肿瘤坏死因子α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的实验研究

采用脂质体转染技术将能表达肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒质粒ｐＬ（ＴＮＦ－α）ＳＮ导入病毒包装细胞ＰＡ３１７，在细胞培养上清液中得到重组病毒，滴度为１．４×１０９ＣＦＵ／Ｌ。将此病毒上清液感染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），用Ｇ４１８筛选出能表达标记基因ＮｅｏＲ的阳性克隆，ＥＬＩＳＡ法测得ＮｅｏＲ阳性ＴＩＬ培养上清液中存在ＴＮＦ－α，可达５３０ｎｇ／Ｌ，Ｌ９２９依赖细胞法并测出上清液中有ＴＮＦ－α生物学活性。结果表明，我们构建的重组逆转录病毒可介导ＴＮＦ－α基因在人脑胶质瘤ＴＩＬ中的表达     

人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的分离培养与活性测定

目的 分离、培养人脑胶质瘤肿瘤浸润淋巴细胞并对其进行活性测定，探讨临床应用肿瘤浸润淋巴细胞的理论根据。方法 采用机械分离、酶解聚和不连续密度梯度离心方法从１０例脑胶质瘤制备肿瘤浸润淋巴细胞单细胞悬液，体外培养扩增；采用ＮＡＧ酶荧光比色法测定肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性。结果 肿瘤浸润淋巴细胞得率达到７２．５±３．２１；在ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中生长旺盛，第３、４周能够达到１０＾９数量级，此时杀伤活     

脑胶质瘤浸润淋巴细胞的分离、培养与表型及体外抗肿瘤活性测定

经重组白细胞介素2(rIL-2)和胸腺因子D(TFD)培养前后的人脑胶质瘤侵润琳巴细胞(GIL)的表型及抗自体瘤细胞活性变化。(1)GIL可被分离，培养后可增值；(2)新鲜GIL主要为T淋巴细胞，其中CD8^ 细胞多于CD4^ 细胞，随培养时间延长呈相反变化；(3)新鲜GIL活性很弱，培养后很强；(4)TFD可能具有增强rIL-2的激活作用。提示G1L可望作为理想的效应细胞用于脑腔质瘤的治疗。     

人脑胶质瘤肿瘤浸润淋巴细胞的分离培养与活性测定

目的分离、培养人脑胶质瘤肿瘤浸润淋巴细胞并对其进行活性测定，探讨临床应用肿瘤浸润淋巴细胞的理论根据。方法采用机械分离、酶解聚和不连续密度梯度离心方法从１０例脑胶质瘤制备肿瘤浸润淋巴细胞单细胞悬液，体外培养扩增；采用ＮＡＧ酶荧光比色法测定肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性。结果肿瘤浸润淋巴细胞得率达到７２５±３２１；在ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中生长旺盛，第３、４周能够达到１０９数量级，此时杀伤活性亦达到高峰。结论肿瘤浸润淋巴细胞适当条件体外培养扩增，在数量和杀伤活性等方面能够满足临床要求，培养第３、４周是肿瘤浸润淋巴细胞应用的时机。     

肿瘤坏死因子α基因转导人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的抗肿瘤活性研究

应用脂质体转染技术构建能表达肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒。采用鱼精蛋白促进法,将重组病毒介导ＴＮＦ－α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＧＩＬ）。在体外,转染后的ＧＩＬ（ＴＮＦ－α／ＧＩＬ）的抗肿瘤活性比ＧＩＬ＋ＩＬ－２强２～５倍。在荷瘤裸鼠体内,ＴＮＦ－α／ＧＩＬ能显著抑制肿瘤生长。因此,ＴＮＦ－α基因转染的人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＮＦ－α／ＧＩＬ）是脑胶质瘤免疫基因治疗的一种有效的效应细胞     

应用肿瘤浸润淋巴细胞和IL—2治疗人脑胶质瘤15例报告

应用过继性免疫疗法治疗人类晚期恶性肿瘤的研究，现已取得了长足的进展。从应用淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）进行过继性免疫治疗，到目前已发展至应用自身肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）进行肿瘤的过继性免疫治疗。我们在人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的分离、制备及体内...     

人脑胶质瘤与人脑转移瘤中NF—κBP65的表达及意义

OBJECTIVE: To study the immunohistochemical changes of nuclear factor-kappaBP65 (NF-kappaBp65) in human brain glioma (HBG) and human brain metastatic carcinoma (HBMC) and the role of NF-kappaBP65 in the biological behavior of the tumors. METHODS: The protein expression of NF-kappaBP65 were examined with SABC immunohistochemical technique in 18 HBG, 12 HBMC and 6 normal brain tissue samples, and the correlation between the expression and the biological behavior of the tumors was analyzed. RESULTS: Normal brain tissues had only trace expression of NF-kappaBP65, whereas all tumor tissues examined expressed NF-kappaBP65. The level of NF-kappaBP65 in high-grade HBG, HBMC and recurrent HBG tissues was considerably higher than that in low-grade HBG tissues (PLT;0.01). CONCLUSION: NF-kappaBP65 expression is associated with the malignant progression, invasion and angiogenesis of HBG and HBMC, and it may play a crucial role in the recurrence of HBG.     

人脑胶质瘤与人脑转移瘤中NF-κBP65的表达及意义

目的 研究人脑胶质瘤(HBG)与人脑转移瘤(HBMC)中核转录因子κBP65(NF-κBP65)的表达及其在肿瘤生物学行为中的作用。方法 应用SABC方法进行免疫组织化学染色,观察6例正常人脑组织、18例HBG组织与12例HBMC组织中NF-κBP65的表达及与肿瘤生物学行为之间的关系。结果 正常脑细胞中NF-κBP65仅微量表达,在HBG细胞与HBMC细胞中呈不同程度的表达;在高级别HBG、HBMC和复发型HBG中,表达水平较低级别HBG细胞的高(P<0.01)。结论 NF-κBP65表达的增强与HBG和HBMC恶性程度的增高、肿瘤浸润关系密切,并在HBG的复发中起重要作用。     

高效分离培养肿瘤浸润淋巴细胞方法的建立

提高肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的增殖能力和杀伤活性，是其临床应用前需解决的关键问题。为此，作者对ＴＩＬ的分离和培养条件进行了探讨，建立了以机械分散法，０．０５％胶原酶和０．００３％ＤＮＡ酶室温消化６小时加冷消化１８小时的酶消化法和７５％与１００％Ｆｉｃｏｌｌ非连续密度梯度离心法相结合的分离纯化ＴＩＬ方法。分离出的ＴＩＬ在体外条件培养基中多数能扩增到１０＾９以上的应用标准，ＮＫ、ＬＡＫ活性分别可达５     

人脑胶质瘤与人脑转移瘤中NF-кBP65的表达及意义

目的研究人脑胶质瘤(HBG)与人脑转移瘤(HBMC)中核转录因子кBP65(NF-кBP65)的表达及其在肿瘤生物学行为中的作用.方法应用SABC方法进行免疫组织化学染色,观察6例正常人脑组织、18例HBG组织与12例HBMC组织中NF-кBP65的表达及与肿瘤生物学行为之间的关系.结果正常脑细胞中NF-кBP65仅微量表达,在HBG细胞与HBMC细胞中呈不同程度的表达;在高级别HBG、HBMC和复发型HBG中,表达水平较低级别HBG细胞的高(P＜0.01).结论NF-кBP65表达的增强与HBG和hHBMC恶性程度的增高、肿瘤浸润关系密切,并在HBG的复发中起重要作用.     

胸腺因子D/重组白细胞介素2高效诱导人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的增殖及杀伤活性

探讨建立胸腺因子Ｄ（ＴＦＤ）／重组白细胞介素２高效诱导人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的可行性 。方法按ＴＦＤ与ｒＩＬ－２的不同组合,分组在体外对ＧＩＬ进行培养,分别用ＭＴＴ法,４ｈ＾５１Ｃｒ释放法和间接免疫荧光法检测其增殖,杀伤活性及ｒＩＬ－２受体的表达情况。结果ＴＦＤ与ｒＩＬ－２共同诱导ＧＩＬ,与对照组相比,其增殖活性及对自体瘤细胞的杀伤活性显著增强且持续时间更长。结论应用ＨＦＤ／ｒＩＬ－２体外诱导方法     

脑胶质瘤局部浸润淋巴细胞CD4^＋／CD8^＋倒置成因研究

目的 揭示肿瘤内环境对局部浸润细胞比例改变的可能作用。方法 采用体外细胞培养及单克隆抗体标记的方法研究胶质瘤提取物对正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的影响。结果 肿瘤提取物可明显抑制植物血凝素（ＰＨＡ）促ＰＢＭＣ增殖和白细胞介素－２（ＩＬ－２）的诱生,且不被外源性ＩＬ－２逆转。结论 胶质瘤可破坏血脑屏障,外周血Ｔ淋巴细胞随机渗入,肿瘤细胞可释放某种物质抑制ＴＨ细胞产生ＩＬ－２,进而抑制ＴＨ细胞的     

香菇多糖对肿瘤浸润淋巴细胞体外扩增及抗瘤活性的影响

香菇多糖 (Ｌｅｎｔｉｎａｎ)是从香菇子实体中提取的抗肿瘤性多糖体。实验证明香菇多糖对人淋巴细胞ＩＬ -2分泌及ＩＬ -2Ｒ表达具有一定的调节作用 ;可促进Ｔ细胞、ＮＫ细胞及ＬＡＫ细胞的产生[1,2 ] 。本实验观察了香菇多糖对肺癌肿瘤浸润淋巴细胞 (ＴＩＬ)体外扩增及抗瘤活性的影响。1　材料和方法1 1　材料 　 2 2例肺癌患者 ,男 1 5例 ,女 7例 ,年龄为 4 0～ 63岁 ,平均年龄 52 5岁 ,其中鳞癌 1 2例 ,腺癌1 2例 ,所有病例均经手术病理确诊。手术切除的肿瘤组织以无菌操作收集于含抗生素的培养液中 ,待分离ＴＩＬ和肿瘤细胞。1 2　…     

人脑胶质瘤综合治疗的临床研究

观察33例脑胶质瘤(A组)手术标本中抽取胶质瘤浸润淋巴细胞(GIL),在体外经IL-2激活、培养、扩增3～4周后,经Ommava管回输入肿瘤术后残腔,并配合以放疗、化疗。与同期仅以手术及放、化疗的胶质瘤33例(B组)对照,结果显示:A组1、2、3年生存率分别为95.45％、91.67％和84％,死亡病例平均生存期为27.5个月,显著高于B组(89.47％、81.87％和58.33％,17.44个月)。说明从胶质瘤手术标本中提取GIL,在体外经IL-2激活、培养、扩增后再回输入肿瘤手术残腔,配合放化疗,是一种较为理想的脑胶质瘤综合疗法。     

脑胶质瘤浸润淋巴细胞抗原受体基因限制性取用

目的 检测人脑胶质瘤中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)是否存在抗原受体基因的限制性取用及其类型．探讨其免疫学和临床意义。方法 术中取人脑胶质瘤组织．分离TIL，用RT-PCR方法检测其TCR VαT和TCR Vβ各基因片断的表达。结果 13例TIL中，TCR Vα和TCR Vβ各基因片断的表达率以Vα7(6／10)、Vα12(4／10)、Vα13(3／10)高于其他亚型．Vβ14(6／10)、Vβ13．1(3／10)、Vβ8(3／10)高于其他Vβ亚型．其中以Vα7、Vβ14的表达最高．且二者量同步表达。结论 人脑胶质瘤TIL存在着抗原受体基因Vα7、Vβ14的优势取用．表达这一TCR亚型的TIL可能是局部抗肿瘤反应的主要效应细胞。     

肿瘤浸润淋巴细胞培养中掺杂肿瘤细胞的清除

根据肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）培养过程中掺杂肿瘤细胞具有粘附、贴壁的特性，将掺杂的肿瘤细胞通过移孔法清除，使ＴＩＬ对数生长期至少可提前４ｄ。由于大量掺杂肿瘤细胞在移孔中被清除，解除了肿瘤细胞对ＴＩＬ的抑制，使增殖倍数有所增加，最高可以达到１０倍。比项研究为临床肿瘤病人用ＴＩＬ治疗打下良好基础，为ＴＩＬ在手术后及早应用及其安全性提供了实验依据。     

食管癌肿瘤浸润淋巴细胞体外增殖和表型变化的研究

目的;寻找新的ＴＩＬ刺激物,摸索解除ＴＩＬ抑制状态和提高扩增效率的最佳条件。方法：通过黄芪、干地黄水提物联合细胞因子,采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法及流式细胞仪对９例食管癌ＴＩＬ的增殖及表型进行了分析。结果：在促增殖作用方面,黄芪联合ＩＬ－２、ＩＬ－２＋ＩＬ－４、ＩＬ－２＋ＴＮＴ－α均较单用其细胞因子有明显增强作用。而干地黄对ＴＩＬ增殖无明显协同作用。食管癌ＴＩＬ表型分析发现ＣＤ４＾＋Ｔ细胞为主,诱导后ＣＤ４＾＋Ｔ细胞明显增多。ＣＤ４／ＣＤ８比值由２．８：１上升至９．９：１。结论：黄芪有明显协同细胞因子促进食管癌ＴＩＬ增殖的作用,激活的食管癌ＴＩＬＣＤ４＾＋Ｔ细胞占绝对优势。     

肿瘤坏死因子α基因转导人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的抗肿瘤活 …

应用脂质体转染技术构建能表达肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒。采用鱼精蛋白促进法,将重组病毒介导ＴＮＦ－α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＧＩＬ）,在体外,转染后的ＧＩＬ（ＴＮＦ－α／ＧＩＬ）的抗肿瘤活性比ＧＩＬ＋ＩＬ－２强２￣５倍,在荷瘤裸鼠体内,ＴＮＦ－α／ＧＩＬ能显著抑制肿瘤生长,因此,ＴＮＦ－α基因转染的人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＮＦ－α／ＧＩＬ）是脑胶质瘤免疫基因治疗的     

人脑胶质瘤干细胞的分离和脑瘤浸润动物模型的建立

目的探讨利用脑胶质瘤分离培养胶质瘤干细胞的方法,并建立脑胶质瘤浸润动物模型。方法采用神经干细胞培养方法对12例手术切除的脑胶质瘤新鲜肿瘤组织进行培养,对形成细胞球的干细胞进行增殖、自我更新及分化试验,用免疫细胞化学法检测干细胞标志物,并用转染增强型绿色荧光蛋白的干细胞进行体内成瘤试验。结果 12例胶质瘤标本中共有9例成功培养出肿瘤神经细胞球,这些神经细胞球具有增殖、自我更新及分化能力,能表达特异性的分子标记物,并且可在免疫缺陷小鼠脑内形成与人类胶质瘤相似的、具有浸润性特征的肿瘤。结论采用神经干细胞无血清培养方法可以成功培养出胶质瘤干细胞,并且在体内建立了一种新的胶质瘤浸润模型。     

Lewis肺癌浸润淋巴细胞的进一步纯化及体外抗癌特点的研究

为探索进一步纯化肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的方法及其体外抗瘤作用特点,为临床应用ＴＩＬ治疗肺癌提供依据,用不连续密度梯度离心法从接种于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内的Ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）瘤体中分离提取ＴＩＬ,过夜贴壁,剔除贴壁细胞后,可明显提高ＴＩＬ的纯度。纯化的ＴＩＬ在含１０００Ｕ／ｍｌＩＬ ２的完全培养基中继续培养。免疫荧光表型分析发现,ＴＩＬ中ＣＤ＋４、ＣＤ＋８初为０９１±０１２,培养后为０８３±００７,体外ＴＩＬ对ＮＫ敏感的Ｌ９２９细胞有一定的杀伤作用,效靶比为２００∶１和１００∶１时的杀伤率高于５０∶１（Ｐ＜００５）,表明ＬＬＣ浸润淋巴细胞体外的杀伤活性具有一定的非特异性。