持续性植物状态患者脑脊液中氨基酸类神经递质的检测

目的 应用高效液相色谱分析法检测持续性植物状态(PVS)患者脑脊液中氨基酸类神经递质,观察其与临床表现的相关性。方法 分别采集46例PVS患者与20例对照病人的脑脊液,检测谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸的含量。结果 4种氨基酸在25min内得以较好分离。PVS组4种递质水平均高于对照组,且递质水平与PVS评分呈负相关,其中甘氨酸及丙氨酸与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PVS患者脑脊液中氨基酸类递质与临床表现有一定的相关性。     

新型荧光试剂柱前衍生高效液相色谱定量分析小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质

目的 采用新合成的荧光试剂柱前衍生氨基酸类神经递质,建立其测定方法,并测定小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质的含量。方法 以1,3,5,7-四甲基-8-苯基-（4′-O-（N-琥珀酰亚胺乙酸酯））-二氟化硼-二吡咯甲烷（TMPAB-OSu）作为柱前荧光衍生试剂,在pH 8.8的硼酸-硼砂缓冲溶液中,30℃衍生反应5 min后获得稳定的荧光衍生产物,在反相色谱柱上,采用梯度洗脱进行5种氨基酸类神经递质标准品衍生物的分离检测,荧光激发波长为497 nm,检测波长为509 nm。结果 5种氨基酸类神经递质的线性范围为0.01~1.2 μmol/L,线性回归系数均大于0.998 1,检出限为1 nmol/L（S/N=3∶1）。小鼠脑脊液中天门冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸和丙氨酸的含量分别为0.06、0.20、0.26、0.03和0.07 μmol/L,标准加入回收率为96%~104%,RSD为0.7%~2.9%。结论 该方法的灵敏度高、重现性好,为小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质的分析检测提供了一种新方法。     

致痫大鼠脑脊液中氨基酸类神经递质含量的变化

目的：探讨氨基酸类神经递质含量变化与癫痫发作的关系。方法：用马桑内酯致痫大鼠。经大鼠第四脑室抽取脑脊液，用HPLC荧光法测定氨基酸类神经递质（谷氨酸、门冬氨酸、甘氨酸和γ－氨基丁酸）的含量。结果：致痫组脑脊液中谷氨酸含量较对照组有显著差异（P＜0．05）。结论：谷氨酸是一种主要的兴奋性神经递质，是诱发癫痫发作的重要因素之一。     

颅脑手术创伤对脑脊液兴奋性氨基酸和甘氨酸代谢的影响

目的　观察颅脑手术创伤对脑脊液兴奋性氨基酸 (EAA )和甘氨酸 (Gly)代谢的影响 ,为手术麻醉过程中如何减少 EAA和 Gly提供理论依据。　方法　于腰椎 3～ 4间隙行蛛网膜下腔穿刺置硬膜外导管长度约 3cm ,分别于麻醉 (BA)、手术结束缝皮时 (PA )采集脑脊液标本 2 m L。采用高效液相色谱仪柱前衍生色谱法 (HPL C)测定颅脑手术前后、脑实质和非脑实质手术、不同手术时程 3种条件下脑脊液中 EAA(谷氨酸 (Glu)、天冬氨酸 (Asp)和甘氨酸 (Gly)水平变化。　结果　 EAA在颅脑手术后明显升高 (P<0 .0 5 ) ;对脑组织有直接侵袭损伤类手术于术后 EAA (Glu、Asp)和甘氨酸 (Gly)显著升高 ,且手术时程长者 (>2 h)脑脊液 EAA和 Gly升高幅度更大。　结论　脑脊液 EAA和 Gly水平显著增高的主要原因是直接侵袭脑组织的脑内手术 ,且升高幅度与手术时程长短有关 ,非脑实质手术组的改变不明显     

低浓度DMSO 对SH-SY5Y 细胞存活率和氨基酸代谢的影响

目的：研究二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）对SH-SY5Y细胞存活率和氨基酸代谢的影响。方法：将细胞分为正常组和DMSO组。0.0125%浓度的DMSO作用SH-SY5Y细胞不同时间（24,48 h）后,利用MTT法测定细胞存活率;高效液相色谱法测定细胞中氨基酸的含量。 结果：与正常组相比,在0.0125% DMSO作用下,细胞活力和形态无显著差异,但细胞内氨基酸含量变化有显著差异（P<0.05）。其中作用24 h,细胞中有7种氨基酸：谷氨酸（glutamic acid,Glu）、谷氨酰胺（glutamine,Gln）、甘氨酸（glycine,Gly）、脯氨酸（proline,Pro）、苯丙氨酸（phenylalanine,Phe）、异亮氨酸（isoleucine,Ile）、亮氨酸（leucine,Leu）含量有显著变化（P<0.05）;作用48 h,细胞中有12种氨基酸：谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丝氨酸（serine,Ser）、组氨酸（histidine,His）、赖氨酸（lysine,Lys）、丙氨酸（alanine,Ala）、色氨酸（tryptophan,Trp）含量有显著变化（P<0.01）。 结论：细胞活力无显著差异时,细胞氨基酸代谢已有明显变化,氨基酸代谢异常可能为细胞损伤早期的一种特征。     

首诊尿毒症患者用串联质谱法分析血氨基酸和酰基肉碱

［摘要］目的　用串联质谱分析方法检测首次诊断尿毒症未行替代治疗患者的血氨基酸和酰基肉碱值，为临床诊疗提供依据．方法　选取30例首次诊断尿毒症患者为研究对象，即尿毒症组（研究组），健康体检者15例为对照组．利用串联质谱技术分析2组血中11种氨基酸及2种酰基肉碱数值，并分析统计数据．结果　研究组与对照组血丙氨酸（Ala）及酪氨酸（Tyr）在2组间的差异有统计学意义（P＜0.05），其中研究组显著低于正常组．血瓜氨酸（Cit）、甘氨酸（Gly）、脯氨酸（Pro）在2组间的差异有统计学意义（P＜0.05），其中研究组显著高于正常对照组．2组间有统计学差异的氨基酸以非必需氨基酸为主．血游离肉碱和总肉碱在2组间的差异有统计学意义（P＜0.05），2个指标在尿毒症患者组均显著高于正常对照组．结论　对于首次诊断尿毒症未行替代治疗患者，其血部分氨基酸代谢紊乱，并且以非必需氨基酸为主．其肉碱水平均高于正常高线，其分析结果可以为临床营养治疗提供依据．     

外源性NGF对家兔急性全脑缺血再灌注期间兴奋性氨基酸释放的影响

目的：观察外源性神经生长因子（NGF）对家兔急性全脑缺血再灌注期间兴奋性氨基酸释放及家兔生存情况的影响,以探讨NGF对脑神经细胞的保护机制。方法：用反相高效液相色谱（HPLC）荧光检测方法,测量急性全脑缺血再灌注损伤模型动物脑脊液中的氨基酸,特别是兴奋性氨基酸含量。并观察实验动物生存情况。结果：脑缺血再灌注期间,脑脊液中兴奋性氨基酸（EAA）明显增加（P＜0．01）;而外源性NGF可使上述指标明显下降,与对照组有明显差异（P＜0．05和P＜0．01）,结论：外源性NGF可能过血脑屏障,抑制脑内EAA过度释放,改善缺血再灌注对脑的损害,保护脑细胞,提高动物生存率,在临床脑复苏中有一定应用前景和实用价值。     

尿毒症患者血浆游离氨基酸谱

本文报告76例尿毒症患者血浆游离氨基酸谱。结果表明:未透析组的必需氨基酸/非必需氨基酸、酪氨酸/苯丙氨酸、缬氨酸/甘氨酸、丝氨酸/甘氨酸的比值均明显低于正常对照组;腹膜或血液透析组经透析后,虽然部分氨基酸有所纠正,但有部分必需氨基酸较透析前有所下降,上述四项指标仍明显低于正常对照组。透析治疗后,氨基酸谱可能仍为异常。因此,必须保证蛋白质摄入的量和质或氨基酸的补充。讨论了尿毒症患者血浆游离氨基酸谱改变的机理及其测定的临床意义。     

REM睡眠剥夺后大鼠脑组织氨基酸类神经递质含量的变化

目的:观察睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)对大鼠脑组织γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(GLU)含量的影响。方法:用小平台水环境法(flower pot technique)对大鼠进行连续96h快速动眼相(rapid eye movement,REM)睡眠剥夺,以正常饲养组及大平台组为对照,高效液相色谱法测定睡眠剥夺后大鼠额叶皮质、脑干、下丘脑等脑区GABA、GLU含量的变化。结果:睡眠剥夺后大鼠各脑区脑组织GABA含量。GABA/GLU值均较对照组明显增高(P<0.01),而GLU含量在脑干、下丘脑两脑区亦较对照组明显增高(P<0.05)。结论:睡眠剥夺导致大鼠脑组织氨基酸类神经递质含量及比例的改变,是睡眠剥夺过程的神经生物学机制之一。     

改良强制性运动调节脑缺血再灌注模型大鼠运动皮层内神经递质水平的研究

  目的  研究改良强制性运动对脑缺血再灌注模型大鼠运动功能恢复的作用及其机制。  方法  将大鼠随机分为对照组和改良强制性运动疗法（mCIMT）组,每组12只。采用Longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。mCIMT组在造模后7 d开始连续训练14 d,使用有弹性的的绷带将健肢绑于前胸,并在强制性转轮设备中进行患肢活动的训练,对照组大鼠不进行mCIMT训练,仅笼内自由活动。在造模后20 d内记录大鼠体质量,通过错步实验评定大鼠的行为学变化。在造模后18 d时处死部分大鼠,使用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）检测脑运动皮层和纹状体内单胺类神经递质〔5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5-HIVV）和高香草酸（HVA）〕和氨基酸类神经递质〔天门冬氨酸（ASP）、谷氨酰胺（Gln）、甘氨酸（Gly）、牛磺酸（Tau）、γ 氨基丁酸（GABA）〕含量,酶联免疫吸附（ELISA）法检测脑运动皮层和纹状体组织总p70核糖体蛋白S6激酶（p70s6k）蛋白和磷酸化蛋白（p-p70s6k）的表达水平。  结果  造模后21 d内,与对照组比较,mCIMT组大鼠体质量无明显变化（P>0.05）,mCIMT组大鼠在造模后17 d时错步率下降（P<0.05）;造模 后18 d时,与对照组比较,mCIMT组大鼠运动皮层中单胺类神经递质5-HIVV水平增加（P<0.05）,运动皮层中氨基酸类神经递质的相对含量（与Glu之比）除ASP/Glu降低（P<0.05）外,其余氨基酸类神经递质包括Gln、Gly、Tau、GABA与Glu之比均增加（P<0.05或 P<0.01）。与对照组比较,mCIMT组大鼠运动皮层中p-p70s6k表达减少（P<0.05）。而对照组与mCIMT组大鼠纹状体中的单胺类神经递质和氨基酸神经递质差异均无统计学意义（P>0.05）。  结论  mCIMT具有一定的改善脑缺血再灌注模型大鼠运动功能的效果,其机制可能与提高大鼠脑运动皮层内氨基酸类神经递质和5-HIVV水平、减少p-p70s6k表达有关。