RNA沉默Pin1表达对乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的应用RNA干扰技术沉默Pinl表达后,观察其对乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法采用脂质体介导法将Pinl干扰片段PinlsiRNA和对照片段controlsiRNA转染入乳腺癌细胞系MDA—MB一23l后,利用RT—PCR和Westernblot法检测Pinl基因在mRNA和蛋白水平的表达情况,并应用MTT法、Transwell法和AnnexinV—FITC／PI试剂盒及流式细胞仪技术分析检测Pinl对MDA—MB一23l细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果Pinl在乳腺癌细胞系中高表达。与未处理组及转染对照片段controlsiRNA组相比,沉默Pinl表达后,PinlmRNA（P〈0．05）和蛋白（P〈0．05）表达均明显下降,细胞生长增殖能力[P〉0．05（第1天）,P〈0．01（第2—4天）]减弱,细胞侵袭数目（6．61±0．53,P〈0．05）减少,细胞凋亡率（31．5％±3．06％,P〈0．05）显著增加。结论沉默Pinl表达后可抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭,促进乳腺癌细胞凋亡。     

敲减USP25对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨乳腺癌细胞中敲减泛素特异性蛋白酶25(USP25)后细胞生物学行为的改变。方法:采用慢病毒载体构建6条shRNA-USP25干扰序列(LV-shRNA-USP25-1～LV-shRNA-USP25-6),分别转染乳腺癌MCF-7细胞以干扰USP25的表达,并检测敲减效率,筛选出最佳干扰序列用于实验。采用CCK8试剂盒法、Transwell侵袭实验、流式细胞术检测敲减USP25后乳腺癌细胞增殖、侵袭能力及凋亡的变化。结果:KD1组(转染LV-shRNA-USP25-1组)为干扰效率最高的序列,USP25蛋白和mRNA的敲减率分别为57.8%、58.3%(P<0.001);敲减USP25后乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭能力受到抑制,且出现明显凋亡(P<0.001)。结论:USP25可能与乳腺癌细胞的增殖、侵袭及凋亡有密切关系,其可能在乳腺癌的恶性进展中扮演着重要角色。     

妊娠糖尿病患者血清microRNA-21调节Bcl-2/Caspase-9对滋养层细胞生物学行为的影响

目的 探讨妊娠糖尿病（GDM）患者血清microRNA-21（miR-21）表达变化及其对滋养层细胞生物学行为的作用机制。方法 选取2019年1月—2020年10月三亚市妇幼保健院收治的66例GDM孕妇及同期体检且孕周相近的38例健康孕妇作为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测血清miR-21 mRNA表达水平,microRNA转染JAR细胞系构建Control、miR-21 NC、miR-21、miR-21 inhibitor NC和miR-21 inhibitor组细胞。采用CCK-8法检测细胞活力,Brdu检测细胞增殖,Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭,TUNEL法检测细胞凋亡;采用Western blotting检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase 9、E-cadherin及Vimentin蛋白表达。结果 研究组患者miR-21 mRNA相对表达量及FPG、HbA1c水平较对照组高（P <0.05）。miR-21组细胞miR-21 mRNA相对表达量高于Control组（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞 mRNA相对表达量低于Control组（P <0.05）。CCK-8法检测结果显示,miR-21组细胞活力较Control组下调（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞活力较Control组上升（P <0.05）。miR-21组细胞增殖能力较Control组减弱（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞增殖能力较Control组增强（P <0.05）。miR-21组细胞凋亡率较Control组升高（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞凋亡率较Control组降低（P <0.05）。miR-21组的穿膜细胞数低于Control组（P <0.05）,miR-21 inhibitor组的穿膜细胞数高于Control组（P <0.05）。相较于Control组,miR-21组E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调（P <0.05）,miR-21 inhibitor组E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调（P <0.05）。相较于Control组,miR-21组Cleaved Caspased-9、Bax蛋白相对表达量上升,Bcl-2蛋白相对表达量下降（P <0.05）;miR-21 inhibitor组Caspased-9、Bax蛋白相对表达量下降,Bcl-2蛋白相对表达量上升（P <0.05）。结论 GDM孕妇存在miR-21高表达,miR-21可通过调节Bcl-2/Caspase-9介导对滋养层细胞增殖、侵袭的抑制作用,继而促进细胞凋亡。     

KDM6A在乳腺癌中的表达及其对相关恶性细胞生物学行为的研究

目的 研究赖氨酸去甲基化酶6A (Lysine demethylase 6A,KDM6A)在乳腺癌组织中的表达并检测其对乳腺癌细胞恶性生物学行为的研究。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测18例乳腺癌患者新鲜癌组织及癌旁正常组织中KDM6A表达差异;构建pcDNA3.0-KDM6A载体,建立KDM6A过表达的乳腺癌细胞株,qRT-PCR进行验证;采用CCK-8实验及流式细胞术检测KDM6A过表达后乳腺癌细胞增殖和凋亡变化;Transwell及细胞划痕愈合实验检测KDM6A过表达后乳腺癌细胞侵袭及迁移变化;Western blot检测凋亡信号通路蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3)表达水平。结果 乳腺癌组织中KDM6A表达量较癌旁正常组织显著降低(P<0.001)。与正常乳腺细胞MCF-10A相比,KDM6A在SKBR3、MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞系中的表达明显降低(P<0.05)。过表达乳腺癌细胞中KDM6A后,细胞增殖、侵袭及迁移能力显著下降(P<0.05),凋亡率明显上升(P<0.05),并且细胞...     

“cell-in-cell”对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探究胃癌肿瘤细胞与免疫细胞cell-in-cell的形成对胃癌细胞生物学行为的影响。 方法 胃癌细胞与单核淋巴细胞（PBMC）的共培养体系分为对照组、1∶1组和5∶1组。PBMC和BGC823细胞分别以1∶1和5∶1的接种到24 孔板中（共5×10 4个）。通过吉姆萨染色检测“cell-in-cell”构建情况。分别检测各组细胞增殖、凋亡和侵袭能力。 结果 1∶1组的“cell-in-cell”构建率为（8.65±1.06）%。5∶1组的“cell-in-cell”构建率为（12.92±1.32）%,显著高于1∶1组（P＜0.05）。3组细胞的生物学行为水平比较差异显著（P＜0.05）。1∶1组的增殖和侵袭能力显著高于对照组,而凋亡率显著低于对照组（P＜0.05）。5∶1组的增殖和侵袭能力显著高于1∶1组和对照组,而凋亡率显著低于1∶1组和对照组（P＜0.05）。 结论 胃癌细胞与免疫细胞形成的“cell-in-cell”结构会促进胃癌细胞的增殖和侵袭并抑制凋亡。     

乳腺癌肿瘤组织和血浆中miR-21、 miR-210的含量及临床意义

目的 探讨miR-21、miR-210在乳腺癌患者肿瘤组织及血浆中的含量,并进一步分析其在乳腺癌中的诊断及预后评价中的价值。方法 收集31例乳腺癌患者肿瘤组织及36例癌旁组织,25例乳腺癌患者及21例健康者血浆。采用实时荧光定量PCR技术(real time fluorescence quantitative PCR, RTFQ PCR)检测miR-21、miR-210在乳腺癌患者肿瘤组织及血浆中的含量,应用受试者工作特征(receive operating characteristic, ROC) 曲线分析其在乳腺癌中的诊断价值, 通过Kaplan-Meier Plotter网站分析其与患者预后的关系。结果 与癌旁正常组织比较, miR-21在乳腺癌肿瘤组织中的含量差异有统计学意义(P<0.05),miR-210含量差异无统计学意义(P>0.05); 与健康者血浆比较,miR-21、miR-210在乳腺癌患者血浆中的含量差异无统计学意义(P>0.05); miR-21在组织中ROC下面积为0.695; miR-21高含量组患者生存时间明显低于miR-21低含量组(P<0.05)。结论 miR-21在乳腺癌肿瘤组织中上调,可作为乳腺癌诊断与预后评价指标。     

氯胺酮通过p38 MAPK信号通路对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨氯胺酮通过p38 MAPK信号通路对乳腺癌细胞增殖、侵袭与迁移的影响.方法:以乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,根据细胞培养基添加氯胺酮和p38 MAPK抑制剂(SB203580)分为4组:control组(无氯胺酮和SB203580)、氯胺酮组(10μg/mL)、SB203580组(20μmol/L...     

miR-34a通过Notch信号通路影响乳腺癌细胞的生物学行为

目的探讨miR-34a通过Notch信号通路影响乳腺癌细胞的生物学行为。方法乳腺癌细胞MCF-7分为miR-34a及Control组,分别利用脂质体转染miR-34a mimics及miR-34a NC,RT-PCR法检测细胞中miR-34a表达,MTT、Hoechst染色及transwell法分别检测细胞活力、凋亡及侵袭情况;western blot检测细胞中Notch1,Notch2,Dll1及Jagged-1蛋白表达情况。结果与Control组比较,miR-34 mimics组中miR-34a表达量上调,细胞皱缩,变圆变亮,细胞活力降低(P0.01),细胞凋亡率显著提高(P0.01),细胞侵袭数目减少(P0.01),Notch1,Notch2,Dll1及Jagged-1蛋白表达量都显著降低(P0.01)。结论 miR-34a mimics通过抑制Notch信号通路进而诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡并抑制其侵袭。     

七氟烷影响恶性肿瘤生物学行为的研究进展

七氟烷是一种吸入性麻醉药。近年来的研究发现手术中吸入性麻醉药的选择不仅对麻醉本身产生影响,而且对癌细胞的生物学行为也有影响。肿瘤的生物学行为对患者的预后有一定的提示意义。本文就七氟烷对乳腺癌、肺癌、肝癌、结直肠癌细胞的增殖、凋亡、侵袭转移等生物学行为的影响及其机制进行综述。     

miR-548c-5p对乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的研究miR-548c-5p转染乳腺癌MCF-7细胞株后对细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度的miR-548c-5p（50、75、100、125、150nmol／L）分别在24、48、72h不同时间点对细胞增殖的影响;miR-548c-5p转染MCF-7乳腺癌细胞株后,荧光定量PCR法检测其转染效率;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;流式细胞术分析干扰后细胞周期的变化;荧光显微镜观察转染后乳腺癌细胞凋亡的变化。结果使用RNA干扰技术成功地将miRNA转染入乳腺癌细胞株,使得miR-548c-5p的表达升高。转染后48hmiR-548c-5p浓度为125nmol／L时,对乳腺癌细胞的抑制作用最明显。miR-548c-5p表达上调后细胞G0／G1明显增多,而s期明显减少（P〈0．01）,能-定程度上抑制细胞的迁移。荧光显微镜观察发现早期凋亡细胞升高。结论miR-548c-5p通过干扰细胞周期,增加G0／G1期的乳腺癌细胞数,进而抑制细胞增殖。抑制乳腺癌细胞株MCF-7的迁移能力并显著促进其凋亡。miR-548c-5p影响乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡,有望成为乳腺癌诊疗的靶点之一。     

miR-210高表达与乳腺癌预后关系的meta分析

目的:探讨miR-210高表达与乳腺癌患者预后的关系?方法:检索PubMed?EMBASE?Web of Science和CNKI等数据库中关于miR-210高表达与乳腺癌预后关系的文献资料,按纳入标准筛选出相关文献,提取总生存率 (overall survival,OS)?无复发生存率(recurrence-free survival,RFS)和无病生存率(disease-free survival,DFS)的风险比(hazard ratio,HR)及其95%可信区间(CI),用Stata软件进行分析合并?结果:按标准共纳入文献6篇,病例数585例,meta分析显示:和低表达组相比,miR-210高表达组OS的合并HR值为2.29(95%CI:0.89~5.91,P=0.086);miR-210高表达组DFS/RFS的合并HR值为2.81(95%CI:1.35~5.87,P=0.006)?结论:以现有相关研究结果的meta分析显示,miR-210的高表达是乳腺癌临床预后的不良因素?     

miRNA-191对人乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-191在人乳腺癌细胞中的表达情况,研究其对乳腺癌细胞的增殖、侵袭的影响。方法 real-time PCR检测乳腺癌细胞[MDA-MB-231(雌激素受体阴性,ER-)、MCF-7(雌激素受体阳性,ER+)]和正常乳腺上皮细胞(HBL-100)中miR-191表达水平的差异;利用Lipofectamine2000将miR-191抑制体瞬时转染乳腺癌MCF-7,并用real-time PCR检测转染效果;分别用CCK-8法检测MCF-7细胞增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞的细胞周期,Transwell法检测MCF-7细胞的侵袭能力。结果与正常乳腺细胞相比,miR-191在乳腺癌细胞中高表达(P<0.01),且在ER(+)乳腺癌细胞MCF-7中的表达水平高于ER(-)乳腺癌细胞MDA-MB-231(P<0.01),转染miR-191抑制体后,MCF-7细胞增殖能力(0.65±0.04)较阴性对照组(1.18±0.05)明显受到抑制(F=122.238,P<0.01),侵袭能力(56.67±2.58)较阴性对照组(82.5±5.79)减弱(F=18.734,P<0.01),G0/G1期的细胞比例(73.39±1.10)%较阴性对照组(69.28±2.11)%增加(F=61.060,P<0.01),S期细胞比例(20.9±1.17)%较阴性对照组(25.48±1.19)%减少(F=46.937,P<0.01)。结论 miR-191在人乳腺癌细胞中,特别是ER(+)乳腺癌中高表达,转染miR-191抑制体后,MCF-7细胞增殖、侵袭能力明显受到抑制。     

miR-204对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学特性的影响

目的 研究microRNA-204(miR-204)对乳腺癌细胞生物学特性的影响.方法 在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中转染miR-204模拟物和抑制剂后48 h,实时荧光PCR(Real-time PCR)检测细胞中miR-204表达变化.流式细胞仪分析miR-204对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响.采用Transwell迁移小室分析法检测miR-204对MDA-MB-231细胞迁移的影响.结果 实时荧光PCR分析:miR-204模拟物和抑制剂效果显著,与正常对照比较差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞仪分析:与正常对照相比,miR-204 模拟物组G1期细胞数目明显减少(P<0.01),G2/M期细胞数目明显增多(P<0.01),而miR-204 抑制剂的作用则相反,G1期细胞数目明显增多(P<0.01),G2/M期细胞数目明显减少(P<0.01);miR-204模拟物组明显促进细胞凋亡(P<0.01),而抑制剂组明显抑制细胞凋亡(P<0.01).Transwell迁移小室分析:miR-204 模拟物组穿过Transwell迁移小室的细胞明显减少(P<0.01),而抑制剂组则相反,细胞数目明显增多(P<0.01).结论 miR-204对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有负调控作用,能够抑制乳腺癌细胞增殖和迁移,促进癌细胞凋亡.     

miR-367对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制

目的：探讨miR-367对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并阐明其作用机制。方法：检测乳腺癌组织、癌旁组织、MCF-7细胞和MCF-10A细胞中miR-367相对表达水平。将miR-NC或miR-367-inhibitor转入MCF-7细胞作为阴性对照组和miR-367-inhibitor组,检测2组MCF-7细胞活性、细胞集落数、Ki67阳性表达率、细胞划痕愈合率、侵袭细胞数和KLF4相对表达水平。将miR-NC或miR-367-mimic转入MCF-7细胞作为阴性对照组和miR-367-mimic组,检测2组MCF-7细胞集落数、细胞划痕愈合率、侵袭细胞数和KLF4相对表达水平。结果：与癌旁组织或MCF-10A细胞比较,乳腺肿瘤组织和MCF-7细胞中miR-367相对表达水平均明显升高（P<0.01）。与阴性对照组比较,miR-367-inhibitor组MCF-7细胞中miR-367相对表达水平、细胞活性、细胞集落数、Ki67阳性表达率、细胞划痕愈合率和侵袭细胞数均明显降低（P<0.01）,KLF4相对表达水平明显升高（P<0.01）;与阳性对照组比较,miR-367-mimic组MCF-7细胞中miR-367相对表达水平、细胞集落数、细胞划痕愈合率和侵袭细胞数均明显升高（P<0.01）,KLF4相对表达水平明显降低（P<0.01）。结论：miR-367可促进MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制KLF4的表达有关。     

miR-21靶向E2F1对三阴性乳腺癌细胞恶性生物学活性及裸鼠肿瘤抑制率的影响

目的 探究miR-21靶向E2F1对三阴性乳腺癌细胞恶性生物学活性及裸鼠肿瘤抑制率的影响。方法将MDA-MB-231细胞分为5组,即MDA-MB-231组、miR-21 inhibitor组、miR-NC inhibitor组、siRNA-E2F1组和siRNA-NC组。检测细胞中miR-21表达（RT-PCR法）;分别检测细胞增殖（MTT法）、侵袭（Transwell法）、迁移（划痕实验）和凋亡能力（流式细胞仪）;检测细胞中E2F1蛋白表达;检测miR-21与E2F1的靶向关系（双荧光素酶实验报告）。结果MDA-MB-231细胞中miR-21表达明显高于MCF10A细胞（P<0.05）;miR-21 inhibitor组细胞细胞中miR-21表达明显低于MDA-MB-231组（P<0.05）。与MDA-MB-231组相比,miR-21 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭能力、迁移能力和细胞中E2F1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡能力明显升高（P<0.05）;MDA-MB-231组细胞吸光度值、侵袭、迁移、凋亡能力和细胞中E2F1蛋白表达与miR-NC inhibitor组相比差异无统计学意义（P>0.05）。预测软件显示E2F1的3′UTR端与miR-21有碱基互补结合点位。通过向MDA-MB-231细胞中转染野生型E2F1（E2F1-WT）时,miR-21组荧光素酶活性明显低于miR-NC组（P<0.05）;miR-21组和miR-NC组突变体荧光素酶活性相比差异无统计学意义（P>0.05）。与siRNA-NC组相比,siRNA-E2F1组细胞增殖、侵袭、迁移和细胞中E2F1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡能力明显增加（P<0.05）。与miR-NC inhibitor组裸鼠移植肿瘤第8天时相比,miR-21 inhibitor组裸鼠肿瘤体积明显降低,肿瘤抑制率为45.3%（P<0.05）。结论低表达miR-21可抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭,促进凋亡,且抑制裸鼠移植瘤体积,其作用机制可能与抑制E2F1表达有关。     

长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞的侵袭转移

目的 探讨长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞侵袭转移的作用及其机制.方法 qPCR检测不同乳腺癌细胞株中ATB和miR-200c的表达情况;双荧光素酶报告基因检测ATB与miR-200c的相互作用;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测沉抑制ATB后乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的变化;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测抑制ATB后沉默miR-200c对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的逆转作用;Western blot检测抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白的表达.结果 与其他乳腺癌细胞相比,SKBr-3细胞株ATB表达水平最低,miR-200c的表达水平最高;ATB能与miR-200c的位点特异性结合,调控其表达活性;抑制ATB后可以增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,而沉默miR-200c后可以在一定程度上逆转ATB对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白表达水平得到一定的恢复.结论 ATB在乳腺癌发生、发展过程中起重要作用,ATB可以靶向调节miR-200c调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力.     

miR-373抑制剂对乳腺癌细胞生长的影响

目的探索miR-373抑制剂对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响。方法设计并合成miR-373抑制剂,通过脂质体转染至MCF-7细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应检测转染后细胞内miR-373的表达水平,同时检测Caspase-3与Caspase-8的表达情况,并应用MTT实验检测miR-373抑制剂对MCF-7细胞生长的影响。结果 miR-373抑制剂能有效抑制MCF-7细胞中miR-373的表达。转染后,MCF-7细胞中Caspase-3与Caspase-8的mRNA水平均升高（P〈0.05）。miR-373抑制剂对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率随浓度升高而增加（P〈0.05）。结论 miR-373抑制物可有效抑制MCF-7细胞增殖,有望成为治疗乳腺癌的新靶点。