单用A23187快速诱导K562细胞分化成树突细胞的研究

目的探索一种快速、简便、廉价而高效获取树突细胞(DC)的方法。方法通过单用A23187、A23187+GMCSF或联合细胞因子(GMCSF、IL4及TNFα)将K562细胞诱导分化为DC(K562DC),倒置显微镜下观察细胞形态并摄相,流式细胞术检测K562DC表面分子表达情况。用MTT法检测K562DC刺激异基因淋巴细胞增殖及介导T细胞杀伤靶细胞的能力。结果上述3种细胞因子组合均能诱导K562细胞向成熟DC分化,均高表达CD1a、CD80、HLADR、CD83和CD86;含A23187的两组诱导72h获得DC数量分别为(69.5±17.2)%、(73.1±13.9)%,均高于细胞因子组的诱导率[(28.5±12.3)%],也高于细胞因子组诱导7d后的诱导率[(51.2±10.7)%](P值均<0.05);诱导7d后,含A23187的两组诱导的DC低表达CD1a,分别为(8.2±2.3)%和(10.3±5.1)%,而CD83表达分别高达(85.6±8.8)%和(82.4±9.1)%,而细胞因子组CD1a和CD83表达率分别为(17.2±1.6)%和(77.4±12.9)%;3组所获得的DC在对异基因淋巴细胞的刺激增殖能力及其致敏T细胞对靶细胞的杀伤作用差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论单用A23187可快速(72h以内)诱导K562细胞向成熟DC转化,与联合细胞因子相比,该方法所获得的DC更趋成熟从而更适用于临床免疫治疗。单用A23187快速诱导白血病细胞生成DC是一种快速、简便、廉价而高效获取DC的方法。     

树突细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对耐药K562细胞的体外杀伤作用

目的研究细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞与同源树突细胞(DC)共培养后CIK细胞的增殖活性及表型的变化,并观察其对K562、K562/ADM细胞毒作用的影响。方法采集健康供者外周血单个核细胞(MNC)用于诱导培养CIK细胞及成熟DC,将成熟DC和CIK细胞混合培养,用MTT法检测DCCIK共培养细胞杀伤K562细胞及其耐药株的活性。结果在2.5～20.0效靶比范围内,CIK细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤率分别为(20.0±1.2)%～(61.1±2.2)%和(17.5±2.1)%～(45.2±3.3)%;DCCIK共培养细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤率分别为(25.2±2.3)%～(70.9±4.1)%和(22.4±2.7)%～(62.3±5.0)%。CIK细胞对K562敏感株和耐药株杀伤率的差异无统计学意义,DCCIK细胞对敏感株和耐药株的杀伤作用差异亦无统计学意义;DCCIK细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤活性均高于单纯CIK细胞组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论DC与CIK共培养细胞的增殖活性和细胞毒活性高于CIK细胞。     

外源性Wnt5a诱导K562细胞分化表型的实验研究

本研究探讨外源性Wnt5a诱导K562细胞定向分化的作用。用重组腺病毒AdWnt5a、AdGFP感染CHO细胞,分别制备Wnt5a和GFP对照条件培养液,并处理K562细胞1-7天,用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态变化;采用过氧化物酶(POX)、糖原(PAS)和非特异性酯酶(α-NAE)染色、细胞表面分化抗原CD13、CD14、CD68鉴定K562细胞的分化表型;用流式细胞术检测细胞分化周期的变化。结果表明:与对照GFP条件培养液相比,Wnt5a条件培养液处理的K562细胞形态和超微结构均出现了分化成熟的特征;POX、PAS、α-NAE细胞化学染色均为阳性,并且α-NAE阳性70%可被氟化钠抑制;单核细胞系表面标志抗原CD14、CD68和粒细胞系表面标志抗原CD13经免疫细胞化学染色均呈阳性,但CD13与对照比较无显著性差异;Wnt5a处理K562细胞5天,细胞周期阻滞在G2期。结论:外源性的Wnt5a可诱导K562细胞向成熟方向分化,并且有向单核细胞系分化的现象。     

树突状细胞-细胞因子诱导杀伤细胞体外抗白血病K562细胞的效应

背景:将细胞因子诱导的杀伤细胞与树突状细胞联合起来治疗恶性肿瘤,将有助于解除部分肿瘤患者T细胞的免疫无能,从而发挥协同抗肿瘤作用.目的:观察细胞因子诱导的杀伤细胞与树突状细胞共同培养对体外抗白血病K562细胞株的效应.方法:分离正常人外周血单个核细胞,诱导成树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞.将树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞共同培养3 d作为效应细胞,流式细胞术检测细胞表型;以K562为靶细胞,分别以单个核细胞,细胞因子诱导的杀伤细胞,树突状细胞和树突状细胞一细胞因子诱导的杀伤细胞为效应细胞,采用MTT法进行体外杀伤实验.结果与结论:随着效靶比的增加,各组效应细胞对K562细胞的杀伤活性也增加;同一效靶比下,各组效应细胞对K562细胞的杀伤活性不同,其中树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞对肿瘤细胞的杀伤活性最强,可达(77.88±1.57)%(P＜0.01).提示树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞抗白血病细胞的作用显著,较单纯应用细胞因子诱导的杀伤细胞或树突状细胞具有更强的抗肿瘤活性.     

联合培养法优化K562细胞红系诱导分化及红系相关基因和膜蛋白表达分析

目的 优化K562细胞体外红系诱导分化条件,分析红系相关基因和膜蛋白的表达,探讨K562细胞的分化潜能.方法 采用红系诱导联合培养法,优化诱导试剂丁酸钠、红细胞生成素、氯化高铁血红素等成分组合和剂量组合.诱导效率鉴定指标选用红系ALAS mRNA和粒系bcr/abl mRNA表达丰度分析、细胞形态学观察、联苯胺染色阳性率计数.红系分化进一步鉴定指标选用Realtime-PCR检测10种红系分化相关基因的表达;流式细胞术测定红系细胞膜标志物.结果 优化红系诱导组合联合培养K562细胞120 h后,联苯胺染色计数阳性细胞可达100%.Realtime-PCR检测Spectrina、Spectrinβ、band3、eALAS、CD47、RhD、EPB4.2的mRNA水平分别为对照组的8.05、14.58、22.87、14.52、26.53、3.48、1.94倍,而ber/abl mRNA水平为对照组的0.39倍.流式细胞术测定红系膜蛋白CD47,band3、RhD水平明显增高(P<0.01),GPA无明显差异.结论优化组合体外红系诱导分化法可使K562细胞稳定向红系分化,良好细胞状态利于转外源基因操作,进行红系统疾病研究.RhD比GPA更早在红系细胞表达,可作为早期红系特异标记.     

全反式维甲酸对K562细胞的诱导分化及c-myc基因表达的抑制

目的观察ATRA对K562细胞的诱导分化作用,探讨c-myc基因表达与诱导分化的关系及可能的作用机制。方法 采用形态学观察、流式细胞术及RT-PCR方法,检测K562细胞向粒系分化特征及c-myc基因的表达。结果 ATRA诱导K562细胞的诱导分化的同时,伴有c-myc基因mRNA水平表达下降。结论ATRA可通过下调c-myc基因表达而诱导K562细胞向粒系成熟方向分化。     

抑制钠氢交换蛋白1促进低氧诱导的K562细胞分化

本研究主要探讨低氧微环境对慢性髓系白血病细胞系K562分化的影响及钠氢交换蛋白1(NHE1)在该过程中的作用。利用低氧模拟物CoCl2或于低氧(2%O2、5%CO2和93%N2)环境中培养K562细胞,应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值(intracellular pH,pHi),瑞氏染色观察细胞形态,实时定量RT-PCR检测基因表达,Western blot技术检测MAPK磷酸化水平的改变。结果表明:与对照组相比,低氧培养的K562细胞表现出成熟相关的形态学改变,并伴随CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)的mRNA水平上调;特异性NHE1抑制剂Cariporide预处理能够促进低氧诱导的K562细胞分化,Cariporide处理后K562细胞的P38和ERK5蛋白激酶磷酸化水平显著增强。结论 :低氧及低氧模拟物能够诱导K562细胞系分化,抑制NHE1活性协同促进低氧诱导的K562细胞分化,其机制可能是通过增强细胞内MAPK蛋白激酶磷酸化水平促进分化。     

联合诱导法对K562细胞红系分化及其相关基因和膜蛋白表达的影响

目的优化K562细胞体外红系诱导分化条件,分析红系相关基因和膜蛋白的表达,探讨K562细胞的分化潜能。方法采用红系诱导联合培养法,优化丁酸钠、促红细胞生成素、氯化高铁血红素、枸橼酸铁等成分组合和剂量组合。鉴定指标选用红系血红素合成酶(eALAS)mRNA和粒系bcr/ablmRNA表达丰度分析、细胞形态学观察、联苯胺染色阳性率计数。红系分化进一步鉴定指标选用Real-timePCR检测10种红系分化相关基因的表达;流式细胞术测定红系细胞膜标志物。结果K562细胞诱导120h后,联苯胺染色阳性率达100%;α、β收缩蛋白(spectrinα、β)、带3蛋白(band3)、eALAS、整合素相关蛋白(CD47)、RhD血型抗原(RhD)、锚蛋白(ankyrin)、红细胞膜带4.2蛋白(EPB4.2)的mRNA水平为对照组的8.05、14.58、22.87、14.52、26.53、3.48、2.71、1.94倍,而bcr/ablmRNA水平为对照组的39%;红系膜蛋白CD47、band3、RhD水平明显增高(P<0.01),血型糖蛋白A(GPA)无明显差异。结论优化组合体外红系诱导分化法可使K562细胞稳定向红系分...     

PHA 诱导的 CIK 细胞的生物学特性及其对 K562 细胞杀伤活性影响的研究简

本研究探讨植物血凝素（PHA）诱导的细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与传统方法制备的CIK细胞的体外增殖能力、效应细胞含量和对K562细胞杀伤活性影响并分析其差异.分离健康人外周血单个核细胞（PBMNC）,分甲、乙两组,其中甲组用传统培养方法从PBMNC制备的传统CIK细胞,乙组采用PHA诱导单个核细胞制备获得的新型CIK细胞.在培养过程中,每3d统计各组细胞培养体系中细胞活率和细胞绝对值,并在培养至第15天时,用流式细胞仪分别检测两组细胞免疫表型,统计CD3＋ CD56＋、CD3＋ CD8＋和CD3＋ CD4＋细胞占各培养体系总细胞数的比例;同时用CCK-8试剂盒分别检测两组细胞在不同效靶比时对K562细胞的杀伤活性.结果表明：采用PHA诱导制备新型CIK细胞的方法比传统方法更能促进细胞增殖（P＜0.05）,且细胞活率都保持在90％以上.两组CD3＋ CD8＋、CD3＋ CD56＋细胞比例都显著升高.与传统方法比,新方法的CD3＋ CD8＋细胞升高比例存在显著差异（P＜0.05）,CD3＋ CD56＋细胞提升比例不存在差异,同时CD3＋ CD4＋下降的比例也不存在差异.效靶比为5：1、10：1、20：1、40：1时,PHA诱导制备的新型CIK细胞比传统方法制备的CIK细胞对K562细胞的杀伤活性更强（P＜0.05）,且随着效靶比的升高两种效应细胞对K562细胞的杀伤活力的差异明显性也增加.结论：与传统方法相比,PHA可明显提高CIK细胞的增殖能力,调高CD3＋ CD8＋细胞的比例,增强CIK细胞对K562细胞的杀伤活性,这为白血病及其他肿瘤的细胞免疫治疗提供一种新来源的CIK细胞和可靠依据.     

金雀异黄素对氯化钴诱导的白血病K562细胞缺氧诱导因子-1α表达抑制作用的研究

为探讨金雀异黄素（genistein,gen）对氯化钴（CoCl2）诱导的人白血病细胞K562缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达的影响,本研究采用低氧模拟剂CoCl2模拟低氧环境。实验分为量-效关系组和时-效关系组,前者CoCl2取0、50、100及150μmol/L4个浓度点,培养72小时进行检测;后者则在CoCl2取100μmol/L浓度的基础上,选取0、24、48和72小时4个时间点进行检测。gen干预实验分为：①正常对照组;②CoCl2150μmol/L组;③CoCl2150μmol/L加gen50μmol/L组;④CoCl2150μmol/L加gen100μmol/L;组⑤CoCl2150μmol/L加gen200μmol/L组,培养72小时检测。采用RT-PCR及Western blot的方法分别检测HIF-1α mRNA及蛋白表达水平。结果发现：CoCl2诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达增加,并呈明显的浓度和时间依赖性关系（p〈0.01）;而对HIF-1α mRNA的表达无显著影响（p〉0.05）;gen呈明显浓度依赖性地抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α蛋白表达（p〈0.01）,对K562细胞HIF-1α mRNA表达无显著影响（p〉0.05）。结论：CoCl2呈浓度和时间依赖性诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达,无论常氧还是在CoCl2诱导下,HIF-1α mRNA呈组成型表达;gen可抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α的表达,这种抑制作用与mRNA水平无关,主要在蛋白水平。     

三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的蛋白质组研究

目的　应用比较蛋白质组技术 ,寻找并鉴定与细胞凋亡相关的蛋白质 ,探讨三尖杉酯碱(HT)促进白血病细胞凋亡的分子机制。方法　应用AnnexinⅤ和PI双染法 ,通过流式细胞术区分HT诱导K5 6 2细胞凋亡早期和凋亡晚期阶段。并进一步运用比较蛋白质组的研究方法 ,对HT诱导K5 6 2细胞凋亡的相关蛋白进行“蛋白差异显示”、质谱鉴定和数据库查询。结果　 10 μg/mlHT作用K5 6 2细胞 5h和 2 4h ,凋亡细胞主群处于凋亡早期和凋亡晚期阶段 ;配比分析对照细胞和凋亡早期及晚期的蛋白图谱 ,统计学分析表明 ,在凋亡晚期组中 3个斑点消失 ,7个斑点表达量显著降低 ,10个斑点表达量显著升高 ;选择 10个表达量改变并且蛋白表达量较大的斑点进行肽指纹谱鉴定 ,其中 5个蛋白斑点鉴定结果比较肯定 ,分别为角蛋白 9、BTF3、色氨酰tRNA合成酶 (tryptophany1 tRNAsyn thetase,TrpRS)、RS和 prohibitin。 结论　在凋亡细胞中TrpRS、RS和 prohibitin表达上调以及BTF3表达下调 ,主要影响核酸转录和蛋白合成。角蛋白 9表达增加是一种凋亡抵抗反应。     

人参皂苷Re对K562细胞向红系分化的作用

背景:既往研究表明,人参皂苷既能促进正常血细胞生成,又能抑制白血病细胞的增殖,人参皂苷Re是人参皂苷的一类主要有效成分,有多种活性,但是对白血病细胞的作用及机制尚不清楚.目的:观察人参皂苷Re对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562细胞)分化的影响.方法:取对数生长期的K562细胞,调整细胞浓度为7×108 L-1.空白对照组予以RPMI1640培养基常规培养;人参皂苷Re组予以含人参皂苷Re的RPMI1640培养基培养,终浓度分别为30,60,90,120,150 μmol/L.Wright's染色、联苯胺染色、血红蛋白测定检测K562细胞向红系细胞分化的特征,流式细胞术测定细胞表面标志物表达.结果与结论:人参皂苷Re 90 μmol/L可以诱导K562细胞向早期红系细胞分化,表现为:①K562细胞形态学上可见细胞体积缩小,核直径减小,胞浆丰富,核浆比例降低.②人参皂苷Re在体外对K562细胞有诱导血红蛋白生成的作用.③细胞膜表面CD13阳性率增加.     

Interleukin 1 production by human monocytes induced in culture with K562 cells

The effect of neoplastic cells, K562, was evaluated on interleukin 1 (IL-1) production by peripheral blood monocytes of healthy humans. Secretion of the monokine was compared with that resulting from stimulation with bacterial lipopolysaccharide (LPS) or iron particles. In parallel, ability of non-malignant cells to induce production of monocyte-derived IL-1 was tested using allogeneic leukocytes (PBL). The studies were performed using concanavalin A (Con A) thymocyte co-activation assay, applying colorimetric assay of proliferation. The results obtained showed that IL-1 secretion by monocytes took place not only after tumor-cell stimulation, but also in co-cultures with allogeneic PBL. LPS and iron particles, however, were more efficient in stimulating IL-1 production. Absence of IL-1 activity was noted in supernatants of monocyte cultures in the presence of dexamethasone. Supernatants showing IL-1 activity were inactive in the presence of soluble immune response suppressor (SIRS) in IL-1 assay.     

Interleukin 1 production by human monocytes induced in culture with K562 cells

The effect of neoplastic cells, K562, was evaluated on interleukin 1 (IL-1) production by peripheral blood monocytes of healthy humans. Secretion of the monokine was compared with that resulting from stimulation with bacterial lipopolysaccharide (LPS) or iron particles. In parallel, ability of non-malignant cells to induce production of monocyte-derived IL-1 was tested using allogeneic leukocytes (PBL). The studies were performed using concanavalin A (Con A) thymocyte co-activation assay, applying colorimetric assay of proliferation. The results obtained showed that IL-1 secretion by monocytes took place not only after tumor-cell stimulation, but also in co-cultures with allogeneic PBL. LPS and iron particles, however, were more efficient in stimulating IL-1 production. Absence of IL-1 activity was noted in supernatants of monocyte cultures in the presence of dexamethasone. Supernatants showing IL-1 activity were inactive in the presence of soluble immune response suppressor (SIRS) in IL-1 assay.     

Enhancement of hematopoietic reconstitution with recombinant cytokines: effect of rhIL-6 in combination with rhGM-CSF and rhIL-3 on unmodified or T cell-depleted bone marrow.

We have investigated the response of unmanipulated and lymphocyte-depleted BM cells (BMC), pretreated with monoclonal rat antihuman lymphocyte (CD52) antibody (Campath-1G) used for prevention of GvHD, to incubation with rhIL-6 alone or in combination with rhGM-CSF, rhIL-3, or both. We investigated optimal conditions needed for incubation of human BMC under conditions that can be upscaled for clinical application prior to autologous (auto-BMT) and allogeneic blood or BM transplantation (allo-BMT). When used as a single agent, rhIL-6 showed no or a minimal effect in enhancing in vitro CFU-GM colony formation of human BMC. A potent additive effect was obtained when rhIL-6 was added to rhGM-CSF, rhIL-3, or a combination of both. Binding of the mAb Campath-1G, which is used for in vivo and in vitro depletion of immunocompetent lymphocytes to BMC, did not reduce the enhancing effect of a combination of rhGM-CSF and rhIL-3 on CFU-GM in the presence or absence of rhIL-6. Our present and previously published observations suggest that enhancement of hematopoiesis by rhIL-6 and other hematopoietic growth factors is T cell independent. Based on the present observations, pilot clinical studies to determine the potential benefit of in vitro activation of BMC prior to BMT with various cytokine combinations, including rhIL-6, seems justified. Our goal is to enhance hematopoietic reconstitution in vivo, focusing on possible enhancement of platelet reconstitution in vivo toward safer auto-BMT and more effective allo-BMT with better engraftment of T cell-depleted allografts while avoiding GvHD.     

rhGM-CSF和rhIL-4诱导的髓性白血病细胞刺激自体T细胞增殖与IFN-γ分泌作用

为了研究rhGM-CSF和rhIL-4诱导的髓性白血病细胞刺激自体T细胞的增殖作用和IFN-γ的分泌作用。运用rhGM-CSF和rhIL-4在体外进行CML和AML外周血MNC培养，培养的第7天运用流式细胞术测定CML和AML细胞的CD80，CD86和HLA-DR表达；以诱导的白血病细胞作为刺激细胞，自体T细胞作为反应细胞，在体外进行混合淋巴细胞培养（MLR），测定自体T细胞的增殖情况和IFN-γ的分泌情况。结果显示,rhGM-CSF和rhIl-4明显上调CML细胞HLA-DR，CD80和CD86的表达，并明显上调AML细胞的CD80与CD86表达；诱导后的白血病细胞刺激自体T细胞明显的增殖和促进IFN-γ的分泌（CML组）作用。结论：rhGM-CSF和rhIL-4诱导的CML和AML细胞可能具有向自体T淋巴细胞递抗原的能力。     

款冬花粗多糖体外诱导人白血病K562细胞的凋亡

目的:观察款冬花粗多糖对体外培养人白血病K562细胞有无凋亡诱导作用。方法:实验于2006-06-25/2006-09-08在河北北方学院实验中心细胞生物学实验室、分子生物学实验室、药物研究实验室完成。①款冬花粗多糖的提取:称取已干燥粉粹的款冬花417.0g,加入1000mL体积分数0.85乙醇回流提取1h,滤过,滤渣加入1000mL三蒸水回流提取2h,过滤,滤渣再加入1000mL三蒸水回流提取2h,合并2次滤液,减压浓缩至适量,四倍体积无水乙醇醇沉,静置过夜,过滤,沉淀依次用无水乙醇、丙酮、石油醚洗涤,即得款冬花粗多糖。苯酚-硫酸法测定款冬花粗多糖含量以生药计算为122.9mg。制成102.5g/L粗多糖溶液。②人白血病K562细胞的生长抑制实验:体外培养的K562细胞经10,30,50,70,90mg/L的款冬花粗多糖作用48h后,通过Hoeehst33258染色在荧光显微镜下进行形态学观察、采用琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞凋亡。结果:①经款冬花粗多糖作用后,荧光显微镜下发现体外培养的K562细胞中出现核固缩、凋亡小体。②经不同质量浓度款冬花粗多糖处理的K562细胞DNA电泳均出现相差约200bp的DNA梯子状条带。③流式细胞仪检测发现,经不同质量浓度款冬花粗多糖处理的K562细胞,有凋亡峰。结论:款冬花粗多糖可诱导体外培养人白血病细胞K562凋亡。     

苦参碱诱导K562细胞分化早期的基因表达分析

目的　比较苦参碱诱导K5 6 2细胞前后的基因表达谱 ,寻找与肿瘤细胞分化相关的基因。方法　 0 .1mg/ml苦参碱作用K5 6 2细胞 3h后 ,采用基因芯片技术测定并分析对照组与苦参碱处理组间的基因表达谱差异。结果　在 84 6 5个候选基因中 ,筛选出 30个差异表达基因 ,苦参碱处理组与对照组比较 ,表达上调的基因有 12个 ,主要涉及代谢相关蛋白基因、细胞受体等 ;表达下调的有18个 ,包括抑癌基因、原癌基因、DNA结合与转录因子、代谢相关蛋白基因、细胞信号转导基因等。结论　肿瘤细胞诱导分化是多基因作用的综合结果 ,筛选的基因对了解肿瘤发生、发展与逆转分化 ,以及寻找潜在的药物作用靶点可能有意义。     

全反式维甲酸诱导神经干细胞向神经元的分化

背景:目前研究证实全反式维甲酸在调控多种组织和细胞的增殖、生长发育、代谢以及维持内环境稳定等方面具有广泛生物学作用.目的:探讨全反式维甲酸诱导神经干细胞分化为神经元过程中的作用及其分子机制.设计、时间及地点:对照观察,体外细胞学实验,于2006-07/2007-06在上海同济大学附属医院实验室完成.材料:普通级孕13～14 d雌性SD大鼠6只,取胎鼠用于制备神经干细胞.诱导剂全反式维甲酸为Sigma公司产品.方法:取第3代神经干细胞,以2×108 L-1密度接种,分为全反式维甲酸诱导1 d,3 d,7d,10d组和空白对照组,各诱导组均加入1 μ mol/L全反式维甲酸,空白对照组仅加入等量生理盐水.主要观察指标:免疫荧光染色鉴定结果,计数分化为神经元的比例,应用半定量RT-PCR法检测维甲酸受体α mRNA的表达.结果:全反式维甲酸诱导后神经元特异性烯醇化酶染色呈阳性,细胞有多个细长突起,胞体呈绿色荧光,胞核呈蓝色荧光.与空白对照组比较,诱导3 d,7 d,10 d组神经元特异性烯醇化酶染色阳性细胞率均明显升高(P<0.05),且诱导7 d组达峰值.与空白对照组比较,各诱导组维甲酸受体α mRNA的表达量均明显升高(P<0.01).结论:全反式维甲酸能显著提高大鼠胚胎神经干细胞分化为神经元的比例,同时发现细胞维甲酸受体α mRNA的表达增加.     

Growth inhibition by STI571 in combination with radiation in human chronic myelogenous leukemia K562 cells

Altered radiation responses by STI571 (Imatinib, Glivec), a specific inhibitor of the tyrosine kinase activity of Bcr-Abl, was assessed in K562 chronic myelogenous leukemia cells using growth inhibition and colony formation assays. Flow cytometry, Western blotting, and microscope observation were used to determine cell cycle redistribution, erythroid differentiation, apoptosis, necrosis, senescence, and expression and phosphorylation of effectors downstream from Bcr-Abl as endpoints. STI571 (> or =24-h contact) retarded the growth of K562 cells and elicited reduction in the G(2)-phase content due to an efficient arrest in early S phase rather than to the disruption of the G(2) checkpoint as confirmed by analysis of Lyn and CDK1 phosphorylation. STI571 brought about the inhibitory dephosphorylation of Bcr-Abl and STAT5, but the expression of DNA-PKcs and Rad51 was unaffected and the interaction between radiation and STI571 was strictly additive with regard to induction of apoptosis. Overall STI571 interacted cooperatively with radiation to retard the growth of K562 cells but did not affect intrinsic radiosensitivity. However, STI571 and radiation acted antagonistically with each other with regard to induction of senescence and erythroid differentiation.