正常和压力负荷下弹性动脉肌层细胞形态、构筑和增殖的实验研究

本文的目的在于:剖析正常弹性动脉肌层完整的构筑特征,探索压力负荷对肌层构筑和细胞增殖的作用及影响。 实验共用大鼠179只,设计了两个部分:第一部分,通过铺片及银染技术,剖露大鼠主动脉平滑肌层的层次构筑,并以定量的方法,确定正常和压力负     

内皮素对大鼠主动脉平滑肌作用的研究

浓度为1.0～18.0nmol/L的内皮素可引起大鼠主动脉产生浓度依赖性收缩,其EC_(50)为3.75±0.75nmol/L。正常对照组中平滑肌细胞S+G_2M期细胞的比例基本稳定在26.3～29.6％的范围内;浓度为10.0和100.0pmol/L的内皮素可使S+G_2M期细胞呈浓度依赖性(P<0.01)和时间依赖性(P<0.01)增加。10.0pmol/L的内皮素作用30min后ATP含量经短暂升高后维持在低水平。结果表明内皮素具有缩血管作用及促进平滑肌细胞增生的作用,上述作用可能在高血压发病机制中有一定的意义。     

葛根素对大鼠豚鼠主动脉肺动脉血管平滑肌的作用

目的：观察葛根素（Pur)对大鼠，豚鼠离体主动脉，肺动脉血管平滑肌的作用。方法；动物急性处死后取出主动脉和肺动脉，挂于含10mlKH液并通入混合气体的浴管中，然后观察Pur的作用。结果：Pur本身对血管无明显作用；在去甲肾上腺素（NA）作用下Pur对大鼠主动脉有促进和抑制收缩的双向作用，对肺动脉仅有抑制收缩作用。对豚鼠血管具有促进收缩作用；Pur可抑制不同浓度KCl引起血管的收缩反应，同时不同浓度Pur对KCl的抑制作用存在明显的剂量依赖性；Pur与心得安，哌唑嗪有类似作用。结论：Pur对血管无直接作用。但可以明显影响NA，KCl的量效曲线，推测Pur具有β和α受体的阻断作用。     

大鼠胸主动脉中膜的细胞构筑

应用血管银染铺片和计算机图像分析等技术，对大鼠胸主动脉中膜肌层构筑进行了研究。结果显示，正常大鼠胸主动脉中膜两弹力膜间，平滑肌一般我成三层，肌层间呈相互交错的网络状结构，环形、螺旋形走向的肌纤维共存，由近内膜部向近外膜部，各层平滑肌细胞的交角逐渐减小。这一构筑有助于增强动脉壁的应力张力，以适应血压的变化。     

改良组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定

目的以简捷、高效的方法获取原代和传代的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),为进一步的科学研究提供实验材料。方法采用改良的组织块贴壁法培养原代大鼠VSMC,2.5 g.L-1胰蛋白酶消化传代,并用相差显微镜、电镜、荧光显微镜及激光共聚焦显微镜对细胞进行鉴定。结果95%的组织块接种成活,相差显微镜下细胞呈典型的"峰-谷"状生长,胞体长梭形;电镜下可见粗、细肌丝沿细胞长轴平行排列;荧光显微镜及激光共聚焦显微镜检测α-肌动蛋白可见细胞胞浆内呈阳性显色,细胞核不显色。结论本方法培养VSMC简便、易操作,获得的细胞纯度和成活率较高。     

滨蒿内酯对离体大鼠主动脉平滑肌作用的研究

目的 :研究滨蒿内酯 (scoparone ,Scop)对离体大鼠主动脉平滑肌张力的影响。方法 :通过测定离体血管环张力变化 ,观察Scop对主动脉平滑肌的舒张作用及与苯肾上腺素 (PE)、普萘洛尔 (Prop)和氯化钾 (KCl)之间的相互作用。结果 :Scop舒张离体主动脉平滑肌 ,并且对内皮完整 (EC +)标本的舒张作用明显大于去内皮 (EC - )标本 ,半抑制浓度 (IC50 )分别为 (10 0± 0 4 ) μmol/L(CE +)与 (83 2± 0 8) μmol/L(EC - ) (P <0 0 1) ;Scop使PE量效曲线下移 ,呈非竞争性抑制 ,亲和力指数 (PD2 )分别为 4 93± 0 0 5 (EC +)与 2 94± 0 14 (EC - ) ;Prop(1μmol/L)对Scop舒张血管平滑肌作用无影响 ;Scop不能抑制Prop所致血管平滑肌收缩 ;Scop对血管平滑肌的依内钙及依外钙性收缩均有明显抑制作用。结论 :Scop可舒张离体大鼠主动脉平滑肌 ,此作用与内皮细胞的功能有一定关系。Scop抑制血管平滑肌依内钙与依外钙性收缩可能是Scop舒张血管平滑肌的主要机制     

东莨菪碱对兔主动脉条收缩反应的影响

用离体兔胸主动脉条研究东莨菪碱（ｓｃｏｐｏｌａｍｉｎｅ，Ｓｃｏｐ）扩张血管作用的可能机理。Ｓｃｏｐ与维拉帕米对ＣａＣｌ２和Ｓｃｏｐ对ＫＣＩ所致兔胸主动脉条收缩的量－效曲线右移，最大反应降低，呈现非竞争性拮抗，其ｐＤ＇２分别为３．４，５．８和３．４。两药能明显抑制ＮＥ的依赖内Ｃａ（２＋）性收缩，Ｓｃｏｐ对ＮＥ的依赖外Ｃａ（２＋）性收缩几无影响，表明Ｓｃｏｐ可能主要作用于电压依赖性的钙通道，阻断Ｃａ（２＋）内流。     

三油酸甘油酯对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：研究三油酸甘油酯对大鼠主动脉血管平滑肌细胞（rat aortic smooth muscle cells,RASMC）增殖的影响。方法：采用体外细胞培养、油红染色观察细胞形态的变化;MTT法、流式细胞术检测三油酸甘油酯对RASMC增殖的影响。结果：油红染色结果显示三油酸甘油酯使RASMC失去原来长梭形外观,胞体变大;三油酸甘油酯浓度越高变化越明显,2 000 mg/dl已无正常细胞存在。三油酸甘油酯对RASMC增殖的影响与作用时间及三油酸甘油酯的浓度密切相关。在24 h≤125 mg/dl,表现为抑制增殖作用;24 h≥250 mg/dl及48~72 h≤500 mg/dl,表现为促进增殖作用,其中24 h,1 000 mg/dl时增殖率最大约为115.9%,与对照组相比差异有统计学意义（t=-3.74,P=0.002）;48~72 h>500 mg/dl及96~144 h,62.5~2 000 mg/dl表现为抑制增殖作用,其中,48、72 h这2个时间点在2 000 mg/dl的增殖率分别较对照组下降42.7%（t=13.08,P=0.000）和65%（t=129.53,P=0.000）,与对照组相比差异有统计学意义。流式周期结果表明,三油酸甘油酯组G0/G1期的百分比较对照组降低,而S期百分比增高。流式凋亡结果为,除了24 h和144 h外,其余各时间点的凋亡率较对照组降低,其中72 h及120 h的凋亡率分别为1.1%（F=14.39,P=0.019）,0.7%（F=9.96,P=0.034）,与对照组相比差异有统计学意义。另外,细胞增殖与凋亡的变化方向一致。结论：三油酸甘油酯对RASMC增殖的影响是双向的,即在低浓度短时间及高浓度长时间的抑制增殖作用,在中间合适的浓度及时间表现为促进增殖作用;细胞增殖周期试验结果也支持三油酸甘油酯具有一定的促进或抑制大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖作用;高浓度脂质对细胞的直接毒性作用、诱导细胞的增殖或凋亡作用,可能共同参与调控血管平滑肌细胞的数目及功能。     

肿瘤抑制因子PTEN蛋白在自发性高血压大鼠主动脉平滑肌中的表达

目的：研究PTEN蛋白在雄性自发性高血压大鼠及SD大鼠主动脉中的表达。方法：取18周龄和26周龄雄性自发性高血压大鼠及同龄雄性SD大鼠主动脉石蜡包埋切片，免疫组织化学观察PTEN在主动脉平滑肌细胞中的表达。结果：SD大鼠主动脉平滑肌细胞中存在PTEN阳怀免疫反应产物。自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞也存在PTEN阳性免疫反应产物，但免疫反应产物的染色强度明显低于SD大鼠。结论：SD大鼠主动脉平滑肌细胞PTEN高表达，自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞PTEN表达呈下降趋势。提示PTEN可能在自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞重塑过程中发挥作用。     

VEGF和PCNA在慢性低氧性肺动脉及高压大鼠主动脉、肺动脉平滑肌细胞中表达

目的：研究慢性低氧性肺动脉高压（PAH）发生过程中，血管内皮生长因子（VEGF）及细胞核增殖抗原（PCNA）在体循环血管、肺循环血管平滑肌细胞中的表达。方法：利用低压缺氧舱建立大鼠缺氧性肺动脉高压模型。实验分为3组：即正常氧组、缺氧2wk组和缺氧3wk组。用免疫组化染色和图像分析，检测主动脉、肺动脉主干及肺内小动脉平滑肌细胞中VEGF及PCNA的表达量。     

Study of the structure and architecture of aortic smooth muscle cells under pressure overloading in rats

ＳｔｕｄｙｏｆｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅｏｆａｏｒｔｉｃｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓｕｎｄｅｒｐｒｅｓｓｕｒｅｏｖｅｒｌｏａｄｉｎｇｉｎｒａｔｓＺｈａｎｇＦａｎｇｍｉｎｇ（张放鸣）；ＨｅＧｕａｎｇｃｈｉ（何光篪）；Ｌ...     

WKY大鼠与SHR血管平滑肌神经肽Y受体数量及其亲和力的对照研究

目的：了解Ｗｉｓｔａｒ－Ｋｙｏｔｏ大鼠（Ｗｉｓｔａｒ－Ｋｙｏｔｏｒａｔｓ,ＷＫＹ）、自发性高血压大鼠（Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ,ＳＨＲ）血管平滑肌细胞（Ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｓ,ＶＳＭＣ）上神经肽Ｙ（ＮｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹ,ＮＰＹ）受体的表达水平及其差异。方法：应用Ｉｏｄｏｇｅｎ法对ＮＰＹ受体进行了测定。结果：ＮＰＹ蛋白质标记率为７０％,比活度为３．３６ＭＢｑ／μｇＶＳＭＣ在（１．０～５．０）×１０６细胞／ｍｌ的范围内,１２５Ｉ－ＮＰＹ的特异性结合量与ＶＳＭＣ细胞数之间呈线性关系;ＳＨＲ的ＮＰＹ受体最大结合量（Ｂｍａｘ）和受体复合物解离常数（Ｋｄ）均明显高于ＷＫＹ,相关分析显示Ｂｍａｘ,Ｋｄ与血压增高程度呈正相关。结论：ＮＰＹ受体数目和亲和力的增加可能在高血压的发病机制中占有重要的地位     

大鼠主动脉和肠系膜动脉多巴胺受体DA1 亚型和年龄变化的关系

目的和方法　采用离体血管环方法 ,用DA1受体的特异性激动剂Fenoldpam(FODA)和特异性拮抗剂Sch 2 3390 ,检测和分析了DA1受体在大鼠不同年龄段的生长发育和演变情况 ,借以阐明外周DA1受体与年龄变化的关系。结果　FODA引起的离体主动脉的舒张反应 ,以 3月龄大鼠的舒张反应最强 ,10d龄和 18月龄大鼠主动脉较 3月龄大鼠的主动脉的舒张百分比均有明显下降趋势 ,三组大鼠的最大舒张百分比 (Emax)分别为 10d龄 4 8.77± 6 .0 3(P <0 .0 5 )、3月龄 98.11± 7.0 2、18月龄 5 6 .2 3± 5 .79(P <0 .0 5 )。 10d龄及 18月大鼠的FODA累积浓度 -舒张反应曲线均明显右移。其主动脉的ED50 分别为5 6 2× 10 -4mol/L和 1.5 8× 10 -4mol/L明显大于 3月龄组大鼠的ED50 (P <0 .0 5 )。 10d龄及 18月龄大鼠肠系膜动脉的最大舒张百分比 (Emax)显著小于 3月龄大鼠 ,分别为 6 0 .32± 7.0 2 (P <0 .0 5 )和 6 9.5 9± 10 .71(P <0 .0 5 ) ,ED50 分别为 6 6 5×10 -4(P <0 .0 5 )和 3.98× 10 -5(P <0 .0 5 ) ,明显大于 3月龄组大鼠的ED50 。结论　①外周DA1受体在新生及幼鼠数量较少 ,可能与个体发育尚未成熟有关。②外周DA1受体与中枢多巴胺受体相似 ,也有明显的年龄依赖性特征 ,也随着老龄化而有明显下调趋势。③外周多     

胃促生长素对人主动脉平滑肌细胞增殖及线粒体融合蛋白2表达的影响

目的 通过体外培养人主动脉平滑肌细胞(HASMCs),研究胃促生长素(ghrelin)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及线粒体融合蛋白2(Mfn-2)表达的影响.方法 体外培养HASMCs,第4～6代细胞用于试验.给予不同浓度(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)的ghrelin 或10-6 mol/L ghrelin不同时间(0、6、12、18、24 h)处理,用四甲基偶氮唑蓝比色(MMT)法观察其对HASMC增殖的影响.RT-PCR,Western blot方法检测不同处理方法对Mfn-2表达的影响.结果 10-7～10-5 mol/L的ghrelin可明显抑制HASMC增殖,浓度为10-6 mol/L抑制作用最为明显(P<0.01).ghrelin在6～24 h内均能明显抑制HASMC增殖,在24 h达最高峰(P<0.01).10-6 mol/L ghrelin能明显上调Mfn-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01).10-6 mol/L ghrelin在18 h上调Mfn-2 mRNA和蛋白表达的作用最为明显(P<0.01).结论 ghrelin可能通过上调Mfn-2的表达来抑制HASMC增殖.     

3,6-(二甲氨基)-二苯骈碘杂六环葡萄糖酸盐对AGEP引起的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及牛主动脉内皮细胞内皮素和一氧化氮改变的影响

目的 :观察 3 ,6 (二甲氨基 ) 二苯骈碘杂六环葡萄糖酸盐对AGEP引起的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及牛主动脉内皮细胞内皮素和一氧化氮改变的影响。方法 :采用牛血清白蛋白 (BSA)与不同浓度葡萄糖 (0 ,2 0 ,5 0 ,80mmol·L-1)体外孵育制备糖基化终产物 (AGEP) ,应用 [3 H] TdR掺入法和MTT比色法观察I-93对重度糖化的AGEP诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞 (ASMC)增殖的影响 ;应用放射免疫技术及Greiss法观察I -93对AGEP引起的牛主动脉内皮细胞 (BAEC)释放内皮素 1(ET 1)和一氧化氮 (NO)的影响。结果 :I-93 10 -7～ 10 -5mol·L-1能明显抑制AGEP引起的ASMC增殖 ,其 [3 H] TdR掺入量和MTT比色法的最大抑制率分别为79 .4%和 44 .2 %。随AGEP糖浓度的增加 (2 0～ 80mmol·L-1) ,BAEC培养液中ET 1含量亦逐渐上升 [(4 93± 63 )～ (779± 10 5 )ng·L-1] ,I -93 10 -7～ 10 -5mol·L-1能明显抑制重度糖化的AGEP促进ET 1释放的作用 ;I -93对AGEP灭活NO的作用有剂量依赖性抑制效应。结论 :I -93有抑制ASMC增殖的作用 ;对AGEP诱导的BAEC释放ET 1和NO间平衡失调有调节作用 ,在防治阻塞性血管疾病方面I -93具有潜在的应用价值     

老年大鼠血管平滑肌中多巴胺受体DA_1亚型的改变

选用ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ作为ＤＡ＿１受体的特异性激动剂，利用离体血管环的方法对老年（１８月龄）大鼠与年轻大鼠（３月龄）血管平滑肌中多巴胺受体ＤＡ＿１亚型的差别进行了观察。结果显示，老年大鼠主动脉、肾动脉、肠系膜动脉由去甲肾上腺素引起的最大收缩反应与年轻大鼠无明显差别，但３种血管由ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ引起的累积浓度－舒张反应曲线均明显右移，提示老年大鼠血管平滑肌中ＤＡ１受体显著下调。     

老年大鼠血管平滑肌中多巴胺受体DA1亚型的改变

选用ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ作为ＤＡ１受体的特异性激动剂，利用离体血管环的方法对老年（１８月龄）大鼠与年轻大鼠（３月龄）血管平滑肌中多巴胺受体ＤＡ１亚型的差别进行了观察。结果显示，老年大鼠主动脉、肾动脉、肠系膜动脉由去甲肾上腺素引起的最大收缩反应与年轻大鼠无明显差别，但３种血管由ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ引起的累积浓度－舒张反应曲线均明显右移，提示老年大鼠血管平滑肌中ＤＡ１受体显著下调。     

糖尿病大鼠血管平滑肌细胞体外培养方法的探讨

目的:对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞体外培养方法进行探讨,建立糖尿病大鼠血管平滑肌细胞模型,为糖尿病慢性血管并发症研究奠定基础。方法:建立糖尿病大鼠模型,用组织贴壁法体外培养胸主动脉血管平滑肌细胞。结果:糖尿病大鼠造模成功。用贴壁法培养糖尿病大鼠血管平滑肌细胞,3d后相差显微镜下可见细胞游出,培养7～10d左右细胞重叠生长达多层,高低起伏呈“峰—谷”状。平滑肌细胞actin免疫组织化学染色鉴定为平滑肌细胞。结论:糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖速度快,培养条件要求严格,在形态学上与正常大鼠平滑肌细胞相同。     

酶消化法分离老龄SD大鼠血管平滑肌细胞

目的采用酶消化法培养老龄SD大鼠血管平滑肌细胞,为血管疾病的研究提供大量的原代平滑肌细胞。方法无菌取老龄SD大鼠主动脉,采用0.2%Ⅱ型胶原酶消化分离血管平滑肌细胞,自然纯化及差速贴壁纯化血管平滑肌细胞,免疫组化鉴定平滑肌细胞α肌动蛋白。结果免疫组化染色显示细胞纯度在95%以上。结论酶消化法用于血管平滑肌细胞的培养有利于获得大量的高纯度细胞供实验研究。     

A型主动脉夹层组织Beclin1及微管相关蛋白1轻链3的表达及意义

目的 探讨自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白1轻链3(LC3)在A型主动脉夹层组织中的表达及意义。方法 选取因A型主动脉夹层(AD)而于我院行手术治疗患者术中切除的主动脉壁组织标本20例作为AD组,以尸检者的正常胸主动脉(NA)壁组织标本10例作为对照。采用免疫组化染色及蛋白质印迹技术检测血管组织中Beclin1及LC3蛋白的定位及表达差异。结果 A型主动脉夹层主动脉壁组织中Beclin1及LC3蛋白主要定位表达于血管平滑肌细胞,且含量高于正常对照组织(P<0.05)。结论 A型主动脉夹层主动脉壁中血管平滑肌细胞的自噬活性明显增强,可能与疾病的发生发展相关。