碱性纤维母细胞生长因子对血管平滑肌细胞增殖的影响

应用＾３Ｈ－ＲｄＲ掺入实验，ＲＮＡ印迹分析和反转录－多降酶链反应等方法观察碱性纤维母细胞生长因子对大鼠血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成及细胞增殖相关基因表达的影响，结果发现，碱性纤维母细胞增殖相关基因表达的影响，结果发现，碱性纤维母细胞生长因子作用于血管平滑肌细胞６ｈ后，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入开始增加，２４ｈ达到高峰，在一定浓度范围内，碱性纤维母细胞生长因子以血管平滑肌细胞的促增殖效应与浓度呈正相关。碱性纤维     

缺氧对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的反应

目的 探讨缺氧对大鼠地动脉平滑肌细胞增殖的效应。方法 应用免疫组织化学染色、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入、流式细胞仪检测技术探讨缺氧对大鼠主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）增殖的影响。结果 缺氧１２ｈ其增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）阳性反应颗粒增加,２４ｈ明显增加,其含量是常氧组２．１倍。低氧８ｈ可使ＡＳＭＣ的＾３Ｈ－ＴｄＲ摄取量减少（Ｐ〈０．０５）,１２ｈ则促进其摄取,２４ｈ则明显较常氧对照组增多（Ｐ〈０．０５）。     

氟伐他汀对高血压血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨氟伐他汀对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法：培养自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞,不同浓度的氟伐他汀和甲羟戊干预后,进行细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率的测定。结果：（１）氟伐他汀呈浓度依赖性（１０＾－５￣１０＾－７ｍｏｌ）抑制血管平滑肌细胞数目的增加和＾３Ｈ－ＴｄＲ的掺入率;（２）１０＾－３ｍｏｌ的甲羟戊酸几科完全逆转了氟伐他汀对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。结论：     

DDPH对实验性腹主动脉狭窄高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

观察１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对实验性腹主动脉狭窄高血压大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响。方法氚－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入，电镜，原位杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交。结果ＤＤＰＨ在降低血压同时，能减少血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的线粒体，粗面内质网及３Ｈ－ＴｄＲ掺入量（Ｐ＜０．０１），并能逆转ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｓｉｓ原癌基因ｍＲＮＡ表达增强（Ｐ＜０．０５～０．０１），Ｐ５３抑癌基因ｍＲＮＡ表达减弱（Ｐ＜０．０５）。结论ＤＤＰＨ能抑制实验性高血压大鼠的ＶＳＭＣ增殖，与癌基因调控的分子生物学机制有关。     

低氧对肺血管周细胞增殖及分化的影响

目的研究低氧对肺血管周细胞增殖及分化的影响,探讨低氧性肺动脉高压时无肌型肺动脉肌化的细胞来源。方法实验分为４组：直接低氧组（Ｈ组）,常氧组（Ｎ组）,低氧内皮细胞条件培养液组（ＨＥＣＣＭ组）,常氧内皮细胞条件培养液组（ＮＥＣＣＭ组）。应用细胞培养、３Ｈ胸腺嘧啶核苷（３ＨＴｄＲ）、免疫细胞化学、图像分析等技术,研究低氧对肺血管周细胞３ＨＴｄＲ的掺入量、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、α平滑肌肌动蛋白（αＳＭＡｃｔｉｎ）表达的影响。结果Ｈ组周细胞３ＨＴｄＲ的掺入量、ＰＣＮＡ及αＳＭＡｃｔｉｎ的表达量分别是Ｎ组的２．１６倍（Ｐ＜０．０１）、１．１６倍（Ｐ＜０．０１）及１．１１倍（Ｐ＜０．０５）,ＨＥＣＣＭ组周细胞３ＨＴｄＲ的掺入量、ＰＣＮＡ及αＳＭＡｃｔｉｎ的表达量分别是ＮＥＣＣＭ组的１．８倍（Ｐ＜０．０１）、１．１５倍（Ｐ＜０．０１）及１．１２倍（Ｐ＜０．０５）。结论低氧可直接或刺激内皮细胞分泌某些细胞因子促进肺血管周细胞增殖、并向平滑肌样细胞分化。肺血管周细胞的增殖、向平滑肌样细胞分化是低氧性肺动脉高压无肌细动脉肌化的重要细胞来源     

莲心碱对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及对PDGF—B,bFGF,c …

用［＾３Ｈ］胸腺嘧啶核苷（［＾３Ｈ］ＴｄＲ）掺入法、电镜、免疫组化和原位杂交方法，在自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）观察了莲心碱（Ｌｉｌｅｎ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的作用及对生长因子ＰＤＧＦ－Ｂ、ｂＦＧＦ及其相关癌基因ｃ－ｓｉｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果发现Ｌｉｅｎ在降低ＳＨＲ血压同时，能减少ＶＳＭＣ的线粒体，粗面内质网和［＾３Ｈ］ＴｄＲ掺入量，并能逆转ＶＳＭＣ增殖对ＰＤＧＦ０Ｂ、ｂＦＧＦ抗     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

用＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入实验及细胞计数法等观察了胰岛素对体外培养的人血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成，细胞增殖及原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果发现，在培养基中加入不同浓度的胰岛素后，血管平滑肌细胞增殖，细胞ＤＮＡ合成增加，原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ表达增加，上述三者均具有胰岛素剂量依赖性，呈现量－效关系，实验结果表明，高胰岛素血症可能促进平滑肌细胞增殖和原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入实验及细胞计数法等观察了胰岛素对体外培养的人血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成、细胞增殖及原癌基因：ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果发现，在培养基中加入不同浓度的胰岛素后，血管平滑肌细胞增殖，细胞ＤＮＡ合成增加，原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ表达增加，上述三者均具有胰岛素剂量依赖性，呈现量－效关系．实验结果表明，高胰岛素血症可能通过促进平滑肌细胞增殖和原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达和来加速动脉粥样硬化的发生与发展的。     

c-myc反义寡核苷酸对缺氧内皮细胞条件培养液刺激的肺血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）刺激的肺血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖的影响。方法制备ＨＥＣＣＭ，用其刺激肺动脉ＳＭＣ后，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析ｃ－ｍｙｃ基因表达，３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入试验及细胞生长计数分析ＳＭＣ增殖情况。结果ＨＥＣＣＭ显著刺激ＳＭＣ增殖及ｃ－ｍｙｃ基因表达增强，反义ＯＤＮｓ显著下调ＨＥＣＣＭ刺激的ｃ－ｍｙｃ表达，显著抑制ＨＥＣＣＭ刺激的ＳＭＣ增殖。同义ＯＤＮｓ无上述作用。结论ＨＥＣＣＭ可能通过刺激ＳＭＣ之ｃ－ｍｙｃ表达而使ＳＭＣ增殖，反义ＯＤＮｓ通过下调ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达而抑制ＨＥＣ－ＣＭ刺激的ＳＭＣ增殖。     

白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α对血管平滑肌细胞及基质金属蛋白酶-2骨桥蛋白基因表达的影响

促炎细胞因子白细胞介素－ １β和肿瘤坏死因子－ α是血管平滑肌细胞的强效促分裂原,为了探讨其促血管平滑肌细胞增殖是否与细胞外基质降解及粘附蛋白合成有关,本文以体外培养的血管平滑肌细胞为研究对象,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹及基质金属蛋白酶－ ２ 活性酶图分析方法动态观察白细胞介素－ １β、肿瘤坏死因子－ α对血管平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶－２ 及骨桥蛋白的影响。结果发现,白细胞介素－１β和肿瘤坏死因子－ α均可显著诱导基质金属蛋白酶－ ２ 及骨桥蛋白的基因表达,血管平滑肌细胞受两种细胞因子刺激１２ ｈ 后,基质金属蛋白酶－２ 及骨桥蛋白ｍＲＮＡ表达活性最高,分别达到对照细胞的３ 倍左右和１０ 倍以上。对细胞培养基基质金属蛋白酶活性进行酶图分析的结果发现,肿瘤坏死因子－α及白细胞介素－１β作用于血管平滑肌细胞１２ 及２４ ｈ 时,基质金属蛋白酶降解明胶的活性约为对照细胞培养基的２ 倍和１．５ 倍。提示这类细胞因子可同时在多位点上对血管平滑肌细胞的迁移与增殖发挥促进作用。     

葛根素抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的　观察葛根素对T诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法　建立凝血酶(T)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖模型,以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定的方法观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。结果　T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4小时末达峰,且T浓度在0 . 1U/L～1 . 0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖与DNA合成。结论　葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖。     

莲心碱对血管平滑肌细胞增殖及热应激蛋白70和P53表达的影响

采用培养的内皮素所致血管平滑肌细胞增殖模型。用氚-胸腺嘧啶核苷掺入法、流式细胞术、Westernblot及Northernblot分析方法，观察了莲心减对血管平滑肌细胞增殖的作用及对热应激蛋白70及其mRNA和抑癌基因P53表达的影响。结果发现，遂心碱能逆转内皮素所致的~3H－TdR掺入量增多，阻止血管平滑肌细胞由Go／G1期进入DNA合成期（S期）和有丝分裂期（G2／M期）．并能使效应激蛋白70及mRNA表达减弱，P53抑癌基因及mRNA表达增强。以上结果提示，莲心碱能抑制血管平滑肌细胞增殖，这可能与热应激蛋白70及P53的调控有关。     

大黄素通过p53途径抑制血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的探讨p53途径在大黄素抑制血管平滑肌细胞增殖作用中的地位。方法通过细胞计数、老化相关β-半乳糖苷酶染色、Annexin V标记等方法观察大黄素抑制血管平滑肌细胞增殖的特点。^3H-胸苷掺入法测定DNA合成、流式细胞仪了解细胞周期变化、Western blot检测p53蛋白表达变化、基因芯片观察mRNA表达水平。结果（1）1．6～3．1μg／ml大黄素延缓细胞生长,6．3～12．5μg／ml大黄素促进细胞老化,25．0μg／ml大黄素则可显著诱导细胞凋亡。（2）大黄素干预24h后,出现非计划性DNA合成现象,这是DNA损伤的敏感性标志。p53基因和蛋白表达水平呈大黄素浓度依赖性上调。除了细胞增殖基因表达下调,其他基因表达均上调,如细胞老化基因、细胞凋亡基因、DNA损伤修复基因。（3）大黄素能够迅速渗透进入细胞,在细胞内的分布具有明显的选择性,绝大多数以颗粒形态分布于细胞胞浆中,细胞核中也有少量分布。结论大黄素通过损伤DNA激活p53途径。随着大黄素浓度升高,p53途径激活程度也随之增强并产生多种细胞增殖抑制效应,即生长停滞、细胞老化和细胞凋亡。     

心钠素及内皮素对心肌细胞肥大及心脏成纤维细胞增殖的影响

目的观察心钠素(ANP)、内皮素-1(ET-1)对心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖的调节作用。方法采用体外乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞培养,一定浓度的ET-1、ANP单独或联合作用细胞24h,以3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法测定细胞DNA、蛋白合成,Brad-ford法测细胞总蛋白含量,RT-PCR法测心肌细胞心钠素ANPmRNA的表达,评价ET-1、ANP对心肌细胞和成纤维细胞的作用。结果对于心肌细胞,ET-1显著促进3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,呈剂量依赖性,ANPmRNA表达明显增加;对于心脏成纤维细胞,ET-1促进3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,以上作用可被ANP明显抑制。结论ET-1促进ANP分泌的同时也促进心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖,ANP反之抑制ET-1的促心肌肥厚作用。     

阿魏酸钠抑制内皮素-1介导高血压病血管平滑肌细胞增殖的研究

目的研究阿魏酸钠(SF)对高血压痛患者血管平滑肌细胞(VSMC)在体外培养条件下内皮素-1(ET-1)介导增殖的影响.方法采用体外培养的VSMC,选用3～8代VSMC分为:ET-1组;SF组;ET-1与SF组.在ET-1组中加入6个不同浓度的SF(0,20,40,80,100,120μg/ml),培养24h后用苔酚蓝法(MTT)和氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定细胞含量及其培养液中一氧化氮(NO).结果SF可使细胞MTT含量和3H-TdR掺入量明显减少,ET-1可使细胞MTT含量和3H-TdR掺入量明显增加.同时,SF可使ET-1所致的细胞MTT含量增加和3H-TdR掺入量增加明显减少,并随SF含量增加而NO升高.结论SF可抑制VSMC增殖,SF抑制ET-1诱导VSMC增殖,并呈剂量依赖型.其作用可能与通过拮抗ET-1、增高NO活性有关.     

肾上腺髓质素及其受体系统抑制溶血磷脂酸诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖

目的观察溶血磷脂酸对肾上腺髓质素及其受体系统生成的影响和肾上腺髓质素在溶血磷脂酸促进血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,H3-TdR掺入测定血管平滑肌细胞DNA合成,γ-32P-ATP标记的同位素法测定丝裂原活化蛋白激酶活性,放射免疫法测定血管平滑肌细胞中肾上腺髓质素的含量。结果溶血磷脂酸促进大鼠血管平滑肌细胞肾上腺髓质素生成,上调血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体CRLR、RAMP2和RAMP3mRNA表达;肾上腺髓质素可抑制溶血磷脂酸刺激大鼠血管平滑肌细胞3H-TdR掺入,抑制溶血磷脂酸诱导的丝裂原活化蛋白激酶激活。结论溶血磷脂酸上调血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体系统,肾上腺髓质素及其受体抑制血管平滑肌细胞增殖的作用与其抑制丝裂原活化蛋白激酶激活有关。     

API0134对血管平滑肌细胞增殖和血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及相关癌基因表达的影响

为探讨API0134防治冠状动脉粥样硬化和腔内成形术后再狭窄的作用机制，采用内皮素诱导建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法、流式细胞术、免疫细胞化学检测及Northernblot方法，观察了API0134对血管平滑肌细胞增殖的作用及对血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及其相关癌基因C－sis和C－mpc表达的影响。结果发现，API0134能逆转内皮素所致的氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量增多（对照组为499±92，内皮素组为617±98，API0134组为506±102），阻止血管平滑肌细胞由静止期（G0／G1期；对照组为72％，内皮素组为50％，API0134组为60％）进入DNA合成期（S期；三组分别为26％、36％和30％）和有丝分裂期（G2／M期，三组分别为2％、14％和4％），并能逆转内皮素引起的血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子抗原、c－sis和c－mpc的mRNA表达增强。提示API0134有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用，这种作用与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关。     

API0134对血管平滑肌细胞增殖和血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及相关癌基因表达的影响

为探讨ＡＰＩ０１３４防治冠状动脉继样硬化和腔内成形术后再狭窄的作用机制，采用内皮素诱导建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法，流式细胞术、免疫细胞化学检测及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，观察了ＡＰＩ０１３４对血管平滑肌细胞增殖的作用及对血小板源生长因子Ｂ链、碱性纤维母细胞生长因子及其相关癌基因ｃ－ｓｉｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果发现，ＡＰＩ０１３４能逆转内皮素所致的氚标胸     

血小板衍化生长因子对血管平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

目的 :观察血小板衍化生长因子 （PDGF）对培养的血管平滑肌细胞 （VSMC）增殖及胶原蛋白合成的影响。方法 :采用培养的兔动脉 VSMC,应用 3H- Td R的 3H-脯氨酸掺入方法 ,观察 PDGF- BB对兔 VSMC DNA合成以及胶原蛋白合成的影响。结果 :PDGF- BB可促进处于静止状态的兔 VSMC DNA及胶原蛋白的合成 ,并呈现明显的浓度依赖关系 ,在 40 μg/ L 的浓度时 DNA及胶原蛋白的合成达到高峰 ,DNA及胶原蛋白分别处于 36 h和 48h合成最为显著。结论 :PDGF- BB可明显促进培养的 VSMC增殖及胶原蛋白的合成。