IL-22抑制ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡并上调其Bcl-2表达

目的研究IL-22对ox-LDL诱导的CRL-1730细胞(人脐静脉内皮细胞)凋亡的影响及其机制。方法 100μg/ml ox-LDL刺激CRL-1730细胞,不同时间点经实时荧光定量RT-PCR检测CRL-1730细胞中IL-22受体R1(IL-22R1)mRNA的表达状况。然后在ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡模型中加入20 ng/ml外源性IL-22,通过AnnexinⅤ-PI凋亡试剂盒检测其对细胞凋亡的影响,经实时荧光定量反转录PCR检测Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、caspase 3及STAT3mRNA的表达,采用免疫印迹法分析STAT3磷酸化和Bcl-2蛋白的水平。结果 IL-22R1 mRNA在ox-LDL刺激后表达明显增高(P<0.05),且于12 h达峰值(P<0.01);加入IL-22可明显抑制ox-LDL刺激诱导的内皮细胞凋亡(P<0.01),促进抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-xl和Bcl-w表达,而降低caspase 3 mRNA表达(P<0.01)。此外,IL-22作用1～2 h STAT3发生磷酸化,4 h后Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01)。结论 IL-22可抑制ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡,这可能与其促使STAT3磷酸化,上调抗凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl和Bcl-w的表达,抑制促凋亡分子caspase 3的表达有关。     

西红花苷对3β,5α,6β-三羟胆甾烷致内皮细胞凋亡和相关基因表达的影响

目的:研究西红花苷(crocin)对3β,5α,6β-三羟胆甾烷(cholestane-3β,5α,6β-triol,Triol)致血管内皮细胞凋亡和相关基因表达的影响.方法:将内皮细胞分成正常对照组、模型组(25 μmol/L Triol)、西红花苷 (10-6 mol/L,10-7mol/L,10-8mol/L) 25 μmol/L Triol组.采用诱导内皮细胞凋亡的模型,用比色法测定丙二醛含量.光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态和超微结构的变化,电泳法检测DNA 梯形条带、流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Bcl-2和Bax mRNA表达,免疫细胞化学方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达.结果:用Triol处理后,培养液中MDA含量增加(P<0.01 vs control),细胞收缩,核浓缩,深染,线粒体肿胀空化,出现凋亡小体、DNA 梯形条带和亚二倍体峰,细胞凋亡率为30.62%,Bax mRNA、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达明显高于正常对照组(P<0.01);Bcl-2 mRNA和蛋白表达低于正常对照组(P<0.01);西红花苷(10-7mol/L、10-6mol/L) Triol组,MDA含量减少,内皮细胞形态结构完整,细胞凋亡率分别为24.4%、6.3%,细胞Bax和Caspase-3基因表达明显下调,Bcl-2基因表达上调(P<0.05 or P<0.01 vs Triol).结论:西红花苷可能是通过调节Bcl-2,Bax 和Caspase-3基因表达抑制Triol诱导的内皮细胞凋亡.     

低氧状态下血管内皮细胞HIF-1α表达及与细胞凋亡的关系

目的探讨低氧对人脐静脉内皮细胞ECV304凋亡及低氧诱导因子-1α表达的影响及意义。方法人脐静脉内皮ECV304细胞分为低氧处理组和对照组,处理后MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡;应用荧光实时定量PCR(QPCR)和Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和HIF-1α的mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,低氧处理能明显抑制细胞的增殖,且抑制作用随着低氧处理时间的延长而增强(P<0.05);低氧处理细胞后凋亡率明显增加,且呈时间依赖性(P<0.05);QPCR和Western blot结果显示,低氧处理组细胞Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05),Bcl-2则明显下降(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低,且呈时间依赖性(P<0.05)。低氧呈时间依赖性上调HIF-1α的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。结论低氧能促进人脐静脉内皮细胞ECV304细胞凋亡,其机制可能与HIF-1α表达上调及Bcl-2的表达降低、Caspase-3和Bax的表达升高有关。     

内毒素对过氧化氢引起的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响

目的：观察内毒素(LPS)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响,探讨其相关机制。方法：C6细胞按处理方法不同分为空白对照组、100 μmol•L^-1 LPS组、1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组及1 000 μmol•L^-1 H₂O₂与100μmol•L^-1 LPS联合应用组。药物作用C6细胞6 h,取培养液上清与细胞沉淀,利用LDH检测试剂盒,采用紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率;应用RT-PCR检测相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、细胞色素C(Cyt-C)及CLIC4蛋白水平。结果：与空白对照组比较, 100 μmol•L^-1 LPS组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2、Bax表达率未见明显改变(P>0.05),而Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,与空白对照组比较,Bcl-2、Bax、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平未见明显变化(P>0.05) ,而Caspase-3蛋白水平高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05);在mRNA水平上Bcl-2表达率低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率高于空白对照组(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于空白对照组(P<0.05)。与H₂O₂组和LPS组比较,LPS与H₂O₂联合作用组细胞凋亡率及LDH释放率明显增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2表达率下降(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于对照组(P<0.05),而CLIC4蛋白水平变化不明显(P>0.05)。结论：单独应用LPS能够激活Caspase-3信号通路,引起C6细胞早期凋亡,同时LPS能促进H₂O₂引起的C6细胞损伤,其机制可能与凋亡相关的Bcl-2/Bax及Caspase-3途径过度激活有关。线粒体氯通道蛋白CLIC4在此过程中作用不明显。     

山楂叶总黄酮对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制的研究

目的探讨山楂叶总黄酮(flavone mixture of crataegus leaves,FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其分子机制.方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率,用Western blot 法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3P20蛋白及用RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA表达量的变化.结果与模型组比较FMCL 100μg/ml剂量组PC12细胞凋亡率下降,Bcl-2蛋白及mRNA表达量明显升高,而Bax、Caspase-3P20蛋白及Bax mRNA表达量明显降低(P<0.05或P<0.01),且在一定范围内存在剂量依赖关系.结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因及蛋白的表达从而抑制Caspase-3活化有关.     

芒果苷对脂多糖诱导小鼠成骨细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探究芒果苷对脂多糖诱导小鼠成骨细胞凋亡的影响及可能机制.方法 将小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组和LPS+芒果苷组,分别加入PBS缓冲液、脂多糖(LPS)、LPS+芒果苷.采用MTT法检测不同处理因素下各组成骨细胞的细胞存活率;qRT-PCR法检测各组细胞炎症因子TNF-α及细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2和Caspase-3基因mRNA的表达.结果 与对照组相比,LPS组MC3T3-E1细胞存活率明显降低,TNF-α、Bax和Caspase-3的mRNA表达明显升高,Bcl-2 mRNA表达明显下降;而与LPS组相比,LPS+芒果苷组MC3T3-E1细胞存活率明显提高,TNF-α、Bax、Caspase-3 mRNA表达明显下降,Bcl-2 mRNA基因表达明显升高,各组间差异均有统计学意义(P<0.05).结论 芒果苷可改善LPS导致的成骨细胞凋亡,其作用机制可能与芒果苷抑制LPS诱导的TNF-α形成及调节细胞内Bax、Bcl-2、Caspase-3产生有关.     

环巴胺对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞增殖凋亡的影响及其抗凋亡机制

目的：研究Hedgehog( Hh)信号通路阻断剂环巴胺对佐剂性关节炎(AIA)大鼠关节软骨细胞增殖凋亡的影响及抗凋亡机制。方法弗氏完全佐剂诱导AIA大鼠模型,胰酶-胶原酶法分离培养关节软骨细胞,环巴胺体外给药处理AIA软骨细胞,MTT法检测细胞增殖,DNA电泳、Hoechst染色、Annexin V-FITC/PI 双染检测细胞凋亡, RT-PCR 检测Shh、Gli1、Ptch1、Bcl-2、Bax 和 Caspase-3 mRNA 的表达。结果环巴胺(0.08、0.4、2、10、50μmol/L)剂量依赖性地提高AIA软骨细胞增殖。 AIA组可见凋亡细胞DNA梯状条带,环巴胺(0.4、2、10μmol/L)给药组的梯状条带明显减少;AIA组存在核碎裂与染色质固缩,环巴胺给药组均匀蓝色荧光的细胞数量增多;流式分析结果表明AIA软骨细胞凋亡率显著升高,环巴胺明显减少细胞凋亡率;与正常组相比, AIA组软骨细胞中Hh信号通路相关基因( Shh、Ptch1、Gli1) mRNA表达显著升高,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达显著下降,而促凋亡基因Bax、Caspase-3 mRNA表达明显升高。环巴胺体外给药能抑制Hh信号通路过度活化,提高Bcl-2 mR-NA表达,并降低Bax、Caspase-3 mRNA表达。结论环巴胺体外给药能促进AIA软骨细胞的增殖,并抑制AIA软骨细胞的过度凋亡;该抗凋亡作用和调节Bcl-2、Bax和Caspase-3表达密切相关,提示干预软骨细胞Hh信号通路对保护类风湿关节炎关节软骨具有潜在的治疗意义。     

CacyBP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 观察干扰小RNA(siRNA)介导的Cacy BP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响。方法 化学合成Cacy BP/SIP基因序列特异性siRNA(Cacy BP/SIP siRNA),采用脂质体法转染siRNA至MDA-MB-231细胞(Cacy BP/SIP siRNA组),MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率。Realtime PCR和Western blotting检测MDA-MB-231细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达。另设阴性对照组和空白对照组。结果 与阴性对照组和空白对照组比较,Cacy BP/SIP siRNA组MDA-MB-231细胞增殖能力显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。Caspase-3和Bax mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05)。结论 靶向沉默乳腺癌MDA-MB-231细胞中Cacy BP/SIP基因表达后,可以抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡,其作用可能通过下调Bcl-2表达,上调Caspase-3和Bax表达发挥诱导细胞凋亡的作用。     

马钱苷在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制

目的探究马钱苷对脑缺血再灌注损伤（CIRI）的保护效果及作用机制。方法采用线栓法构建SD大鼠CIRI模型,分为假手术组、CIRI组、CIRI+马钱苷低剂量（5mg/kg）组、CIRI+马钱苷中剂量（10mg/kg）组、CIRI+马钱苷高剂量（15mg/kg）组,其中假手术组仅分离颈总动脉、颈外动脉,不进行栓塞。CIRI+马钱苷低、中、高剂量组分别给予不同剂量马钱苷,假手术组与CIRI组给予0.9%氯化钠溶液,连续给药7d。TTC法、Tunel染色法观察大鼠脑组织梗死率和神经细胞凋亡情况;ELISA法测定大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量。采用氧糖剥夺/复氧（OGD/R）法构建神经瘤母细胞（N2a）CIRI模型,分为正常对照组、OGD/R组、OGD/R+马钱苷低剂量（10μmol/L）组、OGD/R+马钱苷中剂量（20μmol/L）组和OGD/R+马钱苷高剂量（30μmol/L）组,干预24h。乳酸脱氢酶（LDH）法测定细胞LDH释放率,流式细胞术测定细胞凋亡情况。qRT-PCR法分别测定各组大鼠脑组织和各组N2a中B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2关联X基因（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达水平,Westernblot法分别测定各组大鼠脑组织和各组N2a中NF-κB、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38/p38）、活化Caspase-3/Caspase-3（cleaved-Caspase-3/Caspase-3）蛋白表达水平。结果与假手术组相比,CIRI组大鼠脑梗死率和神经细胞凋亡率升高（均P＜0.01）,血清IL-1β、IL-6和TNF-α质量浓度均升高（均P＜0.01）,Bcl-2mRNA表达水平降低（P＜0.01）,Bax、Caspase-3mRNA和NF-κB、p-p38/p38、cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平均升高（均P＜0.01）;相比CIRI组,CIRI+马钱苷中、高剂量组大鼠脑梗死率和神经细胞凋亡率均下降（均P＜0.05）,血清IL-1β、IL-6和TNF-α质量浓度均降低（均P＜0.05）,NF-κB、p-p38/p38、cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达均降低（均P＜0.05）;CIRI+马钱苷低、中、高剂量组Bcl-2mRNA表达水平均升高（均P＜0.05）,Bax、Caspase-3mRNA表达水平均降低（均P＜0.05）。与正常对照组相比,OGD/R组细胞LDH释放率和凋亡率均增加（均P＜0.01）,Bcl-2mRNA表达水平降低（P＜0.05）,Bax、Caspase-3mRNA和NF-κB、p-p38/p38、cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平均升高（均P＜0.01）;相比OGD/R组,OGD/R+马钱苷中、高剂量组细胞LDH释放率和凋亡率均降低（均P＜0.01）,NF-κB、p-p38/p38、cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平均降低（均P＜0.05）;OGD/R+马钱苷低、中、高剂量组Bcl-2mRNA表达水平均升高（均P＜0.05）,Bax、Caspase-3mRNA表达水平均降低（均P＜0.05）。结论马钱苷可通过调控p38/NF-κB信号通路抑制炎症反应,减少神经细胞凋亡来改善体内外CIRI。     

耐辐射奇球菌pprⅠ基因对MMC诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用

目的 探讨耐辐射奇球菌(DR)pprⅠ基因对丝裂霉素C(MMC)诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法 细胞分为空白对照组(不干预)、未转染组(MMC处理)、空质粒转染组(pCMV-C-Flag+MMC)与pprⅠ基因转染组(pCMV-C-Flag-pprⅠ+MMC)。CCK-8、抗氧化酶相关试剂盒、TUNEL、JC-1荧光探针和qRT-PCR测定细胞存活率、氧化应激、细胞凋亡率、线粒体损伤、凋亡途径相关基因mRNA的表达。结果 与空白对照组比较,未转染组细胞存活率、线粒体膜电位、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA表达下降;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)mRNA表达增加(P<0.05)。与未转染组比较,pprⅠ基因转染组细胞存活率、线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA表达增加;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP mRNA表达下降(P<0.05)。结论 耐辐射奇球菌pprI基因对丝裂霉素C诱导的H...     

刺五加叶皂苷B对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨刺五加叶皂苷B（C-B）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响,阐明其对氧化应激损伤所致的心肌细胞凋亡的抑制作用。方法：乳鼠心肌细胞行原代培养,取自主搏动良好的心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2 损伤组(200 μmol•L^-1H2O2诱导心肌细胞凋亡)、100 mg•L^-1C-B 组和200 mg•L^-1 C-B 组,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,AnnexinⅤ-FITC 流式细胞术检测凋亡率,分光光度法检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：与正常对照组比较,200 μmol•L^-1H₂O₂组心肌细胞有损伤性改变,细胞
存活率明显降低（P<0.001）,凋亡率升高（P<0.001）,Caspase-3活性增加（P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达减少,Caspase-3及Bax蛋白表达增多,PARP蛋白降解增多。与H2O2损伤组比较,100及200 mg•L^-1C-B组心肌细胞损伤性改变均减轻,细胞存活率增加（P<0.05或P<0.01）,凋亡率降低（P<0.001）,Caspase-3活性降低（P<0.05或P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达和Caspase-3蛋白表达减少,PARP蛋白降解减少（依据电泳条带的宽窄及明暗度判断蛋白表达程度）,且200 mg•L^-1C-B组的作用更明显。结论：C-B对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡有一定的抑制作用,可能与其调节细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达有关。     

LukS-PV通过C5aR诱导急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的研究

目的 探讨金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素亚组分(LukS-PV)是否通过C5aR发挥其诱导急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的作用.方法 将THP-1细胞株分为5组:未处理细胞为对照组,使用不同浓度的C5aR拮抗剂(0、50、100、150 nmol/L)预先作用于THP-1细胞后,再使用1μmol/L LukS-PV刺激细胞为处理组.24 h后通过Annexin V/PI染色法,线粒体膜电位法检测细胞凋亡,qRT-PCR法检测凋亡相关基因,Western blot法检测凋亡相关蛋白,酶标仪法检测Caspase-3活性.结果 经过不同浓度C5aR拮抗剂干预后,LukS-PV诱导THP-1细胞凋亡的比率逐渐下降,促凋亡基因Bax、Bak、Bim和促凋亡蛋白cleaved-Caspase-3、Bak、Bax的表达量也逐渐减低,抑凋亡基因Bcl-2、Bcl-w、Bcl-x和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量逐渐升高,Caspase-3活性逐渐降低.结论 LukS-PV可能通过结合C5aR从而激活下游线粒体通路,发挥其诱导人急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的作用.     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因的动态表达及抗菌药物干预效应

目的 探讨创伤弧菌（W）脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因Fas mRNA、细胞色素C（CytC）mRNA、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspases）-9 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的动态表达及头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星的干预效应.方法 制作大鼠W脓毒症模型（W组）和W脓毒症抗菌药物干预模型（AA组）,并设正常对照组（NC组）,同时采用RT-PCR法检测各组各时点肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达量的动态变化.结果 W组各时点肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA和Bax mRNA的表达量均较NC组增高.而各时点Bcl-2 mRNA表达量均较NC组下降（均P〈0.05）;AA组染菌后9、12h时肝组织Bcl-2 mRNA表达量及9h时的Caspase-3 mRNA表达量仍高于NC组（均P〈0.05）;AA组染菌后9、12、16h时的肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量均较同时点W组降低（均P〈0.05）,染菌后12、16h时的Bax mRNA表达量均较同时点W组降低（均P〈0.05）,而染菌后9、12、16h时的Bcl-2 mRNA表达量则较同时点W组增高（均P〈0.05）.结论 外源性、内源性凋亡途径均参与了W脓毒症肝细胞损伤过程;促/抗凋亡调节基因（Bax/Bcl-2）表达失衡可促进肝细胞凋亡;而抗菌药物则可有效抑制肝细胞凋亡,从而维持促/抗凋亡调节基因表达的平衡.     

薤白总皂苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的观察薤白总皂苷对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的薤白总皂苷(25、50、100、250、500、1000μg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的薤白总皂苷在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用100和200μg/ml的薤白总皂苷处理宫颈癌HeLa细胞48 h后,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果薤白总皂苷对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间一剂量依赖性;薤白总皂苷(100和200μ/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,抑制HeILa细胞增殖,促进其凋亡(P<0.05,P<0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05,P<0.01)。结论薤白总皂苷有显著的抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与其降低HeLa细胞线粒体膜电位,上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性有关。     

熊果酸诱导甲状腺乳头状癌细胞TPC-1凋亡的实验

目的 研究熊果酸 (ursolic acid UA) 在体外对人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1增殖的抑制作用.方法采用不同浓度的UA干预细胞 (对照组0μM, 实验组3μM、6μM、12μM) ;MTT法观察同一时间不同浓度的UA和不同时间同一浓度的UA对TPC-1细胞生长情况的影响;流式细胞术 (FCM) 检测应用UA后TPC-1细胞凋亡情况及细胞周期分布情况;QRT-PCR检测UA干预后TPC-1细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-9 m RNA的表达情况;Western blot检测UA干预后TPC-1细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-9蛋白的表达情况.结果 MTT实验结果显示UA对TPC-1细胞增殖的抑制呈现出浓度和时间的依赖性, 24 h、48 h、72 h的IC50分别为14.21μM、10.56μM、10.39μM;流式Annexin V-FITC/PI双染检测显示UA呈浓度依赖性诱导TPC-1细胞凋亡, 且将TPC-1细胞的生长阻滞在S期;QRT-PCR实验发现, 对照组与实验组均有Bcl-2、Bax、Caspase-9 m RNA的表达, UA呈浓度依赖性下调Bcl-2 m RNA的表达, 上调Bax和Caspase-9 m RNA的表达;Western blot结果显示, 对照组与实验组均有Bcl-2、Bax、Caspase-9蛋白的表达, UA呈浓度依赖性下调Bcl-2的表达, 上调Bax和Caspase-9的表达.结论 熊果酸可显著抑制人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖并诱导其凋亡, 为甲状腺癌治疗提供一定思路.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对稳定表达淀粉样前体蛋白的SH-SY5Y细胞抗炎抗凋亡作用研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)对稳定表达淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)的SH-SY5Y细胞抗炎抗凋亡的保护作用.方法 将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组(稳定表达APP的细胞)和EGCG组(APP+10、20、30 μmol/L的EGCG).免疫荧光细胞化学法观察APP在各组细胞中表达;MTT法检测细胞存活能力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3表达;ELISA法测定IL-6和TNF-α浓度.结果 模型组中,APP高表达;与模型组比较,给予20 μmol/L EGCG的EGCG组明显提高SH-SY5Y细胞的存活率,减少细胞凋亡数目,下调Bax/Bcl-2比例及Caspase-3 mRNA表达,减少IL-6和TNF-α浓度.结论 EGCG对稳定表达APP的SH-SY5Y细胞有一定保护作用,可能是通过抗炎以及减少细胞凋亡发挥治疗作用.     

miR-34a调节人卵巢颗粒细胞凋亡

目的: 探讨miR-34a对人卵巢颗粒细胞的作用及其机制。方法: 体外培养人卵泡颗粒细胞,分为模拟物转染组、抑制物转染组、模拟物阴性对照转染组、抑制物阴性对照转染组,分别转染miR-34a模拟物、miR-34a抑制物、模拟物阴性对照和抑制物阴性对照,另设空白对照组不做任何处理;实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-34a、Bcl-2、Bax、生存素、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax、生存素、Caspase-3、剪切体Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果： miR-34a模拟物转染明显下调Bcl-2 mRNA表达水平,降低Bcl-2、生存素蛋白表达,并增加Bax、Caspase-3蛋白表达,促进人颗粒细胞凋亡;miR-34a抑制物转染作用则与之相反;然而,miR-34a模拟物和抑制物转染对Bax、生存素、Caspase-3 的mRNA水平均无明显影响。结论： miR-34a可通过调控凋亡相关的蛋白与基因的表达,促进人颗粒细胞凋亡。