骨桥蛋白基因沉默对乳腺癌细胞HIF-1和VEGF表达及其放疗敏感性影响的探讨

[摘要]目的 探讨siRNA转染乳腺癌细胞MDA-MB-231抑制骨桥蛋白(OPN)表达对HIF-1和VEGF表达及其放疗敏感性的影响。方法 采用重组OPN mRNA干扰质粒转染MDA-MB-231细胞,将新建的OPN沉默细胞株命名为MDA-MB-343进行乏氧和放射处理。RT-PCR、蛋白质印迹法从mRNA和蛋白水平检测乳腺癌细胞OPN表达量的变化及其对HIF-1和 VEGF表达的影响。侵袭试验和划痕试验检测OPN下调对细胞侵袭和迁移的影响。流式细胞仪检测照射后细胞凋亡率。细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测照射后细胞衰老进程。克隆形成试验检测细胞对放射线的敏感性。 结果 与MDA-MB-231细胞相比,转染细胞株MDA-MB-343 OPN mRNA和蛋白的表达均显著下调,乏氧处理后对照组OPN的表达增加,转染组受到抑制。放疗对转染组蛋白表达的影响无统计学意义。转染组经乏氧处理后与放疗抗拒相关的HIF-1和VEGF的表达均显著下调。细胞凋亡率转染组由3.61%提高到4.91%,2Gy照射后对照组和转染组对应的凋亡率分别为13.9%和24.07%。Transwell试验穿过聚碳酸酯膜的细胞MDA-MB-231、阴性对照和干扰组分别为46.20±5.13/HP 、47.64±4.61/HP、 35.86±4.79/HP,侵袭力降至75.27%。2Gy照射后分别为38.93±4.91/HP ,40.87±4.57/HP,21.87±5.06/HP,侵袭力进一步降至45.9%。衰老实验结果显示转染组放疗后细胞的衰老进程明显加剧。转染组细胞克隆存活率为对照组的39%（p=0.000）。2Gy照射后对照组和转染组的克隆存活分数分别为0.6和0.45。对应的1%克隆存活剂量分别为5.60Gy和4.94Gy。 结论 乏氧上调乳腺癌细胞OPN的表达。OPN RNA干扰在常氧和乏氧状态下均有效抑制MDA-MB-231细胞OPN的表达,从而抑制了HIF-1和VEGF的表达,同时加速了细胞凋亡,提高了MDA-MB-231细胞的放射敏感性。OPN有望成为增强乳腺癌放射治疗效果的靶点。     

靶向C-erbB-2基因小干扰RNA对肺腺癌Calu-3细胞株放疗敏感性的影响

目的 探讨转染靶向C-erbb-2基因小下扰RNA(siRNA)对肺腺癌Calu-3细胞株放疗敏感性的影响.方法 合成四对C-erbb-2基因的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA的干扰效果,筛选出干扰效果最好的一对,用LipofectamineTM2000转染肺腺癌细胞Calu-3,实验分为6组:空白组、单纯干扰组、2 Gy照射组、干扰加2 Gy照射组、5Gv照射组和干扰加5 Gv照射组,每组设3个复孔,最后Annexin V-FITC Kit检测各组细胞的凋亡.结果 从合成的shRNA中筛选出一对siRNA.其干扰效果较其他3种有统计学差异;用其干扰Calu-3细胞后,分别用2 Gy和5 Gy的剂量照射细胞,得到的凋亡率如下:李白组7.767±0.551、干扰组14.400±1.114、2 Gy剂量组11.867±0.737、2 Gy+干扰组23.000±1.664、5 Gy剂量组16.100±0.624、5 Gy+干扰组27.900±1.709.结论 靶向转染C-erbB-2基因siRNA至Calu-3细胞可提高其凋亡率;靶向转染C-erbB-2基因siRNA至Calu-3细胞可提高其对γ射线的敏感性.     

PNKP沉默对骨肉瘤放疗的增敏作用

目的 研究多聚核苷酸激酶/磷酸酶(polynucleotide kinase/phosphatase,PNKP)在放疗诱导的细胞DNA损伤、细胞凋亡、细胞增殖和细胞周期中的调节作用.方法 将U2OS细胞系分为3组:骨肉瘤细胞对照组、阴性siRNA转染组(siC)和PNKP siRNA转染组(siPNKP).Western blot检测0、1、2、4、6、8 Gy6个剂量水平γ-射线照射后U2OS细胞中PNKP的变化,CCK-8分析不同剂量γ-射线照射后细胞的存活率,彗星实验检测辐射后骨肉瘤细胞DNA的损伤,MTT法检测辐射后细胞增殖情况,流式细胞仪分析辐射后细胞凋亡、线粒体膜电位和细胞周期的变化.结果 4 Gy剂量的γ-射线可以显著降低骨肉瘤细胞U2OS中PNKP的表达(55.17％,P＜0.01)和细胞的存活能力(与对照组相比下降50.16％,P＜0.01).与单独辐射组(siC+ IR)对比,PNKP沉默可以抑制辐照后细胞的生长(抑制率增加到129.61％,P＜0.01),增加DNA的损伤(DNA迁移量增加58.94％,P＜0.01),使细胞周期停滞在S期,促进细胞凋亡以及降低线粒体膜电位水平.结论 PNKP沉默可以增加骨肉瘤细胞放射治疗的敏感性.     

siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78可增强乳腺癌细胞对顺铂的敏感性

目的探讨siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78（GRP78）增强顺铂对乳腺癌细胞凋亡的敏感性,以期为乳腺癌的临床治疗提供
新的靶点。方法MTT法检测不同浓度（0、1、2、4、8、16 μmol/L）顺铂对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用;PI/Annexin
V 双染检测顺铂（8 μmol/L）对siRNA转染沉默GRP78乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响,同时将未转染和转染空质粒乳腺
癌细胞MDA-MB-231 作为空白和阴性对照;Western blot 检测顺铂（8 μmol/L）处理乳腺癌细胞MDA-MB-231 不同时间（0、6、
16、24 h）GRP78的表达以及siRNA转染沉默GRP78乳腺癌细胞MDA-MB-231 中GRP78的表达。结果8 μmol/L顺铂作用于
乳腺癌细胞MDA-MB-231 24、48、72 h细胞存活率分别为83.13%、54.22%、35.79%,但24 h细胞凋亡率仅为10.8%。将GRP78
沉默后,细胞的凋亡率为24.6%,沉默GRP78并合用顺铂进行刺激,细胞的凋亡率为48.9%,明显高于单用顺铂组。用顺铂刺激
乳腺癌细胞MDA-MB-231 GRP78表达先上调后有减弱趋势,而siRNA转染沉默GRP78后,GRP78表达明显下降。结论抑制
GRP78的表达可以增加乳腺癌细胞的凋亡率,为乳腺癌的临床治疗提供了新的靶点。
     

CacyBP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 观察干扰小RNA(siRNA)介导的Cacy BP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响。方法 化学合成Cacy BP/SIP基因序列特异性siRNA(Cacy BP/SIP siRNA),采用脂质体法转染siRNA至MDA-MB-231细胞(Cacy BP/SIP siRNA组),MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率。Realtime PCR和Western blotting检测MDA-MB-231细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达。另设阴性对照组和空白对照组。结果 与阴性对照组和空白对照组比较,Cacy BP/SIP siRNA组MDA-MB-231细胞增殖能力显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。Caspase-3和Bax mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05)。结论 靶向沉默乳腺癌MDA-MB-231细胞中Cacy BP/SIP基因表达后,可以抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡,其作用可能通过下调Bcl-2表达,上调Caspase-3和Bax表达发挥诱导细胞凋亡的作用。     

X射线对人三阴性乳腺癌细胞E-钙黏蛋白基因表达的影响

目的 研究不同剂量X射线照射人三阴性乳腺癌细胞,照射后不同时间点对人三阴性乳腺癌细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)基因表达的影响。方法 用X射线分2.5、5和10Gy 3个吸收剂量组照射体外培养的人三阴性乳腺癌HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞,采用荧光实时定量PCR技术检测HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞经照射后6、12、24和48h的E-cadherin mRNA表达水平,以未照射组(0h组)为对照。结果 HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞E-cadherin mRNA的表达在2.5、5、10Gy X射线照射后,随着时间点的后移呈升高趋势。与未照射组相比,除了HCC1937细胞10Gy照射后6h、2.5Gy和5Gy照射后24h及MDA-MB-231细胞5Gy照射后12h外,各时间点差异均有统计学意义(P＜0.05)。HCC1937细胞在2.5Gy和10Gy照射后48h,E-cadherin mRNA的表达呈下降趋势,与未照射组相比,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 较大剂量的X射线整体可上调HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞E-cadherin mRNA的表达,可能诱导了肿瘤细胞凋亡;晚期HCC1937细胞E-cadherin mRNA的表达下降,可能与辐射所致HCC1937细胞的放射生物学效应有关。     

RNAi沉默clusterin基因对卵巢癌SKOV3细胞放射敏感性的影响

目的:研究clusterin(CLU)基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞放射敏感性的影响.方法:靶向CLU基因的siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞,Western blot法测定CLU基因蛋白表达水平.给予不同放射剂量(2、4、6Gy)处理后,通过MTT法及克隆形成实验检测卵巢癌SKOV3细胞的存活率及克隆形成率,流式细胞...     

Hiwi基因靶向沉默对乳腺癌MCF-7/ADM细胞化疗敏感性的影响

目的：探讨耐阿霉素乳腺癌MCF-7/ADM细胞应用Hiwi基因靶向沉默技术后对阿霉素敏感性的变化,阐明Hiwi基因在乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药机制中的作用。方法：MCF-7/ADM细胞分为对照组、Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组,分别转染Hiwi control、Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2 3种不同载体,应用实时定量PCR和Western blotting法检测Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平,判断转染效率。转染后各组乳腺癌MCF-7/ADM细胞加入不同浓度阿霉素（0、0.1、0.5和1.0mg·L^-1）,0mg·L^-1阿霉素组为对照组,采用MTT法检测各组MCF-7/ADM细胞的存活率,即耐药敏感性。结果：与对照组比较,转染后Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2组细胞中Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。与对照组比较,经不同浓度阿霉素作用后,Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组细胞存活率明显降低（P<0.01）,阿霉素浓度为1.0 mg·L^-1时,2组细胞存活率分别为（48.15±6.28）%和（41.73±6.17）%,对阿霉素的敏感性明显增强。结论：Hiwi基因在MCF-7/ADM细胞中具有高效的靶向沉默,Hiwi基因沉默后的MCF-7/ADM细胞对阿霉素恢复敏感性。     

siRNA沉默COX-2基因对胶质瘤细胞放射敏感性的影响

目的 利用小分子RNA(small interfering RNA,siRNA)技术体外沉默人胶质瘤细胞COX-2基因表达,探讨其对放射敏感性的影响,以期为胶质瘤的治疗提供新的思路和方法。 方法 体外培养胶质瘤U251细胞,使用siRNA技术构建U251细胞COX-2基因沉默模型,Western blot检测转染后细胞COX-2蛋白表达情况,筛出最适序列。将实验分为对照组与转染组,分别予以2、4、6、8 Gy四个剂量组予以X线照射,实验重复3次,使用MTT法检测辐射后细胞增殖抑制情况,平板克隆形成实验检测细胞存活分数(SF)并通过单击多靶拟合曲线计算增敏比(SER),流式细胞术检测细胞凋亡情况。 结果 转染组COX-2蛋白表达情况较对照组均下降,其中以siRNA600序列降低最为明显,差异具有统计学意义(P<0.05),后续实验均以siRNA600序列进行转染。辐射后转染组的细胞增殖抑制率为(84.87±3.50)%、(63.62±0.35)%、(55.05±4.87)%、(36.85±3.00)%,较对照组增殖抑制作用明显增强,并随放射剂量增加而增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。辐射后的转染组SF低于对照组,且转染组D0为4.110,Dq为1.387,均低于对照组,对照组D0为6.908,Dq为2.772,放射增敏比SER为1.680,差异有统计学意义(P<0.05)。辐射后的转染组细胞凋亡率为(3.63±0.45)%、(6.08±0.87)%、(47.97±2.13)%、(59.56±3.07)%均高于对照组,且在6 Gy、8 Gy照射后升高更为明显。 结论 siRNA技术沉默人胶质瘤U251细胞COX-2基因表达可以提高细胞的放射敏感性,增加了放射后细胞的凋亡率及增殖抑制作用,降低了克隆形成率。      

RNA干扰survivin基因表达对肝癌细胞放射敏感性影响

目的探讨RNA干扰survivin基因表达对肝癌细胞放射敏感性的影响。方法构建针对人肝癌HepG2细胞survivin基因靶序列的shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-387。设置空白对照组(不加载体)、阴性对照组(加入pshRNA-survivin-NC)及siRNA转染组(加入pshRNA-survivin-387),用脂质体2000转染HepG2细胞,采用逆转录聚合酶链反应技术检测各组survivin基因mRNA表达水平。分别设置空白对照组、阴性对照组、siRNA转染组、X线照射组、siRNA转染+X线照射组,收集各组细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT法测定细胞存活分数。结果 siRNA转染组survivin基因mRNA表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有显著性(F=218.93,q=17.73、18.66,P<0.05)。siRNA转染+X线照射组细胞凋亡率明显高于其他各组,差异有显著性(F=1 421.83,q=13.81～57.48,P<0.05);siRNA转染组及X线照射组与空白组、阴性组比较,细胞凋亡率也明显提高(q=17.55～39.10,P<0.05)。siRNA转染+X线照射组细胞存活分数显著低于其他各组(F=2870.58,q=15.32～72.51,P<0.05);siRNA转染组及单纯X线照射组细胞存活分数与空白对照组、阴性对照组比较也明显降低(q=11.14～73.90,P<0.05)。结论 pshRNA-survivin-387转染能抑制survivin基因表达,诱导肝癌细胞凋亡,增强肝癌细胞的放射敏感性。     

Bcl-3在人乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的影响

目的: 探讨Bcl-3在乳腺癌中的表达及沉默后对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法: 选取80例乳腺癌组织及相应癌旁组织,采用免疫组织化学法检测其中Bcl 3蛋白表达,并分析癌组织中Bcl-3表达与临床病理参数间的关系;将乳腺癌MDA-MB-231细胞随机分为空白对照组(常规培养),阴性对照组(转染对照siRNA)和Bcl 3 siRNA组(转染Bcl-3 siRNA)。转染48 h后,免疫印迹法检测各组Bcl-3表达;MTT、平板克隆实验及流式细胞术分别检测各组细胞增殖能力、克隆形成能力和细胞凋亡。结果： Bcl-3蛋白在乳腺癌及相应癌旁组织中阳性表达率分别为72.5%和51.3%。乳腺癌组织中Bcl-3蛋白表达与组织学分级、淋巴结转移及Her 2表达呈正相关(P＜0.05),而与年龄、肿瘤大小、病理分型及雌、孕激素受体无关(P＞0.05)。空白对照组和阴性对照组Bcl-3表达水平明显高于Bcl 3 siRNA组(P均<0.01)。与空白对照组和阴性对照组比较,Bcl-3 siRNA组细胞增殖率和克隆形成率降低,细胞凋亡率增高(P均<0.01)。结论： Bcl 3在乳腺癌组织中呈高表达,其沉默后起抑癌作用,乳腺癌细胞增殖能力及克隆形成率降低、凋亡率增高。     

靶向livin的小分子干扰RNA联合表阿霉素对乳腺癌细胞ZR-75-30凋亡的影响

目的 利用RNA干扰技术阻断livin基因的表达,观察其联合表阿霉素对乳腺癌细胞ZR-75-30凋亡的作用.方法 体外化学合成靶向livin的小分子干扰RNA(siRNA),在脂质体(lipofectamineTM2000)的介导下转染人乳腺癌细胞ZR-75-30.荧光共聚焦显微镜下观察转染效率,半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后ZR-75-30细胞livin基因表达的变化,流式细胞术检测转染靶向livin的iRNA联合表阿霉素作用的ZR-75-30细胞的凋亡率.结果 靶向livin的siRNA可以有效特异地抑制ZR-75-30细胞livin基因的表达,在mRNA水平上其表达抑制率约为53.66%;在蛋白质水平其表达抑制率约为58.32%,转染靶向livin的siRNA 36h后,靶向livin的siRNA联合表阿霉素可以诱导(15.18±0.05)%的细胞凋亡.结论 靶向livin的siRNA能有效、特异地阻断livin基因的表达,阻断livin基因表达联合表阿霉素可促进ZR-75-30细胞的凋亡.     

siRNA靶向抑制CPB2基因对乳腺癌细胞TAFI表达及生长和转移的影响

目的探讨靶向羧肽酶B2(CPB2)基因的小干扰RNA(siRNA)对乳腺癌MDA-MB-231细胞凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)表达以及对乳腺癌细胞的生长和转移的影响。方法将细胞分为siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组、阴性对照组和空白对照组5组,设计并化学合成编码TAFI基因(CPB2)的特异性siRNA,用脂质体2000转染至MDA-MB-231细胞中,采用Western blot、RT-PCR分别检测各组TAFI蛋白及mRNA的表达,Transwell侵袭实验检测癌细胞转移侵袭能力,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活和生长情况。结果 siRNA抑制CPB2表达后,TAFI蛋白及其mRNA表达水平显著下降,siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组与阴性对照组比较细胞侵袭力和细胞生长都明显受到抑制(P<0.05)。结论靶向CPB2的siRNA可有效下调乳腺癌细胞MDA-MB-231中TAFI蛋白及其mRNA表达水平,降低肿瘤细胞的侵袭力,抑制细胞的生长和转移。     

沉默Smad4基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究降低Smad4表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞中Smad4 mRNA表达水平;Smad4-shRNA与Scramble-shRNA质粒分别稳定转染Smad4高表达MCF-7细胞,实验分为未转染MCF-7细胞组（正常对照组）,采用Smad4基因沉默组和Scramble组（阴性对照组）;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法检测增殖相关基因CDKN1A、CDK1和CDK2以及凋亡相关基因Suvivin、bcl-2、caspase3和caspase9 mRNA表达水平。结果：各组细胞增殖能力比较差异无统计学意义（P > 0.05）,各组细胞CDKN1A、CDK1和CDK2 mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P > 0.05）;与正常对照组和阴性对照组比较,Smad4基因沉默组细胞凋亡率明显降低（P < 0.01）,Smad4基因沉默组细胞Suvivin和bcl-2 mRNA表达水平明显升高（P < 0.01）,caspase3和caspase9 mRNA表达水平明显降低（P < 0.05）。结论：Smad4可以通过下调Suvivin和bcl-2的表达、上调caspase3和caspase9表达引起细胞凋亡。     

乙肝病毒X基因参与肝细胞脂肪变性的作用及机制的初步研究

目的 探讨沉默HBx基因对HepG2.2.15细胞脂质代谢相关基因表达的影响.方法 设立空白对照组(HepG2.2.15细胞)、阴性对照组(HepG2.2.15细胞转染阴性HK质粒)、shHBx转染组(HepG2.2.15细胞转染shHBx质粒)和HepG2组(HepG2细胞).构建针对HBx基因的shHBx质粒,转染...     

HDAC1基因小干扰RNA对人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞放射敏感性影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)抑制组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)表达对人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞放射治疗敏感性的作用及可能机制。方法体外合成针对HDAC1基因的siRNA,脂质体法转染人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞,应用蛋白印迹法检测细胞HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4的表达,应用实时定量聚合酶链反应方法检测HDAC1基因、核因子-κB(NF-κB)基因和p53蛋白调控的凋亡调控因子(PUMA)基因mRNA表达。应用6 MV直线加速器,以0、2、4、6、8 Gy不同剂量X线照射细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及克隆形成实验检测细胞放射敏感性。结果人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞经转染HDAC1基因siRNA后,正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组HDAC1基因mRNA表达分别为10.21±0.42、9.48±0.41和4.92±0.41;蛋白表达分别为0.81±0.14、0.79±0.16和0.42±0.18,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞HDAC1基因mRNA和蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05);正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组乙酰化组蛋白H4表达分别为0.76±0.21、0.75±0.20和0.30±0.19,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组乙酰化组蛋白H4表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组细胞NF-κB基因mRNA表达分别为6.24±0.52、6.31±0.61和4.22±0.56,PUMA基因mRNA表达分别为3.84±0.26、3.69±0.29和5.42±0.31,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞NF-κB基因mRNA降低,PUMA基因mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。经X线照射后,正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组凋亡率分别为(16.25±2.64)%、(15.41±2.97)%和(29.62±3.11)%,存活分数(SF2)值分别为0.576±0.149、0.564±0.142和0.226±0.151,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞凋亡率增加,SF2值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HDAC1基因siRNA能够增强人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞对放射线损伤的敏感性。抑制人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞HDAC1基因表达,增加乙酰化组蛋白H4表达,下调NF-κB基因表达和上调PUMA基因表达可能是其作用机制。     

HDAC2 siRNA转染对人胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨RNA干扰沉默组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)基因表达对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 培养人胰腺癌PaTu8988细胞株,并将其随机分为5组:空白对照组,20 nmol／L HDAC2 siRNA阴性组,40 nmol／L HDAC2 siRNA阴性组,20 nmol／L HDAC2 siRNA组,40 nmol／L HDAC2 siRNA组。合成针对HDAC2基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),利用阳离子脂质体将HDAC2 siRNA瞬时转染人胰腺癌PaTu8988细胞,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测HDAC2基因及蛋白的表达;MTT比色法检测细胞的增殖率;流式细胞术测定细胞凋亡率。结果: 与空白对照组和阴性siRNA 组对比,HDAC2 siRNA组的HDAC2基因和蛋白的表达水平均明显下降(P均<0.05),细胞增殖率减慢(P<0.01),凋亡率明显升高(P<0.01)。结论: 采用RNA干扰沉默人胰腺癌细胞HDAC2基因表达,可抑制癌细胞增殖和诱导其凋亡。     

小干扰RNA沉默MAT1基因治疗胰腺癌的实验研究

目的了解体外转录法合成的小干扰RNA（siRNA）沉默MAT1基因对胰腺癌的体内体外抗癌效应。方法用siPORT-脂质体（1ipid）中性阳离子脂质体转染由体外转录法合成、Cy3荧光标记的双链siRNA人胰腺癌BxPC3细胞,观察对胰腺癌细胞生长和细胞周期曲线的影响,检测MAT1基因被siRNA沉默后mRNA和蛋白质的表达水平。在裸鼠胰腺癌皮下移植瘤瘤体内直接注射siRNA观察抑瘤效应。结果合成的4条MAT1-siRNA序列中有一半可显著抑制BxPC3细胞的生长。体外转染MAT1-siRNA72h后,BxPC3细胞生长抑制率达34．9％（P〈0．01）;83．9％的BxPC3细胞滞留于G。／G,期,而空白对照组仅59．86％（P〈0．01）。体外转染MAT1-siRNA48h后MAT1-mRNA水平下调了80．12％,72h后MAT1蛋白质水平下调了50．12％,与各对照组相比差异均有统计学意义（均P〈0．01）。MAT1-siRNA注射组裸鼠移植瘤重量和体积均明显低于对照组（均P〈0．05）,抑瘤率达42．53％。结论siRNA介导的MAT1基因沉默在体外实验中显著抑制了胰腺癌细胞的生长,在体内实验中对裸鼠胰腺癌皮下移植瘤产生明显的抑瘤效应。     

siRNA干扰整合素β4的表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的采用RNA干扰（Small interference RNA,siRNA）技术抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞中整合素β4（integrinβ4）基因表达,观察其对细胞侵袭和迁移能力的影响。方法选用MDA-MB-231乳腺癌细胞为研究对象,应用siRNA技术沉默癌细胞Integrinβ4 mRNA的表达,Real-time PCR和Western blotting方法分别检测未转染Integrinβ4 siRNA的乳腺癌细胞组（简称空白对照组）及转染Integrinβ4 siRNA的乳腺癌细胞组（简称Integrinβ4 RNA干扰组）的Integrinβ4 mRNA和蛋白表达水平;Transwell实验检测两组细胞的侵袭及迁移能力。结果与空白对照组相比,Integrinβ4 RNA干扰组Integrinβ4的mRNA及蛋白表达水平分别降低了86%（P〈0.01）和89%（P〈0.01）,细胞侵袭和迁移能力下降（P〈0.05）。结论应用siRNA干扰技术抑制Integrinβ4表达可使MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力降低,提示Integrinβ4在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用。     

抑制NBS1表达对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响

目的 探讨siRNA抑制NBS1基因表达对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响。方法通过构建NBS1干扰质粒和阴性空载质粒,并通过腺病毒载体感染MDA-MB-231细胞,Western印迹法明确NBS1基因受干扰情况;CCK-8法检测转染质粒后对MDA-MB-231细胞体外增殖能力的影响;流式细胞法检测感染后实验组和阴性对照组MDA-MB-231细胞的凋亡情况。结果 Western印迹法检测结果表明实验组NBS1蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);CCK-8实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组细胞增殖能力受到抑制(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,实验组较阴性对照组凋亡率上升(P<0.05)。结论抑制NBS1基因的表达可以抑制三阴性乳腺癌细胞增殖,并促进癌细胞的凋亡。