幽门螺杆菌ureI核酸疫苗免疫活性的初步研究

目的 观察幽门螺杆菌ureI核酸疫苗诱导C57BL/6小鼠产生体液免疫应答及细胞免疫应答水平.方法 重组质粒pcDNA3.1(+)/ureI、空质粒pcDNA3.1(+)及PBS分别肌注免疫C57BL/6小鼠.ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平以及脾淋巴细胞培养上清中IL-4和IFN-γ含量,MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应,PCR和免疫荧光组化法检测ureI基因和蛋白表达.结果 pcDNA3.1(+)/ureI能够诱导小鼠产生特异性IgG抗体,该组小鼠脾淋巴细胞经UreI重组蛋白刺激后,其刺激指数和培养上清中IL-4、IFN-γ含量明显升高; ureI基因可在小鼠肌细胞中有效表达.结论 pcDNA3.1(+)/ureI核酸疫苗能刺激C57BL/6小鼠产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答,为进一步研究该疫苗的免疫保护作用奠定了基础.     

HPV16 E2与IL-12联合基因疫苗的免疫效果初步研究

目的将HPV16E2与IL-12真核表达载体联合免疫小鼠,检测小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平,为HPV16诱发的宫颈癌治疗性核酸疫苗的研制奠定实验基础。方法40只BALB/c小鼠随机分成PBS组、pcD-NA3.1(+)空质粒组、pcDNA3.1(+)/IL-12组、pcDNA3.1(+)/HPV16E2组以及pcDNA3.1(+)/HPV16E2+pcD-NA3.1(+)/IL-12联合组,每组8只,共免疫4次,每2周1次。于免疫前1d及第8周采血,分离血清,-20℃保存;颈椎脱臼处死小鼠,无菌取脾脏,制备脾细胞悬液。ELISA法测定小鼠血清HPV16E2IgG抗体水平及脾细胞培养上清IFN-γ、IL-4水平;MTT比色法检测脾淋巴细胞的增殖。结果免疫8周后,血清IgG抗体A450值E2组和联合组与PBS组和空质粒组比较差异有统计学意义(P<0.05);但在每个时间点,联合组与E2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。IL-12组、E2组、联合组脾淋巴细胞培养上清中的IFN-γ和IL-4含量与PBS组和空质粒组比较差异有统计学意义(P<0.05);联合组与E2组比较IFN-γ含量差异有统计学意义(P<0.05),两组的IL-4含量差异无统计学意义(P>0.05)。IL-12组、E2组、联合组脾淋巴细胞SI值与PBS组和空质粒组比较差异有统计学意义(P<0.05);联合组与E2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论HPV16E2单基因疫苗及其与IL-12联合基因疫苗能刺激小鼠产生特异性抗体,脾淋巴细胞培养上清IFN-γ含量升高,且联合基因疫苗优于E2单基因疫苗。     

Sjcb2 DNA疫苗在血吸虫感染小鼠中的保护性作用研究

目的 研究Sjcb2 DNA疫苗在日本血吸虫病小鼠模型中的保护性作用和机制,为血吸虫疫苗的研究提供有效的候选抗原分子。方法 构建pcDNA3.1(+)/Sjcb2 核酸疫苗,将6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为pcDNA3.1(+)/Sjcb2 核酸疫苗组、pcDNA3.1(+)空质粒组及生理盐水组,每组35只,采用后腿股四头肌注射方法,每次免疫质粒DNA 100 μg,每2周免疫1次,共免疫3次,用日本血吸虫尾蚴攻击感染各组小鼠。PCR及免疫组化法检测Sjcb2基因在小鼠体内的稳定性及表达情况;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞特异性增殖反应;ELISA法检测小鼠血清中Sjcb2抗体水平及攻击感染前后脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的水平;计数小鼠荷成虫对数和肝脏荷虫卵数。结果 疫苗组小鼠均可在小鼠肌细胞中检测到Sjcb2基因及其抗原的表达;DNA疫苗组T细胞增殖显著增高(P <0.05);ELISA 结果显示疫苗组IFN-γ 水平显著增高(P <0.05),血吸虫尾蚴攻击感染后各组小鼠IL-4水平显著升高(P <0.05)。DNA疫苗组小鼠荷成虫对数及肝脏荷虫卵数与其它组比较显著性减少(P <0.05),其减虫率为36.32％,减卵率为60.61％。结论 Sjcb2 DNA疫苗接种小鼠后能在小鼠肌细胞中稳定存在和表达;Sjcb2可能通过提高IFN-γ 和降低IL-4水平调节Th1细胞亚群产生抗血吸虫感染的保护性作用。     

多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗诱生免疫应答的实验研究

目的观察多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗免疫BALB/c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法30只BALB/c小鼠随机分成3组:Ⅰ组,肌注空质粒(pcDNA3.1)100μg/鼠;Ⅱ组,肌注多房棘球绦虫elp基因真核表达重组质粒(pcD-ELP)100μg/鼠;NS组,肌注等体积生理盐水。每2周免疫1次,共3次。ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG1,IgG2a和IgG 2 b水平。双抗体夹心ELISA法检测免疫鼠脾脏单个核细胞(PMNC)在受到特异抗原刺激后,产生IL-4I、L-12和IFN-γ的能力,3H-TdR掺入法检测脾淋巴细胞的增值能力。结果首次免疫后4周,Ⅱ组小鼠血清可检测到特异性IgG1I、gG2a和IgG2b抗体,随免疫时间和免疫次数的增加3种特异性抗体的OD值逐渐增高,实验结束时(首次免疫后7周)3种特异性抗体OD值均最高。Ⅰ组和Ⅱ组小鼠脾PMNC培养上清中IFN-γ浓度分别为50 pg/ml和55 pg/ml,受特异抗原刺激后分别为44 pg/ml和101.5 pg/ml。NS组IFN-γ及各组IL-4和IL-12均未检出。Ⅰ组和Ⅱ组小鼠脾淋巴细胞增殖能力增高,其淋巴细胞CPM值分别为NS组的85倍和123倍,受到特异抗原或刀豆素刺激其淋巴细胞增殖更明显。结论多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗可刺激BALB/c小鼠同时产生很强的细胞免疫和体液免疫应答。     

乙肝病毒S基因单独和与白细胞介素-12基因联合免疫小鼠诱生的体液免疫应答

以PCR技术扩增得到乙肝病毒(ayw型)表面抗原(HBsAg)的编码基因,构建S基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-S(以下简称S)。以PCR方法扩增得到小鼠白细胞介素-12的全长cDNA序列,构建真核表达载体pcDNA3-IL-12(以下简称IL-12)。以S和S+IL-12经肌肉注射免疫BALB/C小鼠,以空载体pcDNA3.1(+)为阴性对照,血源HBsAg蛋白为阳性对照,用ELISA方法检测不同时间免疫小鼠血清中的抗-HBs。结果表明:S单独和S+IL-12联合免疫2周后,血清中抗-HBs阳转。同时用IL-12免疫,使抗体达峰时间缩短,抗体持续时间缩短,滴度降低。因此,S基因免疫可刺激产生特异性体液免疫;联合IL-12基因免疫可抑制S基因免疫诱生的体液免疫应答。     

恶性疟原虫FCC1／HN株CSP抗原细胞免疫应答IL-2和IFN-γ的体外诱生分析

本实验利用恶性疟原虫FCCI/HN株CSP抗原基因在真核细胞(HeLa)中高效表达,将纯化的表达蛋白作为候选疫苗免疫小鼠,并通过体外诱生检测小鼠脾细胞白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)水平。结果　显示经疫苗免疫后的BALB/C小鼠脾细胞体外经特异性刺激后产生的IL-2和IFN-γ水平有显著提高。与我们前期研究结果　比较,表明对该疫苗特异性的IL-2、IFN-γ的产生与淋巴细胞增殖以及NK细胞活性增高有明显的相关性;该疫苗对T细胞有一定的刺激能力,可诱导小鼠产生较强的细胞免疫反应。     

融合基因S2S/IFNα对小鼠免疫反应的影响

目的探讨S2S/IFNα融合基因疫苗诱导HBV preS2S特异性体液免疫及细胞免疫应答的作用。方法pcDNA3.1S2S/IFNα作为实验组,设立pcDNA3.1S2S＋pcDNA3 IFNα组、pcDNA3.1S2S组及空载体对照组作为对照组,免疫BALB/c小鼠。采用0、2、4周的方案接种,检测各次接种后抗体水平。初次免疫后7周,测定免疫脾细胞的杀伤活性、增殖活性、细胞因子的分泌水平及免疫脾细胞CD25的表达量。结果pcDNA3.1S2S/IFNα组小鼠抗体滴度、免疫脾细胞的杀伤活性和增殖活性、Th1型细胞因子的分泌水平及CD25表达量均比对照组明显增强。结论S2S/IFNα融合基因能诱导更强的特异性体液免疫及细胞免疫应答。     

CpG免疫刺激序列增强日本血吸虫TPIDNA疫苗免疫保护作用的研究

目的研究CpG免疫刺激序列对日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶DNA疫苗诱导BALB/c小鼠免疫保护的增强作用.方法设计合成一对含6个免疫刺激序列的寡脱氧核苷酸,克隆到真核表达载体pcDNA3.1第5314碱基Ssp I酶切位点,改建为pcDNA3.1-CpG.再将SjCTPIDNA片段克隆到pcDNA3.1-CpG的多克隆位点区,构建为pcDNA3.1-TPI/CpG.56只BALB/c雌性小鼠随机分为4组,各组小鼠分别肌肉注射pcDNA3.1、pcDNA3.1-TPI、pcDNA3.1-CpG、pcD-NA3.1-CpG/TPI质粒DNA,每鼠100 μg.每隔2周加强免疫1次,共3次.末次免疫后4周每鼠经腹部皮肤攻击感染(45士1)条日本血吸虫尾蚴,45 d后剖杀,计数成虫及肝脏虫卵数.首次免疫前2d及攻击感染前2 d经尾静脉采血检测抗体水平、抗体亚类IgG1、IgG2a.末次免疫后2周制备脾细胞,检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平.结果 pcDNA3.1-TPI组和pcDNA3.1-TPI/CpG组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体,抗体亚类IgG2./IgG1的比值分别为1.76和2.67,而其他两组则未检测到特异性IgG抗体;pcDNA3.1-TPI组和pcDNA3.1-TPI/CpG组小鼠的IL-2、IFN-γ较对照组均有不同程度的升高,IL-4无明显差异;pcDNA3.1-TPI组和pcDNA3.1-TPI/CpG组分别获得了25.98%和34.54%的减虫率,后者高于前者,并分别获得了27.68%和29.50%的减卵率.结论 CpG免疫刺激序列似能增强DNA疫苗在小鼠体内诱导的Th1型免疫应答,并提高DNA疫苗的免疫保护作用.     

免疫刺激序列增强日本血吸虫DNA疫苗的免疫保护作用

目的　探讨免疫刺激序列在日本血吸虫Mr 23 000膜蛋白 (SjC23)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗血吸虫感染中的作用。　方法　将SjC23基因片段克隆到增加了免疫刺激序列的真核表达质粒 pcDNA3.1-CpG中,构建pcDNA3.1-SjC23/CpG。 40只雌性BALB/c小鼠随机分为 4组 ,① pcDNA3.1对照组 ;②pcDNA3.1-SjC23组 ;③ pcDNA3.1-CpG组 ;④ pcDNA3.1-SjC23/CpG组。每鼠经两侧股四头肌注射质粒DNA共100 μg ,隔 2周加强免疫 1次 ,共 3次。末次免疫后 4周经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴 45条 /鼠 ,45d后计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前和感染前 2d分别经尾静脉采血 ,检测IgG及IgG1、IgG2a。末次免疫后 3周取小鼠脾细胞 ,检测经伴刀豆球蛋白和SjC23重组蛋白刺激后小鼠白细胞介素 2 (IL-2 )、白细胞介素 4(IL-4)和γ干扰素 (IFN-γ)。用51Cr释放法检测经SjC23重组蛋白刺激后脾细胞对小鼠淋巴瘤细胞的杀伤作用。　结果　②组和④组减虫率分别为 2 8.1%和 3 5.1% ,减卵率分别为 2 1.6%和 2 6.5 %。④组减虫率显著高于②组 (P <0.0 5 )。这两组均检测到特异性IgG ,IgG2a/IgG1比值分别为 10.1和 12.2。脾细胞经伴刀豆球蛋白和SjC23重组蛋白刺激后的IL-2水平 ,②组较①组、④组较③组均有升高。②组脾细胞对靶细胞的杀伤活性为9.7%, ④组为40.0%。 结论 疫苗载体中增加免疫刺激序列，可提高SjC23 DNA 疫苗在BALB/c小鼠中诱导产生的免疫保护作用。     

重组质粒pcDNA3．1S2S／Fc在小鼠诱导免疫反应的观察

目的探讨S2S／Fc融合基因疫苗诱导小鼠HBV preS2S特异性体液和细胞免疫应答情况。方法取pcDNA3．1S2S/Fc、pcDNA3．1S2S＋pCMVsFc、pcDNA3．1S2S和空载体对照免疫BALB／c小鼠。在免疫动物2,4和6周后检测血清抗-HBs水平;在初次免疫7周后,测定免疫脾细胞的杀伤活性、增殖活性及细胞因子的分泌水平。结果经pcDNA3．1S2S／Fc免疫小鼠6周抗体滴度升至最高,免疫脾细胞的杀伤活性在效靶比为20：1时最高,免疫脾细胞的增殖活性以及IL-2和IFN-γ的分泌水平均比对照组明显增高。结论S2S／Fc融合基因在小鼠能诱导很强的特异性体液和细胞免疫应答。     

白念珠菌mp65基因真核质粒的构建及免疫原性研究

目的构建以白念珠菌甘露糖蛋白65(MP65)编码基因mp65为目的基因真核重组表达质粒,并对其免疫原性进行分析。方法PCR法自白念珠菌标准菌株ATCC64550中获取mp65基因,分别插入真核表达载体pcDNA3.1中,将真核表达经质粒大抽提并定量后免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测抗体产生水平,流式检测细胞免疫。结果PCR法克隆出全长为1140bp的mp65基因,构建出pcDNA3.1-mp65真核表达质粒,pcDNA3.1-mp65免疫小鼠能诱导产生效价为1∶800的IgG抗体,同时诱导CD4+T和CD8+T细胞百分含量增高。结论白念珠菌真核表达质粒pcDNA3.1-mp65成功构建并能诱导小鼠的体液免疫和细胞免疫。     

白色念珠菌sap2基因真核表达质粒的构建及免疫原性研究

目的构建以白色念珠菌SAP2蛋白编码基因sap2为目的基因的真核重组表达质粒,并对其免疫原性进行分析。方法RT-PCR法自白色念珠菌标准菌株ATCC64550中获取sap2基因,插入真核表达载体pcDNA3.1中,将真核表达经质粒大抽提并定量后免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测抗体产生水平,流式细胞仪检测细胞免疫。结果RT-PCR法克隆出全长为1 197 bp的sap2基因;用构建的pcDNA3.1-SAP2免疫小鼠,能诱导产生效价为1∶1 600的IgG抗体,同时CD4^＋T和CD8^＋T细胞百分比增高。结论成功获取了白色念珠菌sap2蛋白基因,真核表达质粒能够诱导动物的体液免疫和细胞免疫。     

猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA 3.1-TSO45W在小鼠体内诱导的体液免疫效应

目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗TSO45W诱导的小鼠体液免疫应答。方法碱裂解法大量制备重组质粒pcDNA3.1-TSO45W及对照质粒pcDNA3.1。将45只雌性昆明小鼠(4~6周)随机分为3组,每组15只。A组(生理盐水组):每只小鼠肌肉注射生理盐水100μl;B组(空质粒pcDNA3.1对照组):每只小鼠肌肉注射空质粒100μg;C组(重组质粒pcDNA3.1-TSO45W组):每只小鼠肌肉注射重组质粒100μg。分别于免疫后2、4、6、8、10周以ELISA方法检测小鼠血清免疫球蛋白IgG,IgM及IgA含量。结果 pcDNA3.1-TSO45-4B免疫组小鼠血清IgG、IgM、IgA均于第4周开始升高,分别为(17.36±1.85)μg/ml、(9.25±1.78)μg/ml和(9.41±0.88)μg/ml,并分别于第8、第6、第8周达到最高,含量分别为(24.26±2.52)μg/ml、(10.69±0.52)μg/ml和(11.22±1.23)μg/ml,与空质粒对照组(B组)和生理盐水对照组(A组)比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论猪囊尾蚴保护性抗原TSO45WDNA疫苗能在小鼠体内诱导体液免疫效应。     

小鼠β防御素1与甲型流感病毒M2e融合基因表达及其免疫特性研究

目的构建mBD1与M2e融合基因的真核表达载体,并检测其在MDCK细胞中的表达情况,初步探讨其免疫特性。方法利用PCR方法分别扩增mBD1与M2e基因片段,再通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD1与M2e通过一段多肽接头Gly4Ser连接为融合基因mBD1-M2e。将该融合基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+)获得重组质粒pcDNA3.1(+)/mBD1-M2e,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,用脂质体转染MDCK细胞,通过免疫荧光、RT-PCR产物序列分析检测融合蛋白表达情况,最后采用MTT法检测mBD1-M2e融合蛋白刺激淋巴细胞增殖能力。结果经鉴定后证实构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD1-M2e正确,该重组质粒能在MDCK细胞中稳定表达,该细胞培养上清液能刺激淋巴细胞增殖。结论本研究成功构建mBD1-M2e融合基因的真核表达质粒,并证实其融合蛋白能在MDCK细胞中稳定表达,这一结果为进一步研究新型高效通用的流感病毒核酸疫苗奠定了坚实的基础。     

锚定修饰的真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-rmCGβ-IgGFc-GPI的构建及鉴定

目的为研究锚定修饰的rmCGβ-IgGFc-GPI的新功能和免疫治疗奠定基础。方法应用基因工程技术将pCI-IgGFc-GPI质粒经双酶切后,插入pcDNA3.1（＋）真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-Ig-GFc-GPI,然后再插入经双酶切的恒河猴绒毛膜促性腺激素β亚基（rmCGβ亚基）,构建重组真核表达质粒pcD-NA3.1（＋）-rmCGβ-IgGFc-GPI,经限制内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染B16细胞,流式细胞仪技术和细胞免疫荧光法检测B16细胞中表达的IgGFc段融合蛋白。结果酶切和测序证明正确构建了真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-rmCGβ-IgGFc-GPI,流式细胞仪技术和细胞免疫荧光法证实该质粒能在B16真核细胞中正确表达目的蛋白;建立了稳定的细胞株B16/pcDNA3.1（＋）-rmCGβ-IgGFc-GPI。结论锚定修饰的rmCGβ亚基的真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-rmCGβ-IgGFc-GPI成功构建,且能在B16细胞内表达;为进一步研究锚定修饰的rmCGβ-IgGFc-GPI的新功能和免疫治疗奠定了基础。     

日本血吸虫酪氨酸羟化酶基因的克隆、真核表达及鉴定

目的扩增日本血吸虫的酪氨酸羟化酶（Schistosoma japonicum Tyrosine Hydroxylase,SjTH）编码基因,构建pcDNA3.1(+) SjTH真核表达载体,并检测其在COS 7细胞中的表达情况。方法以日本血吸虫成虫cDNA为模板,RACE PCR扩增SjTH编码基因,并与pGEM T连接进行亚克隆,双酶切后回收目的基因,并与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,PCR和双酶切初步鉴定后测序,纯化无内毒素重组质粒pcDNA3.1(+) SjTH,转染入COS 7细胞,G418筛选阳性克隆,RT PCR和Western blot鉴定重组SjTH蛋白的表达。结果RACE PCR 扩增出SjTH编码基因,大小约1 392bp,经双酶切鉴定、测序及Blast分析鉴定重组真核质粒构建成功。脂质体介导无内毒重组真核质粒pcDNA3.1(+) SjTH转染入COS 7细胞,G418筛选出阳性克隆,RT PCR证实阳性单克隆细胞带有SjTH编码基因,Western blot鉴定单克隆细胞表达重组SjTH蛋白,大小约54kD。结论真核表达载体pcDNA3.1(+) SjTH构建成功,G418筛选出阳性克隆,真核表达重组SjTH蛋白,为后续研究SjTH蛋白功能奠定基础。     

西尼罗病毒多表位基因免疫保护研究

目的探讨西尼罗病毒多表位基因诱导体液及细胞免疫的可行性及其免疫攻毒保护作用。方法将西尼罗病毒多抗原表位基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-M。通过脂质体转染法将该多表位基因导入BHK细胞中,采用RT-PCR和IFA检测其在细胞内的瞬时表达。将重组质粒通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测和淋巴细胞增殖试验等,检测小鼠体内特异性体液免疫和细胞免疫的水平。在此基础上进行攻毒试验,分析重组质粒DNA对西尼罗病毒攻击的免疫保护作用。结果重组质粒pcDNA3.1-M能够在真核细胞内表达,采用IFA方法能在细胞内检测到西尼罗病毒特异性抗原。在抗原的刺激下,免疫后的小鼠脾淋巴细胞增殖显著,可诱导特异性CTL应答反应。攻毒试验显示,重组多表位基因能够对西尼罗病毒的攻击起到一定的保护作用,达到50%,中和抗体效价达到1∶50,应用免疫佐剂或应用重组蛋白加强免疫后,其保护率为62.5%,中和抗体效价达到1∶90。结论西尼罗病毒多表位基因可诱发特异性免疫应答,对西尼罗病毒感染具有保护作用,为其基因疫苗研制提供了一定的实验依据。     

hMAM融合HSP70基因真核表达载体的构建及其免疫学活性测定

目的构建融合人乳腺珠蛋白（hMAM）与人热休克蛋白70（HSPT0）基因的真核表达载体pcDNA3．-1hMAM-HSF70,为乳腺癌的基因治疗奠定基础。方法采用PCR法扩增hMAM基因,酶切测序分析后,与人HSPT0基因克隆人真核表达载体pcDNA3．1,构建重组载体pcDNA3．1-hMAM-HSPT0,采用电穿孔法转染入COS-7细胞,间接免疫荧光法和ELISA法检测目的基因的表达。结果成功扩增HSPT0与hMAM基因,酶切测序结果表明,重组载体含有hMAM与人HSPT0的融合基因,COS-7细胞中可检测到hMAM表达;重组质粒免疫小鼠可诱导产生抗HSP70抗体。结论hMAM与人HSP70融合基因的真核表达载体构建成功;此为进一步进行乳腺癌的基因治疗提供了实验依据。     

pcDNA3．1（＋）-SAA真核表达载体构建、转染及其对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响

目的构建peDNA3．1（＋）-血清淀粉样蛋白A（SAA）真核表达载体,观察其在人鼻咽癌细胞CNE-2中的表达及对CNE-2增殖的影响。方法以CNE-2细胞的eDNA为模板,通过PCR扩增得到SAA片段,经酶切、纯化后与peDNA3．1（＋）连接;重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染法转染人鼻咽癌细胞CNE-2,用Westernblot法检测转染前后该细胞中SAA蛋白的表达,并用MTr法检测转染重组质粒后的细胞增殖情况。结果peDNA3．1（＋）-SAA经酶切、测序鉴定完全正确,真核表达载体构建成功;转染peDNA3．1（＋）-SAA真核表达载体后CNE-2细胞中SAA蛋白表达水平明显高增高;转染pcDNA3．1（十）-SAA后CNE-2细胞增殖速度加快。结论成功构建peDNA3．1（＋）-SAA真核表达载体,其能稳定表达于人鼻咽癌细胞CNE-2并促进细胞增殖;此为进一步研究SAA的生物学功能及鼻咽癌的新型治疗方法奠定了基础。