高脂高糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织TLR4和MyD88 mRNA的表达

目的探讨Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)在高脂高糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织中的表达及其意义。方法选取SD大鼠20只,随机分为两组,模型组SD大鼠给予高脂高糖饲料喂养,正常组给予普通饲料喂养,10周末分别进行如下检测:1计算肝指数;2HE染色,光镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变;3应用RT-PCR法检测大鼠肝组织TLR4、MyD88 mRNA的表达。结果模型组的肝指数较正常组明显增加(P0.01);模型组的NAFLD活动度计分与正常组比较差异有统计学意义(P0.01);模型组大鼠肝组织TLR4和MyD88的mRNA表达水平与正常组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论持续10周的高脂高糖饮食喂养可以诱导NAFLD大鼠模型,模型组大鼠肝组织TLR4 mRNA和MyD88 mRNA表达升高,在肝细胞炎症改变中起重要作用。     

TLR4在益生菌治疗小鼠Hp感染中的作用

目的 比较BALB/c小鼠在幽门螺旋杆菌(Hp)感染后和用益生菌治疗后胃黏膜内Toll样受体4(TLR4)、MyD88和IL-1β在基因和蛋白水平上的表达变化,探讨Toll样受体4信号通路在益生菌治疗Hp感染中的作用.方法 60只感染Hp的BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予治疗,第2组予抗生素三联疗法治疗,第3组予乳酸杆菌治疗,另设20只正常小鼠为对照组.取各组小鼠的胃黏膜标本,用RT-PCR和Western blotting的方法 半定量检测TLR4、MyD88、IL-1β在基因和蛋白水平上的表达.结果 ①正常小鼠胃黏膜内无TLR4、MyD88和IL-1β表达.②益生菌治疗组小鼠的TLR4、MyD88和IL-1β均高于抗生素治疗组,但二者均低于Hp感染组.③各组小鼠TLR4与MyD88的表达均呈正相关.结论 TLR4信号通路参与了Hp的致病机制和益生菌治疗Hp的机制,其信号转导均可能是通过MyD88途径.     

MyD88、TLR4和STAT3在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的 探讨TLR4、MyD88、STAT3在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义.方法 采用免疫组化方法检测TLR4、MyD88、STAT3在82例肝癌组织及其对应的癌旁肝组织中的表达水平.结合肝癌临床病理指标分析相关性.结果 TLR4、MyD88、STAT3蛋白在癌组织中的阳性表达率为76.8％(63/82)、67.1％(55/82)、69.5％(57/82),高于在癌旁肝组织中的阳性表达率25.9％( 12/82)、12％(9/82)、8.5 ％(7/82),差异均具有统计学意义(P＜0.05);在肝癌组织中TLR4、MyD88、STAT3的阳性表达呈正相关[TLR4和MyD88 (r=0.612,P =0.011),MyD88和STAT3(r=0.578,P =0.002),TLR4和STAT3 (r=0.542,P=0.016)]. MyD88和STAT3表达与性别、分化程度、有无HBV感染和肝硬化有关(P＜0.05),而与肿瘤大小、有无静脉浸润无关(P＞0.05).结论 TLR4、MyD88、STAT3表达上调,导致肝癌细胞增殖和免疫逃逸是肝癌发生发展的重要分子机制.     

青蒿琥酯对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的神经保护作用及细胞自噬的影响

目的探讨青蒿琥酯对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠神经保护作用及细胞自噬影响。方法选择48只雌性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、青蒿琥酯低剂量组、高剂量组共4组,每组12只。采用MOG35-55多肽制备EAE模型,青蒿琥酯低剂量组、高剂量组分别予以青蒿琥酯(10 mg/(kg·d),50 mg/(kg·d))腹腔注射,连续10 d,观察小鼠发病情况。脑组织行luxol fast blue(LFB)染色观察脱髓鞘情况,采用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ的表达。结果空白组小鼠均未发病,模型组、青蒿琥酯各剂量组发病小鼠出现不同程度的尾部下垂、行走不稳、后肢无力等。青蒿琥酯各剂量组较模型组相比,发病潜伏期、高峰期延迟、神经功能评分减低,高剂量组较低剂量组作用明显(P0.05),低剂量组和高剂量组发病高峰期比较无统计学意义(P0.05)。②LFB染色见模型组脑组织髓鞘排列疏松、紊乱、低染,青蒿琥酯各剂量组髓鞘染色情况好转。③Western blot检测模型组与空白组相比,LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ条带光密度值及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均增加(P0.01);青蒿琥酯各剂量组较模型组相比,LC3I、LC3Ⅱ条带光密度值及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均减小(P0.01),高剂量组较低剂量组作用明显(P0.05)。结论青蒿琥酯对EAE小鼠具有神经保护作用,减轻脑组织脱髓鞘情况,且作用机制可能与通过下调LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ减轻细胞自噬有关。     

青蒿琥酯抗中暑内毒素血症的机制探讨

目的 探讨中药青蒿衍生物青蒿琥酯抗中暑内毒素血症的机制.为该药物在重症中暑治疗中的运用打下基础.方法 在干球温度(34.5±0.5)℃,相对湿度(60±5)%的条件下建立小鼠中暑模型,将40只小鼠随机分为青蒿琥酯组、生理盐水组、高温对照组和止常对照组.用黄嘌呤氧化酶法检测血中SOD的含量.用TBA法检测MDA的含量,用电镜观察肝脏的病理变化.结果 青蒿琥酯组小鼠血中SOD含量和MDA含量分别高于生理盐水组,低于高温对照组(P<0.05),而与正常对照组相近;青蒿琥酯组的肝组织损伤明显轻于生理盐水及高温对照组.结论 青蒿琥酯具有抗脂质过氧化,保护重要脏器功能的作用,是其抗中暑内毒素血症的机制之一.     

二氢杨梅素对小鼠葡聚糖硫酸钠结肠炎的疗效

目的 观察二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的效果并探讨其机制.方法 60只BALB/c小鼠采用随机数字表法分为正常组,模型组,DHM低剂量[50 mg/(kg·d)]、中剂量[100 mg/(kg ·d)]、高剂量[200 mg/(kg·d)]组,5-氨基水杨酸[5-amino saliciylic acid,5-ASA,50 mg/(kg·d)]组.分组当日给予正常组小鼠蒸馏水自行饮用,其余组小鼠给予4％葡聚糖硫酸钠(DSS)水溶液7d诱导急性UC模型.于饮用DSS当日开始,用DHM各剂量组及5-氨基水杨酸组按各组拟定剂量分别进行灌胃处理,连续给药14 d.对比各组疾病活动指数(DAI)、结肠长度、脾脏指数的变化、结肠组织学评分,肠组织TLR2、TLR4和NF-κB的活性以及炎性细胞因子IL-1β、TNF-oα、IL-6表达及MPO、NO、SOD的活性变化.结果 与模型组比较,DHM可显著降低结肠组织中TLR2、TLR4、NF-κB的表达,减少炎性因子如IL-1β、TNF-oα、IL-6水平,同时还能够减少肠组织中MPO、NO活性及增加SOD的活性.其中DHM高剂量组优于低、中剂量组,差异有统计学意义(P＜0.05),治疗效果最明显,其与5-氨基水杨酸组相比差异无统计学意义(P＞0.05),治疗效果相当.结论 DHM可显著缓解DSS诱导的小鼠结肠炎症,其作用机制可能与抗炎、抗氧化有关.     

青蒿素及其衍生物对糖尿病小鼠血糖及炎症因子的影响

目的：　探讨青蒿素及青蒿素衍生物对糖尿病小鼠血糖、体质量及炎症因子表达的影响。方法：　正常对照组为4~6周龄健康db/m小鼠5只,顺应性喂养;实验组为4~6周龄健康db/db小鼠20只,随机分为4组：安慰剂组、青蒿素组、蒿甲醚组、青蒿琥酯组,每组5只。安慰剂组每天给予羟甲基纤维素灌胃,干预组分别给予青蒿素[200 mg/（kg·d）]、蒿甲醚[200 mg/（kg·d）]、青蒿琥酯[200 mg/（kg·d）]灌胃,共干预10周。每周测1次小鼠体质量及空腹血糖,每2周测1次随机血糖。取小鼠血清,ELISA检测血清中炎症因子：细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1/CD54）、白介素（interleukin,IL）-6、IL-8、细胞瘦素（leptin,LEP）、核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）、IL-1β水平变化。结果：　①与db/m组相比,安慰剂组db/db小鼠空腹及随机血糖明显升高。与安慰剂组相比,青蒿素、蒿甲醚及青蒿琥酯组小鼠空腹及随机血糖明显降低。②与db/m组相比,db/db组小鼠体质量明显增加。与安慰剂相比,青蒿素可以明显降低糖尿病小鼠体质量,而蒿甲醚、青蒿琥酯对糖尿病小鼠无明显减重作用。③与db/m组相比,安慰剂组db/db小鼠的炎症因子ICAM-1/CD54、IL-6、IL-8、LEP、NF-κB、IL-1β水平均升高。与安慰剂相比,青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯明显降低糖尿病小鼠炎症因子ICAM-1/CD54、IL-6、IL-8、LEP、NF-κB、IL-1β水平。比较而言,青蒿琥酯抗炎能力最强,炎症因子水平明显降低,青蒿素次之,蒿甲醚抗炎能力相对较弱。结论：　青蒿素、蒿甲醚及青蒿琥酯可以明显降低糖尿病小鼠血糖和炎症因子的表达,且青蒿素可以减轻糖尿病小鼠体质量,而蒿甲醚和青蒿琥酯无明显减重作用。综合来看,青蒿素具有减重降糖作用,治疗效果更为显著。     

五倍子酯提物抗流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤作用机制

目的探索Toll样受体4(TLR4)在A型流感病毒所致小鼠急性肺损伤中的作用,进一步探讨五倍子酯提物的干预机制。方法实验设正常组、模型组、五倍子酯提物组和奥司他韦组,以流感病毒小鼠肺适应株A/PR/8/34滴鼻感染C57BL小鼠,建立小鼠急性肺损伤模型。病毒感染后第1天开始予以相应干预,共6 d。分别于第2、4、6天处理动物。观察肺组织大体解剖学变化,肺组织切片病理学变化,ELISA法检测肺泡灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平,Western blot法检测肺组织中TLR4、MyD88、TRAF6的蛋白表达。结果流感病毒感染小鼠后,模型组小鼠肺脏充血、水肿,外观呈暗褐色,肺泡间质水肿、肺泡腔变小,内有大量炎细胞浸润,肺泡灌洗液中IL-6、IL-10水平及肺组织中TLR4、MyD88、TRAF6蛋白表达升高,与正常组相比,差异有显著统计学意义(P0.01)。与模型组相比,五倍子酯提物组能减轻肺部病变,降低肺泡灌洗液中IL-6、IL-10水平及肺组织中TLR4、MyD88、TRAF6蛋白表达水平,差异有显著统计学意义(P0.01)。结论五倍子酯提物可通过抑制TLR4的活化及下游MyD88依赖的转导路径,减少炎性因子的转录生成,减轻肺部炎症,减缓急性肺损伤进程。     

连翘苷对H1N1病毒株感染小鼠的作用

目的 研究连翘苷对H1N1病毒株感染小鼠的影响。方法 60只H1N1病毒株感染小鼠经随机数字法分为感染组、连翘苷组、连翘苷+罗唑利宾(Loxoribine)[Toll样受体7(TLR7)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路激活剂]组,各20只;20只健康小鼠滴鼻等体积0.9%氯化钠溶液,设为正常组。流式细胞仪检测外周血CD4＋、CD8＋T淋巴细胞占比;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测肺组织病毒相对表达量;Western blot法检测肺组织TLR7、MyD88蛋白表达量。结果 与感染组比较,连翘苷组外周血CD8＋T淋巴细胞占比、肺组织病毒相对表达量、TLR7、MyD88蛋白表达量降低,外周血CD4＋T淋巴细胞占比、CD4＋/CD8＋升高(P＜0.05);与连翘苷组比较,连翘苷+Loxoribine组外周血CD8＋T淋巴细胞占比、肺组织病毒相对表达量、TLR7、MyD88蛋白表达量升高,外周血CD4＋T淋巴细胞占比、CD4＋/CD8＋降低(P＜0.05)。结论 连翘苷可抑制H1N1病毒株感染小鼠病毒复制,改善肺功能及免疫功能,可能通过抑制TLR7/MyD88信号通路活性降低炎性细胞因子水平,从而保护H1N1感染小鼠。     

青蒿琥酯诱导人白血病细胞K562凋亡的实验研究

目的观察青蒿琥酯对人白血病细胞株K562抑制增殖和凋亡作用.方法通过MTT显色法观察不同浓度青蒿琥酯对K562的生长抑制作用,通过Annexin V/PI双标记法检测青蒿琥酯对K562细胞的凋亡诱导作用.结果青蒿琥酯在1～8μg/ml浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度的依赖性;在2～8μg/ml浓度范围内青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡具有明显的量效关系;4μg/ml浓度组的青蒿琥酯在0～72h内,诱导K562凋亡具有明显的时效关系.结论青蒿琥酯在体外能抑制K562细胞的增殖,可能是通过诱导其发生凋亡而起作用.     

磷酸腺苷激活的蛋白激酶在慢性应激诱发小鼠非酒精性脂肪肝中的作用

目的 探讨磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)及其激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(AICAR)在慢性应激诱发小鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)中的作用.方法 建立小鼠慢性应激模型,设对照组、应激组、应激加AICAR给药组和AICAR给药组,每组6只.采用ELISA法检测小鼠血浆促炎性细胞因子(肿瘤坏死因子a,γ干扰素)浓度,采用自动生化分析仪检测小鼠血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆固醇、三酰甘油、游离脂肪酸的水平,采用苏木精-伊红染色和油红O染色检测肝细胞脂肪变性,采用蛋白质印迹法检测肝组织AMPK蛋白表达;然后用AICAR处理慢性应激小鼠并检测上述指标的变化.结果 慢性应激导致小鼠肝细胞脂肪变性,肝功能损害(ALT、AST水平升高,P＜0.01),血浆促炎性细胞因子浓度升高(P＜0.05),血浆游离脂肪酸水平升高(P＜0.01)以及肝组织AMPK蛋白表达降低(P＜0.01).AICAR改善了肝细胞脂肪变性,并缓解了上述指标的变化.结论 慢性应激可能通过AMPK信号通路诱发NAFLD,AMPK激动剂AICAR可缓解慢性应激导致的NAFLD.     

滋肾丸含药血清对大鼠膀胱平滑肌细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

目的 观察滋肾丸含药血清对脂多糖(LPS)刺激的大鼠膀胱平滑肌细胞表达Toll样受体4(TLR4)、Toll样受体5(TLR5)及其下游信号转导通路髓样分化蛋白(MyD88),以及MYD88非依赖型途径激活核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响.方法 用LPS(1μg/mL)刺激大鼠膀胱平滑肌细胞株,同时分别给予滋肾丸含药血清5.54、27.7 g/(kg.U)进行干预,Western-blot方法测定TLR4,TLR5和下游通路相关蛋白的表达,分析评价滋肾丸含药血清的现代药效学基础.结果 滋肾丸含药血清27.7 g/(kg.U)对LPS刺激的TLR4、TLR5及其下游通路的MyD88和NF-κB有抑制作用,滋肾丸含药血清5.54 g/(kg.U)对LPS刺激的病理性升高无抑制作用.结论 滋肾丸的药效学作用可能与抑制TLR4、TL R、MyD88和NF-κB蛋白表达有关,且与剂量呈依赖性.     

疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞PI3K p85α蛋白表达的影响

目的观察疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝细胞磷脂酰肌醇-3-激酶p85α（PI3K p85α）表达的影响。方法以高脂饮食12周建立大鼠NAFLD模型后,造模组大鼠再随机分为模型组、疏肝组、健脾组、综合组和自然恢复组等5组。治疗组分别给予相应药物灌胃,其他组给予等量蒸馏水灌胃,模型组继续高脂饮食,其余均予基础饲料喂养。治疗8周后,用3%戊巴比妥腹腔麻醉,腹主动脉取血,全自动生化仪检测血脂及肝功,稳态模型法评价胰岛素抵抗程度,光镜下观察各组肝脏病理改变,免疫组化方法检测肝细胞内PI3K p85α蛋白的表达情况。结果与模型组相比,药物治疗各组及自然恢复组肝脏脂变程度明显减轻,肝功、血脂、胰岛素抵抗均有显著改善（P〈0.05或P〈0.01）,肝细胞内PI3K p85α蛋白的表达明显减少（P〈0.05）。与自然恢复组相比,药物治疗各组肝功、血脂、血糖的改善无显著差异,但肝脏脂变程度减轻,胰岛素抵抗指数明显下降（P〈0.05）,肝细胞内PI3K p85α蛋白的表达显著降低（P〈0.05）。结论疏肝健脾方药对高脂饮食诱导的大鼠NAFLD有较好的治疗作用,其机制可能是与其降低肝细胞PI3K p85α的表达有关。     

地黄饮子通过调控miR-34a-5p影响细胞凋亡及炎性反应治疗阿尔茨海默病的机制

目的观察地黄饮子治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的作用机制。方法采用大鼠侧脑室注射Aβ1-42寡聚体法建立AD动物模型。按照随机数字表法将75只SD雄性大鼠分为正常组、模型组、微小核糖核酸-34a-5p(miR-34a-5p)抑制剂组(80.0 mg/kg)、地黄饮子高剂量组(86.4 g/kg)、地黄饮子低剂量组(21.6 g/kg),每组15只,连续给药4周。采用Morris水迷宫法检测大鼠空间学习记忆能力,TUNEL法观察大鼠海马病理改变,Real-time PCR法检测大鼠海马miR-34a-5p、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)、Toll样受体4(TLR4)、髓样细胞分化标志物88(MyD88)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期时间延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05...     

UC患者PBMC中TLR4、NF-κB水平的变化及其临床意义

目的 探讨溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单核细胞(PBMC)中TOLL样受体(TLR)4、NF-κB水平的变化及在UC发病中的可能机制.方法 选取武警浙江省总队医院嘉兴医院消化科2014年1月至2015年1月收治的UC患者30例作为观察组,另选取该院体检科健康体检者10例作为对照组.采用流式细胞仪检测外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率,RT-PCR检测TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB(P65) mRNA表达水平,Western blot检测TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平.结果 观察组外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率明显高于对照组(P＜0.05);对照组TLR4、MyD88、NF-κB(P65) mRNA及蛋白水平明显低于观察组(P＜0.01);TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平与UC严重程度呈正相关.结论 UC患者PBMC中TLR4、NF-κB明显增高,临床可通过检测TLR4、NF-κB水平判断UC的发展程度.     

利拉鲁肽对人HepG2肝细胞脂代谢的影响及作用机制

目的:建立HepG2肝细胞脂肪变性模型,了解利拉鲁肽是否可改善HepG2细胞内脂代谢状态,并对相关机制进行初步探讨?方法:软脂酸钠诱导建立HepG2肝细胞脂肪变性模型,并给予利拉鲁肽干预?油红O染色确定HepG2肝细胞脂肪变性模型的建立?Western blot检测HepG2 中脂质合成和分解关键酶蛋白水平的变化情况及HepG2 中PI3K信号通路活化情况?采用PI3K信号通路抑制剂预处理HepG2 细胞,观察PI3K信号通路在软脂酸钠诱导建立HepG2肝细胞脂肪变性中的作用?结果:油红O染色结果显示模型建立成功?Western blot结果显示,软脂酸钠诱导可显著升高HepG2中固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein1c,SREBP1c)?脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)的蛋白水平,降低脂肪甘油三酯脂酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)的蛋白水平(P < 0.01),并上调HepG2中PI3K信号通路活化水平;与软脂酸钠组相比,利拉鲁肽干预可显著降低HepG2中SREBP1c?FAS 的蛋白水平,升高ATGL的蛋白水平,并抑制HepG2中PI3K信号通路活化水平;阻断HepG2中的PI3K信号通路后,软脂酸钠诱导HepG2脂肪变性的能力显著降低(P < 0.01)?结论:利拉鲁肽可通过调节HepG2中的PI3K信号通路,进而改善HepG2细胞的脂代谢情况?     

电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞TLR4和转接蛋白MyD88表达的影响

目的：观察电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞TLRs介导的信号传导通路中TLR4和转接蛋白MyD88表达的影响,探讨低剂量辐射诱导机体免疫效应的机制。方法：昆明系雄性小鼠160只。时间-效应实验60只,随机分为假照组、照射后4、8、16、24和48 h实验组,每组10只;剂量-效应实验100只,随机分为假照组、0.050、0.075、0.100、0.200、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 Gy照射组,每组10只;X 线全身照射 (WBI) 后,采用流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞中TLR4和MyD88阳性细胞百分率。结果：时间-效应实验表明,与假照组比较,0.075 Gy 照射后TLR4和MyD88表达率在4 h后开始增高,分别在16 h和4 h达高峰（P<0.05或P<0.01,）;2.000 Gy 照射后,TLR4和MyD88表达率在4 h后开始增高, 16 h达高峰（P<0.01）。剂量-效应实验表明,与假照组比较,各剂量照射组 TLR4和MyD88表达率均随照射剂的增加递增,在0.075 Gy 开始明显增加（P<0.05）,在2.000 Gy 照射后达高峰（P<0.01）。结论：电离辐射使小鼠腹腔巨噬细胞TLR4和转接蛋白MyD88表达增高,促进小鼠的免疫反应,启动固有免疫及适应性免疫。     

miR-146a经TLR4/MyD88途径加速巨噬细胞迁移所致动脉硬化的作用机制

目的 探讨微小RNA-146a(miR-146a)经Toll样受体4(TLR4)/髓系分化因子88蛋白(MyD88)途径调控巨噬细胞迁移所致动脉硬化的具体机制。 方法 RAW264.7巨噬细胞分为空白组、ox-LDL组、miR-146a mimic组、miR-146a inhibitor组、shRNA-MyD88组、shRNA-NC组、shRNA-MyD88+miR-146a mimic组、shRNA-MyD88+miR-146a inhibitor组,除空白组,其他各组均用50 mg/L ox-LDL进行干预;采用Western blotting法检测TLR4、MyD88、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达水平。采用qPCR法检测miR-146a、TLR4、MyD88、NF-κB、IL-6基因表达水平。采用Transwell法检测巨噬细胞迁移能力。 结果 (1)ox-LDL组细胞内TLR4、IL-6蛋白含量及巨噬细胞迁移率均高于空白组(P均<0.01),miR-146a低于空白组(P<0.01);(2)miR-146a mimic组细胞TLR4 mRNA相对表达量及蛋白含量、巨噬细胞迁移率低于ox-LDL组,miR-146a mRNA相对表达量高于ox-LDL组(P均<0.01);miR-146a inhibitor组细胞TLR4 mRNA相对表达量及蛋白含量、巨噬细胞迁移率高于ox-LDL组,miR-146a mRNA相对表达量低于ox-LDL组(P均<0.01);(3)shRNA-MyD88组MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量、巨噬细胞迁移率低于ox-LDL组(P<0.01),miR-146a、TLR4表达无明显差异(P>0.05);shRNA-MyD88+miR-146a mimic组miR-146a表达高于shRNA-MyD88组,TLR4蛋白含量低于shRNA-MyD88组(P<0.01),MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量表达、巨噬细胞迁移率与shRNA-MyD88组无明显差异(P>0.05);shRNA-MyD88+miR-146a inhibitor组miR-146a表达低于shRNA-MyD88组,TLR4蛋白含量表达高于shRNA-MyD88组(P<0.01),MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量表达、巨噬细胞迁移率与shRNA-MyD88组无明显差异(P>0.05)。 结论 miR-146a是动脉粥样硬化的保护性因子,通过拮抗TLR4/MyD88途径调控炎症因子分泌进而抑制巨噬细胞迁移所致动脉粥样硬化进程,为动脉粥样硬化的防治提供新的治疗靶点。     

TLR4/MyD88/NF-κB 信号通路对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的影响

  目的  研究TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺（methamphetamine,MA）依赖的条件性位置偏好（conditioned place preference,CPP）大鼠海马的影响,同时采用特异性抑制剂TAK-242抑制Toll样4受体（Toll-like receptor 4,TLR4）,减轻MA依赖诱导的海马神经炎症。  方法  建立MA（10 mg/kg,ip,14 d）依赖大鼠CPP模型,分别为生理盐水组、MA组、TAK-242组、MA+TAK-242组。TAK-242组和MA+TAK-242组先分别腹腔注射抑制剂TAK-242（3 mg/kg）,1h后MA+TAK-242组再腹腔注射MA（10 mg/kg）。采用Western Blot实验和采用荧光定量PCR实验检测MA依赖CPP大鼠海马中TLR4、MyD88、TRAF6、IκB-α、p-IκB-α、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白的表达和mRNA表达。  结果  与生理盐水组相比,MA组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均升高（P < 0.001或P < 0.01）,IκB-α的蛋白和mRNA表达下降（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65的表达升高（P < 0.01或P < 0.05）;与MA组相比,MA+TAK-242组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均下降（P < 0.001、P<0.01或P < 0.05）,IκB-α的蛋白和mRNA表达升高（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65表达下降（P < 0.01或P < 0.05）。  结论  MA依赖可通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,诱导CPP大鼠海马神经炎症的发生,采用特异性TLR4抑制剂可以减轻MA诱导的神经炎症。     

复方薏荷茶对肥胖小鼠改善胰岛素抵抗的调节机制研究

研究复方薏荷茶对C57BL/6J肥胖小鼠改善胰岛素抵抗的调节作用。将32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:空白组、模型组、复方薏荷茶低浓度组和高浓度组。空白组给予标准饲料,其余组给予高脂饲料造模饲养6周。6周后给药组每日分别灌胃复方薏荷茶40,20 mg/kg。第11周尾静脉取血测定血糖浓度,第12周测定血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量。取肝脏组织分别用HE和油红O染色,免疫组化法测定肝脏组织中GLUT4蛋白的表达量,Western blot法测定脂肪组织中PI3K,Akt和GLUT4蛋白的表达量。结果显示,复方薏荷茶组与模型组相比可显著降低肥胖小鼠的体质量,提高对葡萄糖的耐受量,降低血清中的TC、TG、LDL-C水平,改善肝脏组织病变,提高脂肪组织中PI3K,Akt,GLUT4和肝脏组织中GLUT4蛋白的表达量。实验结果表明,复方薏荷茶具有改善血糖和血脂的作用,可减轻肝脏组织中的脂肪堆积,从PI3K-Akt-GLUT4通路上调节组织对葡萄糖的利用,对肥胖小鼠胰岛素抵抗有较好的调节作用。