缬沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏抗氧化应激作用机制的研究

目的：观察缬沙坦对实验性2型糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法：链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病肾病大鼠模型随机分为对照组糖尿病组及治疗组（缬沙坦10mg·kg^-1·d^-1），治疗6周后，比较各组大鼠肾组织中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性，同时检测各组大鼠血糖、血肌酐、尿素氮、24h尿蛋白定量等。采用RT-PCR方法检测P22phoxmRNA表达。结果：治疗组较非治疗组明显改善尿白蛋白、尿素氮水平和肾脏肥大指数。肾脏MDA含量明显下降（P〈0．05），SOD活性显著上升（P〈0．05）。p22phox的mRNA相对含量在糖尿病组为（0．875±0．94），明显高于单切对照组（0．297±0．067）（P〈0．01），在治疗组为（0．484±0．064），较糖尿病组显著降低（P〈0．01），但仍高于对照组（P〈0．05）。结论：缬沙坦对2型糖尿病肾脏病变有一定的保护作用，其机制可能是通过抑制氧化应激反应，下调糖尿病大鼠P22phoxmRNA的表达对2型糖尿病模型大鼠肾脏产生保护作用。     

胡黄连总苷对高糖诱导肾小球系膜细胞氧化应激的保护作用

胡黄连总苷(total glucosides of Picrorhiza scrophulariiflora，TGP)是具有抗氧化作用的活性组分。由于氧化应激在糖尿病肾病发病中起关键作用，因此本研究考察了TGP对高糖培养下系膜细胞病变和氧化应激损伤的影响。通过高糖(25 mmol·L^-1)刺激3周造成糖尿病系膜细胞损伤模型，分别以荧光素探针DCFH-DA，Rh123和Fluo-3/AM负载细胞，流式细胞仪法检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)和［Ca²⁺］_i，观察TGP对高糖引起系膜细胞肥大、细胞外基质分泌增加的保护作用。结果表明，高糖培养组系膜细胞肥大，胶原IV的分泌增加，细胞内ROS升高，MMP降低，［Ca²⁺］_i升高，TGP能明显改善高糖诱导的系膜细胞肥大和降低胶原IV的分泌，降低细胞内ROS含量，提高MMP的水平和降低［Ca²⁺］_i。因此TGP可以保护高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤。     

积雪草酸对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及细胞外基质分泌的影响

目的 探讨积雪草酸对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及细胞外基质分泌的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为高糖组(A组)、高糖加积雪草酸干预组(B组)、正常对照组(C组).培养1周、2周、3周后,分光光度计比色法检测细胞培养液上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测培养液上清液中转化生长因子β1(TGF-β1)、纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的含量.结果 与C组相比,A组细胞上清液SOD活力下降,MDA含量增加,且随时间延长变化越明显(P＜0.05);细胞上清液中TGF-β1、FN、Col-Ⅳ分泌量均增加,并且FN分泌量随时间延长变化越明显(P＜0.05).与A组相比,B组细胞上清液SOD活力增加,MDA含量下降,TGF-β1、FN、Col-Ⅳ分泌量减少(P＜0.05).结论 积雪草酸可以缓解高糖诱导的系膜细胞氧化应激损伤以及减少细胞外基质的分泌,对糖尿病肾病大鼠起肾保护作用.     

依帕司他抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激的分子机制

目的探究依帕司他对高糖诱导的肾小球系膜细胞抑制氧化应激的分子机制。方法将106个肾小球系膜细胞转移至培养瓶中,分为正常生理浓度葡萄糖(5.5 mmol·L~(-1))组、高浓度葡萄糖(30 mmol·L~(-1))组、依帕司他高剂量浓度组(10μmol·L~(-1))、依帕司他中剂量浓度组(1μmol·L~(-1))、依帕司他低剂量浓度组(0.1μmol·L~(-1)),在37℃,体积分数5%CO_2培养箱内于无血清培养基培养48 h。分别测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,T-SOD)、铜锌-超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、一氧化氮(NO)含量。采用western-blot方法分别测定肾小球系膜细胞内硝化酪氨酸蛋白(NT)来反映肾小球细胞内过氧亚硝基阴离子(ONOO~-)的生成量。结果与高浓度葡萄糖组对比,依帕司他各剂量组中的肾小球系膜细胞内ROS含量显著地降低;系膜细胞中T-SOD和Cu/Zn-SOD含量显著升高;系膜细胞中GSH的含量无显著变化。与高浓度葡萄糖组相比,依帕司他各剂量组的系膜细胞中NO含量显著地升高;高剂量(10μmol·L~(-1))和中剂量(1μmol·L~(-1))的依帕司他能够显著地降低NT的蛋白表达,表明ONOO~-的生成被显著抑制。结论依帕司他能够升高由高糖诱导的肾小球系膜细胞中T-SOD和Cu/Zn-SOD含量,增强其对ROS的清除能力,降低由高糖诱导的系膜细胞中ROS含量。依帕司他虽能够升高NO生成,但仍能抑制高糖培养的系膜细胞中NT蛋白表达,抑制ONOO~-生成。     

脂联素对高糖环境下人肾小球系膜细胞增殖及氧化应激水平的影响

目的 探讨脂联素(Adiponectin,ADPN)对高糖环境下人肾小球系膜细胞(HMCs,human Mesangial Cells) 增殖及氧化应激水平的影响,揭示脂联素在糖尿病肾病中的保护作用.方法 ①体外培养HMCs:①将HMCs随机分为正常对照组(5.5 mmol/L 葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol/L葡萄糖)、脂联素组(30.0 mmol/L葡萄糖+2.5 μg/ml脂联素),分别培养24、48、72 h后,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3组不同时间点HMCs的增殖情况.②将HMCs随机分为上述3组细胞,分别培养24、48、72 后运用硫代巴比妥酸法(TBA法)测定细胞上清液中MDA及SOD的含量.③再将HMCs随机分为上述3组细胞,分别培养24、48、72 h,运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定HO-1 mRNA的表达,观察细胞氧化应激指标变化.结果 ①24 h高糖组与正常对照组比较细胞增殖无统计学差异(P>0.05),48、72 h两组比较,高糖组细胞增殖明显受抑制(P<0.05).加入脂联素促进细胞增殖,与高糖组比较差异有统计学意义(P<0.05);②24、48、72 h高糖组MDA含量均升高,SOD含量及HO-1 mRNA的表达均下降,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05).加入脂联素后,观察上述氧化应激指标均得到明显改善,差异有统计学意义(P<0.05).结论长期高糖刺激抑制人肾小球系膜细胞增殖,外源性加入脂联素可促进细胞增殖.高糖组均引起氧化应激指标升高,加入脂联素可降低系膜细胞氧化应激水平,提示其对细胞起保护作用.     

高糖对体外培养大鼠肾小球系膜细胞分泌ECM的影响

目的：观察高糖条件下大鼠肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）分泌细胞外基质（ＥＣＭ）成分中纤粘连蛋白（ＦＮ）、层粘连蛋白（ＬＡＭ）、Ｃ－Ⅲ（Ⅲ型胶原）和ＣＩＶ（Ⅳ型毅然的）的变化。方法：采用体外大鼠肾小球系膜细胞培养。用ＥＬＩＳ圾关测定。结果：高糖对体外培养的系膜细胞分泌ＥＣＭ的影响具有选择性,仅增加３功能相关蛋白的合成,而对其他类型的同质胶原没有影响。结论：体外高糖可增加细胞外基质蛋白合成。由此可以推断,在     

积雪草酸对高糖培养肾小球系膜细胞内质网应激的影响

目的 探讨积雪草酸(AA)对高糖培养肾小球系膜细胞(HBZY-1)内质网应激的影响.方法 HBZY-1细胞随机分为五组:高糖对照组(A组)、高糖加不同浓度AA组(B组30 μmol/L、C组60μmol/L、D组90 μmol/L)和空白对照组(E组).分别培养12和24 h后,Western blot法检测蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK (P-PERK)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(Caspase-12)的表达.结果 与E组相比,A组培养12和24 h后的PERK表达降低,P-PERK、CHOP和Caspase12表达增加(P＜0.05).与A组相比,培养12h后C、D组和培养24 h后B、C、D组的PERK表达均增加,P-PERK、CHOP和Caspase-12表达降低(P＜0.05).上述变化均可见浓度依赖性.结论 AA可能通过下调CHOP和Caspase-12蛋白的表达对糖尿病大鼠肾脏起到保护作用.     

丙泊酚对高糖诱导的人肾小球系膜细胞氧化应激和炎症反应的影响

目的探讨丙泊酚对高糖诱导的人肾小球系膜细胞损伤的影响。方法该研究于 2021年 3月至 2022年 3月进行。体外培养人肾小球系膜细胞,采用 30 mol/L葡萄糖诱导建立人肾小球系膜细胞细胞损伤模型,用丙泊酚浓度 10、20、40 μmol/L处理细胞,细胞分为对照组、高糖组、高糖 +低、中、高剂量丙泊酚组。酶联免疫吸附测定( ELISA)检测超氧化物歧化酶( SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-PX)、丙二醛、活性氧、白细胞介素( IL)-10、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)IL-1β表达;蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶( iNOS)、细胞间黏附分子 -1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白 -1(MCP-1)、 IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达。结果高糖组的丙二醛［( 16.7±1.7)mmol/L比( 3.8±0.4)mmol/L］、活性氧［( 9.6±0.9)μg/L比( 3.5±0.3)μg/L］、 IL-10［( 65.3±6.9)ng/L比(26.9±3.2)ng/L］、 TNF-α［( 105.6±10.9)ng/L比( 42.8±4.8)ng/L］和 IL-1β［( 79.7±8.2)ng/L比( 31.2±3.6)ng/L］明显高于对照组; iNOS、ICAM-1、MCP-1、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显高于对照组; SOD、GSH-Px明显低于对照组,均 P<0.05。高糖 +低剂量丙泊酚组、高糖 +中剂量丙泊酚组、高糖 +高剂量丙泊酚组的丙二醛、活性氧、 IL-10、TNF-α和 IL-1β明显低于高糖组; iNOS、 ICAM-1、MCP-1、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显低于高糖组,均 P<0.05;SOD、GSH-Px明显高于高糖组,均 P<0.05。结论丙泊酚能减轻高糖诱导的人肾小球系膜细胞氧化应激和炎症反应,发挥保护肾脏的作用。     

高糖环境下肾小球内皮细胞损伤与糖尿病肾病的关系

糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）是糖尿病的慢性并发症之一,是终末肾病和糖尿病患者死亡的主要原因,但DN的发生、发展机理目前尚无定论。肾小球内皮细胞是肾小球固有细胞之一,作为肾小球滤过膜的第一道屏障,可直接与血液及血液中的循环物质接触,较易受到血糖、血脂及炎症因子的损伤。持续高糖环境下肾小球内皮细胞可发生氧化应激反应,产生大量活性氧族损伤肾小球内皮细胞,进而促进DN的发生、发展。本文就高糖环境下肾小球内皮细胞损伤与DN的关系作一综述,以期为DN的防治提供参考。     

羟苯磺酸钙对2型糖尿病模型大鼠肾脏氧化应激的影响

目的 :观察羟苯磺酸钙对2型糖尿病模型大鼠肾脏氧化应激的影响。方法 :将大鼠分为正常对照组、糖尿病组、羟苯磺酸钙组 ,比较各组大鼠肾组织中丙二醛 (MDA )含量、超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -PX)活性 ,同时观察血糖、肾功能和肾脏形态的变化。结果 :与糖尿病组比较 ,羟苯磺酸钙组肾脏MDA含量明显下降 ,SOD、GSH -PX活性显著上升 ,肾功能和肾脏形态均明显改善。结论 :羟苯磺酸钙通过抑制氧化应激反应对2型糖尿病模型大鼠肾脏产生保护作用。     

舒洛地特联合缬沙坦对早期糖尿病肾病疗效临床研究

目的:观察舒洛地特联合缬沙坦对早期糖尿病肾病的疗效.方法:将我院就诊的早期DN患者60例,随机分为对照组和治疗组,两组同时给予常规综合治疗.对照组给予缬沙坦80mg口服,每日1次,共7周;治疗组在此基础上加用舒洛地特600LSU肌注,每日1次,15天后改为250LSU口服,每日两次,总疗程7周.检测两组患者在治疗前后的...     

吡格列酮对STZ糖尿病大鼠肾组织氧化应激的影响

目的观察不同剂量盐酸吡格列酮对STZ诱导的糖尿病大鼠肾组织氧化应激的影响。方法 STZ腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。成模糖尿病大鼠随机分为模型组和不同剂量吡格列酮组,并设正常对照组,干预8周后检测肾皮质MDA含量,SOD活性,肾组织NADPH氧化酶亚单位p22phoxmRNA和p47phox mRNA表达。结果各吡格列酮组较模型组MDA含量,p22phox mRNA和p47phox mRNA表达明显降低,SOD活性明显升高(P<0.05)。结论吡格列酮可抑制STZ糖尿病大鼠肾脏NADPH氧化酶表达,降低肾脏氧化应激水平,并具有一定的剂量依赖性,该作用可能与其肾脏保护部分有关。     

叶酸和维生素B12对糖尿病肾病患者氧化应激水平的影响

目的:探讨叶酸(FA)、维生素B1(2VitB12)干预对糖尿病肾病(DN)患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)和氧化应激的影响,从而提供治疗DN的有效治疗方法。方法:将40例DN患者随机分为DN1组和DN2组,DN1组仅给予常规治疗,DN2组在常规治疗的基础上给予FA5mg和VitB12500μg每日3次,干预时间为2周。测定治疗前后的血糖、Hcy、FA、VitB12、血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、肾功能、肝功能、总胆固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、24h尿微量白蛋白。结果:(1)治疗后,DN1组FA、VitB12、Hcy无明显变化,DN2组FA、VitB12上升,Hcy水平下降(P<0.01),DN1组和DN2组血糖、MDA、24h尿微量白蛋白定量较干预前下降,NO、SOD较干预前升高(P<0.01)。(2)DN2组MDA、NO、SOD、24h尿微量白蛋白变化幅度高于DN1组(P<0.05)。结论:补充FA、VitB12可降低同型半胱氨酸,降低DN患者体内的氧化应激水平,可能是治疗DN的有效措施。     

甜橙黄酮体外抑制氧化应激减轻肾小球微血管内皮细胞焦亡的机制研究

目的 糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)的发病率逐年升高,氧化应激诱发的肾小球微血管内皮损伤与其发生发展具有重大关联,但其潜在机制尚不完全清楚,且治疗策略有限。甜橙黄酮是一种广泛用于治疗心血管疾病的多甲氧基化黄酮类化合物,有研究显示其抗氧化的作用较为显著。然而,甜橙黄酮是否抑制肾小球微血管内皮细胞的氧化应激来延缓DKD的进展尚不清楚。因此,本研究旨在从一个全新的角度探讨DKD发生发展的机制,并证实甜橙黄酮的作用和机理,为DKD的治疗提供新思路。方法 采用Px-12孵育人肾小球微血管内皮细胞(human renal glomerular microvascular endothelial cells, HRGEC)在体外建立细胞氧化损伤模型。根据光镜观察细胞形态、细胞活性检测试剂盒-8明确细胞活性、并使用(reactive oxygen species ,SROS)/O_^2?荧光探针测定各组HRGEC细胞氧化应激水平的差异。通过透射电镜观察各组细胞膜形态的变化以及western blot检测膜穿孔蛋白(gasdermin D,GSDMD)蛋白表达的变化来明确细胞焦亡的情况。最后通过增加氧化应激抑制剂和细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK1/2)抑制剂,采用western blot探讨间隙连接、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPK)信号通路在HRGEC细胞焦亡中的调控关系以及甜橙黄酮的作用机理。结果 Px-12可诱导HRGEC细胞细胞膜完整性破坏,并可使 GSDMD蛋白剪切暴露其NT端,出现细胞焦亡的发生；Px-12可明显上调ROS/O_^2-的表达,激活氧化应激水平；甜橙黄酮可明显的抑制Px-12诱导的ROS/O_^2-增加,同时能够减少Px-12诱导的GSDMD-NT的形成和ERK的磷酸化；Px-12可诱导间隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)的表达明显的增加,ERK信号通路抑制剂PD98059则可以明显的抑制Cx43的表达,而甜橙黄酮与其作用相似。结论 甜橙黄酮可减轻Px-12诱导的HRGEC细胞焦亡,可能与调控ERK-MAPK/Cx43信号通路相关。     

Protective Effect of Nebivolol against Oxidative Stress Induced by Aristolochic Acids in Endothelial Cells

Aristolochic acids (AAs) are powerful nephrotoxins that cause severe tubulointerstitial fibrosis. The biopsy-proven peritubular capillary rarefaction may worsen the progression of renal lesions via tissue hypoxia. As we previously observed the overproduction of reactive oxygen species (ROS) by cultured endothelial cells exposed to AA, we here investigated in vitro AA-induced metabolic changes by ¹H-NMR spectroscopy on intracellular medium and cell extracts. We also tested the effects of nebivolol (NEB), a β-blocker agent exhibiting antioxidant properties. After 24 h of AA exposure, significantly reduced cell viability and intracellular ROS overproduction were observed in EAhy926 cells; both effects were counteracted by NEB pretreatment. After 48 h of exposure to AA, the most prominent metabolite changes were significant decreases in arginine, glutamate, glutamine and glutathione levels, along with a significant increase in the aspartate, glycerophosphocholine and UDP-N-acetylglucosamine contents. NEB pretreatment slightly inhibited the changes in glutathione and glycerophosphocholine. In the supernatants from exposed cells, a decrease in lactate and glutamate levels, together with an increase in glucose concentration, was found. The AA-induced reduction in glutamate was significantly inhibited by NEB. These findings confirm the involvement of oxidative stress in AA toxicity for endothelial cells and the potential benefit of NEB in preventing endothelial injury.     

氧化应激在TRAIL诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的 探讨氧化应激在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用.方法 40μg·L-1 TRAIL处理细胞后,用MTT法检测TRAIL对细胞增殖的抑制作用;用分光光度法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪检测胞浆内的活性氧(ROS)水平;激光共聚焦测定细胞线粒体膜电位(△Ψm);蛋白质印迹法检测Bcl-2、Cyt C、DR 4、DR 5蛋白量.结果 40 μg·L-1 TRAIL对Hela细胞的生长具有显著的抑制作用;使抗氧化因子GSH含量明显下降,氧化应激产物ROS、MDA含量明显增多;到6h时△Ψm不断降低,能明显下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,引起线粒体Cyt C向细胞质的释放;同时上调死亡受体DR 5的表达.而抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能抑制TRAIL引起的这些变化.结论 氧化应激在TRAIL诱导的Hela细胞凋亡中起着重要作用,可能与ROS激活线粒体途径和上调DR 5的表达密切相关.     

舒洛地特对高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用研究

目的：观察舒洛地特对高糖培养基中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用,探讨舒洛地特对肾脏的保护作用。方法：培养大鼠肾小球系膜细胞24 h后,将培养的细胞分为对照组（C组,普通培养基,含5.6 mmol·L-1葡萄糖）,甘露醇组（M组,24.2 mmol·L-1甘露醇＋C组）,高糖组（H组,30 mmol·L-1高糖MEM培养基）、舒洛地特干预组（S组,H组＋1.0 LRU·ml-1舒洛地特）。培养24 h后,RT-PCR和Western blotting法检测各组CD36 mRNA及蛋白的表达。结果：对照组和甘露醇组CD36mRNA（0.24±0.07和0.21±0.06）及蛋白（0.26±0.08和0.22±0.07）的表达差异无统计学意义（P〉0.05）,高糖组CD36 mRNA（0.62±0.11和0.24±0.07）及蛋白（0.83±0.23和0.26±0.08）表达显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,舒洛地特干预组CD36 mRNA（0.36±0.13和0.62±0.11）及蛋白（0.42±0.15和0.83±0.23）表达显著低于高糖组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：舒洛地特可抑制高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原的表达,可能是舒洛地特发挥肾脏保护作用的机制之一。