RARα和β-catenin在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的作用

目的探讨RARα和β-catenin在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的作用。方法采用免疫组织化学及图像分析方法，检测维甲酸致畸小鼠和相应对照组小鼠腭板中RARα和β-catenin的表达状况。结果实验组RARα在腭板上皮细胞和间充质的表达量明显低于对照组；实验组β-catenin在腭板上皮细胞中的表达量明显高于正常对照组。结论RARα在腭板上皮和间充质细胞中表达的下调和β-catenin在腭板上皮细胞中表达的上调与维甲酸致昆明小鼠腭裂发生相关。     

凝集素受体WGA、RCA和ECL在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的作用

目的  探讨凝集素受体WGA、RCA和ECL在过量维甲酸（RA）致小鼠腭裂畸形中的作用。   方法  以生物素标记的凝集素受体WGA、RCA和ECL为探针,应用亲和细胞组织化学染色方法检测上述3种凝集素受体在RA致畸鼠胚（实验组）和相应对照组鼠胚腭板上皮及其间充质的分布状况和变化规律。  结果  3种凝集素受体在实验组不同发育阶段的小鼠胚胎腭突上皮内的表达量显著低于相应对照组。3种凝集素受体在小鼠胚胎腭板间充质中的表达量在实验组及对照组之间差异无统计学意义。  结论  WGA、RCA、ECL 3种凝集素受体在腭板上皮中表达量的下调与RA致昆明小鼠腭裂发生相关。     

缝隙连接蛋白43的表达与神经管畸形的关系研究

目的观察缝隙连接蛋白43(Cx43)在神经管周围间充质细胞的表达,以探讨Cx43与神经管畸形(NTDs)发生的关系。方法用维甲酸(RA)建立昆明小鼠神经管畸形模型,用免疫组化方法分析比较实验组和对照组神经管发育情况以及Cx43蛋白表达的位置和强度。结果对照组神经管发育良好,实验组神经管不能按时闭合;Cx43蛋白表达于神经管周围间充质细胞的胞膜和胞质内,而且实验组明显高于对照组(P<0.05)。结论 Cx43蛋白的过高表达可能与RA致NTDs密切相关。     

维甲酸诱导腭裂发生的过程中对TGF-β/Smad信号途径的抑制作用

目的探讨维甲酸在诱导腭裂发生过程中对Smad2磷酸化的影响,并分析其可能的致畸机制。方法建立维甲酸诱导的腭裂模型,利用HE染色观察维甲酸诱导腭裂发生的过程;应用免疫组化检测E12 d、E13 d、E14.5 d、E15 d、E15.5 d、E16 d(Ed:Embryonic day)对照组和实验组胎鼠模型腭突中嵴上皮内P-Smad2蛋白的表达。结果在腭突融合过程中,内源性的Smad2通过磷酸化能够被激活。与对照组相比,维甲酸可抑制腭突中嵴上皮中Smad2的磷酸化表达。结论维甲酸诱导腭裂的发生,与中嵴上皮细胞中Smad2磷酸化的抑制密切相关。     

苯妥英钠诱导鼠胚腭突间充质细胞凋亡与Satb2表达变化的关系

目的：探讨苯妥英钠是否能诱导鼠胚腭突间充质细胞凋亡，以及与Satb2基因表达间的关系。方法：取妊娠15dC57BL／6J鼠胚腭突，原代培养腭突间充质细胞。用细胞免疫荧光鉴定细胞的特性，流式细胞仪检测细胞的纯度和CCK．8法测定苯妥英钠处理细胞的最佳作用浓度和时间；用Annexin．VFITCPI双标法检测细胞早期凋亡情况及用TUNEL法检测细胞晚期凋亡情况；用实时定量PCR及Westernblot分析及检测处理后细胞的Satb2的表达变化。结果：原代培养的细胞纯度可达90％左右。与对照组比，苯妥英钠浓度在200~tg／mL以下作用24h可使致死率达50％左右。苯妥英钠可诱导鼠胚腭突间充质细胞显著凋亡。苯妥英钠能显著抑制鼠胚腭突间充质细胞中Satb2mRNA（下调至58％）和蛋白表达（P〈0．01）。结论：苯妥英钠诱导腭裂可能与鼠胚腭突间充质细胞凋亡相关，可能是通过下调细胞中Satb2的表达来实现。     

bcl-2基因在腭裂胎鼠腭突间充质细胞中的表达

目的 通过小鼠胚胎腭裂模型,探讨地塞米松对不同孕期日小鼠胚胎腭突间充质细胞(embryonic palatal mesenchymal cells,EPMs)增殖与凋亡的影响.方法 选取孕鼠30只,分为实验组和对照组.实验组于11.5孕期日(gestational day,GD)腹腔注射50 mg/kg地塞米松,对照组注射等量生理盐水.获取13.5、14.5、15.5、16.5GD的胚胎284只,其中实验组196只,对照组为98只.头部石蜡包埋,标准颅颌冠状位5μm连续切片,进行HE染色和bcl-2免疫组织化学染色.形态学观察及EPMs中bcl-2阳性细胞计数、统计学分析.结果 ①bcl-2阳性信号呈棕褐色颗粒,存在于核膜周围及胞浆中.②实验组14.5、15.5 GD EPMs阳性细胞数密度明显少于对照组(P＜0.05),而16.5 GD阳性细胞数密度高于对照组(P＜0.01).③对照组15.5 GD EPMs的阳性信号最强,13.5 GD EPMs的阳性信号表达较弱但广泛.结论 胎鼠腭裂的发生与EPMs中bcl-2基因的低表达,EPMs凋亡水平升高有关.     

利用三维CT重建和基因检测系统评价TCDD对小鼠面颅骨发育的致畸作用

目的 通过小鼠胚胎面颅三维计算机断层扫描重建技术，结合成骨相关基因检测系统分析2, 3, 7, 8-四氯代二苯并[b, e][1, 4]-二噁英（TCDD）对面颅骨发育的致畸作用。方法 将孕鼠分为对照组和实验组，于小鼠胚胎期第12.5天，使用TCDD （玉米油配制）按40μg/kg对实验组孕鼠单次灌胃，对照组单次灌胃等体积玉米油。收集胚胎期第13.5天和第14.5天胎鼠头颅，组织切片检测成骨相关基因的表达情况。收集两组胚胎期第18.5天小鼠胚胎头颅进行显微计算机断层扫描并三维重建，将面颅骨分块测量、对比分析。结果 TCDD造成小鼠多种面颅畸形，包括颅缝早闭、上颌骨及腭骨水平短小、翼腭突畸形及下颌下降不足。实验组小鼠下颌骨的宽度和体积明显减少，腭突的水平生长明显受损，导致垂直延伸过度，腭中缝宽大，形成腭裂。实验组小鼠腭突内，成骨分化相关基因Runx2、Osterix、Col1a1、Bmp2和Bmp4表达下调。实验组小鼠腭突内芳香烃受体水平升高，雌激素受体水平下降。结结论 TCDD能显著抑制小鼠面颅骨发育，特别是造成颅缝早闭和腭骨成骨抑制，该效应与多种成骨相关基因的异常表达相关。     

维甲酸诱导腭裂小鼠舌发育异常研究

目的：通过检测生肌决定因子基因家族成员Myf5和MyoD在维甲酸诱导腭裂小鼠舌肌发育中的表达,探究维甲酸是否在舌肌发育早期影响其肌向分化。方法建立维甲酸诱导腭裂小鼠模型,利用免疫组化染色法和实时定量PCR法,检测胚胎13天即舌肌发育早期实验组和对照组小鼠舌肌中Myf5和MyoD的分布和表达水平。结果免疫组化结果显示Myf5和MyoD在舌肌细胞的细胞核中表达,实验组Myf5和MyoD的蛋白表达均低于对照组,且差异有显著性意义（P＜0．01）。实时定量PCR结果显示实验组Myf5和MyoD的mRNA表达水平均低于对照组,且差异有显著性意义（ P ＜0．01）。结论 Myf5和MyoD的异常低表达提示了维甲酸可能直接导致舌肌发育和分化的延迟,进而导致腭裂的发生或使其表型加重。     

维甲酸诱导胚胎神经管畸形与β catenin基因表达的关系

目的观察维甲酸诱导小鼠胚胎神经管畸形中β catenin表达水平变化。方法孕鼠随机分为对照组和实验组。胚胎7.75?d时,实验组1次性胃饲致畸量维甲酸,对照组胃饲等量溶剂,服药后4、18、42、66、90?h分别取胚,常规制作石蜡切片,采用原位杂交和免疫组化技术,检测胚胎神经管组织中β catenin mRNA及蛋白的表达量变化。结果各对照组及实验组的胚胎神经管上皮均有β catenin mRNA及蛋白的不同程度表达。实验组在灌服维甲酸花生油悬液后4、18?h,β catenin mRNA表达水平明显低于对照组(P≤0.05);42?h时两组表达水平无明显差异,66?h后显著高于对照组表达水平(P≤0.05)。实验组在灌服维甲酸花生油悬液后18、42?h,β catenin 蛋白表达水平明显低于对照组(P≤0.05);66?h时两组表达水平无明显差异,90?h后显著高于对照组表达水平(P≤0.05)。结论β catenin基因在胚胎神经管上皮中的异常表达与维甲酸致神经管畸形有相关性。     

甲醛致雌性小鼠卵巢细胞DNA损伤及Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨甲醛致小鼠卵巢细胞DNA损伤效应及对Bcl-2和Bax表达的影响与其相关作用的机制。方法采用单细胞凝胶电泳方法,检测甲醛染毒(剂量分别为0.3、1.2、4.8 mg/kg)后小鼠卵巢细胞DNA损伤情况,采用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax的表达。结果甲醛致卵巢组织结构损伤,染毒浓度越高,病理损害越明显;卵巢细胞Bcl-2下调,Bax表达上调,并有量-效关系,甲醛染毒各组Bcl-2和Bax表达的相对灰度值较对照组均有差异(P<0.01);试剂量范围内,小鼠卵巢细胞彗星率随甲醛染毒剂量增加而增高(P<0.05),其彗星尾长随甲醛染毒剂量增加而缩短,尤其高甲醛染毒组更短(P<0.01)。结论甲醛能致卵巢细胞DNA损伤效应,损伤小鼠卵巢的结构,使卵巢细胞凋亡增加,Bcl-2表达下调、Bax表达上调;Bcl-2和Bax表达的变化可能是诱导凋亡的机制。     

胎鼠MEE细胞与腭裂发生关系的组织学研究

为探讨ＭＥＥ细胞与腭裂发生的关系，对１８４例ＮＩＨ胎鼠腭器官发生期不同阶段的头颅标本进行了组织胚胎学研究。结果表明，两组ＭＥＥ细胞于胎龄１４（１８）ｄ（ｈ）的标本中开始出现差异，正常组ＭＥＥ细胞逐渐由二层变为一层；给药组ＭＥＥ细胞有３种存在形式：①二层细胞；②假复层纤毛柱状上皮；③复层扁平鳞状上皮。１５（０）～１６（１８）ｄ（ｈ），正常组两腭突基底层ＭＥＥ细胞逐渐接触融合，最后中胚层组织也接触融合，ＭＥＥ细胞消失；给药组的腭裂标本ＭＥＥ细胞转归为口腔上皮。证明ＭＥＥ细胞的异常转归可导致腭裂畸形     

维甲酸诱导BALB／c近交系小鼠腭裂动物模型的实验研究

目的分析维甲酸（RA）在胚胎发育期间对胎鼠的致畸作用,建立维甲酸诱导腭裂动物模型的最佳剂量。方法将特定妊娠期BALB／c近交系小鼠分为对照组和实验组。实验组小鼠一部分在妊娠8d,10d,12d管饲RASOmg／kg,一部分在妊娠10d给予40mg／kg、50mg／kg和60mg／kg三种不同剂量RA;对照组小鼠在妊娠8d,10d,12d管饲等剂量玉米油。观察胎鼠腭裂比率,确定诱导腭裂形成的最佳作用条件。结果RA在不同的发育阶段均可诱导腭裂,妊娠第10天50mg／kgRA诱导腭裂的比率为93．75％（P〈0．05）,诱导腭裂形成的比率最高。结论RA诱导BALB／c近交系小鼠腭裂是一种较为理想的腭裂动物模型,其最佳剂量为妊娠第10天给予50mg／kgRA。     

Nrf2在小鼠非酒精性脂肪性肝病发病机制中的作用

目的    研究高脂饮食诱导的实验小鼠在非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD）形成不同阶段,核因子相关因子-2（NF-E2-related factor 2, Nrf2)表达的变化情况。方法    通过高脂饮食建立小鼠非酒精性脂肪性肝病的模型（实验组）,同期设正常饮食组作为对照组。并在8、12周末分批处死,检测丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase, ALT）、总胆红素（total bilirubin, TBIL）、甘油三酯(triglyceride, TG)、胆固醇（cholesterol, CHOI）、血糖（glucose, GLU）,计算肝指数;观察肝脏组织病理学改变,并用免疫组化方法检测Nrf2的表达。结果    实验组小鼠第8周末病理变化呈单纯脂肪肝改变,第12周末进展为脂肪性肝炎。8、12周末实验组小鼠血清ALT、CHOI和肝脏组织Nrf2表达均明显高于同期对照组（P＜0.01）;与8周末实验组小鼠比较,12周末实验组小鼠的肝脏组织Nrf2表达明显增高（P＜0.01）。Nrf2表达与ALT、GLU、CHOI、肝指数成明显正相关（P＜0.01）。结论    随着非酒精性脂肪性肝病的发生和发展,Nrf2表达上调,提示其对该病中氧化应激所致炎症损伤的保护作用。     

甲基化干预对小鼠大肠癌生长及p16/CDKN2基因表达的影响

目的 探讨甲基转移酶抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对小鼠大肠癌发生发展的影响及其与细胞周期依赖性激酶抑制因子p16/CDKN2 mRNA表达的关系.方法 40只雄性KM小鼠按随机数字表法随机分为2组:1,2-二甲肼(DMH)诱癌组和甲基化干预组,每组20只.小鼠皮下注射DMH 25 mg/kg,每周1次,连续22周,以诱发小鼠大肠癌,甲基化干预组于12周开始皮下注射5-Aza-CdR.另选同来源雄性KM小鼠作为未诱癌对照组(阴性对照组)10只,于皮下按25mg/kg注射生理盐水,每周1次,连续22周."席卷法"收集肿瘤组织,HE染色观察肿瘤发生的数目、类型及浸润程度;免疫组织化学染色观察细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白表达情况;原位杂交技术检测肠癌组织抑癌基因p16/CDKN2 mRNA的表达.结果 (1)DMH诱癌组肿瘤数达(7.6±3.1)个/只,而甲基化干预组诱癌数为(3.4±1.8)个/只,且以重度异性增生为主,浸润癌的发生率明显低于DMH诱癌组(P＜0.05).(2)DMH诱癌组19只小鼠中PCNA阳性表达16只,明显多于甲基化干预组(19只中11只阳性表达)及未诱癌对照组(0只,均P＜0.05).(3)DMH诱癌组有明显p16/CDKN2 mRNA杂交信号(蓝紫色),主要位于胞质,但甲基化干预组染色显然较DMH诱癌组强,尤其以瘤灶部位明显.结论 早期5-Aza-CdR的干预能显著抑制小鼠大肠癌的发生发展,其抑制肿瘤机制可能是通过激活抑制因子p16/CDKN2的表达.

Abstract：

Objective To explore the effects and relationship of specific demethylation agent 5-Aza-2'-deoxycytidine (5-Aza-CdR) on colorectal cancer ( CRC ) induced by 1,2-dimethylhydrazine ( DMH ) in mouse and the in vivo expression of cyclin-dependent kinases inhibitor p16/CDKN, mRNA. Methods A total of 40 male KM mice were randomized into 2 groups and CRC was induced by a 22-week injection of DMH. One group was interfered by specific DNA methyltransferase inhibitor 5-Aza-CdR. Another 10 the same source male KM mice were induced by a 22-week injection of saline as none induced cancer control group (negative control group ). All mice were sacrificed to examine for colorectal neoplasm.Immunohistochemical staining was used to assess the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA). The expression of p16/CDKN2 mRNA was detected by in situ hybridization. Results The average numbers of neoplasm was higher in the DMH group (7. 6 ±3. 1 ) than that of the group DMH +5-Aza-CdR (3.4 ± 1.8, P ＜0. 05). Immunohistochemical staining showed there was a significant elevation of PCNA in the group DMH(16/19) as compared with that in the group DMH +5-Aza-CdR ( 11/19, P ＜0. 05 ). In situ hybridization revealed that the level of tumor suppressor gene p16/CDKN2 mRNA was significantly lower in the group DMH than that in the group DMH +5-Aza-CdR. Conclusion The specific demethylation agent 5-Aza-2'-deoxycytidine may inhibit the carcinogenesis of CRC. Its mechanism may be related with a high expression of p16/CDKN2 mRNA.     

胰岛素样因子3在邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯诱导隐睾发生过程中的表达分析

目的：研究环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二（2-乙已基）酯（Di-（2-ethylhexyl）phthalate,DEHP）作用于孕鼠后,其胎鼠睾丸组织中胰岛素样因子3（Insulin like factor3,INSL3）mRNA和蛋白质的表达情况;探讨DEHP诱发小鼠隐睾的分子机制.方法：妊娠KM小鼠随机分为3组：正常对照组、玉米油对照组和DEHP实验组.玉米油对照组和DEHP实验组自妊娠12.5d到妊娠18d分别持续经口予以玉米油和DEHP500mg/（kg.d）,正常对照组不予灌药.结果：正常对照组和玉米油对照组睾丸组织中INSL3 mRNA和蛋白质的表达均无差异（P〉0.05）;DEHP实验组INSL3 mRNA的表达量约为对照组的1/3,与对照组相比其差异具有显著性（P〈0.05）;实验组INSL3蛋白质的表达量约为对照组的1/4,与对照组相比其差异具有显著性（P〈0.05）.结论：环境内分泌干扰物DEHP下调睾丸间质细胞INSL3 mRNA和蛋白质的表达,影响睾丸引带发育,可能是DEHP诱发隐睾的分子机制之一.     

负向免疫调节分子TIPE2调控巨噬细胞亚型治疗狼疮小鼠的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子诱导蛋白8样因子-2(TIPE2)调控系统性红斑狼疮(SLE)巨噬细胞极化的 作用和对实验狼疮小鼠的治疗作用.方法 将小鼠分别用活化淋巴细胞来源的DNA(ALD-DNA)诱导狼疮小鼠模型 ,分为AAV-scr组和AAV-TIPE2组,从小鼠尾静脉注射AAV-TIPE2或AAV-scr病毒溶液.检测极化的巨噬细胞 TIPE2 mRNA和蛋白表达、小鼠血清抗dsDNA抗体滴度、尿蛋白及肾病理指数.结果 (1)转染AAV-TIPE2细胞的 TIPE2 mRNA和蛋白表达水平分别是AAV-scr组的(13.5±1.6)倍和(10.8±1.6)倍;(2)AAV-TIPE2组M2巨 噬细胞特异分子MGL+为59.6%,AAV-scr组MGL+细胞为8.4%;AAV-TIPE2与AAV-scr转染的巨噬细胞M2/M1比 值之比为16;(3)重组TIPE2基因的腺病毒相关载体在转染HEK-293中稳定表达,小鼠体内外实验证实AAV-TIPE2能诱导ALD-DNA狼疮小鼠巨噬细胞向M2极化;(4)AAV-TIPE2组血清抗dsDNA抗体、尿蛋白及肾病理等活 动指标明显低于AAV-scr组(P<0.01).结论 TIPE2诱导巨噬细胞极化为M2表型,缓解ALD-DNA诱导狼疮小鼠的 病情,可以作为ALD-DNA诱导狼疮小鼠的一种有前景的治疗方法.     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对实验性大鼠隐睾Bcl-2表达的影响

①目的研究一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯对实验性大鼠隐睾生精细胞凋亡过程中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）表达的影响。②方法 42天龄雄性SD大鼠建立单侧隐睾模型,随机分为隐睾组、隐睾＋L-NAME组、隐睾＋生理盐水（溶媒）组、假手术组,每组12只大鼠,隐睾＋L-NAME组和隐睾＋生理盐水组大鼠术后分别腹腔内注射L-NAME或生理盐水,每天1次,定时定量（50mg/Kg）,术后第7天分别采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测各组隐睾Bcl-2mRNA和蛋白表达的变化。③结果与假手术组睾丸相比,隐睾组、隐睾＋生理盐水组睾丸生精上皮和睾丸间质细胞内Bcl-2mRNA和蛋白表达降低,差异有显著性（P〈0.05）;而隐睾＋L-NAME组Bcl-2 mRNA和蛋白与假手术组睾丸无明显差别。④结论 L-NAME可通过调节Bcl-2的表达抑制热应激导致的生精细胞凋亡。