刀豆蛋白A诱导的C57BL/6J小鼠急性免疫性肝损伤模型的研究

目的:通过单次尾静脉注射不同剂量的刀豆蛋白A(ConA)诱导C57BL/6J小鼠急性免疫性肝损伤,探讨ConA诱导建立C57BL/6J小鼠急性免疫性肝损伤模型的实验条件。方法:①50只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为5组,每组10只,通过尾静脉分别注射生理盐水和6mg/kg、12mg/kg、20mg/kg、30mg/kg的ConA,8h后眼球取血处死小鼠。②另40只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为4组(0、1、4、8h),每组10只,0h组小鼠使用生理盐水,另外3组小鼠使用12mg/kg ConA尾静脉注射,分别在注射后0、1、4、8h后眼球取血,测定不同剂量及不同时间点尾静脉注射ConA后C57BL/6J小鼠血清ALT、AST水平及肝脾组织病理学变化情况。结果:与对照组相比,分别注射6mg/kg、12mg/kg、20mg/kgConA 8h后小鼠血清ALT、AST均明显升高(P0.05),并呈剂量依赖性。注射30mg/kgConA的小鼠8h内全部死亡。与对照组相比,随注射ConA剂量增加,8h内小鼠肝组织呈进行性病变,最终发展为肝实质灶性坏死。12mg//kg剂量组小鼠染毒后,4 h后脾脏病变达高峰;血清ALT、AST水平在早期呈上升趋势,并在8h达到高峰(P0.05),呈显著性肝损害。对照组小鼠以上指标无显著变化。结论:小鼠尾静脉注射ConA可建立急性免疫性肝损伤小鼠模型,最佳剂量为12mg/kg。     

荣肝合剂对刀豆蛋白A诱导急性免疫性肝损伤小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的:探讨荣肝合剂对刀豆蛋白A(Con A)诱导的急性免疫性肝损伤小鼠病理组织学及T淋巴细胞亚群的影响。方法:乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠60只,随机分为6组(模型组、正常组、荣肝合剂组、茵陈蒿汤组、茵陈组、联苯双酯组),每组10只,造模前14天,模型组、正常组小鼠给予生理盐水灌胃,其余组分别给予荣肝合剂、茵陈蒿汤、单味茵陈煎液、联苯双酯溶液,每日灌胃给药干预。末次灌胃给药后1h,正常组小鼠给予磷酸盐缓冲液(PBS)尾静脉注射,其余各组按照Con A3μg/g体重尾静脉注射造模。造模给药后8h处死动物取血或组织标本检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、组织病理学(光镜)及T淋巴细胞亚群等指标。结果:模型组各指标与正常组比较,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);与模型组比较,荣肝合剂组、联苯双酯组小鼠ALT、AST、TBil水平显著降低(P0.01),荣肝合剂组、茵陈蒿汤小鼠组肝细胞变性、坏死及炎细胞浸润程度较轻;各药物干预组CD4~+CD8~-T淋巴细胞所占比例均有升高,以荣肝合剂最显著,有显著性差异(P0.05);荣肝合剂组CD4~+CD8~+T淋巴细胞所占比例下降(P0.05);各中药组均可升高CD4~+/CD8~+T细胞比例(P0.05)。同时,荣肝合剂CD4~+CD8~-T淋巴细胞所占比例于其他药物干预组比较差异有显著性意义(P0.05),荣肝合剂组CD4~+CD8~+T细胞所占比例与联苯双酯组比较有显著性差异(P0.05),荣肝合剂组CD4~+/CD8~+T细胞比值与茵陈蒿汤组比较差异有显著性意义(P0.05)。结论:荣肝合剂对刀豆蛋白A所致转基因小鼠急性免疫性肝损伤具有降酶作用,同时对于肝组织有保护作用,可以减轻肝组织的炎症与坏死,其机理与调节T淋巴细胞亚群功能相关。     

槲皮素对刀豆蛋白A诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨槲皮素对刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其可能的分子机制。方法通过检测Con A注射后8 h血清转氨酶水平及肝组织病理学评估肝损伤;应用酶联免疫法(ELISA)检测TNF-α、IFN-γ、IL-4水平;定量PCR和Western blotting或免疫组织化学检测肝组织mRNA与蛋白的表达。结果与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清转氨酶水平(P0.05),且组织病理学分析表明肝脏炎症坏死程度明显减轻;与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清促炎症细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-4的水平(P0.01);槲皮素预防组肝组织NOX4、COX-2和i NOS基因与蛋白的表达均明显低于模型组(P0.05)。结论槲皮素对Con A诱导小鼠急性肝损伤具有保护作用,其发挥有益作用的机制可能与抑制肝脏的炎症反应有关。     

异甘草酸镁对刀豆蛋白A诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用

异甘草酸镁是第四代甘草酸制剂,其有效成分是一种高纯度单-18-α异构体甘草酸,临床主要用于治疗肝炎.通过抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的药理作用,对四氯化碳、D-氨基半乳糖等引起的化学性肝损伤模型发挥保护效应[1-2].但目的鲜见对免疫性肝损伤作用的报道,因此,本实验通过建立刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠免疫性肝损伤模型,进一步探讨异甘草酸镁的疗效及部分作用机制.     

血府逐瘀汤对刀豆蛋白A诱导小鼠肝纤维化的干预作用

目的：观察血府逐瘀汤对刀豆蛋白A （ Con A）诱导小鼠肝纤维化的干预作用。方法： Balb/c雄性小鼠40只,随机分为正常组（8只）,模型组（16只）和治疗组（16只）。模型组和治疗组按照1.25mg/100g小鼠体重予以尾静脉注射Con A,正常组予注射相应剂量生理盐水,1次/周,共10周。治疗组于造模同时,予血府逐瘀汤药液1ml/100g小鼠体重灌胃,正常组及模型组则予以等量饮用水,1次/d。10周后,处理各组小鼠,留取血清、肝脾标本。全自动生化仪检测血清血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）和白蛋白（Alb）; HE和天狼星红染色观察肝组织炎症和胶原沉积; RT-PCR和Western Blot法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和转化生长因子β1（TGF-β1）表达。结果：模型组小鼠ALT和AST活性均较正常组明显升高（P＜0.05）;肝组织HE染色可见肝细胞坏死和大量炎性细胞浸润;天狼猩红染色可见大量胶原沉积和假小叶形成;肝组织α-SMA和TGF-β1较正常组显著升高（P＜0.01）。与模型组相比,治疗组ALT、 AST水平明显降低（P＜0.05）;肝脏炎症和胶原沉积明显改善;α-SMA和TGF-β1表达显著下调（P＜0.01）。结论：血府逐瘀汤可通过减轻肝脏炎症和抑制肝星状细胞活化而改善Con A诱导的小鼠肝纤维化。     

链脲菌素剂量对C57BL/6J小鼠糖尿病诱导效应的影响

目的 观察不同剂量链脲菌素(STZ)对C57BL/6J小鼠糖尿病诱导效应的影响,探讨其量效关系及最佳剂量范围.方法 将C57BL/6J小鼠按数字随机法分为9个STZ剂量组(A～I组,STZ分别为30、60、80、100、120、150、180、210、240 ms/kg体重),每组15只,腹腔注射;1个对照组,10只,腹腔注射等体积缓冲液.观察各组血糖、体重、血胰岛素和45 d生存率的变化,分析其与STZ剂量的关系.同时取A、C、G及对照组小鼠胰腺、肾脏组织做病理学检杏,并行免疫组化观察胰腺胰岛素及肾脏CD<,68>的表达.结果 C～G组较对照组血糖增高、体重及血胰岛素含量较对照组下降非常显著(P<0.05),且STZ剂量与血糖呈正相关(r=0.984,P<0.05),与血胰岛素含量呈负相关(r=-0.994,P<0.05).C～G组成模率达86.7%～100%,显著高于A、B组的0和40%(P<0.05);45 d生存率为46.7%～73.3%,显著高于H、I组的13.3%和0(P<0.05).A组胰腺、肾脏组织未见明显破坏;C组及G组出现典型的胰岛萎缩变形,胰岛素分泌颗粒减少,肾小球系膜外基质沉着及球周臣噬细胞浸润.结论 C57BL/6J小鼠腹腔注射STZ以80～180 mg/kg体重的剂量制模率高、生存率高,且靶器官损伤典型;该剂量与血糖呈正相关,与血胰岛素含量呈负相关.     

高脂饮食诱导下C57BL/6J小鼠外周血单核细胞变化的研究

目的动态观察高脂饮食诱导小鼠肥胖发生的过程中外周循环单核细胞的变化特点。方法选取5周龄C57BL/6J小鼠80只,适应性饲养1周后随机分为两组:高脂饮食(HF)组予60%脂肪饲料;正常饮食(Con)组予10%脂肪饲料。于相应时间点采集外周血单核细胞,以荧光抗体APC-CD11b、PE-CD115、Alexa Flour-430-Ly6C标记单核细胞和其亚群后,流式细胞仪检测,同时免疫组织化学检测3d和15周时的内脏脂肪组织巨噬细胞表达情况。结果高脂饮食诱导下,外周循环单核细胞亚群比例发生改变,早期巡逻单核细胞(Ly6C-low)比例增加,炎性单核细胞(Ly6C-hi)单核细胞比例减少,后期相反,15d时单核细胞数目减少最明显。结论高脂饮食过程中,外周循环单核细胞及亚群早期呈减少趋势,可能与组织脂肪细胞浸润有关。     

脂联素对刀豆球蛋白A诱导小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的探讨脂联素(ADPN)是否对肝脏的免疫性损伤具有保护作用以及可能的作用机制。方法将小鼠ADPN基因高效表达载体导入小鼠体内,获得高血清ADPN模型小鼠(表达载体组),与导入空载体的对照小鼠(空载体组)同时静脉内注射刀豆球蛋白A(Con A),以诱导肝脏的免疫性损伤,测定不同时间点血清ALT浓度,并进行肝组织病理学检查(HE染色),观察两组小鼠肝脏损伤程度是否有差异。比较两组间血清TNFα浓度的不同,探讨可能的作用机制。结果表达载体组小鼠注射Con A后血清ALT水平的升高明显低于空载体组,差异有统计学意义(P<0.01),组织学检查也显示表达载体组小鼠的肝损伤明显低于空载体组。经统计分析表明,ALT水平与血清ADPN水平成负相关(r=-0.5034,P=0.0121)。表达组小鼠血清TNFα水平明显低于空载体组(P<0.01)。结论脂联素对Con A诱导的肝脏免疫性损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制TNFα的产生进而阻断肝细胞遭受免疫性攻击有关。     

缺氧对C57BL/6J小鼠瘦素及其受体基因表达的影响

目的　研究缺氧对小鼠瘦素及其受体 (包括转运性受体Ra、Rc和功能性受体Rb)mRNA表达变化的影响,以进一步明确瘦素和呼吸功能的关系。方法　利用医学自动测控缺氧仓(XQ Ⅰ型)复制机体常压缺氧状态,将小鼠分为正常对照组、缺氧 24h组、缺氧 48h组,然后利用逆转录 聚合酶链反应(RT-PCR)分别定量检测瘦素及其受体mRNA表达水平。根据cDNA条带的灰度值计算其相对含量,各种产物与磷酸甘油醛脱氢酶 (GADPH)的比值表示其相对表达水平。结果(1)缺氧 24h组和缺氧 48h组瘦素mRNA表达水平分别为 0.903±0.190、0.856±0.336,显著高于正常对照组(0.508±0.207,P均<0.05); (2)缺氧 24h组和缺氧 48h组RamRNA表达水平分别为0 724、0.700,分别为正常对照组 (0 630)的 115%、111%; (3)缺氧 24h组和缺氧 48h组RbmRNA表达水平分别为 0.381±0.038、0.345±0.042,与正常对照组(0.258±0.049)比较差异均有统计学意义(P均<0.05); (4)缺氧 24h组和缺氧 48h组RcmRNA表达水平分别为 0.299、0.292,分别为正常对照组(0.133)表达水平的 224%、219%。结论　缺氧作为一种独立因素可在一定范围内刺激机体瘦素、瘦素受体Ra、Rb、Rc基因表达增加,从而在正向调节机体呼吸功能中发挥重要作用。     

MSCs对辐射诱导C57BL/6J鼠胸腺瘤的抑制作用

目的 观察MSCs对辐射诱导C57BL/6J鼠胸腺瘤模型的抑制作用.方法 无菌分离C57BL/6J鼠股骨,全骨髓贴壁法培养MSCs.将实验分为三组:正常组对照组、辐射组及MSCs治疗组.应用深部X线放射治疗机对C57BL/6J鼠进行全身照射,1次/w,共4次.末次照射结束后第二日,治疗组小鼠经尾静脉回输MSCs,1次/w,共2次.6个月后无菌取出各组的C57BL/6J鼠胸腺,研磨制成单细胞悬液,流式细胞仪检测CD45表达.提取组织RNA,利用RT-PCR检测caspase-3表达.结果 MSCs对辐射诱导C57 BL/6J鼠胸腺瘤模型CD45+的表达,治疗组CD45阳性百分率高于模型组(P＜0.01),模型组CD45阳性百分率低于正常对照组(P＞0.05).MSCs对辐射诱导C57BL/6J鼠胸腺瘤模型胸腺caspase-3的表达,治疗组Caspase-3 mRNA表达高于模型组(P＜0.05),高于正常对照组(P＜0.05),模型组Caspase-3mRNA表达接近于正常对照组(P＞0.05).结论 MSCs对辐射诱导C57BL/6J鼠胸腺瘤模型有抑制作用.     

消斑肽对C57BL/6J小鼠动脉粥样硬化斑块的影响

恨现从中华眼镜蛇毒素中提取一种多肽能抑制血管平滑肌细胞地殖,并在一定范围内杀伤快速增殖的平滑肌细胞。为验证消斑肽是否具有消除动脉粥样硬化斑块和预防再狭窄的药物效应,选用动脉粥样硬化敏感株近交系Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠,经致动脉粥样硬化饮食饲喂１７周。使用消斑肽腹腔注射３．２μｇ／ｇ治疗４周,在主动脉窦部连续切片,油经Ｏ染色并在显微镜下观察,使用Ｒｏｂｅｒｔｓ ＆ Ｔｈｏｍｐｓｏｎ评分判定斑块消退情况。     

慢性复合式应激对C57BL/6J小鼠凝血功能的影响

目的探讨慢性应激对C57BL/6J小鼠凝血功能的影响。方法将20～25g雄性C57BL/6J小鼠分成应激组及相应的对照组。应激组小鼠独笼饲养,将6个日相和6个夜相刺激及一个全天刺激随机安排到1w内,每w刺激顺序随机重新组合,连续8w。对照组动物则每5～6只小鼠合笼饲养,自由给水,整个实验过程中不接受任何刺激。两组动物均于刺激后的1、2、4、8w经内眦取血,用于空腹血糖含量,3、5、8w取血用于纤维蛋白原及凝血因子的检测。结果①与对照组相比较,应急组小鼠各时间点血糖含量均明显高于对照组(P0.01)。②纤维蛋白原含量检测显示,刺激后的3、5、8w应激组小鼠均低于对照组(P0.01);而出、凝血时间检测结果显示,刺激后各时间点应激组小鼠与对照组无显著差异。结论复合式慢性应激刺激可成功引起C57BL/6J小鼠处于应激状态,对C57BL/6J小鼠凝血功能造成一定的影响。     

肺炎衣原体感染对C57BL/6J小鼠动脉粥样硬化形成的影响

目的:研究肺炎衣原体(CP)感染对C57BL/6J小鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响。方法:48只8周龄雄性C57BL/6J小鼠分为感染-高脂组、高脂组和感染组和对照组,喂养40周,取主动脉根部标本分析AS斑块面积,采用直接免疫荧光法检查血管壁CP抗原,微量免疫荧光法(Micro-IFA)检测CP特异性抗体IgG。结果:感染-高脂组小鼠平均AS斑块面积较高脂组增大[(135249±43748)μm2∶(96378±30945)μm2,P<0·05],感染组和对照组小鼠无AS样斑块形成。结论:CP感染可加速高脂饮食C57BL/6J小鼠的主动脉AS发展。     

EGCG对刀豆蛋白A诱导肝损伤小鼠CXCR3表达的影响

目的观察EGCG对刀豆蛋白A(Con A)诱导的肝损伤小鼠肝组织中CXCR3表达的影响。方法 C57BL/6小鼠分成4组:正常对照组、表没食子儿茶素酸酯(EGCG)对照组、Con A模型组,EGCG+Con A模型组。EGCG对照组及EGCG+Con A模型组小鼠造模前给予EGCG口服(5 mg/kg),10 d后两组模型组小鼠通过静脉注射Con A(15 mg/kg)建造肝损伤模型,采血及留取肝组织,HE法检测肝组织病理变化,ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)α,干扰素(IFN)-γ及CXCR3的水平,免疫组化法检测肝组织中CXCR3的表达。结果 Con A模型组小鼠肝损伤明显,TNF-α、IFN-γ及CXCR3的表达明显增多,与其他组比较有差异显著(P0.05);EGCG干预的模型组肝损伤减轻伴TNF-α、IFN-γ及CXCR3的表达下降,与Con A模型组比较差异明显(P0.05)。免疫组化结果同样显示Con A模型组CXCR3的表达明显增多,EGCG治疗后表达减少。结论 EGCG对Con A诱导的免疫性肝损伤小鼠有保护作用,其机制可能与调节CXCR3的表达有关。     

刀豆蛋白A诱导小鼠肝纤维化动物模型的建立

目的利用刀豆蛋白A建立昆明小鼠肝纤维化模型并探讨其机制。方法昆明小鼠210只,随机分为7组,正常A组(注射等量生理盐水),刀豆蛋白A10mg每周1～3次(分别为B、C、D组)、15mg每周1～2次(分别为E、F组)、20mg每周1次(G组),采用尾静脉注射法攻击昆明小鼠,分别在第1周、第5周、第12周和第20周处死3只小鼠,留取肝组织标本行苏木精-伊红染色、纤维Masson染色,并行Knodell HAI和Ishak肝纤维化半定量计分,最后一次留取血清标本,检测血清IL-18、TNF-α和IFN-γ。结果 15mg每周1次,10mg每周2次组实验早期肝脏组织以坏死为主;实验中期(5～12周)坏死减轻,细小纤维条索出现;实验晚期(20周)纤维间隔逐渐增宽。10mg每周1次组实验晚期(20周)纤维条索形成,纤维间隔有增宽趋势。10mg每周3次组和20mg每周1次组全部死亡前,未发现有明显的肝纤维化形成。肝组织炎症活动度半定量计分显示刀豆蛋白A注射次数和注射剂量较大组评分较高(P<0.05)。肝纤维化半定量计分显示10mg每周2次组较15mg每周1次,10mg每周1次组高(P<0.05)。各组注射刀豆蛋白A后均出现了IL-18、TNF-α和IFN-γ的升高,并且IL-18和TNF-α表现出相关性(r=0.889,P<0.05)。结论利用刀豆蛋白A建立昆明小鼠的肝纤维化模型,其形成机制与IL-18、TNF-α和IFN-γ的升高密切相关。     

促红素衍生肽对刀豆蛋白A诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨外源性给予人工合成的促红素衍生肽(HBSP)对刀豆蛋白A(Con A)诱导的急性免疫性肝损伤的保护作用。方法采用小鼠尾静脉注射Con A建立急性肝损伤模型,造模后2 h给予HBSP治疗(采用尾静脉注射,8nmol/kg,每6小时1次),造模后6、12、24 h分别测定小鼠血清中ALT、AST水平,并进行肝组织病理学检查评估肝损伤程度。测定造模后12 h肝组织中IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10、TGF-β表达水平,通过TUNEL及免疫组化检测(分裂型Caspase-3)评估肝脏内肝细胞凋亡情况。结果在Con A诱导的急性肝损伤小鼠模型中,HBSP给药组血清ALT和AST水平显著低于Con A模型组,并且小鼠肝组织炎症坏死程度明显低于Con A模型组。同时,80 nmol/kg的HBSP给药显著提高了注射致死剂量Con A小鼠的生存率。此外,HBSP在mRNA水平抑制肝脏中促炎因子(IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-12)的表达,促进抑炎因子(IL-4、IL-10)的表达,并显著抑制Con A诱导的急性肝损伤相关的细胞凋亡。结论 HBSP对Con A诱导的急性肝损伤具有较好的保护作用,其机制可能与其抑制炎性反应及肝细胞凋亡有关。     

清肠利肝方对刀豆蛋白A所致急性肝损伤小鼠的防护作用

目的：探讨中药复方清肠利肝方对刀豆蛋白A （ Con A）所致急性肝损伤小鼠的防护作用。方法：将野生型C57BL/6（B6）雄性小鼠随机分为正常组、染毒组和清肠利肝方干预组;染毒组通过尾静脉注射Con A （35 mg/kg）诱导肝损伤,干预组先给予清肠利肝方（50 ml/kg）灌胃后再进行染毒。正常组仅给予生理盐水。观察比较各组小鼠的生存率、肝功能水平、组织病理学变化以及相关炎症分子的变化情况。结果：给予小鼠Con A能诱导明显的肝损伤,表现为血浆ALT、 AST水平显著升高,大量肝细胞发生凋亡坏死。清肠利肝方干预组小鼠的ALT、 AST水平低于染毒组,差异有显著性意义（P＜0.05）,病理结果显示肝损伤亦得到明显减轻;此外,干预组各项炎症分子如细胞外组蛋白、 IL-6, MCP-1, TNF-α等水平显著低于染毒组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：清肠利肝方对Con A所致的小鼠急性肝损伤有显著防护作用,其机制可能与减少细胞外组蛋白和相关的细胞因子的水平而达到抗炎的效应有关。     

炎症对C57BL/6J小鼠肝脏胆固醇积聚及纤维化的影响

目的 观察炎症对小鼠肝脏内胆固醇蓄积、内质网应激及纤维化的影响.方法 将8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=6)和炎症组(n=6),均以高脂饮食,炎症组小鼠隔天皮下注射0.5ml 10％酪蛋白以建立慢性炎症模型,对照组注射等量等渗盐水,14周处死.收集血清和肝组织样本,测定血清及肝组织中炎症因子及脂质水平;油红O、天狼猩红和Masson三色染色观察肝脂质沉积、形态改变以及纤维化程度;荧光实时定量PCR检测肝组织单核细胞趋化蛋白1、肿瘤坏死因子(TNF)α 、胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)2、低密度脂蛋白受体、3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶、活化转录因子6、葡萄糖调节蛋白(GRP)78、骨形成蛋白(BMP)7、转化生长因子(TGF)β、层黏连蛋白、Ⅰ/Ⅳ型胶原的mRNA水平.对数据进行两样本均数t检验或近似t检验.结果 血清中,炎症组白细胞介素(IL)6的水平[(32.41±7.42)pg/ml]高于对照组[(12.55±4.75)pg/ml],t=5.522,P＜ 0.01;总胆固醇水平为(10.62±0.48)mmol/L,低于对照组的(14.82±1.56)mmol/L,t=6.303,P＜0.01.肝组织中,炎症组TNFα的mRNA相对表达水平为2.12±0.72,高于对照组的1.05±0.35,t=3.132,P＜0.01;总胆固醇水平为(23.21±8.75)μg/mg,高于对照组的(12.10±2.57)μg/mg,t=2.984,P＜0.05.油红O染色表明,炎症组肝脏脂滴沉积异常增多;天狼猩红和masson三色染色可见炎症组有更为明显的肝纤维化改变.荧光定量PCR检测表明炎症组SREBP-2、GRP78的mRNA相对表达水平分别为2.63±0.13、2.21±0.99,高于对照组的1.01±0.19、1.07±0.47,t值分别为15.641和2.031,P值均＜0.05.TGF β、Ⅰ型胶原的mRNA相对表达水平分别为1.38±0.28、1.71±0.51,高于对照组的1.01±0.14、1.02±0.27,t值分别为3.032和3.152,P值均＜0.05.BMP-7的mRNA相对表达水平为0.55±0.25,低于对照组的1.01±0.15,t=3.765,P＜0.01.结论 慢性炎症可以明显促进小鼠肝脏胆固醇沉积而加重肝细胞损害,刺激内质网应激,从而增加促纤维化因子表达、抑制抗纤维化因子表达,促进肝纤维化发生.     

泮托拉唑对二乙基亚硝胺联合四氯化碳诱导C57BL/6J小鼠肝癌模型肝细胞增殖的影响

目的:探讨泮托拉唑对二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)联合四氯化碳(carbon tetrachloride,CC14)诱导C57BL/6J小鼠肝癌模型肝癌细胞增殖的影响.方法:将78只C57小鼠采用DEN联合CCl_4共同诱导C57BL/6J小鼠肝癌,第9周将制模小鼠随机分为模型组、泮托拉唑低剂量组(40mg/kg)、高剂量组(80 mg/kg),并开始腹腔注射泮托拉唑,同时取12只正常小鼠为对照.第25周处死小鼠,取正常肝组织、肝癌组织和癌旁组织,肉眼观察拍片,并作HE染色光镜检查.采用生化法检查小鼠血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、尿素(urea)、肌酐(creatinine,Cr)水平;采用Realtime PCR方法来检测正常肝、肝癌及癌旁组织甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)、细胞增殖核抗原Ki67,增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA的表达,采用Western blot法检测Ki67、PCNA蛋白的表达.结果:小鼠死亡率为21%,成瘤率为100%.肝脏组织巨检:模型组与高低剂量组肝体积增大,表面有大小不等的结节,与模型组比较,高、低剂量组结节个数明显减少.HE染色显示:与模型组比较,高、低剂量组异型增生明显减少.血清生化检测显示:模型组、高、低剂量组血清ALT、AST水平明显高于正常组(P0.05),高剂量组ALT、AST水平明显低于模型组(P0.05).RT-PCR结果提示,与正常组相比较,模型组和高、低剂量组AFP、Ki67和PCNA mRNA表达明显增高(P0.05,F=7.94;P0.05,F=15.62;P0.01,F=45.58).与模型组比较,高剂量组Ki67和PCNA mRNA表达降低(P0.05,F=5.89;P0.05,F=10.34).Western blot结果显示,与正常肝组织比较,模型组和高剂量组的肝癌及癌旁组织Ki67和PCNA蛋白表达明显增高(P0.05,F=20.41;P0.05,F=20.31).与模型组比较,高剂量组肝癌及癌旁组织Ki67和PCNA蛋白表达明显减少(P0.05,F=16.47;P0.05,F=12.38).结论:泮托拉唑DEN联合CCl_4诱导C57BL/6J小鼠肝癌模型肝细胞增殖有抑制作用.