肺炎克雷伯菌（ESBLs）氨基糖苷类修饰酶基因的研究

目的了解临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的肺炎克雷伯菌的耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法对临床分离的35株产ESBLs肺炎克雷伯菌采用聚合酶链反应技术（PCR）检测6种氨基糖苷类修饰酶aac（3）-Ⅰ,aac（3）-Ⅱ,aac（6）-Ⅰ,age（6’）-Ⅱ,ant（3″）-Ⅰ,ant（2″）-Ⅰ。结果该35株肺炎克雷伯菌检出：aac（3）-Ⅰ阳性4株（11．8％）,aac（3）-Ⅱ阳性7株（20．6％）,aac（6’）-Ⅰ阳性13株（37．1％）,aac（6’）-Ⅱ阳性7株（20％）,ant（3″）-Ⅰ阳性11株（31．4％）,ant（2″）-Ⅰ阳性12株（34.3％）。共有26株（74．3％）检出AMEs。同一菌株可产生两种或两种以上的氨基糖苷类修饰酶基因。结论临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯茵氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。     

肺炎克雷伯菌老年人分离株氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因研究

目的 了解肺炎克雷伯菌(KPN)老年人分离株氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因存在状况.方法 对80株PKN菌进行2种氨基糖苷类修饰酶基因和I类整合子的遗传标记-I类整合酶基因检测.结果 80株KPN菌中aac(3)-Ⅱ阳性60株(75%)、aac(6)-Ⅰb阳性5株(6.3%),共有60株检出氨基糖苷类修饰酶基因(75%),intll基因阳件62株(77.5%),与庆大霉素、妥布霉素、奈替米星、阿米卡星耐药率分别为75%、80%、65%和60%.结论 该80株老年人分离株PKN菌氨基糖苷类抗菌药物耐药与产氨基糖苷类修饰酶及I类整合酶基因密切相关.     

肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因检测的临床应用

目的评价应用检测氨基糖苷类修饰酶基因判断肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药性。方法对61株肺炎克雷伯菌采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,再采用聚合酶链反应检测氨基糖苷类修饰酶基因并比较分析。结果61株肺炎克雷伯菌对AMK、GEN、TOB、NET耐药率分别为52.4%、86.9%、91.8%、78.7%;氨基糖苷类修饰酶基因检出率（56/61）91.8%,其中aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ检出率分别为13.1%、60.7%、55.7%、4.0%、6.6%、26.2%。结论采用聚合酶链反应法检测肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因判断耐药与K-B纸片扩散法高度一致,灵敏度高,特异性强,是筛选氨基糖苷类抗菌药物耐药的可靠方法。     

肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因型的研究

近年来肺炎克雷伯菌已成为医院感染的重要病原菌,它对氨基糖苷类药物的耐药问题日益受到重视.     

肺炎克雷伯杆菌对氨基糖苷类耐药机制的研究

目的了解肺炎克雷伯杆菌对氨基糖苷类药物的耐药情况,同时进行基因分型,确立耐药基因的位点和种类,进一步研究不同基因型对庆大霉素、阿米卡星、奈替米星、链霉素、妥布霉素的耐药情况以及产超广谱β-内酰胺酶与非产超广谱β-内酰胺酶同基因型的关系。方法收集浙江省人民医院检验医学中心2007年2月至2007年8月分离鉴定菌株31株,采用Kirby-Bauer法测定肺炎克雷伯杆菌对庆大霉素、阿米卡星、奈替米星、链霉素、妥布霉素的敏感性,并采用聚合酶链反应(PCR)及电泳测定技术分析氨基糖苷类修饰酶基因型。结果从浙江省人民医院分离到的31株肺炎克雷伯杆菌对庆大霉素、奈替米星、链霉素的耐药率分别为58.1%、6.5%、61.3%,阿米卡星和妥布霉素都未发生耐药;含一种基因型的有6株,两种基因型的有10株,三种基因型的有8株,四种基因型的有3株;产ESBLs有4株,其中含aac(3)-Ⅱ、aac(6″)-Ⅱ产ESBLs的百分率达75%。结论必须加强对细菌耐药性变迁的动态监测,更好地指导临床合理用药。     

肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶基因分型研究

目的调查广州地区下呼吸道感染肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的分离率及各种基因型的流行病学分布。方法收集广州地区13家医院2001-10～2002-12临床分离的肺炎克雷伯菌511株,采用美国临床实验室标准化委员会规定的ESBL表型筛选和确证试验确定ESBL的发生率、PCR扩增对产ESBL菌初步分型,然后对部分PCR扩增阳性产物测序,序列分析进一步确定基因型。结果肺炎克雷伯菌产ESBL分离率为40.1%。TEM型49株占21.9%,均为TEM-1型;CTX-M型59株占28.8%;SHV型96株占46.8%。结论SHV型是广州地区下呼吸道感染肺炎克雷伯菌产ESBL流行的常见基因型。     

浙江丽水铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶编码基因研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶编码基因存在状况。方法对临床分离的40株铜绿假单胞菌采用聚合酶链反应（PcR）检测基因[aac（3）-Ⅱ、aac（6）-Ⅰ,aac（6＇）-Ⅱ、ant（3＂）-Ⅰ、ant（2＂）-Ⅰ]。结果40株菌中aac（6＇）-Ⅰ阳性18株（45.0％）、ant（2＂）-Ⅰ阳性21株（52.5％），其余基因均阴性。结论丽水临床分离的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶编码基因携带率高。     

多重耐药大肠埃希菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解多重耐药大肠埃希菌(ECO)氨基糖苷类药物耐药机制。方法采用PCR检测20株多重耐药ECO菌11种16S rRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因。结果1株检出16S rRNA甲基化酶基因(5.0%),并为新亚型;16株检出氨基糖苷类修饰酶基因(80.0%)。15号株rmtB基因测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库(GenBank)已登录的rmtB氨基酸不同,为新亚型。结论本组多重耐药ECO菌氨基糖苷类耐药机制与产16S rRNA甲基化酶和产氨基糖苷类修饰酶相关。多重耐药ECO菌存在新的氨基糖苷类药物耐药机制。     

南京地区铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子类型分析

目的 调查南京地区铜绿假单胞菌(PA)氨基糖苷类药物修饰酶基因(AMEs)分子类型.方法 K-B药敏法测定2003～2005年临床分离的PA对庆大霉素、阿米卡星、链霉素的药敏表型,筛选出56株对氨基糖苷类药物耐药(至少对一种受试药物耐药)的菌株,聚合酶链反应(PCR)的方法对6种AMEs进行了检测和分析.结果 PA对庆大霉素的耐药率为51.8%(29/56),对阿米卡星的耐药率为26.8%(15/56),对链霉素的耐药率为96.4%(54/56).6种AMEs检出率由高到低分别为:aac(3)-Ⅱ 48.2%、ant(2')-Ⅰ 48.2%、aac(6')-Ⅱ 41.0%、ant(3')-Ⅰ 17.8%、aac(6')- 12.5%、aac(3)-Ⅰ 0.0%.总AMEs检出率为68.0%.结论 南京地区PA对氨基糖苷类抗菌药的耐药主要由AMEs引起.     

多重耐药大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶与Ⅰ类整合酶基因的研究

目的 探讨本地区临床分离多重耐药大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)的氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合子基因存在情况.方法 纸片扩散法(K-B法)测定71株大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药性,应用PCR技术对E.coli进行氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因的检测.结果 71株大肠埃希菌对庆大霉素、左氧氟沙星、头孢噻肟、头孢他啶的耐药率分别分为66.20％、63.38％、59.15％、18.31％,其中23株为多重耐药株(32.39％).氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ阳性40株(56.34％),aac(6′)-Ⅰ阳性22株(30.99％),ant(3″)-Ⅰ阳性14株(19.72％),未检出aac(6′)-Ⅱ阳性株,氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为74.65％;Ⅰ类整合酶基因(intI1)阳性53株(74.65％).多重耐药与非多重耐药大肠埃希菌中aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ、总氨基糖苷类修饰酶基因、intI1的阳性率有统计学差异(P＜0.05).结论 本地区多重耐药E.coli的氨基糖苷类修饰酶基因、Ⅰ类整合酶基因携带率高.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物的耐药情况.方法对ESBLs(-)肺炎克雷伯菌73株和ESBLs( )肺炎克雷伯菌31株进行11种抗菌药物的药物敏感性试验.ESBLs采用双纸片协同法测得.结果肺炎克雷伯菌产ESBLs阳性率为29.8%.ESBLs( )菌株对多种抗菌药物敏感率显著低于ESBLs(-)菌.ESBLs( )菌株对亚胺培南、氨曲南的敏感率最高,阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦、环丙沙星次之;对头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松及哌拉西林耐药性很强.结论 ESBLs( )肺炎克雷伯菌耐药性较强,亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦对其有很高的活性,这些数据对临床经验用药有较好的指导作用.     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的探讨我院肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因分布规律。方法对20株经双纸片试验确证为ESBLs表型阳性的肺炎克雷伯菌进行bla TEM-1、blaSHV-1、CTX—M-1组、TOHO-1组等4种基因PCR扩增，并对16株blaSHV-1基因PCR扩增阳性的菌株进行基因序列测定，在Internet网上与GenBank中的已知序列进行核苷酸相似性分析，并进行编码基因对位和氨基酸序列对比分析。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌中blaTEM-1，blaSHV-1，CTX—M-1组等3种基因扩增阳性率分别是50．0％、95．0％、20．0％。16株肺炎克雷伯菌中有4株序列与SHV—1a（序列号：X98101，74→934）氨基酸序列完全相同；有3株序列与SHV-2（序列号：AY570959，42→812）100％相同；有2株序列与SHV-11（序列号：AY293069，41→817）100％相同；有4株序列与SHV-27（序列号：AF293345，2→821）氨基酸序列完全相同；有1株序列与SHV-28（序列号：AF538324，12→823）100％相同；有2株序列在GenBank中未找到与之完全相同的序列。结论本地肺炎克雷伯菌中有SHV—1a、SHV-11、SHV-28广谱β-内酰胺酶基因和SHV-2、SHV-27 ESBLs基因存在。     

肺炎克雷伯菌耐药分析

目的探讨医院分离1094株肺炎克雷伯菌的产酶情况。方法采用2012年CLSI推荐产超广谱β-内酰胺酶（ESBLS）和碳青霉烯酶的检出方法,主要是纸片扩散法和改良Hodge试验。结果 1094株肺炎克雷伯菌产ESBLs率为69.7%,改良Hodge试验阳性株22株。结论肺炎克雷伯菌的产ESBLs率一直居高,对碳青霉烯类抗生素的耐药现状十分严峻,临床工作人员应做到密切观察,提前预防。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌研究进展

感染性呼吸系统疾病不仅是临床上最常见的疾病之一,也是最常见的致死原因之一,导致了巨大的社会负担和经济负担,因此病原菌感染与抗感染治疗长期以来不仅是一个关系重大的社会问题,也是呼吸系统和其他相关临床及基础-临床领域密切关注的课题.产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌目前已在全世界范围内流行,且多重耐药菌株所占比例高,使临床治疗面临巨大挑战.因此,掌握产超广谱β-内酰胺酶菌株的流行病学特征、耐药的特点及相关检测方法,对有效地进行预防和控制至关重要.本篇文章就相关研究进展作一综述.     

肺炎克雷伯菌临床分离株产广谱和超广谱β-内酰胺酶的基因型研究

目的 了解产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性及其基因型分布特征,指导临床进行抗感染治疗,更好地控制耐药菌株的播散.方法 对38株经双纸片试验确认为ESBLs表型阳性的肺炎克雷伯菌采用纸片扩散法进行药物敏感性试验;采用PCR法对ESBLs阳性株进行TEM型、SHV型、CTX-M型、VEB型和PER型ESBL基因检测,对PCR阳性产物进行测序确定基因型别;同时采用PCR法检测整合酶基因,对PCR产物进行测序确定整合酶类别.结果 38株产ESBLs的肺炎克雷伯菌对青霉素类和头孢菌素类耐药性十分严重,对庆大霉素和复方磺胺甲嚼唑的耐药率也均＞90%,未检测到耐亚胺培南和美罗培南的菌株.38株ESBLs阳性菌株检测到3种ESBLs型,分别为TEM型、SHV型和CTX-M型,VEB型和PER型没有被检出.CTX-M型、TEM型和SHV型阳性率分别为92.1%(35/38)、84.2%(32/38)、76.3%(29/38).整合酶基因阳性率为94.7%(36/38).经测序,所有TEM型均为TEM-1广谱β内酰酶.29株SHV型阳性的PCR产物经测序证实,SHV-12有19株,SHV-11有4株,SHV-2有3株,SHV-28有2株及SHV-1有1株.35株CTX-M型中,CTX-M-14有22株,CTX-M-15有13株.同时检测到3种基因的有22株(57.9%),同时检测到2种基因的有14株(36.8%).整合酶基因PCR产物经测序为Ⅰ类整合子.结论 产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性及多重耐药性严重,Ⅰ类整合子是其多重耐药和耐药性传播的主要原因;CTX-M-14及SHV-12为肺炎克雷伯菌产ESBLs的主要基因型.     

3株含qnr基因肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的检测

目的了解临床分离含qnr基因,(质粒介导的喹酮类耐药基因)肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的基因型别。方法琼脂稀释法测定3株临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药性,NCCLS表型确证试验进行产ESBLs菌株的表型鉴定、采用TEM、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-13组、OXA-1组、OXA-2组、OXA-10组、PER-1、VEB-1β-内酰胺酶通用引物以及TEM、CTX-M-13组、OXA-1组全编码基因引物、I类整合酶基因引物进行PCR检测和DNA序列分析;同时对这些菌株进行PFGE检测。结果3株临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌均为产ESBLs菌株,ESBLs基因型别为CTX-M-14,其中2株细菌同时产生TEM-1型广谱β-内酰胺酶、1株同时产生TEM-1和OXA-30型广谱β-内酰胺酶,I类整合酶基因均为阳性;这些菌株对青霉素类、一代、二代、三代头孢菌素(头孢噻肟)以及多种喹诺酮类均显示耐药。3株菌株中有2株的PFGE谱型相同。结论临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌可同时产生CTX-M-14超广谱β-内酰胺酶,引起多重耐药,并存在克隆传播,临床应加强检测。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯氏菌的耐药性监测

目的 对肺炎克雷伯氏菌进行超广谱β-内酰胺酶检测及耐药性测定。为产ESBLs细菌的监控和治疗提供依据。方法 对临床分离的肺炎克雷伯氏菌采用K—B纸片扩散法．严格按照美国NCCLS制定的标准，进行ESBLs检测并对19种抗生素的耐药性测定。结果 在41株肺炎克雷伯氏菌中，检出16株产ESBLs阳性率为39．0％。ESBLs阳性株除对亚胺培南、头孢哌酮／舒巴坦高度敏感外，对其它抗生素的耐药性明显高于ESBLs阴性株。结论 产ESBLs的肺炎克雷伯氏菌在临床分离株中阳性率较高．且对多种抗生素耐药．应加强对ESBLs的检测和其感染者的治疗。     

下呼吸道标本肺炎克雷伯菌耐药性分析及其AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶检测

医院感染肺炎克雷伯菌是引起临床呼吸道感染常见的革兰阴性杆菌。因其具有容纳外源性遗传物质的特性，作为医院感染的重要致病菌，继超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）后，又出现质粒介导的AmpC酶，且质粒介导者因其具有较快的传播速度和较强的耐药性，日益受到人们的重视。近年来随着广谱抗生素的大量使用，肺炎克雷伯菌耐药性日趋严重，     

肺炎克雷伯氏菌AmpCβ-内酰胺酶动力学及抑酶效应的研究

对肺炎克雷伯氏菌99—799株产生的AmpC型β—内酰胺酶利用分光光度法进行了酶动力学及酶抑制剂抑酶效应的研究。分别以L—B作图法求取米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax)，以Dixon作图法求取抑制常数Ki，以半对数作固法求取酶活性被抑制50％时的抑制剂浓度IC50。结果表明，AmpC酶对头孢噻啶、头孢噻啶和头孢哌酮的Km及Vmax／Km值较苯唑西林、头孢噻肟、头孢他啶、头孢西丁和氨曲南的值大，说明AmpC酶对头孢噻啶、头孢噻吩和头孢哌酮具有较低的亲和力和较高的水解效率。此外，克拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦3种β—内酰胺酶抑制剂对AmpC酶的抑制效力均很差，尤其是克拉维酸作用很弱。     

某三级甲等医院肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因分析

目的:分析某三级甲等医院连续4年肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因分布,了解耐药性变化趋势,指导临床合理用药。方法:使用VITEK-32全自动微生物分析仪进行细菌鉴定,用纸片法和最低抑菌浓度(MIC)试验进行药敏分析,用聚合酶链式反应(PCR)对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株可能携带的主要β-内酰胺酶耐药基因进行检测。结果:在182株临床分离的肺炎克雷伯菌中,痰和咽拭子标本分离率占首位(78.6%);对检测的13种抗菌药物耐药谱分析显示,该菌对哌拉西林耐药率最高,对亚胺培南和美罗培南敏感;产ESBLs菌株的检出率约30%;51%以上的产ESBLs菌株携带至少1种所检测的耐药基因,以blaTEM为主。结论:该院肺炎克雷伯菌分离株耐药范围广、产ESBLs菌检出率高,应引起重视。