HBV-DNA定量检测的室内质控分析

目的探讨实时荧光定量技术在HBV-DNA定量检测过程中的室内质控问题。方法采用TaqMan探针法,对质粒标准品高、中、低值在常规条件下与标本同时检测,求出均值和标准差,利用Excel折线散点图画出质控图,以（x=±2SD）为在控标准。结果四种质粒标准品S1的Ct值x=18.026,s=0.999;S2的x=21.902,s=0.947;S3的x=25.125,s=1.046;S4的x=28.035,s=0.965,连续20次测定均在控。结论实时荧光定量技术在HBV-DNA定量检测过程中的标准化和质量保证体系已经建立,而且稳定性良好。     

荧光定量PCR检测HBV-DNA室内质控物的制备及初步应用

目的:利用混合血清自制荧光定量PCR HBV-DNA室内质控血清,并对其在日常工作中的应用进行评价.方法:分别留取进行健康体检的多人两对半全阴的血清作为基质,"大三阳"作为高值血清,"小三阳"作为低值血清,用全阴血清将高值和低值血清稀释至(5.0±2)×106拷贝/ml和(5.0±2)×103拷贝/ml两个水平.与临床样本采用荧光定量PCR方法同时检测,其结果计算X、S、CV值,并在Levery-Jennings室内质控图绘图,并结合应用Westgard多规则质控判断方法[1].结果:高值:X=6.758277(对数值),S=0.203284(对数值),CV=3.0%.低值:X=3.66921(对数值),S=0.32195(对数值),CV=8.77%.结论:利用混合血清制备的HBV-DNA室内质控物,其制备方便,结果稳定,有一定的实用价值.     

HBV-DNA荧光定量PCR检测的室内质控研究

目的研究HBV-DNA荧光定量PCR检测室内质控管理体系。方法自制HBV-DNA阳性质控血清,连续测量20次,计算均值、标准差和变异系数,从第3次开始利用即刻法进行质控,20次以后利用质控图法进行质控。结果自制阳性质控血清均一性和准确度均达到实验要求,用即刻法检测3～20次质控结果均小于N2S数值,在控制范围内,用质控图法检测HBV-DNA室内质控对数值的均值为5.54,标准差为0.22,CV为3.9%,稳定性好,有临床应用价值,质控图利用EXCEL表格标示出警告限和失控限,有利于动态监控质控结果。结论联合即刻法和质控图法对于应用荧光定量PCR的方法进行HBV-DNA检测的室内控制切实可行。     

乙型肝炎病毒DNA定量检测室内质控品的制备与评价

目的自制乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)临界阳性、强阳性和阴性3个水平的室内质控品,对其临床检验实际应用价值进行初步评价。方法收集日常工作中HBV-DNA强阳性、临界阳性和阴性标本,分别混合后分装冷冻于-80℃,按方法学评价进行均一性、重复性、准确性和稳定性研究。结果自制HBV-DNA3个水平室内质控品的均一性、重复性、准确性均达到实验要求;15个月的自制质控品均数(x珋)、标准差(s)、变异系数(CV)差异无统计学意义,稳定性好,符合检测项目质控要求。结论自制HBV-DNA3个水平的质控品具有良好的均一性、重复性、准确性和稳定性,可用于HBV-DNA室内质控。     

自建HBV-DNA实时荧光定量PCR检测系统性能验证方法及结果分析

目的探讨自建乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)实时荧光定量PCR检测系统性能验证的方法和程序,充分了解其检测性能,评估并确认分析性能是否符合预期用途。方法参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)颁布的EP系列文件及中国合格评定国家认可委员会(CNAS)对实验室检测系统评估的要求,对实验室自建的HBV-DNA实时荧光定量PCR检测系统进行精密度、正确度、线性范围、检测下限等性能参数的验证和评价。结果 HBV-DNA定量检测低值和高值的批内精密度CV分别为3.4%和1.8%,总精密度CV分别为3.8%和1.8%。正确度初次验证有两项不符合要求,经厂家校准后重新验证符合要求。线性回归方程为Y=0.997X+0.012,R2=0.999,线性范围为500-108IU/ml。检测下限为500 IU/ml。结论自建HBV-DNA实时荧光定量PCR检测系统的性能符合要求,能够应用于临床检测。     

乙型肝炎两对半与HBV-DNA含量的探讨

目的:探讨乙肝两对半与HBV-DNA含量的相关性。方法:458份血清用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定乙肝病毒(HBV)两对半,用FQ-PCR法检测HBV-DNA含量。结果:乙肝两对半模式不同血清型的HBV-DNA阳性率不同,HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)最高,其HBV-DNA检出率为95.5%,对数均值为7.4±2.15;HBsAg (+)、抗HBe(+)、抗-HBc(+)的HBV-DNA检出率为39.6%,对数均值为4.8±1.02。而HBsAg(+)、抗-HBc(+)其HBV-DNA检出率为73.8%,对数均值为3.7±0.84。结论:3种血清型的HBV-DNA检出率差异及拷贝数差异均有统计学意义。     

LightCycler FQ-PCR检测HBV-DNA时CT值基线调节

随着分子生物学技术的飞速发展，应用聚合酶链反应(PCR)技术对日益增多的传染性疾病评估极具价值，由当初的定性检测发展到现在的定量检测。Roche公司LightCycler全自动荧光定量PCR仪以其扩增循环速度快，独立封闭的毛细管反应体系大大减少了标本间和产物的污染，单一光路的三个检测点对样本同时进行三个波长的荧光检测，扩增与检测同时进行并提供实时分析和在线监控。其定量依据是采用内对照法和外标法对产物进行定量分析．下面就我们的体会介绍如下。     

乙型肝炎不同血清模式与HBV-DNA的关系

目的　研究HBV感染的不同血清学模式与HBV DNA含量关系。方法　采用荧光定量PCR方法对 2 89份临床标本进行HBV DΝΑ测定 ,ELISA方法对乙型肝炎血清学标志进行检测。结果　HBsAg(+ )HBeAg(+ )HBcAb(+ )模式的HBV DNA阳性率为 90 3 % ,载量为 6 3 0 3± 0 742 ,以及HBsAg(+ )HBeAg(+ )模式HBV DNA阳性率为 91 6% ,载量为 6 70 2± 0 2 98,明显高于其他模式 ;HBV感染血清学指标全阴模式和单一HBsAb模式各有 1例阳性。结论　HBeAg(+ )模式的患者 ,乙型肝炎病毒复制活跃。单凭HBV感染血清学指标评估HBV感染状态是困难的 ,只有将血清学指标同HBV DNA定量结果结合才能客观的分析HBV感染状况。荧光定量PCR在HBV感染中起着重要作用     

自配HCV-RNA室内质控品稳定性探讨

目的探讨自配HCV-RNA质控品稳定性及对其临床应用价值进行评估。方法第1组实验:配备HCVRNA阳性质控品,分装并随机分为4组,分别为A组:-20℃组,B组:-70℃组,C组:-20℃蛋白酶K组,D组:-70℃蛋白酶K组,定期用实时荧光PCR技术定量检测;第2组实验:将HCV-RNA阳性新鲜血清、HCV-RNA阴性新鲜血清和稳定剂按适当比例混合,分装并随机分成3组,分别为E组:-20℃静置保存,F组:干冰包装邮寄组,G组:模拟卫生部邮寄室间质控品的常温邮寄包装,F和G组经历共2 d邮寄运送后-20℃保存,定期用实时荧光定量PCR技术定量,统计分析,绘制质控图。结果 A、B、C和D组28周前病毒载量对数分别为(5.39±0.11)、(5.44±0.11)、(5.40±0.10)、(5.46±0.12),变异系数为2.00%、2.00%、1.85%、2.20%,差异均无统计学意义(P>0.05),SD和CV均小于临床允许误差,Z-score质控图显示28周前4组测定结果均在可控范围。E、F、G组24周前病毒载量对数分别为(5.22±0.09)、(5.19±0.07)、(5.08±0.15),变异系数为1.72%、1.35%、2.95%;3组均值两两比较,E和G组之间差异有统计学意义(P=0.02);L-J质控图显示E、F组病毒载量均匀分布在均值两侧和±2SD范围内,G组于第12周连续超出-2SD,于16周和20周超出-3SD控制线。结论在自配HCV-RNA质控品中加入蛋白酶K不能有效延长质控品的有效期;自配HCV-RNA质控品在-20℃保存稳定期至少7个月(28周),满足临床室内质量控制的需要;常温邮寄过程可明显缩短HCV-RNA时效性,自配HCV-RNA无需经历运送过程,在稳定性上存在明显优势。     

孕妇血清及其胎儿脐血HBV-DNA定量检测与宫内感染的关系

目的：探讨新生儿发生宫内感染与孕妇不同的乙肝感染状态的关系。方法：通过ELISA法及荧光定量PCR法检测血清标本中HBV标志物和HBV-DNA含量水平。结果：乙肝大三阳孕妇其体内HBV-DNA水平明显高于乙肝小三阳孕妇，胎儿脐血HBV-DNA水平与孕妇血清中HBV-DNA水平密切相关，孕妇血HBV-DNA含量高时脐血HBV-DNA阳性率明显增高。结论：宫内感染的发生率与孕妇血清HBV-DNA含量相关，脐血HBV-DNA阳性是判断HBV宫内感染的相关指标。     

Roche定量试剂和国产PCR试剂检测HBV-DNA的比较分析

目的探讨Roche定量试剂和国产PCR试剂检测慢性HBV感染者血清HBV-DNA的差异。方法收集慢性HBV感染患者366例,包括慢性乙型肝炎患者247例,乙肝肝硬化失代偿患者72例,乙肝相关性肝癌患者28例,乙型慢加急性肝衰竭患者19例;采用Roche定量试剂(试剂A)和和国产PCR试剂(试剂B)检测患者血清HBV-DNA,比较检测结果的差异、相关性及影响因素。结果试剂B 124例(33.88%)低于检测下限而试剂A高于检测下限(包括24例超过1.00×10~3IU/m L,考虑试剂B为假阴性);试剂A的阳性率(70.49%)显著高于试剂B(36.61%)(P0.01)。试剂A的HBV-DNA检测均值高于试剂B(P0.05),HBe Ag滴度低者、终末期患者更容易出现COBAS系统的血清HBV-DNA检测值高于国产试剂的情况。Spearman相关分析显示,两种试剂在1.00×10~3IU/m LHBV-DNA1.00×10~7IU/m L时的相关性较好(r=0.74,P0.01)。结论国产PCR试剂可以满足慢性HBV感染患者抗病毒治疗随访、监测的需求;但针对那些怀疑有低病毒复制状态或病毒变异导致HBV-DNA检测结果假阴性的患者,有必要用COBAS系统予以复核。     

荧光定量分型PCR法与直接测序法检测HBV-DNA水平的应用价值比较

目的比较荧光定量分型PCR法与直接测序法检测HBV-DNA水平的应用价值。方法选取该院2012年1月—2013年12月收治的126例符合入选标准的HBV患者,分别采用荧光定量分型PCR法与直接测序法检测HBV-DNA水平,对HBV-DNA基因分型结果进行比较分析。结果 126份样本只检测出3种基因分型（B型、C型、B/C混合型）,其中B型占明显优势。荧光定量分型PCR法B/C混合型检出率明显高于直接测序法（P〈0.001）;一致性检验表明两种检测方法的一致性较好（Kappa〉0.75）;TA克隆结果与荧光定量分型PCR法一致。结论荧光定量分型PCR法检测HBV-DNA水平应用价值较直接测序法高,值得临床推广应用。     

实时荧光定量PCR应用及实验条件优化

实时荧光定量PCR是在普通PCR基础上发展起来的新技术,在保持了PCR技术灵敏、快速、特异特点的基础上增加了定量的特点.在检测微小残留病变,肿瘤标志性基因及病毒负荷量等方面为临床医生判断病情,了解预后发挥着不可替代的作用.荧光定量PCR为科学发挥着巨大作用的同时,人们也不断对其实验条件进行优化,保证定量结果的准确.     

HBV-DNA质控物的制备及评价

目的：制备HBV-DNA荧光定量PCR质控物,评价其均匀性及稳定性。方法利用混合血清样本制备质控物。依据《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》和ISO Guide 35标准随机抽取足够的样本,采用单因子方差分析评价质控物均匀性;用一元线性回归分析评价质控物的稳定性。结果均匀性评价结果显示样品内和样品间均匀性差异无统计学意义(P>0．05),稳定性评价线性回归分析结果显示, HBV-DNA质控物随时间变化无明显趋势变化(P>0．05)。结论 HBV-DNA质控物制备简单,其均匀性、稳定性符合标准。     

实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌femA表达水平

目的探讨实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌乒,以表达的方法。方法以BB270femA基因表达为标准,建立实时荧光定量PCR方法,对实验菌株femA表达进行相对定量。结果建立的实时荧光定量PCR方法所得结果标准曲线线性关系好,熔解峰单一。随MIC变化,金黄色葡萄球菌femA表达水平也随之变化。结论用实时荧光定量PCR方法研究金黄色葡萄球菌femA表达量结果可靠、敏感、重复性好。     

200例慢性乙型病毒性肝炎患者血清标志物和HBV-DNA联合检测结果的分析

目的探讨慢性乙型肝炎血清标志物与血清HBV-DNA之间的相关性,评价血清标志物和HBV-DNA联合检测的应用价值。方法采用荧光定量聚合酶链反应检测我院收治的200例乙型肝炎患者的血清标志物和HBV-DNA。结果重度组HBV-DNA检出率为92.14%,中度组检出率为56.02%,轻度组未检出,且重度组高拷贝数所占的百分率远高于中度组。结论荧光定量聚合酶链反应检测血清HBV-DNA可检测HBV的复制状态和真实感染程度,可补充慢性乙肝病毒的血清标志物检测,同时检测HBV-DNA和血清标志物,对慢性乙肝的诊断及预后判断具有较大的价值。     

人类mdr1基因新型Taq Man-MGB探针实时定量PCR检测方法的建立

目的建立一种比现有方法敏感、特异性高、重复性好的实时荧光定量PCR检测的新方法检测人类mdr1基因。方法以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1/A为阳性模板,用Primerexpress2.0引物设计软件设计引物和TaqMan-MGB探针,建立荧光定量PCR检测方法。结果当待扩增DNA浓度在3.601×103cps/ml～3.601×109cps/ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,相关系数r2大于0.98。结论应用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确度高等优点,可作为进一步研究人类mdr1基因的方法。     

标本双份测定法在临床生化检验室内质控中的应用

目的利用极差型质控图,探讨患者标本双份测定法在临床生化检验室内质控中的应用。方法在常规室内质控在控后开始检测标本,每天从前10份标本中选出1份总蛋白(TP)60～80 g·L~(-1)、白蛋白(ALB)30～50 g·L~(-1)的标本,3 h后再重测1次该标本的TP、ALB,每天计算2次测定结果的差值和差值的标准差,连续40个工作日,利用标准差计算双份测定极差的控制限,建立极差型质控图。再连续1个月(22个工作日)进行患者标本TP、ALB双份测定,把每天2次测得结果的差值描到极差型质控图上。结果TP和ALB 1个月标本双份测定差值无失控点。结论患者标本双份测定法可以用来监测检测系统的稳定性,与常规室内质控相互补充提高检验质量。     

上皮性卵巢癌中HOST2 lncRNA的表达及临床意义

目的：检测HOST2 lncRNA在上皮性卵巢组织的表达水平,并分析其临床意义。方法：利用实时荧光定量PCR方法检测HOST2 lncRNA在上皮性卵巢癌、上皮性交界性瘤和上皮性正常卵巢组织的表达水平,分析HOST2 lncRNA在不同上皮性卵巢组织表达差异的临床意义。结果：HOST2 lncRNA在上皮性卵巢癌组织和上皮性交界性瘤表达量明显高于上皮性正常卵巢组织的表达,差异均有统计学意义（P<0.01）。HOST2 lncRNA在上皮性卵巢癌组织表达量与上皮性交界性瘤表达量比较无明显差异（P>0.05）。HOST2 lncRNA在不同临床分期的上皮性卵巢癌中表达量无明显差异（P>0.05）。结论：在上皮性卵巢癌和交界性卵巢瘤中HOST2 lncRNA均有表达,可作为上皮性卵巢癌早期诊断的一个分子诊断标志物。