中华眼镜蛇毒组分对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的诱导作用及对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨中华眼镜蛇毒组分(naja naja actra venom component,NNAVC)对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的诱导作用及对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法采用MTT法检测不同浓度(0.312 5、0.625、1.252、.5、5、10μg/mL)、不同作用时间(244、8、72 h)下NNAVC对MCF-7细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察NNAVC对MCF-7细胞形态学影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Bcl-2及Bax蛋白的表达。结果 MTT结果显示,NNAVC对MCF-7细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈时间及剂量依赖性。倒置显微镜观察NNAVC作用MCF-7细胞后,细胞出现形态不规则、部分细胞变圆甚至脱落、细胞碎片等改变。流式细胞仪检测2.5μg/mL和5μg/mL的NNAVC均明显诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡率分别达到(35.08±4.24)%和(44.41±3.56)%。Western blot法结果显示Bcl-2蛋白表达减少,而Bax蛋白表达增多。结论 NNAVC对MCF-7细胞具有明显的增殖抑制作用,且可以诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与下调Bcl-2和上调Bax蛋白表达有关。     

丹参酮ⅡA联合5-Fu诱导人乳腺癌细胞系MCF-7凋亡的影响

目的 研究丹参酮Ⅱ A 联合5-Fu 诱导人乳腺癌细胞系MCF-7 凋亡的影响.方法 应用MTT 法分析细胞增殖抑制作用,瑞氏- 吉姆萨染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术测定细胞周期和凋亡率,Western blot 法检测Bcl-2、bax 蛋白的表达.结果 丹参酮ⅡA 与5-Fu 均可抑制乳腺癌MCF-7 细胞的增殖及阻滞周期于G0/G1 期,并能诱导MCF-7 的凋亡,而当这两药联合时,以上作用得到明显加强,凋亡率显著升高;两药均可使Bcl-2 表达下调及bax 表达上调,当两药联合时这种作用更明显.结论 丹参酮ⅡA 与5-Fu 联合具有协同抑制乳腺癌MCF-7 细胞增殖及诱导其凋亡的作用.     

黄连素对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究黄连素对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖和凋亡的影响以及机制. 方法 用不同浓度的黄连素 (0、10、20、40) g/ml处理人乳腺癌细胞株MCF-7,细胞培养72 h后,MTT法检测 MCF-7 细胞增殖抑制率;流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡的影响;Western blot法检测JAK2、p-JAK2、p-STAT3、STAT3、 Bax、 Bcl-2、 Cleavage-PARP 和 Cleavage-Caspase3表达. 结果 黄连素呈浓度依赖性地诱导MCF-7细胞的增值抑制和凋亡,上调Bax、Cleavage-PARP和Cleav-age-Caspase3表达,下调 p-JAK2、p-STAT3 和 Bcl-2,对 JAK2和STAT3表达无明显影响. 但高表达p-STAT3的MCF-7细胞可以抑制黄连素的减少增殖和促进凋亡作用. 结论 黄连素诱导MCF-7细胞增殖抑制和凋亡的机制可能是通过调节JAK2/STAT3信号通路.     

依西美坦与低剂量甲氨蝶呤对依西美坦耐药人乳腺癌细胞的协同效应及逆转耐药机制

目的研究依西美坦( EXE )与低剂量甲氨蝶呤( MTX)对依西美坦耐药人乳腺癌 MCF-7细胞( MCF-7/EXE)的增殖抑制作用及意义。方法使用 MTT 法检测EXE与低剂量MTX单药和联合给药对MCF-7/EXE细胞的增殖抑制作用,计算依西美坦与低剂量甲氨蝶呤联合给药时的联合指数(CI),评价两药间的相互作用。流式细胞术检测IC50浓度药物EXE组(120μmol/L)、低剂量MTX组(60 nmol/L)、EXE+MTX组处理后的MCF-7/EXE细胞周期变化。荧光染色观察单药及联合作用对细胞凋亡的影响。Western blot法检测各组细胞 Bcl-2、AKT、P-AKT、COX-2蛋白的表达情况。结果 MTT法表明,与单药作用相比,联合治疗明显降低 MCF-7/EXE细胞的活性( CI<0.9)。此外, EXE和低剂量MTX的联合使用表现对细胞增殖的协同抑制作用,细胞周期显著阻滞于S期,Western blot法显示联合组与对照组或单个药物组相比对P-ATK、Bcl-2、COX-2蛋白的表达有更强的抑制作用。结论 EXE与低剂量MTX联合使用时对MCF-7/EXE细胞产生协同抑制作用,可逆转耐药。     

多柔比星影响他莫昔芬对MCF-7乳腺癌细胞的作用

目的研究多柔比星(ADM)影响他莫昔芬(TAM)对MCF-7乳腺癌细胞的作用及作用机制。方法 MTT检测在ADM作用后, TAM对MCF-7乳腺癌细胞增殖的抑制作用。Western blot检测对照组、ADM组、TAM组以及ADM+TAM组中细胞Her-2、Akt的表达情况。结果 MTT表明, TAM对MCF-7乳腺癌细胞有抑制作用(P<0.05);而MCF-7乳腺癌细胞在ADM作用后, TAM丧失了对细胞的抑制作用(P> 0.05)。Western blot表明,与对照组比较,ADM组、TAM组及ADM+TAM组MCF-7细胞中Her-2和Akt水平的表达均增高(P <0.05)。结论TAM可以抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长,而在ADM作用后,激活信号通路,增加Her-2、Akt的表达,导致TAM的作用下降,说明在ADM作用后,TAM对细胞的抑制作用消失。     

冬虫夏草对乳腺癌细胞凋亡的诱导及相关基因表达的调控

目的:明确中药冬虫夏草(cordyceps sinensis,CS)对人乳腺癌细胞凋亡的影响及凋亡相关基因表达的调控。方法:应用MTT比色法检测CS对乳腺癌细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡;采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的改变。结果:CS对人乳腺癌细胞株MCF-7生长有抑制作用,且呈时间/浓度依赖性;CS使MCF-7细胞发生细胞凋亡,流式细胞仪DNA直方图上出现了凋亡峰,且凋亡率呈浓度依赖性;细胞NDA裂解成180～200bp及其倍数的片段,电泳得到特有的梯形条带;随着药物浓度的增加,Bcl-2表达逐渐减弱,Bax表达逐渐增强。结论:CS可诱导乳腺癌细胞凋亡,为CS的抗肿瘤应用提供了理论依据,CS可能通过调控Bcl-2、Bax基因表达而诱导凋亡。     

姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制作用及机制研究

目的:探讨姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制、诱导凋亡作用及其分子作用机制。方法:MTT法检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术PI单染法检测细胞周期;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA表达水平。结果:姜黄素对MCF-7细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;FCM结果显示姜黄素能使MCF-7细胞阻滞在G1/S期;Annexin V/PI双染法验证姜黄素可以诱导细胞凋亡;RT-PCR结果显示Bax mRNA水平明显上调,而Bcl-2的mRNA表达水平降低。结论:姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Bax基因表达水平的同时,下调Bcl-2基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关。     

槲皮素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的实验研究

目的探讨Que促人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法用不同浓度的槲皮素处理人乳腺癌MCF-7细胞,用MTT法测定槲皮素对MCF-7细胞增殖的抑制作用,用流式细胞仪检测MCF-7细胞的凋亡水平,用免疫印迹法检测Que处理人乳腺癌MCF-7细胞的Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化。结果 Que能够明显的抑制MCF-7细胞增殖,促进其凋亡;Que处理人乳腺癌MCF-7细胞的Bcl-2蛋白表达水平明显下调,而Bax蛋白表达水平明显上调。结论 Que通过调节Bcl-2和Bax蛋白表达水平促使人乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡。     

苦参碱对乳腺癌细胞杀伤作用的体外实验研究

目的 研究苦参碱(matrine)对体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及相关机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的苦参碱对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的苦参碱作用于MCF-7细胞后细胞周期分布、凋亡率及Bax,Bcl-2蛋白的表达水平.结果 苦参碱对MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05),并呈现时间和剂量依赖性;细胞周期被阻滞于G0/G1期;苦参碱能够诱导细胞凋亡,并且上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达.结论 苦参碱可显著抑制MCF-7细胞的增殖,且抑制作用呈剂量和时间依赖性.苦参碱对MCF-7细胞的增殖抑制作用可能与其诱导细胞周期阻滞及凋亡有关,诱导凋亡可能与其上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达有关.     

BMP-4基因影响乳腺癌细胞增殖、凋亡和迁移能力涉及NF-κB途径

目的探讨骨形态发生蛋白-4(bone morphogenetic protein 4,BMP-4)基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响途径。方法通过向乳腺癌MCF-7细胞株转染PET-BMP-4质粒过表达BMP-4;采用RT-PCR、MTT法、Boyden小室培养、Hoechst染色、Western blot方法,检测质粒转染、NF-κB抑制剂吡咯二硫代氨基甲酸盐(pyrrodlidine dthiocarbamate,PDTC)预处理和对照组细胞增殖、凋亡、迁移能力及NF-κB、Bax、Bcl-2水平。结果与空质粒转染组和空白对照组细胞相比,过表达BMP-4基因可导致MCF-7细胞增殖能力升高,凋亡细胞比例降低,细胞迁移能力增强,NF-κB和Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低(P<0.05);PDTC预处理后NF-κB和Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,显著降低过表达BMP-4对MCF-7细胞的生物学效应(P<0.05)。结论过表达BMP-4基因可增强乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移能力并抑制其凋亡,可能与上调NF-κB有关。     

氯喹增强乳腺癌细胞对他莫昔芬化疗敏感性的作用研究

目的:探讨氯喹(chloroquine,CQ)增强乳腺癌细胞对他莫昔芬(tamoxifen,TAM)化疗敏感性的作用及其机制.方法:以雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,分为空白对照组、TAM组、CQ组和CQ+TAM组,空白对照组不加药物,仅用培养基培养,其余各组加入相应药物培养.采用MTT法检测各组细胞存活率;通过集落克隆形成实验观察低浓度CQ、TAM及其联用对MCF-7细胞增殖的抑制作用;溴化丙啶单染检测各组细胞凋亡率;Western blot法检测各组蛋白表达情况.结果:TAM组、CQ组和TAM+CQ组24 h、48 h、72 h细胞存活率均明显低于空白对照组(P<0.01),TAM+CQ组24 h、48 h、72 h细胞存活率亦均明显低于TAM组和CQ组(P<0.01),TAM组24 h存活率低于CQ组(P<0.05).集落克隆形成实验结果显示,低浓度CQ抑制MCF-7细胞集落形成不明显,但CQ可明显增强TAM的抑制作用.4组间细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.01),其中TAM组、CQ组和TAM+CQ组细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P<0.01),TAM+CQ组细胞凋亡率亦均明显高于TAM组和CQ组(P<0.01).Western blot结果显示,随时间增加,TAM组Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白表达升高,p62蛋白表达降低;与空白对照组比较,TAM组LC3Ⅱ蛋白表达明显升高,p62蛋白表达降低;而CQ+TAM组LC3Ⅱ、Beclin-1和p62蛋白表达均较TAM组升高,Bcl-2蛋白表达降低.结论:CQ可增强乳腺癌细胞对TAM化疗的敏感性,其机制可能是通过下调Bcl-2表达,抑制细胞自噬反应.     

甲地孕酮与三苯氧胺联合应用对乳腺癌MCF-7细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨小剂量甲地孕酮(MA)和三苯氧胺(TAM)联合应用对乳腺癌细胞MCF-7生长和凋亡的影响.方法:分别或联合应用TAM、MA作用于MCF-7细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长和抑制作用,应用流式细胞技术测定细胞周期和凋亡率.结果:TAM可抑制MCF-7细胞生长,阻滞细胞周期于G0/G1期,并可诱导细胞凋亡;小剂量的MA对MCF-7细胞生长与凋亡无明显影响,G0/G1.期细胞增多;两者联合应用时,细胞的生长抑制作用加强,凋亡率上升.结论:TAM对MCF-7细胞具有抑制生长和诱导凋亡作用.加用小剂量的MA后,其抑制生长和凋亡诱导作用加强,两者联合应用具有协同作用.     

硫利达嗪对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的杀伤效应

目的观察硫利达嗪对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的凋亡作用,并探讨其机制。方法采用MTT法测定硫利达嗪对细胞的抑制作用,计算半数抑制浓度( IC50);流式细胞术检测硫利达嗪对细胞周期分布和凋亡的影响;比色法测定药物对细胞Caspase-3活性的影响;West-ern blot法检测凋亡调节蛋白Bcl-2、Bax表达的变化。结果
　　硫利达嗪作用24 h后, MDA-MB-231、MCF-7细胞增殖明显呈剂量依赖性抑制,其IC50为18、22μmol/L。流式细胞术结果显示,随着加入硫利达嗪浓度的提高, MDA-MB-231、MCF-7细胞均发生不同程度的G0/G1期阻滞、细胞凋亡程度增加及伴随胞内Caspase-3活性增加。各实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0．01)。 Western blot法结果显示随着药物浓度的增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调、促凋亡蛋白Bax表达明显上调,各实验组与对照组相比,差异有统计学意义( P <0．01)。结论硫利达嗪对乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7有显著的增殖抑制作用且可显著诱导肿瘤细胞发生G0/G1期阻滞及凋亡,伴随Caspase-3活性的上调,其毒性机制可能与肿瘤细胞内抗凋亡蛋白 Bcl-2下调、Bax上调有关。     

扁蒴藤素对人乳腺癌MCF-7细胞生长和凋亡的影响及机制研究

目的 研究扁蒴藤素对乳腺癌细胞MCF-7生长和凋亡的影响及其机制.方法 用MTT法检测扁蒴藤素对MCF-7细胞细胞生长的影响;用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染及TUNEL染色检测扁蒴藤素对MCF-7凋亡的诱导作用;用western blot分析扁蒴藤素作用后,凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白的表达变化.结果 扁蒴藤素对MCF-7细胞的生长有显著的抑制作用,对其作用48 h的半数抑制浓度(IC5o)为0.59 μmol/L.1.0μmol/L扁蒴藤素作用后,Annexin Ⅴ-FITC/PI染色凋亡细胞比率(15.55 ±1.43)％,TUNEL阳性的MCF-7细胞比率为(35.59±4.43)％,较对照组(未经扁朔藤素作用)[(1.45±0.24)％和(0.85±0.34)％]明显升高,差异均有显著性意义,P ＜0.05.Western blot结果显示,扁蒴藤素能下调Bcl-2的表达,上调Bax的表达.结论 扁蒴藤素素通过调节细胞凋亡相关因子诱导MCF-7细胞凋亡的发生,从而高效抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长.     

盐霉素联合17AAG促进乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制研究

目的 探讨盐霉素与17-AAG联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及机制。方法 CCK8法检测单药及联合用药对MCF-7细胞增殖的影响;用流式细胞术检测单药及联合用药对MCF-7细胞凋亡的影响;用qRT-PCR检测与凋亡相关基因的表达情况。结果 细胞增殖实验显示加药后48 h药物杀伤作用更为明显,且联合用药组的细胞增殖抑制率明显高于其他对照组。流式细胞术测定结果显示空白对照组、盐霉素单药组、17-AAG单药组细胞早期凋亡率分为(4.24±0.90)%、(4.79+0.89)%、(2.78±1.10)%,而联合用药组早期凋亡率为(6.42±1.70)% ,明显高于其他三组,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);qRT-PCR结果显示与其他三个对照组相比,联合用药组中Bcl-2的表达量显著降低,Caspase-3、Beclin-1、Bax的表达量显著增高,组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 盐霉素与17-AAG联合用药可能通过相关信号通路如PI3K/Akt /mTOR、MAPK、JNK等,调控凋亡基因Bcl-2、Beclin-1、Bax等的表达而促进MCF-7细胞凋亡。     

姜黄素联合干扰素-β/维甲酸对乳腺癌细胞的协同效应

目的 研究姜黄素和干扰素-β/维甲酸(IFN-β/RA)联合用药对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制效应,探讨姜黄素和IFN-β/RA联合用药的合理性及科学性.方法 实验分组如下:对照组(加培养基)、姜黄素组(40 μmol/L)、 IFN-β/RA组(IFN-β 750 U/ml,RA 1.5 μmol/L)、姜黄素联合 IFN-β/RA 组(姜黄素 40 μmol/L, IFN-β 375 U/ml, RA 0. 75 μmol/L),分别处理乳腺癌细胞MCF-7,采用MTT法检测细胞活性,采用Annexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 姜黄素和IFN-p/RA联合用药可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,同时诱导细胞凋亡,这种作用强于单药(P<0. 05),表现为协同作用.结论 姜黄素联合 IFN-β/RA对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有更强的抑制作用,并能促进细胞凋亡,具有协同作用.     

重组复合高效干扰素抗人乳腺癌细胞的体外实验研究

目的 了解重组复合高效干扰素(rSIFN-co)在体外抗乳腺癌细胞的作用,以及与抗肿瘤药物合用的协同抗肿瘤作用,并初步探讨其可能的作用机理.方法 采用MTT比色法和流式细胞仅技术,检测rSIFN-co、干扰素(干复津)、抗肿瘤药物(盐酸表柔比星),以及联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞及人乳腺癌阿霉素耐药MCF-7/ADR细胞增殖、凋亡的影响,采用免疫组化SABC法检测经过各药物处理的MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞中P53、Bcl-2、CerbB-2蛋白的表达.结果 rSIFN-co对MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞均具有增殖抑制、促进凋亡作用,作用强于干复津,且有剂量依赖性及时间依赖性倾向;rSIFN-co与盐酸表柔比星联用具有协同增效的作用;rSIFN-co可下调MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞P53、CerbB-2蛋白及上调Bcl-2蛋白的表达水平.结论 rSIFN-co诱导MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞凋亡、抑制其增殖作用可能与下调肿瘤细胞P53、CerbB-2蛋白及上调Bcl-2蛋白的表达水平有关.     

毛酸浆内酯通过抑制STAT3诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

[目的]旨在探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)在毛酸浆内酯（PPB）诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中发挥的作用。[方法]采用荧光染色法分析PPB诱导MCF-7细胞凋亡;使用生物信息学方法预测PPB抗乳腺癌的潜在机制;采用噻唑蓝（MTT）法考察STAT3抑制剂S3I-201以及STAT3小干扰RNA(siRNA)对PPB抑制MCF-7细胞生长的作用;采用蛋白免疫印迹（Western Blot）法考察PPB单独处理或STAT3 siRNA预处理后对MCF-7细胞中STAT3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase8)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)、细胞色素c(Cytochrome c)以及多聚ADP核糖聚合酶（PARP）蛋白表达的影响。[结果] MCF-7细胞经PPB作用后凋亡形态特征明显,凋亡比例上升;生物信息学结果显示PPB与乳腺癌疾病的共同靶点STAT3在乳腺癌组织中高表达,单基因GSEA结果提示STAT3高表达与凋亡信号通路呈负相关;Western Blot法检测结果显示PPB能够抑制STAT...     

rhTIMP-3与TAM联合应用对乳腺癌细胞MCF-7生长与凋亡的影响

目的:探讨重组金属蛋白酶组织抑制因子-3(rhTIMP-3)和三苯氧胺(tamoxifen,TAM)联合应用对乳腺癌细胞株MCF-7(ER )生长和凋亡的影响。方法:分别或联合应用不同浓度的rhTIMP-3、TAM作用于MCF-7细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用,应用流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率。结果:rhTIMP-3与TAM均可抑制MCF-7细胞增殖,呈时间、浓度依赖性,并可诱导凋亡。rhTIMP-3使细胞阻滞在S和G2/M期;TAM可造成细胞G0/G1期的阻滞,当两者联合时对MCF-7的生长抑制明显增加,在诱导凋亡方面有明显协同作用。结论:rhTIMP-3、TAM均可抑制MCF-7细胞的增殖,并可诱导其凋亡;二者联合应用不仅能增加细胞生长的抑制作用,而且在诱导细胞凋亡方面有协同作用。     

黄芩苷抑制乳腺癌细胞侵袭、迁移与凋亡的机制研究

目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MCF-7,观察黄芩苷对乳腺癌细胞侵袭、迁移与凋亡的影响及其作用机制.方法 实验分为正常组、模型组、黄芩苷组、miR-126组、LNA组、LNA-126组和LNA-126+黄芩苷组.采用RT-PCR检测miR-126、miR-145、miR-100和let-7c的表达水平,MTT法检测细...