鲍氏不动杆菌新型整合子、Ⅰ类整合子遗传标记研究

目的 了解医院ICU临床分离鲍氏不动杆菌(ABA)的新型整合子、Ⅰ类整合子遗传标记存在状况,探讨ABA多药耐药机制.方法 收集20株分离自2007年10月-2008年7月ICU患者临床标本的ABA,采用纸片扩散法测定32种抗菌药物的敏感性;采用PCR法检测新型整合子遗传标记(tnpU基因),Ⅰ类整合子遗传标记(qacE△1-sull基因),PCR阳性产物为PCR直接全自动荧光法测序.结果 tnpU基因检测到11株,阳性率55.0%;qacE△1-sull基因检测到15株,阳性率75.0%.结论 ABA存在严重的对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素和复方新诺明等抗菌药物多药耐药状况,与细菌转座子和整合子携带率高有关;氯己定预防术后医院感染需要重新评估.     

新疆多药耐药鲍氏不动杆菌质粒、转座子、整合子遗传标记研究

目的 为了解新疆地区多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)的质粒、转座子,Ⅰ类整合子遗传标记存在状况.方法 对20株MDR-ABA株进行了质粒遗传标记(traA、traF)、转座子遗传标记(mpA、tnpU、merA)、Ⅰ类整合子遗传标记(int Ⅰ1)检测研究.结果 20株MDR-ABA tnpU阳性5株,阳性率25%;intⅠ 1阳性4株,阳性率20%;其中tnpU与int Ⅰ1基因同时阳性4株;其他均为阴性.结论 Ⅰ类整合子较广泛地存在于新疆地区于鲍氏不动杆菌,多药耐药与细菌携带转座子和整合子相关.     

多药耐药鲍氏不动杆菌季胺类化合物耐药基因研究

目的 了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)季胺类化合物(消毒剂)耐药基因存在情况.方法 采用PCR榆测20株MDR-ABA菌季胺类化合物(消毒剂)qacE△1基因.结果 20株MDR-ABA菌株具有多药耐药性,仅对亚胺培南65%的敏感,20株MDR-ABA qacE△1基因全部阳性.结论 20株MDR-ABA qacE△1基因全部阳性,提示其均携带Ⅰ类整合子,氯己定预防术后医院感染在我国需要重新评估.     

多药耐药铜绿假单胞菌耐药机制与菌株亲缘性分析

目的 调查临床分离的多药耐药铜绿假单胞菌(PAE)的β-内酰胺类、氨基糖类、整合子及转座子遗传标记相关耐药基因分布状况,并分析多药耐药菌株的亲缘性.方法 应用PCR法对20株分离于临床的多药耐药PAE进行了21 种耐药基因、2种Ⅰ类整合子遗传标记和1种转座子遗传标记榆测,并采用多基因聚类分析法,以耐药基因及整合子、转座子遗传标记为分子标记作样本聚类分析.结果 20株多药耐药PAE中CARB、oprD2、aac(3)一Ⅱ、aac(6')-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、int Ⅰ 1、qacE△1-sull、metA阳性率分别为:15%、100%、70%、15%、15%、85%、85%、85%,其他基因均阴性,20株PAE聚类分析,可分成3种携带不同耐药基因或整合子、转座子遗传标记的克隆群.结论 多药耐药PAE携带多种耐药基因,其中oprD_2基因全部缺失,整合子及转座子遗传标记基因阳性率较高,可能是多药耐药铜绿假单胞菌的主要机制,菌株亲缘性分析结果表明多药耐PAE存在克隆传播,并致医院感染流行.     

多药耐药鲍氏不动杆菌化合物外排泵基因及可移动遗传元件研究

目的了解临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)化合物外排泵基因、可移动遗传元件的存在状况。方法从2009年4-8月医院住院患者中分离20株MDR-ABA,用K-B法测定鲍氏不动杆菌对10种抗菌药物的敏感性,采用PCR及序列分析的方法分析化合物外排泵基因(mdfA、qacE△1、smr-2)、可移动遗传元件(tnpU、tnp513、ISaba1、ISaba4、ISaba9、intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3)。结果 20株MDR-ABA化合物外排泵基因mdfA、qacE△1均为阳性,未检出smr-2;可移动遗传元件基因tnpU、tnp513、ISaba1、intⅠ1均为阳性,未检出ISaba4、ISaba9、intⅠ2、intⅠ3。结论携带mdfA、qacE△1基因是菌株对多药耐药的原因,携带转座子和整合子等可移动遗传元件,可能是耐药基因互为传播的主要因素,其中ISaba4、ISaba9基因检测为国内首次。     

多药耐药鲍氏不动杆菌可移动遗传元件研究

目的了解临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)可移动遗传元件的存在状况。方法收集住院患者中分离的62株MDR-ABA,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法检测接合性质粒遗传标记(traA、trbC),插入序列(ISaba1、IS1133、ISEcp1),转座子遗传标记(merA、tnsA),整合子遗传标记(intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3)等可移动遗传元件,并将先前报道的转座子遗传标记新型转座酶基因tnpU、tnp513合并总结分析。结果62株MDR-ABA中,4种可移动遗传元件基因ISaba1、tnpU、tnp513和intⅠ1阳性株数分别为55株(88.7%)、34株(54.8%)、35株(56.5%)和34株(54.8%),其余8种基因均阴性;55株(88.7%)至少检出1种基因,33株(53.2%)同时4种基因阳性。结论MDR-ABA存在严重的β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素和复方新诺明等多药耐药状况可能与ISaba1、tnpU、tnp513和intⅠ1等可移动遗传元件标记携带率高有关,在MDR-ABA中检出ISaba1、tnpU、tnp513等3种基因插入序列和转座酶基因为国内首次。     

qacE△1-sull阳性多药耐药革兰阴性杆菌的临床分布特征

目的 了解携带耐消毒剂磺胺复合物基因qacE△1-sull的多药耐药革兰阴性杆菌临床分布状况,为多药耐药革兰阴性杆菌医院感染预防控制提供依据.方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测多药耐药革兰阴性杆菌qacE△1-sull基因,分析其阳性菌株的分布特点.结果 182株qacE△1-sull基因阳性多药耐药革兰阴性杆菌临床分布以重症监护病房(ICU)最多(55株,30.22%),其次为普外科(38株,20.88%);标本分布以痰标本检出率最高(52.20%).结论 耐消毒剂基因qacE△1-sull多药耐药革兰阴性杆菌分布以ICU、普外科较高,应作为防范重点,加强医院环境微生物监测,防止感染携带耐消毒剂基因多药耐药菌感染的局部流行和暴发.     

不同来源大肠埃希菌中Ⅰ类整合子和耐消毒剂基因qacE/△1-sull的研究

目的 研究健康大学生及住院患者肠道内大肠埃希菌Ⅰ类整合子及qacE△1-sull基因的携带情况,并与临床分离株比较,初步探讨其影响因素.方法 常规方法分离并鉴定健康大学生粪便分离大肠埃希菌79株,住院患者粪便分离出40株及住院患者其他类型标本分离出29株,PCR方法检测Ⅰ类整合酶及qacE△1-sull基因,K-B法检测药物敏感性,标准纸片扩散确证法检测 ESBs.结果 Ⅰ类整合酶基因总检出率为26.35%,qacE△1-sull基因总检出率为68.92%;临床分离株组Ⅰ类整合酶及qacE△1-sull基因携带率均高于两组粪便,差异有统计学意义(P0.05);Ⅰ类整合酶阳性组菌株对阿莫西林、左氧氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、阿米卡星与头孢噻肟的耐药率均明显高于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);ESBLs阳性组Ⅰ类整合酶的阳性率为43.24%,明显高于阴性组20.72%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 肠道内大肠埃希菌Ⅰ类整合子的携带率与多种药物耐药有关,与 ESBLs及qacE△1-sull基因的携带有关,肠道内大肠埃希菌中耐消毒剂基因qacE△1-sull的携带高,医疗部门应及时监测并在选用消毒剂种类上做出调整.     

铜绿假单胞菌抗菌制剂外排泵基因与可移动遗传元件研究

目的 研究临床分离铜绿假单胞菌(PAE)抗菌制剂外排泵基因与可移动遗传元件存在状况.方法 分离自贵州省贵阳地区(A组)和江苏省苏南地区(B组)PAE各20株,用纸片扩散法测定19种抗菌药物的敏感性,采用PCR法检测抗菌制剂外排泵基因(smr、smr-2、qacE△1),质粒遗传标记(traF、trbC),插入序列遗传标记(IS1133、ISEcp1),转座子遗传标记(merA、tnpU、tnp513),整合子遗传标记(qacE△1又为Ⅰ类整合子遗传标记)等可移动遗传元件;对阳性基因进行测序,测序结果进行Biast分析.结果 两组PAE呈β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类多药耐药;A组检出qacE△1、merA等两种基因,阳性率分别为10.0％、5.0％;B组检出qacE△1、merA、tnpU、tnp513等4种基因,阳性率分别为100.0％、85.0％、5.0％、55.0％.结论 两组为多药耐药的表型,与携带抗菌制剂外排泵基因和可移动遗传元件相关.     

多耐药鲍氏不动杆菌菌株亲缘性分析

目的了解医院感染多耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)的耐药基因及亲缘性。方法采用PCR对20株MDR-ABA进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类耐药基因、转座子遗传标记、整合子遗传标记共36种耐药基因的检测,并以耐药基因作为分子标志作聚类分析;同时用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子同源性检测以作参照。结果 20株MDR-ABA中,TEM、ADC、OXA-23群阳性率分别为100%、75%、50%,而其他β-内酰胺酶相关基因均为阴性;aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ阳性率分别为10%、15%、30%、25%;转座子遗传标记tnpU检出率为55%、整合子遗传标记qacE△1-sul1阳性15株(75%),并对检测结果作样本聚类分析,聚类分析提示20株MDR-ABA可分为A、B两群,均存在克隆传播现象;而PFGE法通过图形条带分析所得结果与聚类分析结果具有一定差异。结论 MDR-ABA耐药基因检出率较高,并可导致医院内克隆传播感染,聚类分析比PFGE更能反映菌株遗传信息,是分析同源性更科学方法。     

大肠埃希菌Ⅰ类整合子与消毒剂抗性的研究

目的了解医院大肠埃希菌的Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因存在状况。方法对临床分离的34株大肠埃希菌,采用PCR方法检测Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因。结果 34株大肠埃希菌qacEΔ1-sul1基因阳性有28株(82.4%)。结论 34株大肠埃希菌药敏试验结果显示,β-内酰胺酶和氨基糖苷类抗菌药物耐药性高与Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因高检出率有关。     

多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因与转座子、整合子遗传标记研究

目的 研究铜绿假单胞菌连续分离株的β-内酰胺酶基因、孔膜蛋白oprD2基因及整合子和转座子介导的各种耐药基因的分布状况.方法 纸片扩散法测定铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的敏感性,采用PCR方法检测20株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶编码基因、孔膜蛋白oprDz基因、Tn21/Tn501型转座子编码基因merA、Ⅰ类整合子编码基因qacE△l-sull;采用PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序.结果 20株铜绿假单胞菌检出TEM、OXA-2群、OXA-10群、CARB 4种p.内酰胺酶基因.未检出质粒型AmpC酶和金属β-内酰胺酶基因;膜孔蛋白编码基因oprD:均为缺失型,Tn21/Tn501型转座子遗传标记MerA阳性7株(35.0%),Ⅰ类整合子遗传标记qacE△l-sull阳性10株(50.0%),2号株作OXA-2群阳性基因测序,与OXA-21型接近,但仍存在2个氨基酸序列差别,可确认为新亚型.结论 多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶类抗菌药物的耐药主要与TEM、OXA、CARB型耐药基因有关,整合子与转座子参与了铜绿假单胞菌的耐药和多药耐药,并发现1种铜绿假单胞菌OXA基因新亚型.     

多药耐药鲍氏不动杆菌菌株亲缘性分析

目的了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)临床分离株的亲缘性。方法在2007年11月~2008年2月从浙江大学医学院附属第一医院住院患者中分离62株MDR-ABA,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法检测β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类耐药基因(含氨基糖苷类修饰酶基因、16S rRNA甲基化酶基因)和喹诺酮类、利福平、四环素、氯霉素、磺胺类耐药基因,多种药物外排泵基因以及质粒、转座子、整合子遗传标记等68种基因,并以该68种基因为分子标记,对检测结果作样本聚类分析。结果62株中TEM、ADC、OXA-23、gyrA突变、aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅱb、tetB、mdf A、tehA、qacE△1-sul1、intⅠ1、tnpU和tnp513基因阳性率分别为82.2%、58.1%、80.6%、83.9%、12.9%、35.5%、35.5%、30.6%、3.2%、74.2%、100.0%、12.9%、58.1%、54.8%、54.8%和56.4%,聚类分析示存在克隆传播现象,有两个流行株,并已发生衍化。结论调查MDR-ABA多药耐药表型与基因检测状况相符,MDR-ABA可导致克隆传播医院感染,多基因聚类分析法是判断医院感染流行株的可靠方法,对临床治疗和医院感染的防控具有指导意义。     

多药耐药大肠埃希菌整合子、转座子遗传标志研究

目的了解大肠埃希菌（ECO）多药耐药株整合子、转座子遗传标志。方法聚合酶链反应（PCR）检测整合子遗传标志（qacE△1-sul1）、转座子遗传标志（merAt、npA、tnpU）。结果20株ECO中qacE△1-sul1基因阳性14株（阳性率70.0%）;merA基因阳性3株（阳性率15.0%）。结论ECO多药耐药株整合子遗传标志（qacE△1-sul1）、转座子遗传标志（merA）携带率高。     

两所医院铜绿假单胞菌连续分离株耐药性与整合子、转座子遗传标记研究

目的 了解江浙地区两所医院铜绿假单胞菌(PAE)连续分离株的耐药性与遗传标记.方法 采用K-B法检测PAE连续分离株的耐药性,PCR方法检测4种整合子、转座子遗传标记(qacE△1-sul1、mer、tnpA、tnpU).结果 两所医院PAE对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、美罗培南与阿米卡星药物敏感性尚好,对β-内酰胺类、环丙沙星、复方新诺明耐药率极高,PAE检出qacE△1-sul1基因(48.6%、45.0%)和merA(11.4%、5.0%),tnpA、tnpU未检出.结论 PAE连续分离株携带qacE△1-sull、merA基因是细菌呈多药耐药的主要原因,具有流行病学意义.     

肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子与qacE△1-sul1基因的研究

目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1耐消毒剂基因的携带情况.方法 收集临床住院患者分离出的产ESBLs肺炎克雷伯菌108株;采用K-B法测定抗菌药物的敏感性;聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1基因.结果 Ⅰ类整合子基因总检出率为53.70％,qacE△1 -sul1基因总检出率为63.89％;产ESBLs肺炎克雷伯株Ⅰ类整合子阳性株除对氨苄西林和哌拉西林的耐药率与Ⅰ类整合子阴性株差异无统计学意义以外,对其他抗菌药物的耐药率均明显高于整合子阴性株,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 医院产ESBLs肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△ 1-sulⅠ耐消毒剂基因携带率均较高,应进一步加强Ⅰ类整合子和耐消毒剂基因菌株的流行病学监测,并根据耐消毒剂状况,在消毒剂的使用上作出相应的调整.     

鲍氏不动杆菌儿童分离株qacE△1-sul1及IntⅠ1基因与抗菌药物多药耐药性关系研究

目的 鲍氏不动杆菌(ABA)在儿科临床分离株的耐消毒剂-磺胺基因(qacE△1-sul1)、整合酶基因(IntⅠ1)以及与该基因阳性细菌多药耐药的关系.方法 28株ABA收集自2006年分离的儿科住院肺炎患儿的深部痰培养标本,均采用VITEK-32全自动微生物鉴定仪GNI和GNS卡进行细菌鉴定和药敏试验;qacE△1-sul1与IntⅠ1基因检测用聚合酶链反应(PCR)方法.结果 检测的28株ABA中3株呈多药耐药性,阳性率10.71%,复方新诺明(SXT)检出4株耐药菌株,耐药率14.29%,qacE△1-sul1基因检出11株,阳性率为39.29%,IntⅠ1基因检出4株,阳性率14.29%;4株复方新诺明耐药菌株(包括3株多药耐药株)均检出qacE△1-sul1和IntⅠ1基因,其余7株qacE△1-sul1基因阳性菌株对复方新诺明表型敏感.结论 ABA儿童分离株对SXT耐药的主要原因是获得了qacE△1-sul1基因;对于复方新诺明表型敏感,但qacE△1-sul1基因阳性菌株也应引起重视,防止在抗菌药物的压力下,出现耐药;因qacE△1-sul1、IntⅠ1基因两者之一为阳性即可表明该菌株携带Ⅰ类整合子,即可能含有多药耐药基因,其对抗菌药物表现多药耐药性,应引起儿科医生的高度重视.     

全耐铜绿假单胞菌40种耐药相关基因的研究

目的 研究全耐铜绿假单胞菌40种耐药相关基因.方法 采用法国生物梅里埃公司的API鉴定条/PSE5.0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC/ID-109鉴定/药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测 1株全耐铜绿假单胞菌临床分离株29种β-内酰胺酶相关基因、外膜蛋白D_2基因(oprD_2)、6种氨基糖苷类修饰酶基因(AMEs)、消毒剂/磺胺耐药基因(qacE△1-sull)、3种整合子基因(intⅠ 1、2、3)等40种耐药相关基因,分析其分布情况.结果 在该株菌,6种耐药相关基因阳性,两种β-内酰胺酶基因(blaTEM、bla()XA10)、两种氨基糖苷类修饰酶基因[(aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ)]、(qacE△1-sull和Ⅰ类整合子基因(int Ⅰ 1)],同时oprD_2缺失;其他27种β-内酰胺酶基因、4种氨基糖糖类修饰酶幕因[(aac(6')-Ⅰ b、aac(3)-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ)]和两种整合子基因(int Ⅰ 2、int Ⅰ 3)均为阴性.结论 该株全耐菌耐药机制为多重机制,主要与7种耐药相关基因(blaTEM、blaOXA10、oprD_2缺失、aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ、qacE△1-sull和Ⅰ类整合子)有关.     

rmtB基因在铜绿假单胞菌烧伤分离株中流行

目的 了解分离自烧伤科患者的铜绿假单胞菌中16S rRNA甲基化酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、耐消毒剂-磺胺基因(qacE△1-sull)、转座子基因(merA)存在状况.方法 以K-B法测量铜绿假单胞菌对20种抗菌药物的耐药性;以PCR法检测20株铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序.结果 20株铜绿假单胞菌检出3种氨基糖苷类修饰酶基因,分别为aac(6′)-Ⅰ b、aac(6″)-Ⅱ、ant(2″)-Ⅰ,检出1种16S rRNA甲基化酶基因(rmtB);所测20株菌均携带qacE△l-sull(阳性率100.0%),19株携带merA基因(阳性率95.0%).结论 分离自烧伤科患者的铜绿假单胞菌耐药情况,严重,对氨基糖苷类抗菌药物耐药与5种氨基糖苷类修饰基因及168 rRNA甲基化酶基因rmtB有关,qacE△1-sull及merA携带率高,说明转座子及整合子是细菌间基因传播的重要机制,必须寻求新的途径来解决此类细菌对氨基糖苷类抗菌药物的耐药问题.     

多药耐药肺炎克雷伯菌尿液分离株检出gyrA基因新亚型

目的了解1株多药耐药肺炎克雷伯菌的遗传学背景。方法采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析1株多药耐药肺炎克雷伯菌可能存在的65种耐药相关基因:包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药相关基因及可移动的遗传元件(整合子、转座子、接合性质粒)遗传标记、抗菌制剂外排泵基因。结果该株多药耐药肺炎克雷伯菌耐β-内酰胺类药物基因检出blaTEM,耐氨基糖苷类药物基因检出aph(3′)-Ⅰ,耐喹诺酮类药物基因检出gyrA,Ⅰ类整合子遗传标记检出intⅠ1,转座子遗传标记检出tnp513,接合性质粒遗传标记检出trbC;抗菌制剂外排泵基因检出qacE△1-sul1,gyrA基因是新亚型(GenBank登录号:JN232083),83位密码子突变方式为TCG→TTC,导致氨基酸从丝氨酸(S)→苯丙氨酸(F);87位密码子突变方式为GAC→GCC,导致氨基酸从天冬氨酸(D)→丙氨酸(A)。结论携带多药耐药基因和抗菌制剂外排泵基因是这株肺炎克雷伯菌呈多药耐药的主要原因,携带多种可移动遗传元件使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间,甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播。