二氮嗪抑制癫痫大鼠海马神经元凋亡的研究

目的 观察线粒体ATP敏感性钾离子通道(mitoKATP)开放剂二氮嗪(DZ)对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元线粒体凋亡通路相关凋亡因子的影响,探讨DZ对癫痫大鼠神经保护作用的机制.方法 采用腹腔注射的方法,建立氯化锂-匹鲁卡品( PILO)诱导的大鼠癫痫持续状态(SE)模型.在检测大鼠海马凋亡相关蛋白水平变化时分为对照组,SE后24h、72 h、5d组;在检测DZ对海马神经元保护作用时分为对照组、PILO致痫72 h组(PILO组)、DZ预处理组(PILO+ DZ组)、DZ +5-羟基癸酸(5-HD)预处理组(PILO+ DZ+ 5-HD组).SE后分别在相应时间点灌注取脑,采用TUNEL法检测细胞的凋亡;采用Western blot法检测大鼠海马Bcl-2、Bax、活性半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3( Caspase-3)蛋白的水平及细胞色素C(cytC)由线粒体到胞浆的释放.结果 与正常对照组比较,SE组大鼠在SE后备相应时间点TUNEL染色阳性细胞明显增加(P＜0.05),海马Bcl-2蛋白、线粒体中的细胞色素C(mito-cytC)的表达显著降低(P＜0.05),海马Bax、活性Caspase-3蛋白及胞浆中的细胞色素C(cyto-cytC)的表达明显增高(P＜0.05).与PILO组及PILO+ DZ+ 5-HD组比较,PILO+ DZ组降低的海马Bcl-2蛋白水平显著升高(P＜0.05),而升高的海马Bax、活性Caspase-3蛋白的水平明显降低(P＜0.05),cytC由线粒体到胞浆的释放减少(P＜0.05),TUNEL染色阳性细胞明显减少(P＜0.05).DZ的保护作用能被5-HD阻断.结论 DZ可通过上调Bcl-2/Bax水平,减少cytC的释放,抑制Caspase-3的激活,从而通过线粒体凋亡通路抑制氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠SE后海马神经元的凋亡,对癫痫发作所致的脑损伤具有神经保护作用,为癫痫的神经保护治疗提供新的治疗靶点.     

HO-1对氧糖剥夺海马神经元线粒体运动调节蛋白的影响

目的 研究HO-1对氧糖剥夺海马神经元线粒体运动调节蛋白的影响.方法 将培养7 d的大鼠海马神经元随机分为4组:正常培养组(C组)、正常培养+血晶素组(C+H组)、氧糖剥夺组(D组)、氧糖剥夺+血晶素组(D+H组).C组正常培养方法 培养.C+H组在正常培养的神经元培养液中加入血晶素使其终浓度为10μmol/L后按正常培养24 h.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D+H组神经元用10μmol/L血晶素处理24 h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.进行神经元纯度鉴定,细胞存活率,HO-1-mRNA表达,HO-1、Mirol、Miro2和Milton蛋白表达,神经元凋亡的检测.结果 C+H组神经元H0-1-mRNA和HO-1表达高于C组(P＜0.01),Mirol、Mirio2和Milton蛋白表达高于C组(P＜0.01),神经元存活率和神经元凋亡率变化无统计学差异(P＞0.05);D组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于C组(P＜0.01),Mirol、Miro2和Milton蛋白高于C组(P＜0.01),神经元存活率低于C组(P＜0.01),神经元凋亡率高于C组(P＜0.01);D+H组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于D组(P＜0.01),Mirol、Miro2和Milton蛋白高于D组(P＜0.01),神经元存活率高于D组(P＜0.01),神经元凋亡率低于D组(P＜0.01).结论 HO-1增加海马神经元线粒体运动调节蛋白Mirol、Miro2和Milton的表达,抑制神经元的凋亡.     

异丙酚对缺氧复氧后培养海马神经元nNOS的影响

目的 观察异丙酚对培养海马神经元缺氧复氧后损伤反应的影响.方法 培养12d海马神经元,随机分为正常对照再培养24h组(Nor组)、缺氧4h后复氧24h组(Ano组)、加异丙酚500μmol/L缺氧4h后复氧24h组(Pro组).采用MTT法测定细胞存活率,免疫组化方法 测定nNOS蛋白含量,应用流式细胞仪测定神经元凋亡率.结果 缺氧后Ano组nNOS蛋白表达及细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),加入异丙酚后能减少nNOS蛋白含量(P＜0.01)和细胞凋亡率(P＜0.05),Pro组细胞存活率较Ano组增加(P＜0.05),但与Nor组比仍下降(P＜0.05).结论 异丙酚能提高体外海马神经元的抗缺氧能力,减少nNOS蛋白过度表达和细胞的凋亡.     

依达拉奉对原代海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用

目的:研究依达拉奉对原代培养海马神经元缺氧复氧损伤的保护机制.方法:建立离体海马神经元缺氧复氧的细胞损伤模型,实验分组为正常对照组、缺氧复氧组、依达拉奉干预组,其中依达拉奉干预浓度分为1、10、100和300 μmol/L.观察海马细胞四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率、丙二醛(MDA)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性的变化,流式细胞仪观察细胞凋亡.结果:与缺氧复氧组相比,依达拉奉100μmol/L组和300 μmol/L组的MTT代谢率显著增高(P＜0.01),MDA含量降低(P＜0.05),NOS活性降低(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.01).结论:依达拉奉能够有效地抑制脂质过氧化作用,降低MDA及NOS活性,减少细胞凋亡率,对缺氧损伤的神经元具有显著的神经保护作用.     

二氮嗪预处理对缺氧复氧后大鼠海马神经元凋亡及JNK表达的影响

目的探讨二氮嗪（DZ）预处理能否抑制C-Jun氨基末端激酶（JNK）表达而减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡。方法原代培养9～10d的SD大鼠海马神经元随机分为5组：对照组、DZ0,30,100μmol／L和DZ100μmol／L＋5-羟癸酸（5-HD）100μmol／L预处理组。除对照组外,其余4组神经元自缺氧前2d开始,每天实施以上对应浓度DZ预处理1h。连续3d。于体外缺氧4h复氧48h后,采用四唑蓝比色法测定海马神经元活力,AnnexinV—FITC流式细胞术测定凋亡率,Western blotting法检测JNK蛋白表达。结果与对照组比较,缺氧复氧后海马神经元的活力下降,凋亡率增大,JNK蛋白表达增强（P〈0．05）。与其他预处理组比较,DZ100μmol／L预处理组的神经元活力高,凋亡率低（P〈0．05）,其他预处理组间比较无统计学意义：DZ预处理后,JNK蛋白表达减低,且DZ100μmol／L组表达弱于DZ30μmol／L组（P〈O．05）。同时给于5-HD预处理后,DZ未能抑制JNK蛋白表达。结论DZ预处理可能抑制JNK表达而减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡。     

重组人红细胞生成素对癫痫持续状态大鼠海马线粒体凋亡途径相关调控因子的影响及作用机制

目的 观察重组人红细胞生成素(rHuEPO)对戊四氮（PTZ)点燃的癫痫持续状态(SE)的成年雄性（SD）大鼠海马神经元磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响,并进一步探讨rHuEPO作用的可能机制。方法 于2010年3月,由河北省实验动物中心提供的健康清洁级成年SD大鼠。采用PTZ点燃大鼠SE模型,将大鼠随机分为B组（PTZ+0.9%氯化钠溶液)、C组（PTZ+rHuEPO）、D组（PTZ+LY294002+rHuEPO）、E组（PTZ+二甲基亚砜+rHuEPO）,同时另选取不进行SE制模的SD大鼠作为A组（0.9%氯化钠溶液）,检测大鼠行为学和脑电图的改变;用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测海马神经元的凋亡情况;免疫组织化学法观察p-Akt、Bax、XIAP的阳性细胞数;反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠海马Bax信使RNA（BaxmRNA）的表达;Western blot方法检测各组大鼠海马蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、XIAP蛋白的表达。结果 与B组比较,C组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均增多,Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均减少,差异有统计学意义(P＜0.05);与C组比较,D组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均减少,Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均增多,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 rHuEPO可以提高p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达水平,降低Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平,减少海马神经元的凋亡,发挥神经保护作用;加入磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002后,海马p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达减少、Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达增加,海马神经元的凋亡增加,减弱了rHuEPO的保护作用。因此,PI3K/Akt信号通路是rHuEPO发挥神经保护作用的通路之一,其作用机制可能是rHuEPO活化PI3K/Akt后,提高p-Akt蛋白及线粒体凋亡途径相关调控因子XIAP的表达,下调了Bax的表达,从而介导线粒体凋亡途经,发挥抗凋亡、促存活的神经保护作用。     

Effects of Environmental Factors on Ischemic Cardiac Myocyte Apoptosis and Expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 in Rats

目的:探讨光照、黑暗、行为限制对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响.方法:Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、心肌梗死组(B组)、黑暗组(C组)、光照组(D组)及行为限制组(E组),用TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白及基因表达.结果:(1)与A组比较,B、C、D、E组的凋亡指数增加(P＜0.01);与B组比较,D、E组的凋亡指数增加(P＜0.05);与C组比较,D、E组的凋亡指数增加(P＜0.05).(2)与A组比较,B、C、D、E组的Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达增加(P＜0.01);与B组比较,D、E组的Bax、Caspase-3蛋白表达增加(P＜0.05);与C组比较,D、E组的Bax、Caspase-3蛋白表达增加(P＜0.05).(3)与A组比较,B、C、D、E组的Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达增加(P＜0.01);与B组比较,D、E组的Bax、Caspase-3 mRNA表达增加(P＜0.01);与C组比较,D、E组的Bax、Caspase-3 mRNA表达增加(P＜0.01).结论:光照环境、行为限制可增加大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、Caspase-3的表达有关.     

铜诱导神经元凋亡及凋亡相关蛋白的表达

目的 观察铜对原代培养神经元的凋亡以及Bax、Bcl-2、caspase-3表达的影响,探讨铜沉积对肝豆状核变性神经系统的损伤机制.方法 以不同浓度醋酸铜(0、2、20、40、80、160、240、320 μmol/L)诱导体外培养大鼠神经元48 h.MTT比色法检测细胞活力,Hoechst 33342/PI和Annexin-V/PI法检测神经元凋亡;Western blotting测定细胞Bcl-2、Bax、caspase-3表达.结果 神经元细胞活力随醋酸铜浓度的升高而显著降低.醋酸铜低浓度诱导组(0～80 μmol/L),神经元凋亡数随铜浓度的增加而增多(P＜0.01);caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax比值下降(P＜0.01).醋酸铜高浓度诱导组(≥160μmol/L),神经元坏死较凋亡更为明显.结论 Bax、Bcl-2、caspase-3在低浓度铜诱导神经元凋亡过程中发挥重要的调控作用.神经元凋亡或死亡导致神经元减少可能与肝豆状核变性神经系统症状有关.     

JNK信号通路在异氟醚诱导新生大鼠海马神经细胞凋亡的作用

目的 探讨c-Jun氨基末端激酶(the c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路对异氟醚诱导新生大鼠海马神经细胞凋亡以及对磷酸化JNK、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法 48只出生后7d(Py7)的新生大鼠按照随机数的方法随机均分为DMSO对照组(D组)、JNK抑制剂SP600125对照组(SP30组)、异氟醚+DMSO组(Iso+D组)和异氟醚+SP600125组(Iso+ SP30组).对照组吸入空气,异氟醚组吸入1.1％异氟醚4h.麻醉前20 min,幼鼠根据分组分别侧脑室注射SP600125 30 μg或者12％ DMS0 5μl.麻醉结束后6h,部分幼鼠灌注取脑,TUNEL荧光染色检测脑海马CA1区神经细胞凋亡(n=6);部分幼鼠取新鲜脑皮质,Western blotting法检测磷酸化JNK、Bcl-2和Bax蛋白表达的变化(n=6).组间资料的比较采用单因素方差分析.结果 幼鼠海马CA1区的TUNEL阳性细胞数比较,Iso+D组[(135.72±21.26)个/mm2]比D组[(24.07±1.35)个/mm2]增加5倍(P＜0.01);与Iso+D组相比,Iso+ SP30组[(42.49±5.56)个/mm2] CA1区的TUNEL阳性细胞数降低了84％ (P＜0.05).Iso+D组磷酸化JNK P46表达比D组增加44.1％ (P＜0.01),而Iso+ SP30组显著降低了磷酸化JNK P54 (p＜ 0.05)和P46(P＜ 0.01)的表达.Iso+D组Bax表达比D组增加1.5倍(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达比D组下降42.2％ (P＜0.05);而Iso+ SP30组Bax表达下降(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达上调(P＜0.01).D组与SP30组TUNEL阳性细胞数,磷酸化JNK,Bcl-2和Bax蛋白表达差异均无统计学意义.结论 JNK信号通路激活促进了异氟醚诱导发育期大鼠海马神经细胞凋亡,SP600125通过维持Bcl-2,降低Bax表达产生抑制凋亡作用.     

脱氟烷诱导神经元HO-1mRNA表达信号通路的研究

目的 研究脱氟烷(desflurane)诱导氧糖剥夺损伤神经元血红素氧合酶-1表达的信号转导通路,探讨脱氟烷脑保护机制.方法 将96孔和6孔培养板上培养7d的大鼠海马神经元随机分为6组(n=12):正常培养组(C组),神经元按正常培养方法培养;氧糖剥夺组(I/R组),神经元缺糖缺氧后复糖复氧处理;氧糖剥夺 6% desflurane组(Des组),神经元缺糖缺氧的同时接受6% desflurane麻醉;氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L tin-protoporphyrin (HO-1抑制剂)组(Tin组)、氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L LY 294002 (PI3-K抑制剂)组(LY组)、氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L Triciribin (Akt抑制剂)组(Tri组)神经元进行缺糖同时分别加入tin-protoporphyrin、 LY 294002或Triciribin使其终浓度均为10μmol/L后同D组处理.96孔培养板的神经元进行细胞存活率的检测.6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡、HO-1mRNA表达、PI3-K和Akt蛋白表达的检测.结果 Des组PI3K和Akt蛋白表达增加,HO-1mRNA表达增加,神经元存活率增加、凋亡率降低(vs I/R组,P<0.01).Tin组PI3K和Akt蛋白表达变化不明显(vs Des组,P0.05), HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加 (vs Des组,P<0.01). LY组PI3K和Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01). Tri组PI3K表达变化不明显(vs Des组,P0.05), Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01).结论 Desflurane通过PI3-K/Akt信号转导通路诱导大鼠海马神经元HO-1表达,保护了神经元.     

基于PI3K/Akt通路沉默miR-26b对妊娠期高血压胎盘滋养细胞增殖、凋亡的影响

目的 分析沉默微小RNA-26b（Micro RNA-26b,miR-26b）对妊娠期高血压胎盘滋养细胞增殖、凋亡及磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphoinositide-3 kinase/protein kinase B,PI3K/Akt）通路的影响。 方法 购买人胎盘滋养细胞,使用100 μmol/L N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞模拟妊娠期高血压微环境,分为细胞空白组（N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞）、过表达组（N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞后做miR-26b过表达质粒转染）、沉默组（N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞后做miR-26b沉默质粒转染）。检测3组细胞增殖、细胞凋亡、细胞PI3K/Akt通路蛋白表达情况。 结果 与空白组相比,过表达组miR-26b表达量升高,沉默组miR-26b表达量降低（P＜0.05）,说明miR-26b转染成功。过表达组24 h、48 h、72 h细胞增殖率逐渐降低,沉默组逐渐升高,3组在组间、时点间、组间·时点间差异均有统计学意义（P＜0.05）。与空白组相比,过表达组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表达量降低,Bax蛋白表达量升高（P＜0.05）;与空白组相比,沉默组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表达量升高,Bax蛋白表达量降低（P＜0.05）;与过表达组相比,沉默组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表达量升高,Bax蛋白表达量降低（P＜0.05）。 结论 沉默miR-26b可抑制妊娠期高血压胎盘滋养细胞凋亡、促进增殖,其作用机制可能与PI3K/Akt通路被激活相关。     

LY294002通过PI3K/Akt/Mtor对CD133+CD44+结直肠癌干细胞自我更新、增殖能力的影响

目的:探讨LY294002对CD133+CD44+结直肠癌干细胞自我更新、增殖能力的影响及其机制.方法: 通过流式细胞术从人结直肠癌HCT116细胞中分选CD133+CD44+的肿瘤干细胞(CSCs),不同浓度(10、20、30 μmol/L)LY294002作用CSCs,对照组不使用药物.成球实验及有限浓度稀释法检测细胞自我更新能力,细胞活性计数法及平板克隆实验检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR及流式细胞术检测PI3K/Akt/mTOR信号通路基因Akt、磷酸化Akt、诱骗受体3(DcR3)、B淋巴细胞瘤-2(Bc--2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达变化.结果: 与对照组相比,30 μmol/L LY294002作用实验组成球能力明显削弱(P＜0. 01),CSCs比例明显下降(P＜0. 05),增殖能力明显削弱(P＜0. 01),G0G1期细胞周期受到阻滞(P＜0. 01);磷酸化Akt表达降低(P＜0. 01),DcR3、Bcl-2、mTOR及Cyclin D1表达量下调(P＜0. 01).结论: LY294002可能通过PI3K/Akt/mTOR通路导致结直肠癌CSCs周期阻滞、抑制其自我更新、增殖能力.     

二氮嗪通过抑制内质网应激作用降低软骨细胞凋亡的研究

目的 探讨二氮嗪对H₂O₂诱导的软骨细胞凋亡的机制研究。 方法 每组取3只SD大鼠膝关节软骨细胞进行原代培养,将软骨细胞分成6组,分别为对照组(A组),H₂O₂损伤组(B组),H₂O₂+100 μmol/L二氮嗪组(C组),H₂O₂+200 μmol/L二氮嗪组(D组),H₂O₂+300 μmol/L二氮嗪组(E组),H₂O₂+400 μmol/L二氮嗪组(F组)。A组细胞不做特殊处理,B组用400 μmol/L双氧水在37℃恒温箱内孵育8 h,C、D、E、F组分别用100、200、300、400 μmol/L的二氮嗪在37℃的恒温箱内预处理30 min,再用400 μmol/L的H₂O₂孵育8 h,用CCK8法检测各组软骨细胞的活性,用流式细胞仪检测各组软骨细胞凋亡情况,用RtPCR检测软骨细胞功能情况,用免疫荧光、Western Blot检测凋亡和内质网应激相关蛋白的表达情况。 结果 ①CCK8法检测各组细胞的活性率从大至小依次为A组> E组> D组> F组> B组;②流式细胞仪检测各组软骨细胞凋亡率由大至小依次为B组> F组>D组> E组> A组;③RtPCR检测软骨细胞二型胶原蛋白(Coll-Ⅱ)、Caspase-3和聚集蛋白聚糖酶(aggrecanase)表达量,表达量大至小依次为A组> E组> D组> F组> B组;各组聚集蛋白聚糖酶表达量大至小依次为B组> F组> D组> E组> A组;④免疫荧光检测软骨细胞中CHOP蛋白的表达量,各组表达量依次是B组> F组> A组;⑤Western bolt检测各组软骨细胞中Caspase-3、Bax、CHOP蛋白的表达情况,表达量依次为B组> F组> A组。 结论 二氮嗪通过抑制内质网应激作用,从而减少H₂O₂诱导的大鼠软骨细胞的凋亡。      

尼氟灭酸对氯化钴诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的：探讨尼氟灭酸（NFA）对氯化钴（CoCl2）诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用,阐明其可能的机制。方法将血管内皮细胞随机分为对照组、100μmol／L CoCl2损伤组和20、40μmol／L NFA保护组,四甲基偶氮唑蓝比色（ MTT）法检测各组细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验（ ELISA ）检测细胞内相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Caspse-3的表达情况。结果 MTT检测,与对照组比较,100μmol／L CoCl2组在24 h细胞增殖活性明显降低（P＜0．01）;与CoCl2损伤组相比,20、40μmol／L NFA保护组在24 h细胞增殖活性升高（P＜0．05,P＜0．01）,40μmol／L NFA保护组更加明显。 ELISA法检测显示,与对照组比较,100μmol／L CoCl2组在24 h细胞Caspse-3、Bax的表达增多,Bcl-2表达减少（ P＜0．05,P＜0．01）。与损伤组相比,NFA处理缺氧后血管内皮细胞Caspse-3、Bax的表达减少,Bcl-2表达增多（P＜0．05,P＜0．01）。结论 CoCl2能诱导血管内皮细胞缺氧损伤,引起细胞的凋亡;NFA可以保护CoCl 2诱导的血管内皮细胞的缺氧损伤,这可能与上调Bcl-2、下调Bax和Caspse-3抑制其凋亡有关。     

原花青素B2保护血管内皮细胞延缓凋亡及机制研究

目的 以H2O2诱导人内皮细胞凋亡为模型,观察原花青素B2 (GSPB2)延缓人内皮细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 用0.5 mmol H2O2预处理细胞,分别加入不同浓度的GSPB2(5.0、10.0、20.0 μmol/L)保护细胞,TUNEL法检测细胞凋亡;Western blotting检测凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2以及影响凋亡的相关分子PI3K、p-Akt、Akt的蛋白表达;Transwell小室检测各组细胞迁移情况.结果 0.5 mmol H2O2致人内皮细胞凋亡明显增加(P＜0.01),GSPB2能明显减轻H2O2所致的人内皮细胞凋亡(P＜0.05),10 μmol/mL的GSPB2就能接近恢复到H2O2未处理的对照组水平.进一步研究发现:Caspase-3、bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下调;PI3K、p-Akt、Akt表达上调.结论 不同浓度的GSPB2对H2O2诱导的血管内皮细胞具有保护作用,而且表现为浓度依赖性和时间依赖性,其机制与相关分子PI3K、p-Akt、Akt有关.     

姜黄素抑制硝普钠诱导的大鼠软骨细胞凋亡机制研究

目的 探讨姜黄素抑制硝普钠(SNP)诱导的大鼠软骨细胞凋亡的机制研究。 方法 每组取4只SD大鼠关节软骨，细胞进行原代培养，将软骨细胞分成6组，分别为空白对照组(A组)，SNP损伤组(B组)，SNP+5 μmol/L姜黄素组(C组)，SNP+10 μmol/L姜黄素组(D组)，SNP+20 μmol/L姜黄素组(E组),SNP+30 μmol/L姜黄素组(F组)。用CCK8法检测不同浓度的姜黄素对软骨细胞增殖的影响，同时检测各组中软骨细胞的活性；用RtPCR检测软骨细胞MMP-13、caspase-3、Bax和Bcl-2基因的表达情况；用Hoechst 33342染色观察软骨细胞核凋亡情况；Western Blotting检测线粒体凋亡途径相关蛋白的表达情况。 结果 ①当姜黄素的浓度为20 μmol/L时，姜黄素对软骨细胞的促增殖作用最为明显；②CCK8法检测各组细胞的活性率从大至小依次为A组＞E组＞D组＞C组＞F组＞B组；③RtPCR检测软骨细胞caspase-3、Bax和Bcl-2表达量经姜黄素处理后均有显著变化；④Hoechst 33342染色结果表明姜黄素能改善SNP诱导的软骨细胞核染色质的损伤，减少软骨细胞中的线粒体膜电位；⑤Western boltting检测各组软骨细胞中caspase-3、Bax、蛋白的表达情况，表达量依次为B组＞E组＞A组；Bcl-2蛋白的表达情况，表达量依次为A组＞E组＞B组。 结论 姜黄素通过抑制线粒体凋亡途径，从而减少SNP诱导的大鼠软骨细胞的凋亡。      

PI3K/Akt信号通路介导莱菔硫烷预处理对大鼠供心冷缺血再灌注损伤的影响

目的：探讨脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路介导莱菔硫烷（SFN）预处理对大鼠心肌冷缺血再灌注损伤（IRI）的作用,阐明其作用机制。方法：64只健康雄性SD大鼠随机分为冷IRI组、SFN组、LY（PI3K抑制剂）+冷IRI组和LY+SFN组,每组供、受体各8只。将冷藏于组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液（HTK液）9 h供心移植到受体大鼠的腹腔,建立同种大鼠异体异位心脏移植模型,术后24 h取供心心肌组织,采用苏木精-伊红（HE）染色观察心肌组织形态表现,免疫组织化学法和Western blotting法检测心肌组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,即蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、Bax、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）的蛋白表达水平。结果：心肌组织形态表现,冷IRI组和LY+冷IRI组大鼠心肌组织损伤最严重,SFN组心肌组织损伤最轻,LY+SFN组心肌组织损伤介于冷IRI组和SFN组之间。免疫组织化学法和Western blotting法,与冷IRI组比较,SFN组p-Akt蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）,Bcl-2蛋白表达水平升高（P < 0.05）,而Bax蛋白表达水平降低（P < 0.05）;应用阻滞剂LY294002后,与LY+冷IRI组比较,LY+SFN组p-Akt蛋白表达水平差异无统计学意义（P > 0.05）,但Bcl-2蛋白表达水平仍升高（P < 0.05）,Bax蛋白表达水平仍降低（P < 0.05）,Bcl-2/Bax比值升高（P < 0.05）。结论：SFN可能通过PI3K/Akt信号通路减轻心脏移植心肌冷IRI。     

Effect of icariin on apoptosis in hippocampal neurons cultured in high glucose

OBJECTIVE

To investigate effect of icariin on apoptosis in hippocampal neurons cultured in high glucose, and the possible mechanism behind the action.

基于ROS/PI3K/Akt信号通路探讨异牛肝菌素对人胃癌BGC-823细胞凋亡影响及机制

目的 基于ROS/PI3K/Akt信号通路探讨异牛肝菌素(iso-suillin)对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响及其机制。方法 体外培养人胃癌BGC-823细胞,分别采用7μmol/L、14μmol/L、28μmol/L不同浓度iso-suillin干预48 h,将7μmol/L浓度iso-suillin干预的定义为低剂量组,14μmol/L浓度iso-suillin干预的定义为中剂量组,28μmol/L浓度iso-suillin干预的定义为高剂量组,同时设置对照组(以等量生理盐水干预48 h)。采用Hoechst 33342荧光染色法观察iso-suillin处理后人胃癌BGC-823细胞形态学变化,蛋白免疫印迹法检测iso-suillin处理后人胃癌BGC-823细胞凋亡相关蛋白表达水平,活性氧荧光探针染色法(2,7-dichlorofluorescin diacetate, DCFH-DA)检测iso-suillin处理后人胃癌BGC-823细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,蛋白免疫印迹法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达水平...