骨疏康颗粒含药血清对成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨骨疏康颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖及细胞周期分布的影响.方法 采用酶消化法进行大鼠成骨细胞培养,制备骨疏康颗粒含药血清干预成骨细胞,以生理盐水大鼠血清作对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布.结果 与同浓度生理盐水血清比较,骨疏康含药血清能不同程度地促进体外堵养成骨细胞增殖,其中以20%骨疏康含药血清促增殖作用最显著,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且能明显降低G0/G1期细胞比例(P＜0.05),提高S期成骨细胞比例及增殖指数(P＜0.05).结论 骨疏康含药血清能加速成骨细胞周期,促进成骨细胞增殖.     

健骨颗粒含药血清对成骨细胞增殖的影响

目的：探讨健骨颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。方法：采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果：与同浓度生理盐水血清相比,20%健骨颗粒含药血清能明显促进体外培养成骨细胞增殖（P〈0.05）,明显降低G0/G1期细胞分数（P〈0.01或P〈0.05）,提高S期、G2/M期细胞分数和增殖指数（P〈0.01或P〈0.05）。结论：健骨颗粒含药血清能推进体外培养成骨细胞细胞周期,从而促进成骨细胞增殖。     

健骨颗粒含药血清对大鼠成骨细胞G_1期调节蛋白的影响

目的探讨健骨颗粒含药血清对成骨细胞G_1期调节蛋白的影响。方法采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用流式细胞术检测成骨细胞增殖周期,免疫细胞化学法、RT-PCR法检测成骨细胞G_1期调节蛋白细胞周期蛋白(Cyclin)D1、CDK4、P21表达。结果 20%健骨颗粒含药血清能推进成骨细胞增殖周期进程,促进其增殖;成骨细胞核中存在Cyclin D1、CDK4、P21等蛋白表达;与生理盐水血清比较,健骨颗粒含药血清干预24、48、72 h均能提高成骨细胞CyclinD1、CDK4蛋白及mRNA表达(P0.05或P0.01),而降低P21表达(P0.05,P0.01)。结论健骨颗粒含药血清能从mRNA及蛋白层面上提高体外培养成骨细胞Cyclin D1、CDK4表达,抑制负性调节因子p21的表达,调节G_1期调节蛋白,促进成骨细胞增殖。     

骨碎补总黄酮含药血清对成骨细胞增殖、分化、周期及调亡的影响

目的:观察含骨碎补总黄酮大鼠血清对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化、周期及凋亡的影响.方法:取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞.应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及流式细胞术观察不同浓度的含骨碎补总黄酮大鼠血清在不同时段对体外培养成骨细胞的光密度D(λ)值、碱性磷酸酶(ALP)活性及细胞周期和凋亡的影响.结果:不同浓度的骨碎补总黄酮大鼠含药血清均可促进成骨细胞增殖、分化,使处于DNA合成期细胞比例增加,使早期和晚期凋亡细胞比例减少,与对照组比较均具有统计学意义(P＜0.05). 结论: 骨碎补总黄酮含药血清具有促进体外成骨细胞增殖、分化,抑制成骨细胞凋亡的作用,即具有抗骨质疏松活性.     

清络通痹颗粒含药血清对体外培养的成骨细胞和破骨细胞的影响

目的：观察清络通痹颗粒（QLTBG）含药血清对体外培养的成骨细胞增殖、碱性磷酸酶（AKP）活性及破骨细胞增殖的影响。方法：（1）取1d龄SD大鼠颅骨分离培养成骨细胞，取5d龄SD大鼠四肢股骨、胫骨分离培养破骨细胞。（2）MTT法检测成骨细胞、破骨细胞增殖，偶联重氮盐法测定成骨细胞AKP活性。结果：QLT以7．2，14．4g／kg给药的大鼠含药血清对成骨细胞的增殖能力有明显增强作用，能明显增加AKP活性；QLT以3．6，7．2，14．4g／kg给药的大鼠含药血清对破骨细胞均有明显的抑制作用。结论：清络通痹颗粒含药血清可促进成骨细胞增殖、增强成骨细胞的AKP活性，抑制破骨细胞增殖。     

密骨颗粒对成骨样细胞增殖及IGF-I活性影响的实验研究

依据中医"肾主骨"的理论,通过运用中药血清药理学和建立成骨样细胞(UMR106)体外培养模型,采用MTT法和EIA法,检测补肾中药密骨颗粒含药血清对成骨样细胞增殖和IGF-I的活性,阐明补肾中药对肾虚骨质疏松症的防治机理.结果表明密骨颗粒含药血清组的成骨样细胞数目和IGF-I的活性明显高于正常组(P均＜0.05);密骨颗粒与骨疏康颗粒含药血清之间IGF-I活性无明显差别(P＞0.05);密骨颗粒与骨疏康颗粒含药血清都有促进体外培养成骨样细胞的增殖和IGF-I的活性的作用,而且呈剂量依赖性.从而为"肾主骨"、"气能生精"的理论提示出客观化、科学化依据;密骨颗粒含药血清可以促进成骨样细胞的增殖和IGF-I的活性,而达到防治肾虚骨质疏松症的目的.     

透骨消痛颗粒对兔关节软骨细胞增殖的影响

目的:研究透骨消痛颗粒对兔关节软骨细胞增殖的影响。方法:取新西兰大白兔6只,随机分为含药血清组和空白血清组,分别给予用10 mL生理盐水溶解的透骨消痛颗粒2 g·kg-1·d-1和生理盐水10 mL·d-1灌服,1月后截取膝关节的软骨,对软骨细胞的分离、培养、纯化及鉴定后,采用MTT法检测不同浓度透骨消痛颗粒含药血清对成骨细胞增殖以及软骨细胞周期的影响。结果:用含药血清或空白血清干预,随着干预时间的延长,G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞数量增加,PI升高。与空白血清组相比,含药血清组在干预24小时即能促使较多软骨细胞进入增殖周期,由G0/G1期进入S期和G2/M期,在干预24、48、72小时的检测中G0/G1期细胞比例明显低于空白血清组,S期和G2/M的细胞数明显高于后者,PI与空白血清组比较有显著性差异(P0.01)。结论:透骨消痛颗粒含药血清可以促使更多体外培养软骨细胞迅速进入增殖周期,推进软骨细胞由G0/G1期向S期、G2/M期推进,推动细胞周期的进程,促进软骨细胞增殖。     

仙鹿活骨丸对成骨细胞生物学功能的影响

目的探讨仙鹿活骨丸含药血清对大鼠成骨细胞生物学功能的影响。方法采用仙鹿活骨丸含药血清体外培养大鼠成骨细胞,测定成骨细胞增殖、周期、ALP表达、细胞凋亡,以及基因Bax、Bcl-2的mRNA表达。结果与对照组相比,实验组成骨细胞的增殖能力增强,处于S期的成骨细胞数量增多,ALP表达升高,成骨细胞凋亡数量减少,Bax基因表达降低、Bcl-2表达升高。结论仙鹿活骨丸可以促进成骨细胞增殖,促进成骨细胞周期由G0/G1期进入S期,增强ALP的表达,促进成骨细胞分化成熟,抑制成骨细胞凋亡,抑制成骨细胞Bax基因的表达、增强Bcl-2基因的表达。     

固本活血壮骨颗粒对成骨细胞OPG和ODF基因表达的影响

目的:研究固本活血壮骨颗粒对成骨细胞骨保护素(OPG)和破骨细胞分化因子(ODF)的基因表达的影响。方法:SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞体外分离培养纯化,制备固本活血壮骨颗粒(大、中、小剂量)、仙灵骨葆、戊酸雌二醇含药血清以及对照组(生理盐水组)含药血清,含药血清干预成骨细胞后提取总RNA,反转录,进行RT-PCR实验。结果:固本活血壮骨颗粒大剂量、中剂量组可明显升高OPGmRNA的基因表达,抑制ODFmRNA的基因表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:固本活血壮骨颗粒能增强成骨细胞增殖,抑制破骨细胞活性。     

健骨颗粒对成骨细胞分化的影响

目的:观察健骨颗粒对成骨细胞分化过程的影响。方法:取第3代SD大鼠颅骨成骨细胞,生理盐水血清组加入生理盐水血清;含药血清组加入最佳浓度的健骨颗粒颗粒含药血清;MTT法检测最佳含药血清浓度;运用采用ELISA法检测成骨细胞OCN的表达,采用比色法测羟脯氨酸(HYP)、碱性磷酸酶(AKP),实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测核心结合因子(Cbfα1)、I型胶原(Col I)、成骨转录因子(OSX)mRNA的表达。取第4代细胞采用茜素红染色法染色矿化结节。结果:MTT法检测显示含药血清最佳浓度为20%;钙化结节观察显示含药20%组最先出现矿化结节,结节数量增多;含药血清组细胞液内OCN、AKP和HYP含量高于生理盐水血清组(P0.05);Real-time PCR检测结果显示含药血清组Cbfα1、ColⅠ、OSX基因mRNA的相对表达水平明显高于生理盐水血清组(P0.05)。结论:健骨颗粒含药血清能提高体外培养成骨细胞中矿化结节的数量、AKP、HYP、OCN的含量、ColⅠ、Cbfα1、OSX mRNA的表达,促进成骨细胞增殖,加快细胞分化。     

纳米钙补肾中药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响

用血清药理学方法探讨纳米钙补肾中药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响.按照随机对照原则设立7个实验组:假手术组、模型空白组、中药复方小剂量组、中药复方中剂量组、中药复方大剂量组、骨疏康颗粒组、牡蛎碳酸钙咀嚼片组,在相同条件下分别制备含药血清和对照血清.采用多次胶原酶消化法获得足够数量的成骨细胞进行实验研究.用MTT法观察各组不同浓度血清在不同作用时间段对成骨细胞增殖的影响.采用SPSS 10.0软件进行均数比较和多元线性分析.结果表明,3个中药复方组均能促进成骨细胞增殖,其中20%血清浓度下中剂量中药复方增殖作用最为明显,有显著的统计学意义(P＜0.01).表明血清浓度与成骨细胞增殖率有较强的相关关系.     

肉苁蓉含药血清对BMSC分化为神经细胞的诱导作用研究

目的：观察肉苁蓉含药血清对骨髓间充质干细胞（BMSC）分化为神经细胞的诱导作用。方法：原代培养BMSC并鉴定;SD大鼠灌胃肉苁蓉水煎剂,给药10天后取大鼠血清,将不同浓度的含药血清加入到培养至第三代的BMSC中诱导细胞分化;5小时后免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经巢蛋白（Nestin）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）3种蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：肉苁蓉含药血清能诱导BMSC向神经细胞分化,与对照组比较,各浓度组细胞的NSE、Nestin表达均升高（P〈0.05）,且高、低浓度组之间比较有统计学意义（P〈0.05）,GFAP表达极低;流式细胞仪检测细胞周期结果显示,肉苁蓉含药血清诱导后,中、低浓度组G0/G1期细胞明显减少（P〈0.05）,S期细胞增多（P〈0.05）。结论：肉苁蓉含药血清能诱导BMSC向神经细胞分化,并促进细胞增殖。     

龟鹿二仙汤含药血清对大鼠成骨细胞细胞周期调控的研究

目的 探讨龟鹿二仙汤含药血清对体外培养SD大鼠成骨细胞（OB）增殖功能以及细胞周期与凋亡的调控作用,分析其防治骨质疏松症的作用机理.方法 采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原同浓度（10％、15％、20％）的龟鹿二仙汤含药血清加入OB培养体系（对照组等量生理盐水灌胃）,培养24、48、72 h,应用MTT比色法来检测其对OB增殖功能的影响.培养72 h后流式细胞仪分析DNA含量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡.结果 龟鹿二仙汤含药血清对OB的增殖作用呈浓度依赖性,在培养72 h后显著促进其增殖作用.DNA含量分析显示,含药血清组的S期和G2/M期细胞百分率比对照组明显增加,龟鹿二仙汤含药血清对OB具有抗凋亡作用,高浓度组作用最显著.结论 龟鹿二仙汤含药血清对体外培养SD大鼠OB增殖具显著作用且呈浓度依赖性,在体外可抑制OB凋亡从而治疗骨质疏松.     

壮骨胶囊含药血清对小鼠成骨细胞增殖 及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响

目的观察壮骨胶囊含药血清对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)增殖、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)合成的影响,探讨壮骨胶囊对骨代谢、骨形成机制的作用。方法壮骨胶囊由射干、白芍等组成。实验分为对照组、壮骨胶囊高、中、低剂量组(4.3、2.15、1.08 g生药/kg),给药组灌胃给予Wistar大鼠壮骨胶囊,对照组给于等体积水,连续给予7 d后,采血离心制备对照组空白血清及含药组血清;以小鼠成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,用空白血清及含药血清处理体外培养的MC3T3-E1成骨细胞,采用CCK8法检测成骨细胞增殖能力,IFCC速率法测定ALP活性,酶联免疫法测定BGP分泌量。结果壮骨胶囊含药血清各剂量组对体外培养的MC3T3-E1细胞增殖有显著的促进作用,高、中剂量组48 h可促进成骨细胞增殖(同对照组比较,P 0.05),高、中、低剂量组72 h均能促进成骨细胞增殖(同对照组比较,P 0.01,P 0.05);高、中剂量组含药血清作用于MC3T3-E1细胞72 h后,ALP活性、BGP分泌量较对照组明显提高(P 0.01,P 0.05)。结论壮骨胶囊含药血清具有促进骨形成作用,这可能与其促进成骨细胞增殖,增加成骨细胞ALP的合成和BGP的分泌,从而改善骨代谢有关。     

补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖的影响

目的:观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖的影响.方法:制备补肾健脾活血方中药含药血清,取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞,用MTT检测成骨细胞增殖率.结果:补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率形成,且与含药血清浓度呈正相关.结论:补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖,并能促进成骨细胞对骨机质的功能.     

菟丝子含药血清对成骨细胞代谢调控的影响

目的探讨菟丝子含药血清对体外培养大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法采用血清药理学方法制备菟丝子含药血清;采用改良的组织块法体外培养大鼠成骨细胞;分别用5%、10%、15%、20%菟丝子含药血清诱导培养成骨细胞24h、48h、72h后,MTT法检测大鼠成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性;培养48h后用RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)mRNA的表达。结果 5%和10%菟丝子含药血清在48h和72h能显著促进成骨细胞增殖并提高ALP活性;在48h时10%菟丝子含药血清可促进COL-ⅠmRNA的表达。结论 10%菟丝子含药血清能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,表明其具有促进成骨作用。     

不同中药含药血清对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:研究中药骨康及其中补肾、健脾、活血各成分吸收后不同血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌白介素-6(1L-6)的影响。方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以中药骨康及其中补肾、健脾、活血成分吸收后血清,加入体外培养成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞增殖,ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果:发现中药骨康吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,补肾成分吸收后血清亦能促进成骨细胞的增殖和分化,健脾、活血各成分吸收后血清对成骨细胞无明显影响,同时,中药骨康及其中补肾成分含药血清可作用于成骨细胞,使分泌其IL-6的能力下降。而中药骨康含药血清的作用明显优于补肾成分含药血清的作用。结论:中药骨康及其中补肾成分含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化从而促进骨形成,同时可抑制成骨细胞分泌IL-6,健脾、活血二法是补肾法的良好补充。     

二至丸含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的 研究二至丸含药血清对体外培养大鼠成骨细胞(Osteoporosis,OP)增殖、分化及矿化的影响.方法 二至丸(9,4.5,2.25 g/kg/d)给大鼠连续灌胃7d,每天2次,于第8天灌胃后1～2 h眼眶取血制备含药血清,采用多次酶消化法获得大鼠原代成骨细胞,将含药血清加入成骨细胞培养液中,采用MTT比色法、碱性磷酸酶(ALP)染色法、茜素红染色法研究其对细胞增殖及功能的影响.结果 二至丸含药血清能不同程度地促进大鼠原代成骨细胞的增殖,二至丸中剂量在24,48,72 h均能显著促进大鼠原代成骨细胞的增殖(P＜0.05);二至丸中、小剂量能显著增加大鼠原代成骨细胞ALP活性(P＜0.05)和矿化结节的数量(P＜0.05),其中二至丸中剂量效果最为显著(P＜0.01).结论 二至丸含药血清具有良好的促进成骨细胞增殖、分化、矿化的作用,其中二至丸中剂量组作用效果尤为显著.     

红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响1

目的：研究中药红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法：取SD大鼠48只，随机将大鼠分为A组（空白组）、B组（倍美力组）、C组（普拉固组）、D、E、F组（红曲高、中、低剂量组）六组，按10ml／kg分别予以生理盐水、倍美力水溶液（6.25μg／ml）、普拉固水溶液（0．2mg／m1）及红曲水提液（1．25g／ml、0．625g／ml、0．125g／ml）灌胃。灌骨10天后，制备含药血清；将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中，然后应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化。结果：经过10天红曲水提液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量（P〈0．01或P〈0．05）、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成，作用随红曲剂量的增加而增加。结论：成功地运用血清药理学的方法，模拟了体内的药理环境；证实了红曲含药血清可以呈剂量依赖性地促进成骨细胞增殖。     

糖足方对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的：用血清药理学与现代分子生物学相结合的方法，探讨糖足方对糖尿病大鼠模型血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法：选择纯种新西兰家兔，灌服不同剂量的糖足方中药制剂，制备含有不同药物浓度的兔血清；用组织块种植法体外培养糖尿病大鼠模型的髂动脉平滑肌细胞并用不同浓度含药血清进行干预；用同位素液闪测定氚标记胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（3H-TDR）掺入量，检测含药血清对平滑肌细胞增殖的影响；流式细胞仪测定细胞周期。结果：糖足方含药血清诸组呈浓度依赖性地表现为3H,TDR掺入量显著减少，3个含药血清组3H-TDR掺入量均明显低于正常血清对照组（P〈0.01）；流式细胞仪测定各含药血清组处于S和G2／M期细胞百分比显著低于正常血清对照组（P〈0.01）。结论：糖足方舍药血清抑制体外培养糖尿病大鼠VSMC增殖，且抑制效应呈浓度依赖性，其部分机制可能是通过阻滞VSMC G0/G1期向S的转化有关。