巢式RT—PCR检测肺癌患者外周血微量转移癌细胞

[目的]建立检测肺癌患者外周血微转移癌细胞的敏感的分子检测方法，探讨其临床应用的意义。[方法]从肺癌患者外周血中分离有核细胞，用TRzol提取RNA，采用巢式反转录聚合酶链反应(RT—PCR)技术特异引物扩增CK19mRNA，凝胶电泳观察结果，以检测肺癌患者外周血CK19-mRNA的表达情况。分析CK19mRNA扩增结果与患者临床指标的关系。[结果]76例肺癌患者外周血标本中39例CK19mRNA阳性，阳性率为51．3％(39／76)，27例肺良性病变中仅1例阳性，阳性率为3．7％，15例健康对照者为阴性。[结论]巢式RT—PCR检测肺癌患者外周血微量转移癌细胞具有较高的敏感性和特异性，CK19-mRNA可作为一个标志物来检测肺癌患者外周血微转移。     

非小细胞肺癌病人外周血MUC1基因定量表达及意义

目的探讨Mucin-1（MUC1）mRNA在非小细胞肺癌（NSCLC）病人外周血中的表达及临床意义。方法采用实时荧光定量RT—PCR方法检测MUC1 mRNA在NSCLC病人外周血中的表达。结果NSCLC病人外周血中MUC1 mRNA表达显著高于正常人（t=2．01,P〈0．05）;鳞癌与腺癌病人MUC1基因的表达无明显差异（P〉0．05）。NSCLC病人外周血中MUC1 mRNA表达与NSCLC的病理分级、TNM分期及淋巴结转移密切相关（F=25．62、34．61,t=2．05,P〈0．05）。结论NSCLC病人外周血中MUC1 mRNA表达与NSCLC发生、发展、侵袭、转移及恶性程度密切相关,对判断NSCLC恶性程度及预后有重要参考价值。     

荧光定量RT—PCR检测肺癌外周血CK19、CK20mRNA表达

目的 应用荧光定量RT-PCR（Fluorogenic quantitative reverse trailsctiptase po1ymerase chain reaction，RT-PCR）检测肺癌外周血中微转移情况。方法 用荧光定量RT-PGR方法检测103例肺癌患者外周血CK19mRNA和CK20mRNA表达。结果 103例肺癌患者外周血中CK19mRNA检测阳性35例，阳性率33．98％；CK20mRNA检测阳性17例，阳性率16．50％，其中6例患者CK19、CK20mRNA均阳性。统计结果显示外周血CK19、CK20mRNA的表达与临床分期、分化程度和淋巴结转移相关，与性别、年龄、病理类别无关。结论 用荧光定量RT-PCR法检测肺癌患者外周血CK19mRNA和CK20mRNA具有较高的灵敏度和特异性，有助于早期筛选亚临床转移。     

细胞角蛋白19、20 mRNA定量在检测结肠癌患者外周血微转移中的应用

目的探讨细胞角蛋白19、20（CK19、20）mRNA表达在诊断结肠癌患者外周血微转移中的作用。方法随机选择和收集36例结肠癌患者、34例结肠良性疾病患者及32名健康献血员外周血,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（FQ—RT-PCR）测定CK19、20mRNA含量。结果CK19、20mRNA在结肠良性疾病组外周血均未见表达。在健康献血员组只有1例CK19表达阳性,CK20均为阴性。在结肠癌组,CK19检测阳性率为58．3％（21／36）;CK20阳性率为36．1％（13／36）;CK19、20联合检测阳性率为77．8％（28／36）。结肠癌组与结肠良性疾病组或献血员组之间比较,CK19、CK20在外周血表达差异均有显著性（P〈0．05）。结合临床资料分析,结肠癌患者外周血CK19、CK20mRNA阳性表达和淋巴结转移、Dukes分期关系密切（P〈0．05）,而与肿瘤类型及分化程度无关（P〉0．05）。结论CK19、20mRNA可作为检测结肠癌外周血微转移的标志物,两者联合检测可提高检出率。     

胰腺癌患者外周血MUC4、MMP-9mRNA的表达及临床意义

目的研究MUC4mRNA和MMP-9mRNA在胰腺癌外周血单个核细胞上的表达，探讨其在胰腺癌早期诊断、鉴别诊断、转移监测及预后评价中临床价值。方法采用荧光定量RT—PCR技术检测胰腺癌、胰腺良性疾病和健康人外周血单个核细胞上的MUCAmRNA和MMP-9mRNA的表达，同时检测血清CA19—9、CA242水平，分析MUC4mRNA、MMP-9mRNA与CA19—9、CA242之间相关性。结果胰腺癌患者外周血中MUC4mRNA的阳性率为64．3％，特异性100％；胰腺良性疾病及健康对照组中未见MUC4mRNA的表达；MMP-9mRNA的阳性率为69．6％，诊断特异性85％，胰腺癌MUCAmRNA和MMP-9mRNA的表达明显高于胰腺良性疾病组和健康对照组：P〈0．01），且二者水平变化呈正相关。MUCAmRNA和MMP-9mRNA阳性表达率随胰腺癌临床分期的增加及淋巴转移而逐渐增高。结论MUC4和MMP-9是胰腺癌早期诊断和鉴别诊断的良好指标，肿瘤标志物联合检测，可有效提高胰腺癌早期诊断灵敏度和特异性。     

非小细胞肺癌患者外周血三种标志物的检测及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者检测血液中癌胚抗原信使核糖核酸（CEA mRNA）、角蛋白19信使核糖核酸（CK19 mRNA）、端粒酶活性（TA）的临床意义。方法以97例NSCLC患者、51例非肿瘤性呼吸系统疾病患者（疾病对照组）和36例健康人（健康对照组）为对象，采集外周血为标本，应用逆转录．套式．聚合酶链反应技术检测CEA mRNA和CK19mRNA；端粒末端重复序列扩增-杂交-酶联免疫检测技术检测TA。结果NSCLC组3种标志物的阳性结果显著高于2个对照组（P〈0．01），且CEA mRNA和TA的特异性和敏感性也显著高于CK19 mRNA（P〈0．01），但不同类型NSCLC检测3个指标结果的差别均无统计学意义（均P〉0．05）。结论检测血液CEA mRNA、CK19 mRNA和TA有助于发现NSCLC细胞血液转移。也有助于预后的评估，且CEA mRNA和TA的价值高于CK19 mRNA，但此3个指标可能无助于鉴别NSCLC的类型。     

外周血AFP mRNA表达与大鼠肝细胞癌微转移的关系

【目的】探讨肝细胞癌外周血AFP mRNA表达水平与早期微转移的关系。【方法】用0．2％二己基亚硝胺（DEN）诱导Wistar大鼠建立肝癌模型,提取外周血总RNA,经转录后,采用巢式反转录聚合酶链反应（巢氏RT-PCR）技术检测大鼠AFP mRNA水平。【结果】20只对照组大鼠外周血标本中未检测到AFP mRNA,而在79只存活的实验组大鼠中,肝硬化组AFP mRNA检出率为6．3％（1／16）,未转移肝癌组AFP mRNA检出率为42．3％（22／52）,伴转移肝癌组AFP mRNA检出率为81.8％（9／11）。【结论】以AFP mRNA为标志物,通过巢氏RT—PCR来检测肝细胞癌外周血微转移是可行的,有助于提高肝细胞癌外周血微转移检测的敏感性和特异性。早期检测外周血微转移可以提高预测肝细胞癌复发、转移的能力。     

LUNX、CK19和CEA基因在非小细胞肺癌淋巴结微转移中的比较研究

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中肺特异性X蛋白（LUNX）、细胞角蛋白（CK19）及癌胚抗原（CEA）mRNA的表达及其在NSCLC发生、转移、预后中的意义。方法采用RT-PCR方法检测56例NSCLC患者的肺癌组织及103枚区域性淋巴结LUNX mRNA、CK19 mRNA及CEA mR-NA的表达情况并进行半定量。对照组为15例肺良性病变患者的35枚淋巴结。对所有淋巴结进行常规病理切片HE染色,观察转移情况。结果（1）LUNX mRNA、CK19 mRNA及CEA mRNA在肺癌患者淋巴结中的表达明显高于肺良性病变者淋巴结（P〈0.05）。（2）与常规病理学方法检查淋巴结相比,RT-PCR技术的敏感性显著增高（P〈0.05）。（3）LUNX mRNA、CK19 mRNA在淋巴结中的阳性表达率与肺癌病理类型之间没有明显相关性（P〉0.05）,由于CEA mRNA在肺腺癌组织中的表达明显高于鳞癌及其他类型的肺癌（P〈0.05）。（4）区域淋巴结中LUNX mRNA表达的阳性率随TNM分期的升高而增加（P〈0.05）。结论LUNX mRNA与CK19 mRNA均可作为RT-PCR检测肺癌患者区域性淋巴结微转移的分子标志物,但前者在特异性和敏感性上优于后者。该方法的建立可能有利于早期诊断肺癌转移,从而指导临床分期和治疗。     

胃癌患者外周血hTERT mRNA转录水平及临床意义

目的研究胃癌患者外周血中hTERT mRNA的表达，探讨其作为胃癌肿瘤细胞标志物的可行性。方法应用实时荧光定量RT—PCR技术检测96例原发性胃癌、50例胃溃疡和60例健康献血员血清中hTERT mRNA表达水平，并对阳性PCR产物进行克隆、测序。结果胃癌组hTERT mRNA表达水平（12．78±0．97）copies／ml，显著高于良性胃溃疡组（0．93±0．23）copies／ml和健康对照组（0．29±0．17）copies／ml。多变量分析表明，hTERT表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤生长方式、肿瘤分化程度、淋巴管侵犯、静脉侵犯均无显著相关性（P〉0．05），而与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、pTNM分期及CEA有显著相关性（P〈0．05）。结论qRT—PCR具有快速、敏感和特异的特点。定量分析外周血hTERT mRNA转录水平可作为胃癌的肿瘤细胞标志物之一，用于早期诊断。     

外周血中CK18mRNA检测对食管癌微转移的诊断意义

目的探讨CK18mRNA套式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测对食管癌微转移的诊断意义。方法采用套式RT-PCR方法检测50例无远处转移、10例有远处转移的食管癌患者及10例食管良性病变对照和10例健康对照外周血中细胞角蛋白CK18mRNA基因的表达。结果食管良性病变对照组和健康对照组的外周血中均未检测出CK18mRNA阳性细胞。50例无远处转移食管癌患者外周血中CK18mRNA表达阳性率为38.0%(19/50)。10例有远处转移的食管癌患者外周血中CK18mRNA表达阳性率为90.0%(9/10)。食管癌Ⅳ期与Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ期相比,其阳性率有显著性差异(P<0.05),而其他各期之间没有显著差异。不同病理分化程度之间没有显著差异。结论食管癌患者临床早期已有癌细胞发生微转移。应用套式RT-PCR方法检测外周血中CK18mRNA靶基因有助于食管癌微转移的早期诊断。     

巢式RT-PCR对肺癌外周血中微转移灶的检测和半定量测定

目的对肺癌外周血中微转移灶的检测和半定量测定。方法以CK-19为标记,采用巢式RT-PCR和半定量方法对肺癌患者外周血中微转移灶的检测,比较治疗前后外周血中癌细胞数的相对变化。结果60例肺癌中有29例CK-19阳性,18例健康人中,仅1例检测出CK-19阳性,7例肺良性疾病患者有2例为CK-19阳性。实验组CK-19阳性率48%(29/60)与对照组12%(3/25)相比有极显著差异(P<0.01)。2例肺癌患者化疗前相对癌细胞数分别为25和16个,经1周期化疗后,相对癌细胞数分别为5和1个。结论以CK-19为标记,采用巢式RT-PCR方法检测肺癌患者外周血中的癌细胞有较高敏感性和特异性,半定量RT-PCR法,能早期反映外周血中癌细胞数的相对变化情况,有助于对临床疗效及早做出评价。     

胃癌患者外周血CK20 mRNA的表达及临床意义

目的探讨胃癌患者外周血中CK20 mRNA的表达水平及与临床病理因素的相关性,评价其在微转移中的诊断意义。方法运用巢式逆转录-聚合酶链反应检测46例胃癌患者外周血CK20 mRNA的表达情况,并以20例慢性胃炎患者和20例健康志愿者作对照。结果胃癌组外周血CK20 mRNA阳性表达率为60．8％（29／46）,而慢性胃炎组和健康志愿者组均表达阴性,差异均有统计学意义（P〈0.0001）;胃癌组CK20 mRNA的阳性表达率与胃癌分化状态、TNM分期和有无淋巴结转移相关（均P〈0．05）,而与年龄、性别、肿瘤大小和浸润深度无关。结论胃癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为胃癌早期诊断及微转移的判断指标,可对临床分期、预后判断和治疗起指导作用。     

前列腺癌患者外周血PSA mRNA的意义

目的 探讨前列腺特异抗原（PSA） mRNA在前列腺癌（PCa)患者外周血表达的意义。方法 运用巢式RT－PCR检测36例PCa患者,28例良性前列腺组织增生（BPH）患者和15例健康志愿者外周血。结果 BPH患者和志愿者外周血PSA mRNA均阴性,36例PCa外周血PSA mRNA阳性率38．9％（14／36）。PSA mRNA表达阳性率随肿瘤分期进展而增高,各期阳性率有显著差异（P＜0．05）。结论 PSA mRNA特异表达于PCa外周血,可用作PCa微转移的指标。     

手术操作与胃癌微转移的关系

目的探讨手术操作与胃癌微转移的关系。方法采用巢式逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）技术检测70例胃癌病人手术前、后外周血细胞角蛋白（CK20）mRNA及癌胚抗原（CEA）mRNA的表达情况，并以20例健康志愿者作为阴性对照组，以10例胃癌组织作为阳性对照组。结果CK20mRNA及CEAmRNA在术前阳性表达率分别为32．9％和51．4％，而术后二者的阳性表达率分别为62．9％和70．0％，术后阳性率明显高于术前（X^2=12．62、5．06，P〈0．05）。20例健康志愿者无1例阳性表达。结论手术操作可以促使胃癌发生微转移。     

RT—PCR法检测非小细胞肺癌患者外周血Lunx mRNA的表达及临床意义．

目的通过检测非小细胞肺癌患者外周血Lunx mRNA的表达来探讨其对临床诊断、治疗及判断预后的意义。方法采用RT-PCR（逆转录PCR）技术分别对实验组及对照组外周血Lunx mRNA的表达进行检测分析。结果NSCLC患者外周血微转移与病理类型、细胞分化程度及TNM分期均存在密切关系（P〈0．05）;NSCLC患者外周血微转移与年龄、性别、吸烟史、原发肿瘤部位无密切关系（P〉6．05）。结论应用RT-PCR技术建立了一种检测NSCLC微转移Lunx mRNA表达的实验方法,Lunx mRNA是一种检测NSCLC外周血微转移新型的、较好的特异性标记物,对判断病程发展和指导临床治疗具有重要意义。     

非小细胞肺癌患者外周血癌胚抗原和细胞角蛋白19表达与患者预后的关系

目的 探讨外周血中癌胚抗原(CEA)mRNA和细胞角蛋白19(CK19)mRNA表达与非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的关系.方法 应用逆转录-聚合酶链反应技术检测了84例NSCLC患者外周血细胞中CEAmRNA和CK19 mRNA的表达.结果 NSCLC患者外周血中CEAmRNA与CK19mRNA的阳性表达率分别为70.23%(59/84)和67.9%(57/84);NSCLC患者外周血中CEA与CK19的阳性表达率呈正相关(c=0.333).CEA与CK19呈阴性表达的NSCLC患者,其生存例数显著性多于阳性组(P＜0.01～0.05).接受化疗者CEA与CK19表达阳性者生存时间明显低于阴性表达者(P＜0.05).结论 NSCLC患者外周血中CEA与CK19的表达呈正相关,检测血液中CEA和CK19表达有助于客观评估NSCLC预后.     

肺癌患者血浆及外周血单个核细胞Lunx mRNA检测的临床意义

目的检测肺癌患者血浆及外周血单个核细胞肺特异性X基因(Lunx)mRNA,探讨两者对肺癌辅助诊断的临床意义。方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肺癌患者、肺良性疾病患者、肺外肿瘤患者及健康人血浆及外周血单个核细胞Lunx mRNA。结果肺癌组患者血浆Lunx mRNA阳性率显著高于肺良性疾病组(χ2=113.10,P<0.01)、肺外肿瘤组(χ2=125.34,P<0.01)和健康组(χ2=100.33,P<0.01);Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者血浆Lunx mRNA阳性率高于Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者(χ2=7.07,P<0.05)。肺癌组患者外周血单个核细胞LunxmRNA阳性率显著高于肺良性疾病组(χ2=32.79,P<0.01)、肺外肿瘤组(χ2=44.44,P<0.01)和健康组(χ2=44.44,P<0.01);Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者外周血单个核细胞Lunx mRNA阳性率显著高于Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者(χ2=24.52,P<0.01)。血浆Lunx mRNA检测对肺癌辅助诊断的敏感性高于单个核细胞检测的敏感性(χ2=36.46,P<0.01),血浆检测的阴性预测值高于外周血单个核细胞检测的阴性预测值(χ2=16.37,P<0.01)。结论血浆与外周血单个核细胞Lunx mRNA检测均可用于肺癌的辅助诊断,前者敏感性较后者高。