Akt参与热休克蛋白27保护大鼠心肌细胞过氧化损伤

目的:探讨小分子热休克蛋白27保护大鼠心肌细胞过氧化损伤的机制.方法:①以稳定转染 pCDNA3.1/Hsp27质粒并稳定高表达Hsp27的大鼠心肌细胞株H9c2(H9c2-Hsp27)为研究对象.对照组采用稳定转染pCDNA3.1质粒的H9c2(H9c2-Vector)细胞;②氧化应激诱导和检测:500 μmol/L H2O2处理细胞后进行如下分析:培养上清中的 LDH 活性、细胞形态学改变、细胞内Akt激活水平;③Akt在Hsp27保护 H2O2诱导H9c2损伤中的作用:以Akt抑制剂Triciribine处理H9c2-Hsp27,观察其对Hsp27保护H2O2诱导H9c2形态学变化的影响.结果:①H2O2诱导H9c2细胞向培养上清释放的LDH显著增加(P<0.01),但与对照组相比,Hsp27 高表达显著抑制了 H2O2诱导的LDH释放(P<0.01);②H2O2处理后,H9c2细胞Akt磷酸化水平增加(P<0.01或P<0.05),但与H9c2-Vector比较,H9c2-Hsp27的Akt磷酸化水平进一步增强(P<0.05);③Akt磷酸化被抑制后,Hsp27对H2O2诱导H9c2细胞形态学改变的保护作用消失.结论:Akt激活是Hsp27保护大鼠心肌细胞过氧化损伤的重要机制.     

RRx-001介导Nrf2减弱DOX诱导的心肌细胞损伤

目的 探究RRx-001对阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导的H9c2心肌细胞损伤及氧化应激的影响,并研究其机制.方法 使用阿霉素处理H9c2细胞12 h诱导心肌细胞损伤,通过RRx-001提前1 h预处理H9c2细胞,使用MTT实验检测细胞活力变化;检测细胞上清中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶...     

黄连素介导的细胞自噬对缺氧损伤H9c2心肌细胞的影响

目的:研究黄连素(Berberine,BBR)对缺氧损伤H9c2心肌细胞的影响,并探索BBR所介导的细胞自噬机制在逆转心肌损伤中的作用。方法:设置不同浓度的BBR药物组,处理H9c2细胞24 h,采用CCK-8法检测细胞活力,筛选适宜的BBR药物治疗浓度。分别设置正常H9c2细胞对照组,缺氧H9c2细胞组(HP组),BBR药物处理组,缺氧/BBR处理组(HP/BBR组),BBR处理时间均为24 h。收集蛋白或细胞,采用Western blot及流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡水平及自噬相关分子的表达水平。同时采用PI3K抑制剂抑制H9c2心肌细胞自噬,检测自噬相关分子表达。结果:一定浓度范围内的BBR对心肌细胞无细胞毒性,且可以显著降低缺氧损伤所致的H9c2心肌细胞凋亡;不仅如此,高浓度BBR可显著诱导H9c2细胞发生自噬,且心肌细胞自噬信号通过PI3K通路介导。结论:黄连素可通过介导细胞自噬发挥抑制H9c2心肌细胞凋亡的作用,且黄连素介导的心肌细胞自噬信号通过PI3K通路所介导。     

丙烯醛对缺氧复氧H9c2心肌细胞损伤的影响及机制初探

目的研究丙烯醛对缺氧复氧H9c2心肌细胞损伤的影响,并探讨其促凋亡作用机理。方法建立H9c2心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤模型,分为正常对照组、丙烯醛组(ACR)、缺氧复氧组(H/R)、丙烯醛+缺氧复氧组(ACR+H/R)。用10μmol/L丙烯醛预处理H9c2心肌细胞30min后2h缺氧16h复氧,采用MTT法检测细胞存活率,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染色检测细胞核凋亡的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白cytochrome c(cyt c)、caspase 9和caspase 3的表达水平。结果与H/R组相比,ACR+H/R组H9c2细胞存活率下降、凋亡增加(P<0.05),cyt c的线粒体蛋白表达水平下调、细胞浆蛋白表达水平上调,caspase 9和caspase 3蛋白表达水平下调并出现明显裂解蛋白。结论作为一种来源于人类生活环境的心血管毒物,丙烯醛能加剧缺氧复氧H9c2心肌细胞的损伤,可能与cyt c由线粒体释放到细胞浆、激活caspase级联反应导致线粒体功能损伤有关。     

白藜芦醇对脂多糖诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响

目的 探讨白藜芦醇对脂多糖诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响及其与Sirt1表达量的关系.方法 H9c2心肌细胞株培养24 h后随机分为4组:空白对照组(CON组)、白藜芦醇对照组(RES组)、模型组(LPS组)和白藜芦醇处理组(RL组).RES组和RL组细胞接受白藜芦醇处理24 h,此后LPS组和RL组细胞接受脂多糖处理24 h.处理完成后,采用乳酸脱氢酶检测试剂盒测定细胞培养液中乳酸脱氢酶含量;硫代巴比妥酸反应法检测细胞内丙二醛(MDA)的含量;荧光探针标记法检测细胞内活性氧(ROS)的含量;Western blot法检测Sirt1表达量.结果 与CON组比较,LPS组中H9c2心肌细胞乳酸脱氢酶漏出量和细胞内MDA及ROS含量显著升高,Sirt1表达量显著降低;与LPS组比较,RL组中乳酸脱氢酶漏出量和细胞内MDA及ROS含量显著降低,Sirt1表达量显著升高.结论 白藜芦醇降低脂多糖诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤,该作用可能与白藜芦醇提高受损心肌细胞内Sirt1的表达量有关.     

黄连素通过miR-29b保护缺氧复氧诱导H9c2细胞损伤中的作用及其机制

目的 探讨miR-29b在黄连素(berberine,Ber)保护缺氧/复氧(H/R)H9c2细胞损伤中的作用及其机制.方法 将体外培养的H9c2细胞分为对照组(正常培养)、H/R组(行H/R处理)、H/R+Ber组(在H/R处理前给予150μmol/L黄连素处理).采用MTT法检测细胞活力,LDH试剂盒检测细胞上清液...     

miR-221在H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制研究

目的探讨miR-221在过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤中的作用及机制研究。方法 MTT法检测不同浓度H_2O_2对H9c2细胞的损伤作用,RT-PCR法检测miR-221表达量。通过Lipofectamine2000将miR-221 inhibitor及阴性对照转入H9c2心肌细胞,并将实验分为4组,正常对照组,模型对照组(H_2O_2组),阴性对照组(H_2O_2+阴性对照组),抑制组(H_2O_2+miR-221 inhibitor组)。MTT法检测细胞活力,吖啶橙染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax,Bcl-2,10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因蛋白(PTEN)及p-蛋白激酶(AKT)表达。结果 0、25、50、100、200、400μmol/L H_2O_2对H9c2细胞活力的抑制作用逐渐加强,其中200μmol/L H_2O_2对细胞活力抑制程度适中,因此作为后续诱导剂量。与正常对照组比较,模型对照组及阴性对照组中miR-221表达量显著上调(P0.01),H9c2细胞活力降低(P0.01),细胞凋亡率显著提高(P0.01),Bax及PTEN表达量上调(P0.01),Bcl-2及p-AKT表达量下调(P0.01)。与模型对照组及阴性对照组比较,抑制组中miR-221表达量显著下调(P0.01),H9c2细胞活力提高(P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),Bax及PTEN表达量下调(P0.01),Bcl-2及p-AKT表达量上调(P0.01)。结论 miR-221低表达能显著抑制H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤,与调控PTEN/AKT信号通路有关。     

Damage Effect of Hydrogen Peroxide on Primary Cardiac Myocytes and H9c2 Cells

目的:考察过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞损伤作川的相似性.方法:选用H9c2心肌细胞与新生大鼠原代心肌细胞,应用MTT法测定不同浓度过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞活性的影响,观察两株细胞对过氧化氢损伤的敏感性.结果:600～1 600μ mol/L的过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞所造成的氧化损伤均具有浓度依赖性,1 200 μmol/L的过氧化氢使H9c2心肌细胞的存活率降低40％～60％ (P<0.01),表现出与原代心肌细胞相似的H2O2损伤敏感性(P>0.05).结论:H9c2心肌细胞与原代心肌细胞对过氧化氢氧化损伤具有相似的作用和浓度依赖性.     

过氧化氢对原代心肌细胞及H9c2细胞的损伤作用

目的:考察过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞损伤作用的相似性。方法:选用H9c2心肌细胞与新生大鼠原代心肌细胞,应用MTT法测定不同浓度过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞活性的影响,观察两株细胞对过氧化氢损伤的敏感性。结果:600～1 600μmol/L的过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞所造成的氧化损伤均具有浓度依赖性,1 200μmol/L的过氧化氢使H9c2心肌细胞的存活率降低40%～60%(P<0.01),表现出与原代心肌细胞相似的H2O2损伤敏感性(P>0.05)。结论:H9c2心肌细胞与原代心肌细胞对过氧化氢氧化损伤具有相似的作用和浓度依赖性。     

大黄酚对缺氧诱导的心肌细胞损伤保护作用及机制

目的 探讨大黄酚对缺氧诱导的心肌细胞H9c2损伤的保护作用及其机制.方法 将体外培养的H9c2细胞分为对照组(正常培养)、缺氧组(缺氧处理)和1、10、20 μmol/L大黄酚处理组(1、10和20 μmol/L大黄酚处理后,给予缺氧处理).采用LDH试剂盒检测细胞上清液中LDH释放量,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪...     

氧化应激介导的DNA损伤在大鼠心肌H9C2细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的 探讨氧化应激介导的DNA损伤在大鼠心肌H 9 C2细胞缺氧/复氧损伤中的作用.方法 采用大鼠心肌H9C2细胞制备缺氧/复氧损伤模型.实验分为对照组(Con组)、缺氧/复氧模型组(H/R组)、抗氧化剂NAC组(NAC组)、抗氧化剂+模型组(NAC+H/R组).Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)表达;细胞免疫荧光法检测活性氧(ROS)水平,DNA损伤相关蛋白(p-γH2ax、8-OHdG)、细胞损伤指标[细胞色素c(Cytochrome c)]表达.结果 与Con组比较,H/R组细胞内ROS水平升高,p-γH2ax、8-OHdG、Cytochrome c、Bax/Bcl-2表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组比较,NAC+H/R组ROS水平降低,p-γH2ax、8-OHdG、Cytochrome c、Bax/Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 抑制心肌细胞氧化应激,可明显改善心肌细胞DNA损伤和凋亡.     

LncRNA TTTY15通过调控miR-520a-3p表达对高糖诱导大鼠心肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNATTTY15(LncRNATTTY15)对高糖诱导大鼠心肌细胞H9c2增殖和凋亡的影响及作用机制.方法:高糖诱导H9c2细胞后,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测H9c2细胞中TTTY15和miR-520a-3p水平,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白...     

黄芪多糖对胰岛素抵抗H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的影响

目的:研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对胰岛素抵抗H9c2(IR-H9c2)心肌细胞葡萄糖摄取的影响,并探讨其信号机制。方法:采用高浓度胰岛素处理复制IR-H9c2心肌细胞模型,给予一定剂量的APS处理,MTT法筛选合适的实验浓度,2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖法检测细胞的葡萄糖摄取,Western blotting法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的磷酸化水平。结果:APS可以明显促进IR-H9c2心肌细胞对葡萄糖的摄取,并能显著提高其AMPK的活性,且AMPK抑制剂Compound C明显降低了APS刺激IR-H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的作用。结论:APS可以促进IR-H9c2心肌细胞的葡萄糖摄取,这一作用与AMPK的活化有关。     

青葙皂苷对过氧化氢诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究青葙皂苷（Celosins,CES）对H2O2诱导的H9c2凋亡的保护作用。方法 噻唑蓝检测各组细胞活力以确定CES的最佳作用浓度,以及对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。细胞分组为：空白对照组、H2O2处理组、低剂量青葙皂苷+H2O2处理组、中剂量青葙皂苷+H2O2处理组、高剂量青葙皂苷+H2O2处理组。利用流式细胞术检测心肌细胞凋亡比例、ROS的产生情况。蛋白印记法（WB）检测凋亡信号通路相关蛋白的表达和Nrf2 /ARE 信号通路相关蛋白表达。结果 （1）青葙皂苷可升高H2O2处理的H9c2细胞活力,差异具有统计学意义(P＜0.05)。（2）青葙皂苷可降低H2O2处理的H9c2细胞凋亡率(P＜0.05)。降低ROS的产生(P＜0.05)。（3）青葙皂苷可降低蛋白细胞质细胞色素C、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3、Bax的表达(P＜0.05),升高蛋白Bcl-2、Nrf2 核转位与HO-1的表达(P＜0.05)。结论 CES通过激活Nrf2 /ARE信号通路抑制H2O2诱导的H9c2细胞损伤。     

柚皮素对缺氧损伤大鼠心肌细胞的保护作用

目的 探究柚皮素对缺氧损伤的大鼠心肌细胞是否有保护作用.方法 用大鼠心肌细胞系H9c2细胞制备心肌细胞缺氧损伤模型,并用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒进行模型鉴定.实验分为5组:对照组,模型组,以及柚皮素低、中、高剂量组(20、40、80μmol/L).用CCK-8检测细胞增殖抑制率,间接免疫荧光法检测细胞肥大...     

山楂叶总黄酮对过氧化氢所致大鼠H9c2心肌细胞氧化应激损伤及诱导凋亡的保护作用

目的:研究山楂叶总黄酮对过氧化氢(H2O2)所致大鼠H9c2心肌细胞的氧化应激损伤及诱导凋亡的保护作用.方法:检测了细胞活性、LDH释放、细胞周期凋亡峰、hoechst 33342 DNA染色、ROS释放.结果:山楂叶总黄酮中、高浓度组(100 μg/mL,200 μg/mL)均能显著对抗过氧化氢(H2O2)所引起的大...     

异氟烷预处理激活Nrf2-ARE通路保护H9c2心肌细胞缺氧-复氧损伤

目的 研究异氟烷预处理对大鼠胚胎心肌细胞(H9c2)缺氧-复氧损伤及Nrf2-ARE信号通路的影响.方法 用大鼠H9c2细胞低氧模拟缺血性损伤,并将细胞分为空白对照组、缺氧-复氧组、异氟烷预处理组、转染Nrf2 siRNA组、转染非特异性siRNA组(Scramble组)、异氟烷预处理的Scramble组和异氟烷预处理的siRNA组.采用MTT法检测H9c2细胞存活率,TUNEL染色检测细胞凋亡,分别使用硫代巴比妥酸法(TBA)和分光光度法测定MDA和GSH水平,qRT-PCR及Western blot检测Nrf2、HO-1和NQO1基因的表达.结果 与空白对照组比较,缺氧-复氧组细胞活力降低,凋亡细胞数上升,MDA水平升高,GSH水平降低,同时H9c2细胞中Nrf2、HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达降低,差异均具有统计学意义(JP＜0.01).与缺氧-复氧组比较,异氟烷可提高H9c2细胞活力,降低凋亡细胞数,并降低MDA水平,升高GSH水平,上调Nrf2、HO-1和NQO1的表达(P＜0.05).siRNA转染组Nrf2的mRNA和蛋白表达与缺氧-复氧组和Scramble组相比均降低(P＜0.05),2％异氟烷对siRNA转染组Nrf2 mRNA和蛋白表达均无影响(P＞0.05);经2％异氟烷处理的siRNA转染组H9c2细胞存活率与空白对照组、2％异氟烷处理组和2％异氟烷处理的Scramble组相比降低,凋亡细胞数增多,MDA水平升高,GSH水平降低(P＜0.05).结论 异氟烷预处理对H9c2细胞缺氧-复氧损伤具有保护作用,这种保护作用与激活Nrf2-ARE信号通路有关.     

京尼平对高糖氧化损伤的H9c2细胞的保护作用

目的 研究植物提取的京尼平(Genipin,GEN)对高浓度糖氧化损伤的大鼠心肌细胞系H9c2的影响作用。方法体外培养H9c2细胞4组,各组H9c2细胞存活率利用CCK-8 法检测;AnnexinⅤ/PI双标记流式分析法检测细胞凋亡率;酶标法测定细胞上清液肌酸激酶(CK-MB)的水平,比色法和WST-1法分别测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果 CCK-8法分析结果显示,33.3mmol/L高浓度糖条件下细胞存活率显著低于正常糖对照组,10μmol/L京尼平保护组细胞存活率高于高糖组(P<0.05)。AnnexinⅤ/PI双标记法检测高糖组细胞早期凋亡率显著高于正常糖组(P<0.05),而高糖加京尼平组比高糖组早期凋亡率显著降低(P<0.05)。京尼平保护组与高糖损伤组比较,上清液中CK-MB活性下降,细胞内MDA含量下降,SOD活力升高(P<0.05)。结论 一定浓度的京尼平具有抗氧化保护高浓度糖损伤的H9c2心肌细胞的作用。     

戊巴比妥钠诱导心力衰竭心肌细胞损伤模型的构建及鉴定

目的:探讨戊巴比妥钠诱导心力衰竭相关的H9c2大鼠心肌细胞损伤模型的制作并明确相关机制。方法:不同浓度不同造模时间戊巴比妥钠对H9c2心肌细胞进行干预,利用透射电镜检测细胞超微结构、三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)、细胞凋亡、自噬等细胞改变。结果:模型组(戊巴比妥钠干预组)线粒体可见肿胀边缘不清、内膜破裂、嵴断裂等改变,并伴随自噬小体增多。模型组ATP含量显著减少(P<0.01),ROS水平明显增加,细胞凋亡率显示出增长趋势(P>0.05)。结论:戊巴比妥钠诱导的H9c2心肌细胞损伤模型符合心衰心肌细胞病理改变,明确戊巴比妥钠对心肌细胞的影响,可为体外心衰模型的研究提供基础理论。     

ERKl/2介导依达拉奉保护H9c2心肌细胞对抗异丙肾上腺素诱导的损伤作用

目的 探讨胞外信号调节激酶1/2(ERKI/2)在依达拉奉(EDA)保护H9c2心肌细胞对抗异丙肾上腺素(ISO)损伤中的作用.方法 用不同浓度的ISO处理H9c2心肌细胞,建立B1肾上腺素受体持续兴奋诱导心脏毒性的体外模型.EDA在ISO处理心肌细胞前1h加人培养基中作为预处理.PD-98059 (ERKI/2抑制剂)在应用EDA前加入培养基中并作用1h,以抑制ERKI/2的磷酸化.CCK-8比色法检测细胞存活率; Western blot法检测总量及磷酸化ERK1/2蛋白的表达;罗丹明123(Rhl23)染色荧光显微镜照相检测线粒体膜电位(MMP).结果 80μmol/LISO处理H9c2心肌细胞24h,可使磷酸化的ERK1/2及MMP的水平明显降低.EDA在10-40μmol/L浓度范围内预处理1h可以剂量依赖性地减弱80Rmol/LISO处理H9c2心肌细胞48h引起的毒性反应;40μmoUL EDA预处理1h可明显抑制ISO作用24h引起的ERKI/2磷酸化水平降低及MMP受损.ERK1/2抑制剂,PD-98059,可以取消EDA诱导的细胞保护作用,使细胞毒性及MMP受损加重.结论 EDA可保护H9c2心肌细胞对抗ISO诱导的损伤作用,其机制之一可能与拮抗ISO对ERK1/2的磷酸化抑制作用有关.