Hedgehog通路与肝纤维化及肝星状细胞活化的关系研究

目的:探讨Hedgehog通路与肝纤维化及肝星状细胞(HSC)活化的关系.方法:清洁级SD雄性大鼠20只,均分为模型组和对照组.模型组采用腹腔注射四氯化碳(CCl4)和高脂饮食诱导肝纤维化,对照组予以正常饮食.第8周末取模型组存活大鼠与对照组中大鼠各5只处死,取左叶肝脏组织.HE、Masson染色观察两组肝组织病理变化;逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测纤维化大鼠肝脏中表达Hedgehog通路成员超音速Hedgehog信号通路(Shh)、膜受体patched(Ptc)、smoothened(Smo)和核转录因子Gli表达;实时荧光定量PCR法检测Hedgehog通路成员及HSC活化标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA在两组大鼠肝脏中的表达差异.体外培养HSC-T6细胞,RT-PCR检测HSC-T6细胞株中Hedgehog通路成员的表达;四甲基偶氮唑盐比色分析(MTT)法检测不同浓度环耙明(Cyclopamine,Cyc)对HSC-T6增殖的影响;分别用0、100/μmol/L的Cye干预HSC-T6,实时荧光定量PCR法检测Shh、Smo、Ptc、Gli-1及αSMA mRNA表达差异.结果:模型组大鼠肝脏有大量脂质及胶原沉积,且肝脏组织中均有Shh、Smo、Ptc、Gli-1表达.荧光定量PCR结果示模型组大鼠Shh、Smo、Gli-1及αSMA mRNA表达均较对照大鼠升高(20.45±3.31、12.78±0.53、10.88±2.41、4.91±2.59比1;P值均<0.05).Cyc在体外对HSC-T6有明显的抑制作用,且抑制作用呈剂量依赖性(F=636.81,P<0.01).荧光定量PCR结果示,用Cyc 100 μmol/L干预的HSC-T6中,Ptc、Smo、Gli-1和αSMA表达量分别为0.20±0.11、0.21±0.08、0.28±0.05和0.27±0.10,与Cyc 0μmol/L干预比较差异均有统计学意义(P值均<0.01).结论:肝纤维化过程中Hedgehog通路成员表达增高,抑制Hedgehog通路可抑制HSC活化,推测Hedgehog通路通过活化HSC促进肝纤维化的发生.     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞自分泌转化生长因子β1的影响

目的从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC,以0.85%氯化钠溶液和秋水仙碱为对照.免疫细胞化学分析TGF-β1的蛋白合成;半定量RT-PCR法检测TGF-β1mRNA的表达量.结果抗纤软肝冲剂组TGF-β1蛋白表达量为108.41士4.50,mRNA相对表达量为54.41±5.57,明显低于0.85%氯化钠溶液组和秋水仙碱组(P＜0.01)..结论抗纤软肝冲剂能抑制HSC的TGF-β1的基因和蛋白表达,阻断其自分泌放大活化效应,这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.     

Hedgehog-Gli 1信号通路对肝星状细胞增殖和凋亡的调控作用

目的 研究肝星状细胞(HSC)中hedgehog(Hh)信号通路成员Shh、patched、smoothened(Smo)和Gli-1的表达,及Hh通路抑制剂环耙明对HSC-T6细胞株增殖、凋亡及其激活的影响.方法 体外培养HSC株,提取细胞总RNA,用RT-PCR扩增Shh、patched、Smo、Gli-1基因;用环耙明作用HSC-T6后采用四甲基偶氮唑盐法检测其在体外对HSC-T6的抑制情况,流式细胞仪检测其对HSC-T6细胞周期的影响,碘化丙啶和膜联蛋白-Ⅴ双染荧光标记法及提取细胞DNA检测HSC-T6细胞凋亡,荧光定量聚合酶链反应检测Gli-1,转化生长因子β1、血小板衍生生长因子、Bcl-2 mRNA的表达水平.结果 HSC-T6中表达有Hh通路家族成员.环耙明在50、100、150、200,250 μmol/L作用下,A值分别为1.55±0.07、1.19 ±0.05,0.78±0.06、0.48±0.03、0.38±0.04,正常对照组为1.74±0.03,环耙明组与正常对照组相比,F=636.81,P<0.01,差异有统计学意义.流式细胞术测出干预后环耙明G0/G1期细胞所占比例为65.08%±1.50%,正常对照组为55.41%±2.54%,两组比较,t=-8.05,P<0.01.药物干预后提取DNA及碘化丙啶和膜联蛋白-Ⅴ双染荧光标记均检测出HSC-T6细胞凋亡.荧光定量结果表明,经环耙明干预后,HSC-T6细胞中Gli-1、转化生长因子β1、血小板衍生生长因子、Bcl-2 mRNA的目的基因相对表达量分别0.28±0.05、0.13±0.04、0.07±0.04、0.17±0.02,正常对照组为1,各基因表达量较正常对照组均明显降低,t值分别为23.09、31.34、43.87和59.10,P值均<0.01,差异有统计学意义.结论 HSC-T6中存在Hh信号通路,环耙明能抑制HSC增殖及增殖周期,促进活化的HSC凋亡,其抑制HSC活化可能是通过抑制Hh-Gli-1信号通路的结果.     

软肝化坚颗粒对肝纤维化模型C57小鼠肝脏PDGF-B表达的影响

目的观察软肝化坚颗粒对肝纤维化模型C57小鼠肝组织血小板衍生生长因子-B（PDGF-B）表达的影响。方法 50只C57小鼠被随机分为5组,每组10只。采用四氯化碳腹腔注射制造小鼠肝纤维化模型,通过免疫组织化学染色方法检测各实验组肝组织中PDGF-B的表达,对不同剂量软肝化坚颗粒进行实验对比,同时进行肝组织炎症评分（G）和纤维化评分（S）。结果各实验组肝组织PDGF-B表达、炎症和纤维化评分与正常对照组比较,差异均具有统计学意义（P〈0.05）;模型对照组肝组织PDGF-B表达、炎症和纤维化评分明显高于软肝化坚颗粒低剂量组、高剂量组和秋水仙碱组,差异均具有统计学意义（P〈0.05）;软肝化坚颗粒低剂量组、高剂量组和秋水仙碱组肝组织PDGF-B表达、炎症和纤维化评分差异无统计学意义（P〉0.05）。结论软肝化坚颗粒可能通过降低C57小鼠肝组织PDGF-B的表达,进而减轻肝纤维化程度和肝组织损伤。     

转化生长因子-β信号通路与肝纤维化分子治疗研究进展

肝星状细胞（HSC）是肝纤维化发生的关键细胞，转化生长因子-β（TGF-β）在肝纤维化发生、发展过程中具有活化HSC、促进细胞外基质（ECM）合成和沉积等作用。TGF-β-Smad信号通路是TGF-β发挥生物学效应的主要通路，其分子组成和分子调节复杂，与其他信号通路存在广泛交互影响。深入研究TGF-β-Smad信号通路可进一步阐述肝纤维化的发病机制，为肝纤维化的防治提供新的有效途径。     

软肝化坚颗粒对肝纤维化模型C57小鼠肝组织α-SMA、TGFβ1表达和I型胶原水平的影响

目的观察软肝化坚颗粒对肝纤维化模型C57小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子(TGF)β1表达和I型胶原水平的影响。方法 40只C57小鼠随机分为4组,分别为正常对照组、模型对照组、软肝化坚颗粒低剂量组及高剂量组,每组10只。采用四氯化碳(CCl4)腹腔注射制造小鼠肝纤维化模型,通过免疫组织化学染色方法检测肝组织中α-SMA、TGFβ1和I型胶原的表达,同时进行肝组织纤维化评分(S)。结果各模型组肝组织α-SMA、TGFβ1及Ⅰ型胶原表达和纤维化评分与正常对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);软肝化坚颗粒低剂量组、高剂量组肝组织α-SMA和TGFβ1及Ⅰ型胶原评分和纤维化评分较模型对照组均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);软肝化坚颗粒低剂量组和高剂量组α-SMA、TGFβ1及Ⅰ型胶原评分及肝纤维化评分之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论软肝化坚颗粒可能通过抑制C57小鼠肝组织TGFβ1的产生,进而抑制肝星状细胞(HSC)的活化,减少细胞外基质(ECM)的合成,从而降低I型胶原增生,达到预防和治疗肝纤维化的作用。     

肝病病理的共同特征:Hedgehog信号通路活化

一、Hedgehog通路概况 Hedgehog (Hh)信号通路最初是在果蝇中发现的,该通路非常保守,在胚胎发育过程中,其决定着许多关键细胞的命运如增值、分化、凋亡、迁移等,从而广泛调节胚胎形成、发育以及众多组织的重塑[1-2].在成年时的许多组织,包括肝脏的损伤修复中发挥着重要作用[3-6].该信号通路主要包括Hh生成细胞和Hh反应细胞,前者能产生一个配体家族包括Sonic hedgehog (Shh),Indian hedgehog (Ihh),Desert hedgehog (Dhh);然后通过自分泌、旁分泌和内分泌途径作用于后者,并与其细胞膜上的受体Patched (Ptc)结合,同时通过抑制Smoothened (Smo)分子活性启动胞内信号通路,导致Glioblastoma (Gli)家族转录因子(Glil,Gli2,Gli3)前往细胞核内,调节Gli靶基因的表达[5-7].     

软肝化坚颗粒调节肝星状细胞分泌胶原及相关细胞因子的研究

目的:观察软肝化坚颗粒药物血清对肝星状细胞(HSC)分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原及肝纤维化相关细胞因子的影响.方法:通过灌胃制备小鼠软肝化坚颗粒及秋水仙碱药物血清.将HSC-T6细胞分为3组,分别加入含10％软肝化坚颗粒血清、10％秋水仙碱血清和10％正常小鼠血清的培养基,培养24小时后,收集培养上清.采用ELISA法检测Ⅰ型胶原、转化生长因子β1 (TGF-β1)、瘦素(LP)及血小板衍生生长因子(PDGF)的含量;采用放射免疫法检测Ⅲ型胶原含量.结果:与正常血清对照组相比,秋水仙碱血清组和软肝化坚颗粒血清组培养上清中Ⅰ型胶原含量均显著降低,P值均为0.000;Ⅲ型胶原的含量也均显著降低,P值分别为0.005和0.001.与正常血清对照组相比,秋水仙碱血清组培养上清中TGF-β1、LP和PDGF的含量均明显降低,P值均为0.000;软肝化坚血清组也均显著降低,P值均为0.000;软肝化坚颗粒血清组与秋水仙碱血清组相比,培养上清中TGF-β1、LP的含量均明显降低,P值分别为0.006和0.043.结论:软肝化坚颗粒可抑制活化的HSC产生TGF-β1、PDGF及LP等细胞因子,从而对HSC分泌胶原产生抑制作用.     

桃红芪术软肝煎基于TGF-β/Smad信号通路逆转上皮-间质转化抗肝纤维化作用

目的:观察桃红芪术软肝煎从(transforming growth factor beta,TGF-β)/Smad信号通路逆转上皮-间充质细胞转化(e p i t h e l i a lmesenchymal transition,EMT)抗肝纤维化的作用.方法:取对数生长期的HepG2细胞进行试验,将细胞分为7组:空白组、TGF-β诱导EMT组、TGF-β+中药[低剂量组(p e a c h stilbene low dose group,THQL)、中剂量组(peach stilbene middle dose group,THQM)、高剂量组(peach stilbene high dose group,THQH)]、TGF-β+扶正祛瘀胶囊组(Fuzheng Huayu recipe,FZHY组)、TGF-β+秋水仙碱组(c o l c h i c i n e g r o u p,QSXJ组),采用免疫荧光和Western blot方法检测E-cadherin、Vimentin、Smad2、TGF-βR1表达情况,并检测细胞上清液中的谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)表达情况.结果:诱导组AFP诱导第3天浓度明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);用药干预后,用药组ALT、AST水平均低于模型组,差异具有统计学意义(P0.05),THQL及TRQM的ALT水平均低于FZHY和QSXJ,差异具有统计学意义(P0.05),THQM及THQH的AST水平均低于FZHY和QSXJ,差异具有统计学意义(P0.05);桃红芪术软肝煎可以改善HepG2细胞被诱导发生EMT的形态,其中THQM组和THQH组形态改变较为明显;桃红芪术软肝煎可以上调E-cadherin表达,下调Smad2、TGF-βR1、Vimentin表达.结论:桃红芪术软肝煎可以通过作用于TGF-β/Smad信号通路逆转上皮-间质转化,从而起到抗肝纤维化的作用.     

化瘀通络解毒颗粒对肝纤维化大鼠TGF-β_1、Smad3表达的影响

目的探讨化瘀通络解毒颗粒抗肝纤维化的作用机制。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,同时以化瘀通络解毒颗粒进行干预,造模8 w后,HE和Masson染色观察肝组织病理变化;免疫组化观察TGF-β1的表达;RT-PCR法检测Smad3 mRNA的表达。结果病理学观察表明化瘀通络解毒颗粒组和复方鳖甲软肝片组均能明显降低纤维化大鼠肝组织中的胶原含量,且治疗组优于对照组(P0.05);RT-PCR和免疫组化显示治疗后TGF-β1、Smad3的表达均明显减少。结论化瘀通络解毒颗粒能逆转肝纤维化,其机制可能与化瘀通络解毒颗粒具有促进肝脏胶原降解和抑制TGF-β1及其下游信号Smad3的表达,进而阻断其信号传导通路有关。     

Hedgehog信号通路抑制剂对转化生长因子-β1诱导人胆管癌细胞生物学行为的影响

目的研究Hedgehog信号通路抑制剂对转化生长因子(TGF)-β1诱导人胆管癌细胞(RBE)生物学行为的影响。方法选取Hedgehog信号通路特异性的抑制剂环杷明,选用台盼蓝染色计数法及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5二苯基四氮唑嗅盐(MTT)比色法检测其对TGF-β1诱导人胆管癌细胞(RBE)增殖的影响。随后采用Western印迹法测定RBE产生的Glil蛋白及Smo蛋白的表达数量。结果浓度为5、10、15、20、40μmol/L的环杷明都可以通过调控Hedgehog信号通路而对REB活性及增殖产生明显的抑制作用,且与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。而控制环杷明的浓度,将时间作为变量的实验中,发现经环杷明处理时间越长,RBE的生长能力越弱(P0.05);不经过环杷明处理过的RBE表达的Glil及Smo的数量较高,而环杷明处理后的REB所翻译出两种蛋白质的量皆有所减少(P0.05);而且随着环杷明处理时间越长,其表达的数量越低(P0.05)。结论环杷明作为特异性抑制剂可以通过阻断Hedgehog信号通路而对TGF-β1诱导的RBE生物学行为学产生影响,主要可以抑制其增殖,其发生机制可能与抑制Glil及Smo蛋白的表达有关。     

肝纤维化中肝星状细胞内主要信号转导通路

肝纤维化是肝脏对各种慢性刺激进行损伤修复反应时,以胶原为主的细胞外基质(ECM)在肝内大量沉积的病理过程.活化的肝星状细胞(HSC)是肝纤维化时产生ECM的主要细胞.细胞因子、氧化应激以及ECM的改变等外部因素通过一定的细胞内信号转导通路激活HSC.了解HSC活化的信号转导通路能从根本上为治疗肝纤维化提供更多更有效的思路和方法.目前研究较多的信号途径有TGF-β/Smad通路、MAPK通路、PI3K通路、JAK/STAT通路、NF-κB通路、过氧化物酶体增殖物激活受体通路等.本文简要综述了肝纤维化时HSC中主要的细胞内信号转导通路.     

酒精性肝纤维化中主要信号转导通路的研究

在酒精性肝病的进展过程中,乙醇在体内代谢通过多个环节诱导肝星状细胞(HSC)活化增殖,导致肝纤维化的发生,这个过程是向酒精性肝硬化进展的病理阶段,早期具有可逆转的特点。了解参与HSC活化增殖的相关细胞因子介导的信号转导通路可为逆转酒精性肝纤维化提供有效的靶向。目前研究较多的信号途径包括TGF-β/Smads通路、Wnt/β-catenin通路和NF-κB通路等。     

心钠素对大鼠肝星状细胞活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 探讨心钠素(ANP)对大鼠肝星状细胞(HSC T6)活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 待HSC T6细胞贴壁后,在细胞培养瓶中加入ANP 10μmol/L培养1h,采用免疫荧光法、利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Smad4和pSmad2/3蛋白细胞内转位.将HSC T6细胞分成空白未活化组、空白活化组、ANP1 μmoL/L组、ANP 10 μmol/L组,继续培养1h,分别提取细胞质蛋白及核蛋白,以Western blotting法检测Smad4蛋白表达水平变化.ANP作用24 h,收集细胞培养液,以ELISA法检测Ⅰ型胶原、MMP-13分泌量.结果 空白未活化组、ANP 10 μmol/L组Smad4、pSmad2/3在胞质内表达,空白活化组在核内表达;ANP1、10 μmol/L组细胞质内Smad4蛋白表达量较空白活化组增多(P均＜0.05),并随ANP浓度的增大表达增强(P＜0.05),而细胞核内Smad4蛋白表达量变化趋势与细胞质蛋白相反(P均＜0.05).ANP作用HSC T6 24 h后,细胞上清液中Ⅰ型胶原的分泌量较空白对照组减少(P＜0.05),MMP-13分泌量无明显变化.结论 ANP可在一定程度上阻断大鼠HSC T6细胞活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的传导,减少了Ⅰ型胶原的分泌量,起到了抗肝纤维化的作用.     

维药小茴香抗肝纤维化作用及对TGF-β/smad信号转导通路的影响

目的探讨小茴香提取物抗肝纤维化的作用及其对TGF-β/smad信号转导通路和肝星状细胞活化的影响。方法选择44只SD大鼠给予40%四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液4 ml/(kg·体重)皮下注射5周制备肝纤维化模型,成模后随机分成治疗组和模型对照组,同时取6只正常大鼠做空白对照。治疗组给予小茴香提取物灌胃,模型对照组给予生理盐水灌胃,4周末处死大鼠检测血清ALT、AST、HA、LN,肝石蜡切片行Masson染色和抗α平滑肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β受体Ⅰ型(TGF-βRⅠ)、TGF-β1免疫组织化学染色,反转录实时荧光定量PCR分析肝组织TGF-β1、smad2 mRNA相对内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的表达量。结果小茴香提取物治疗组血清ALT、AST、HA水平,肝组织内胶原纤维含量、α-SMA、TGF-βRⅠ、TGF-β1表达以及TGF-β1、smad2 mRNA相对表达量均明显低于模型对照组。结论小茴香提取物可通过抑制TGF-β/smad信号转导通路抑制肝星状细胞活化,从而减轻大鼠肝纤维化。     

抗纤软肝胶囊对大鼠肝纤维化肝星状细胞活化及凋亡的影响

目的探讨抗纤软肝胶囊对大鼠肝纤维化肝星状细胞(HSC)活化及凋亡的影响。方法将32只清洁级SD大鼠采用随机数字表法分为正常对照组和肝纤维化建模组各16只。建模组大鼠皮下注射四氯化碳(CCl_4)诱导大鼠肝纤维化,正常对照组以同样方法注射等量植物油,随后将正常对照组随机分为正常组8只,药物组8只,建模组随机分为模型组8只,治疗组8只。药物组、治疗组均给予抗纤软肝胶囊治疗,其他组同期灌服相当量的生理盐水。应用苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色观察各组肝脏病理组织学改变;检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅳ-C型胶原(Ⅳ-C)及Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)水平;RT-PCR法或流式细胞术检测各组血清体外对HSC-T6细胞中α平滑肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子(TGF)-β1 mRNA表达以及细胞凋亡水平的影响。结果与模型组大鼠比较,治疗组大鼠肝脏的肝纤维化程度减轻;治疗组血清ALT、AST、HA、LN、IV-C、PC-Ⅲ水平明显低于模型组,而ALB水平明显高于模型组(均P<0.05);体外实验发现药物组及治疗组α-SMA和TGF-β1 mRNA的表达水平显著低于正常组及模型组(均P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,药物组及治疗组HSC-T6的凋亡水平显著高于正常组及模型组(均P<0.05)。结论抗纤软肝胶囊通过参与调控HSC的活化及凋亡,可发挥对肝纤维化大鼠的治疗作用。     

肝内型门脉高压相关基因功能和信号通路的分析

目的肝星状细胞(HSC)的激活受多条信号通路的调节,是肝内型门脉高压发生的关键事件。此研究对静态和活化HSC二代测序结果进行了全面的生物信息学分析,旨在深入了解HSC激活的关键基因及其信号通路。方法通过基因功能分析——功能的显著性分析和KEGG信号通路对差异表达信使RNA(mRNA)进行分析。结果根据基因功能分布发现,HSC转型过程中主要涉及细胞凋亡、增殖、迁移等40种功能,KEGG信号通路提示30条信号通路富集度高。结论在HSC活化向肌成纤维母细胞分化的过程中存在mRNA基因功能和信号通路的差异调控,这为肝纤维化及门脉高压的发病机制和诊治研究提供了新方向。     

氧化苦参碱对转化生长因子-β1促肝星状细胞活化及跨膜信号转导影响

目的观察低浓度氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞(HSC)培养活化和转化生长因子-β1,(TGF-β1)促活化作用影响,并探讨该作用与TGF-β1受体后信号通路的关系.方法原代分离培养2d HSC,MTT法检测低浓度氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSG细胞毒作用(作用12 h)和增殖影响(作用48 h),或给予TGF-β1(5 ng/m1)和/(或)氧化苦参碱(2 mg/L)干预,相差显微镜观察HSC形态变化,分别以RT-PCR或Western blot法检测TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体、Smad 2/3、Smad 7以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和/(或)蛋白表达.结果氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSC无明显细胞毒作用,大于8 mg/L能抑制HSC增殖.氧化苦参碱(2 mg/L)抑制TGF-β1诱导HSC激活时的α-SMA表达和形态转化,伴随TGF-β1受体mRNA表达升高,Smad 7 mRNA表达上调及TGF-β1mRNA表达下降(与单纯TGF-β1处理组相比,分别上升1.25、0.87倍或下降1.92倍,P均＜0.05),但不影响TGF-β1Ⅱ型受体和Smad 3 mR-NA表达.Western blot检测Smad 2/3、Smad 7蛋白表达,与RT-PCR结果相似.氧化苦参碱对单纯培养激活的HSC有类似作用.结论低浓度氧化苦参碱(2 mg/L)上调Smad 7表达并抑制TGF-β1表达、上调TGF-β1Ⅰ型受体、恢复正常的TGF-β1跨膜信号转导,抑制HSC培养活化和TGF-β1促活化作用.     

抗纤软肝颗粒对PDGF诱导下HSC细胞周期及胞内Ca2+浓度的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞周期及胞内Ca~(2 )浓度的影响。方法:采用完全无血清培养,用流式细胞术分析抗纤软肝颗粒对PDGF诱导的HSC增殖的影响,应用Ca~(2 )荧光指示剂Fura-2/Am在荧光分光光度计上测定细胞内Ca~(2 )浓度。结果:与对照组相比,抗纤软肝颗粒处理组可显著地抑制PDGF诱导的HSC增殖及细胞内Ca~(2 )浓度的升高,尤以抗纤软肝颗粒5mg/ml组作用明显。结论:抗纤软肝颗粒能拮抗PDGF诱导的细胞内Ca~(2 )浓度的升高。     

应用组织芯片检测原发性肝细胞癌中Hedgehog信号通路的表达

目的：了解Hh通路在HCC的表达情况。方法：将44例原发性肝细胞癌组织及其相应的癌旁肝组织制成含88个微组织的组织芯片，采用免疫组织化学方法分别检测了Hh信号通路中Shh、Ihh、Ptch-1和Gli-2在两种组织中的表达情况，并分析其与HCC临床病理组织学的相关性。结果：在HCC组织中Shh、Ptch-1和Gli-2表达阳性率分别为63．6％、45．5％和68．2％，高于癌旁肝组织（P〈0．05）。在不同分化组和转移组中，Gli-2的阳性表达率差异具有显著性（P〈0．05）。结论：组织芯片技术可高效、平行地进行肿瘤分子病理研究；Hh信号通路的过度激活参与了HCC的发生，可能成为HCC治疗的潜在新靶标。