灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后脑内Fas表达的抑制作用

目的研究灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注引起脑损伤的保护作用,探讨其作用机制。方法选用40只雄性Wistar大鼠,随机分成5组：假手术组、生理盐水组（I-R组）、MgSO4治疗组、灯盏花素治疗组Ⅰ和Ⅱ（BreⅠ、Ⅱ组）。结扎中脑动脉,然后再灌注。用TUNEL法和免疫组化法分别检测脑组织凋亡细胞和Fas阳性细胞的变化。结果①降低脑组织凋亡细胞：MgSO4组、BreⅠ、Ⅱ组在脑缺血再灌注23 h后海马区凋亡神经元/海马神经元均较I-R组海马区凋亡神经元/海马神经元低,差异有显著性。②降低Fas阳性表达细胞数量：MgSO4组、BreⅠ组和BreⅡ组在脑缺血再灌注23 h后海马区Fas表达阳性神经元/海马神经元均较I-R组海马区Fas表达阳性神经元/海马神经元低,差异有显著性。结论灯盏花素可显著保护大脑缺血再灌注引起的脑损伤,可能与其抑制Fas蛋白的表达有关。其作用优于单用MgSO4。     

大鼠肢体缺血再灌注后海马神经元NR 2B亚单位表达的变化

脑缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,I-R)损伤是全球的研究热点,但外周器官I-R对脑的影响尚缺乏研究.我们发现大鼠肢体I-R后其海马锥体层神经元出现明显的病理改变,提示肢体I-R对脑的影响不容忽视.N-甲基-D天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NR)有功能亚单位(NR1)和调节亚单位(NR2)两部分组成,NR2有A、B、C、D四种类型.资料显示,在前脑缺血所造成的海马神经元损伤中,NR1/NR2B型受体具有重要作用.NR1/NR2B型受体是否参与介导了肢体I-R所导致的海马损伤,尚无研究证实.     

大鼠缺血预处理诱导脑缺血再灌注损伤后Bc1-2及Bc1-xl表达

为探讨凋亡抑制基因Bc1-2及Bc1-x1在缺血预处理(IPC)对大鼠海马CA1区神经元细胞保护中的作用,利用大鼠四血管阻断和再灌注及再通建立前脑缺血再灌注损伤模型,采用尼氏小体染色光镜观察、流式细胞术、免疫组织化学等技术,观测缺血预处理海马CA1区部分神经元病理组织学改变,细胞凋亡百分率及Bc1-2和Bc1-xl蛋白表达的情况.结果发现,大鼠前脑缺血再灌注引起海马CA1区部分神经元发生凋亡,IPC还可明显的减少缺血再灌注损伤后凋亡的神经元数目,产生细胞保护作用,IPC可诱导缺血再灌注损伤早期缺血敏感神经元中出现Bc1-2及Bc1-x1蛋白的表达.结果提示,抑制神经元凋亡发生可能是IPC对脑缺血再灌注损伤起保护作用的机制之一.     

大鼠缺血预处理诱导脑缺血再灌注损伤后BcI-2及BcI-xI表达

为探讨凋亡抑制基因Bcl-22及Bcl-x1在缺血预处理(IPC)对大鼠海马CAl区神经元细胞保护中的作用，利用大鼠四血管阻断和再灌注及再通建立前脑缺血再灌注损伤模型，采用尼氏小体染色光镜观察、流式细胞术、免疫组织化学等技术，观测缺血预处理海马CAl区部分神经元病理组织学改变，细胞凋亡百分率及Bcl-2和Bcl-x1蛋白表达的情况。结果发现，大鼠前脑缺血再灌注引起海马CAl区部分神经元发生凋亡，IPC还可明显的减少缺血再灌注损伤后凋亡的神经元数目，产生细胞保护作用，IPC可诱导缺血再灌注损伤早期缺血敏感神经元中出现Bc1-2及Bc1-xl蛋白的表达。结果提示，抑制神经元凋亡发生可能是IPC对脑缺血再灌注损伤起保护作用的机制之一。     

利多卡因对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织细胞间NF-κB表达的影响

目的观察利多卡因对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织细胞间NF-κB基因表达的影响,探讨利多卡因脑保护作用的机制。方法雄性SD大鼠32只,随机分为假手术组(A组)、缺血再灌注组(B组)、利多卡因大剂量组(C组)和利多卡因小剂量组(D组),缺血前10min腹腔注射。脑缺血10min再灌注24h时,断头处死大鼠。用RT-PCR技术检测海马组织NF-κB的表达,用免疫组织化学、蛋白印记(westernblot)方法检测NF-κB蛋白表达情况。结果脑缺血再灌注后海马组织NF-κBmRNA及蛋白表达水平增高,利多卡因可下调NF-κB表达,缺血再灌注后,海马区神经元细胞出现明显坏死,利多卡因可减轻海马区神经元损伤。结论利多卡因可能通过抑制NF-κB基因表达而对脑缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。     

利多卡因对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织细胞间黏附分子-1表达的影响

目的观察利多卡因对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)基因表达的影响,探讨利多卡因脑保护作用的机制。方法雄性SD大鼠32只,随机分为假手术组(A组)、缺血再灌注组(B组)、利多卡因大剂量组(C组)和利多卡因小剂量组(D组),缺血前10 min腹腔注射。脑缺血10 min再灌注24 h时,断头处死大鼠。用RT-PCR技术检测海马组织ICAM-1的表达,用免疫组织化学、蛋白印记(Western blot)方法检测ICAM-1蛋白表达情况。结果脑缺血再灌注后海马组织ICAM-1 mRNA及蛋白表达水平增高,利多卡因可下调ICAM-1表达,缺血再灌注后,海马区神经元细胞出现明显坏死,利多卡因可减轻海马区神经元损伤。结论利多卡因可能通过抑制ICAM-1表达而对脑缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。     

缺血再灌注对大鼠学习记忆及海马神经元Glu、NR1和NR2B表达的影响

目的观察脑缺血再灌注对大鼠学习记忆能力及海马神经元谷氨酸（Glu）、NR1、NR2B表达的影响，探讨脑缺血损伤与Glu兴奋性毒性的关系。方法采用PULLINSIN-4VO改良法制备血管性痴呆动物模型，MORRIS水迷宫检测其空间学习记忆能力，苏木精-伊红染色显示海马组织结构变化，免疫组织化学SABC法显示海马神经元Glu及NR1、NR2B的表达。结果缺血15min再灌注损伤48h后，海马神经元大量坏死损伤，大鼠学习记忆能力明显下降，海马内Glu、NR1和NR2B表达显著增加（F=22．063～1368．839，q=3．453～5．342，P〈0．01）。结论缺血再灌注使大鼠学习记忆能力下降，其机制与海马神经元Glu、NR1和NR2B的表达增加有关。     

雷帕霉素对大鼠缺血再灌注肾超微结构和凋亡蛋白表达的影响

雷帕霉素(rapamycin,RPM)是一种强有力的免疫抑制剂,其免疫作用较环孢素A强100倍左右,并已广泛应用于肾移植中[1].本实验通过复制大鼠肾缺血再灌注(IR)模型,研究RPM对大鼠缺血冉灌注肾Fas、bcl-2蛋白表达的影响及对再灌注24 h的肾组织超微结构的影响,探讨RPM对肾缺血再灌注的保护作用及其机制.     

大鼠实验性肾缺血/再灌注引起肾小管上皮细胞凋亡及其与Bcl-2,Fas/FasL表达变化的关系

目的：探讨大鼠实验性肾缺血再灌注引起肾脏损伤、肾小管上皮细胞凋亡情况及其与Bcl—2，Fas／FasL表达变化的关系．方法：建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型，在不同时间点处死动物取肾组织石蜡包埋切片，HE染色分析肾组织病理损伤程度，用TUNEL法标记检测肾小管上皮细胞凋亡的变化，SABC免疫组化方法检测Bcl—2，Fas与FasL蛋白表达的变化．结果：缺血再灌注后肾组织的病理损伤主要发生在肾小管，肾小管上皮细胞凋亡指数增加，且随缺血再灌注时间延长而进一步上升，48h达高峰(P＜0．05).Bcl—2蛋白在对照组呈弱阳性表达，缺血30min，60min后再灌注0h有少量表达，再灌注24，48及72h呈阳性表达，48h达高峰(P＜0.05)，并以远曲小管为主．Fas，FasL蛋白在对照组呈阴性表达，缺血30，60min后再灌注0h有少量表达，再灌注24，48及72h呈阳性表达，以72h时达高峰(P＜0.05)，多表达在远曲小管．HE染色可见肾缺血再灌注后各组均有不同程度的肾小管上皮组织片状坏死灶，以近曲小管为主，坏死灶周围有炎性细胞浸润．结论：肾缺血再灌注可诱导肾小管上皮细胞凋亡，Bcl—2，Fas／FasL系统可能在肾小管上皮细胞凋亡过程中发生着重要的调控作用．     

通络清脑注射粉针对脑缺血-再灌注损伤大鼠的脑保护作用及神经元自噬相关蛋白表达的影响研究

背景　细胞自噬所致神经元凋亡是脑缺血后神经损伤的重要环节,而以通络清脑注射粉针为代表的清热解毒通络疗法在只辨病、不辨证的情况下治疗大鼠脑缺血亦能取得良好疗效,因此推测通络清脑注射粉针发挥脑保护作用的机制很可能与抑制细胞自噬有关。目的　探讨通络清脑注射粉针对脑缺血-再灌注损伤大鼠的脑保护作用及神经元自噬相关蛋白表达的影响。方法　本实验于2019年1月-2020年3月实施,共选取SPF级成年雄性SD大鼠36只,编号后采用随机数字表法分为假手术组、模型组、通络清脑组,每组12只。采用线栓法制备大鼠脑缺血-再灌注损伤模型（假手术组大鼠只进行血管分离、不进行其他操作）,通络清脑组大鼠经尾静脉缓慢推注浓度为18.75 mg/ml的通络清脑溶液3.2 ml/kg,假手术组、模型组大鼠经尾静脉注射等体积0.9%氯化钠溶液。比较三组大鼠建模24 h后神经功能学评分、脑梗死体积占比及再灌注24 h后海马区神经元损伤情况、海马区和皮质区自噬体形成情况、海马区神经元自噬相关蛋白〔包括磷酸化核因子-κB（p-NF-κB）、Beclin1、自噬微管相关蛋白1轻链3（LC3）〕表达情况。结果　模型组、通络清脑组大鼠建模24 h后神经功能学评分、脑梗死体积占比高于假手术组,而通络清脑组大鼠建模24 h后神经功能学评分、脑梗死体积占比低于模型组（P<0.05）。再灌注24 h后假手术组大鼠海马区神经元未见明显坏死、海马区和皮质区均偶见自噬体,模型组大鼠海马区缺血区神经元结构破坏严重、大量神经元丢失且海马区和皮质区均可见双层膜结构自噬体,通络清脑组大鼠海马区缺血区神经元坏死范围较模型组缩小、神经元损伤明显缓解且海马区和皮质区自噬体数量均减少。再灌注24 h后模型组、通络清脑组大鼠海马区p-NF-κB、LC3相对表达量及模型组Beclin1相对表达量高于假手术组,而通络清脑组大鼠海马区p-NF-κB、Beclin1、LC3相对表达量低于模型组（P<0.01）。结论　通络清脑注射粉针可有效改善脑缺血-再灌注损伤大鼠神经功能,减轻脑梗死程度、神经元损伤,减少自噬体形成及神经元凋亡,抑制神经元自噬相关蛋白p-NF-κB、Beclin1、LC3的表达,其发挥脑保护作用的机制可能与抑制神经元过度自噬有关。     

大鼠神经元体外类缺血再灌注模型的建立及神经元损伤的动态监测

目的:建立类神经元缺血再灌注模型,观察单个神经元缺氧/复氧后不同时间细胞结构变化。方法:对大鼠海马神经元进行原代培养,采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色鉴定,通过缺氧/复氧建立体外神经元类缺血再灌注模型,透射电子显微镜观察类缺血再灌注后不同时间点神经元结构的变化。结果:海马神经元缺氧/复氧后受到了损伤,结构发生了变化,并且随着缺氧/复氧时间的延长,神经元损伤程度增加。结论:体外神经元类缺血模型的建立可以很好观察神经元缺血再灌注后的结构变化,为研究缺血性脑血管病提供很好的研究和途径。     

缺血再灌注大鼠海马神经元超微结构的变化

目的:观察缺血再灌注大鼠海马神经元超微结构的改变.方法:雄性SD大鼠32只,随机分为缺血再灌注组和假手术组.缺血再灌注组制备缺血再灌注模型,电镜下观察两组大鼠海马神经元超微结构的变化.结果:缺血再灌注可使海马神经元超微结构尤其是线粒体出现明显损伤;缺血再灌注2h出现的神经元水肿、线粒体肿胀等损伤是可逆的;再灌注6h受损神经元增多,细胞器减少,线粒体外膜、线粒体嵴断裂;再灌注12h神经元损伤更为严重,残存的线粒体崩解呈空泡状.结论:缺血再灌注可损伤大鼠海马神经元超微结构,其作用机制可能与线粒体内Ca2 超载、NOS增加等因素有关.     

c-fos在急性肾缺血再灌注后大鼠脑组织中的表达

目的研究c-fos在急性肾缺血再灌注后大鼠脑组织中不同时间段的表达及调控作用。方法取SD大鼠90只,建立肾缺血再灌注大鼠模型,采用免疫组化染色,光镜下观察肾及蓝斑、杏仁核、海马的病理改变,用c-fos免疫组化染色,观察c-fos于不同时间段在蓝斑、杏仁核、海马的阳性细胞数。结果 I、I/R 0～8 h组间比较c-fos表达差异均有统计学意义(P<0.05)。肾缺血再灌注损伤诱导c-fos表达,在杏仁核、蓝斑于8 h时达高峰,c-fos表达在海马于4 h时达高峰。结论肾缺血再灌注可引起脑组织损伤。c-fos在肾缺血再灌注引起脑组织损伤中发挥调控作用,其中杏仁核、蓝斑、海马参与调控。     

bFGF对局部性脑缺血再灌注大鼠海马及皮质神经元CREB表达的影响

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后cAMP反应元件结合蛋白（CREB）表达的变化,探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对脑组织缺血再灌注神经元CREB的调节作用及机制．方法：应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2h再灌注损伤24h,采用TUNEL法、免疫组化检测海马及皮质内神经元凋亡和CREB的表达．结果：大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数增加而CREB表达较假手术组减少,注射bFGF后神经元凋亡数减少,CREB表达明显高于缺血再灌注组．结论：bFGF抑制缺血神经元凋亡,参与CREB的调节,对缺血神经元有保护作用．     

雷帕霉素对缺血再灌注大鼠肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨雷帕霉素(RPM)对肾缺血再灌注不同时间Fas、Bcl-2蛋白表达的影响.方法 将54只Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、手术组和药物组.采用HE染色分析肾组织病理损伤程度,电镜观察再灌注24 h的肾组织超微结构,免疫组化SABC法检测Bcl-2、Fas蛋白表达的变化.结果 Fas蛋白在假手术组呈阴性表...     

腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经细胞的保护作用

目的 探讨脑缺血再灌注后腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对大鼠海马CAl区神经元的保护作用及其分子机制.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注对照组、表达病毒处理组、非表达病毒处理组及溶剂组.采用焦油紫染色、免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织Akt的磷酸化情况.结果 表达病毒处理组与缺血再灌注对照组、非表达病毒处理组及溶剂组相比海马CA1区神经元损伤明显减轻,脑组织Akt磷酸化升高(P<0.05).结论 腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段可能通过升高脑组织中Akt的磷酸化程度对海马CA1区神经元起保护作用.     

参麦注射液对大鼠肢体缺血-再灌注损伤后骨骼肌细胞凋亡的影响

目的:探讨参麦注射液对大鼠肢体缺血再灌注损伤的保护机制。方法:30只SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和参麦组,每组10只。模型组与参麦组采用扎闭股动、静脉缺血4h,开放再灌注1h制造缺血再灌注模型,并分别于再灌注即刻给予生理盐水或参麦注射液4mL/kg腹腔注射;假手术组不结扎股动静脉,4h后给予生理盐水4mL/kg腹腔注射。采用免疫组织化学方法检测腓肠肌组织Bcl-2及Fas蛋白表达情况。结果:与模型组比较,参麦组腓肠肌组织Fas蛋白表达明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05)。结论:参麦注射液可减轻大鼠缺血再灌注后骨骼肌细胞凋亡,对缺血再灌注损伤有一定的防治作用。     

中药益智胶囊对大鼠全脑缺血后海马CA1区神经元迟发性死亡的影响

目的 观察中药益智胶囊对大鼠全脑缺血后海马CA1区神经元迟发性死亡及学习功能的影响。方法 以四血管闭塞(4-VO)法制成大鼠急性全脑缺血再灌注模型。采用免疫组织化学方法计数脑缺血再灌注脑损伤后1、2、4、8及40d后,大鼠海马CA1区正常神经元数目;用Morris水迷宫实验观察脑缺血再灌注脑损伤后40d时各组大鼠的学习记忆功能。结果 从缺血再灌注后第2天起,益智胶囊(100mg/kg·b.w.)组大鼠海马CA1区正常神经元数量显著高多于缺血对照组大鼠(P<0.01)。全脑缺血再灌注脑损伤后40d时,益智胶囊(100mg/kg·b.w.)组大鼠记忆功能明显好于缺血对照组大鼠(P<0.01)。结论 益智胶囊对全脑缺血后大鼠海马CA1区神经元具有保护作用,并可改善大鼠的记忆功能障碍。     

PNU-282987对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡和学习记忆能力的影响

研究PNU-282987对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用和可能机制。建立体内大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)损伤模型,SD大鼠44只随机分为4组:假手术组、模型对照组、PNU-282987低剂量(1.2 mg/kg)和PNU-282987高剂量(2.4 mg/kg)治疗组。Y-型电迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,并检测大鼠脑梗死面积、脑含水量和神经功能评分,苏木精-伊红(H&E)染色观察脑组织病理学改变,TUNEL法检测神经元凋亡情况。结果显示,治疗组较模型对照组学习记忆能力明显改善,且治疗组可显著降低缺血再灌注后大鼠脑梗死面积、脑含水量和神经行为学评分,同时发现PNU-282987高剂量(2.4 mg/kg)能够改善缺血脑组织病理学损伤,抑制神经元凋亡。本研究提示PNU-282987可提高脑缺血再灌注损伤后大鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制神经元凋亡有关。     

针刺对脑缺血大鼠神经元凋亡的影响

目的观察针刺对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马神经元内细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（CDK4）和神经元凋亡的影响。方法大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,再灌后针刺大鼠,应用免疫组化、免疫印迹法和流式细胞计数法分别检测CDK4和细胞凋亡。结果缺血组再灌注48h后海马CDK4表达升高,凋亡细胞增多,针刺组CDK4表达和凋亡细胞明显减少（P〈0．01）。结论针刺对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与调控细胞周期因子从而抑制凋亡有关。