前列腺癌中EphA1基因表达的初步研究

目的:检测前列腺癌中EphA1基因转录及受体表达水平,探讨其表达异常的机制及其临床意义。方法:利用RT-PCR法检测雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3中EphA1基因mRNA表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法进行甲基化状态分析;用免疫组化方法检测19例前列腺癌和22例良性前列腺组织标本中EphA1受体表达情况。结果:LNCaP和PC-3细胞中均未检测到EphA1基因转录;PC-3细胞中EphA1基因启动子区内CpG岛存在高甲基化现象,而LNCaP细胞则不存在;前列腺癌和良性前列腺增生组织中EphA1受体表达率分别为36.8%和45.5%,其差异无统计学意义(P>0.05)。结论:前列腺癌细胞LNCaP和PC-3中无明显EphA1基因表达,甲基化可能是导致该基因下调的机制之一。EphA1基因的甲基化在前列腺癌进展及由雄激素依赖向雄激素非依赖转化过程中可能发挥一定作用。     

抗凋亡基因Bfl-1在前列腺癌中的表达及作用

目的 检测Bcl2相关蛋白A1(Bfl-1) mRNA在前列腺癌细胞株、前列腺癌组织及良性前列腺增生组织中的表达,观测阻断Bfl-1表达对前列腺癌细胞的影响,探讨Bfl-1在前列腺癌发生发展中的作用.方法 采用RT-PCR、实时荧光定量PCR(Q-PCR)、cDNA探针原位杂交(ISH)等技术检测Bfl-1 mRNA在前列腺癌组织、细胞株和良性前列腺增生组织的表达水平;结合临床资料分析Bfl-1的表达与临床病理指标的关系;利用反义寡核苷酸干预前列腺癌细胞株,RT-PCR检测Bfl-1表达,MTT法检测细胞的存活,倒置显微镜下观察前列腺癌细胞的形态变化.结果 RT-PCR、Q-PCR结果显示Bfl-1 mRNA在激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3和DU145中高表达,在激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP中未见表达,表达差异有统计学意义(P＜0.05);原位杂交结果显示Bfl-1mRNA在前列腺癌组织中高表达,而在良性前列腺增生组织中未见表达,表达差异有统计学意义(P＜0.05);有转移、分期高的前列腺癌病例的Bfl-1 mRNA表达水平高于无转移、分期低的病例(P＜0.05);Bfl-1反义寡核苷酸转染PC-3和DU145细胞后,Bfl-1表达下调,细胞生长受到抑制(P＜0.05),细胞脱落、碎裂形成大小不一的细胞团块.结论 激素非依赖性前列腺癌细胞的生长与Bfl 1过表达有关;干预Bfl-1表达可能成为晚期前列腺癌治疗的新策略.     

雄激素调控前列腺癌中PTTG1表达的研究

目的:阐明雄激素与前列腺癌中雄激素应答基因PTTG1(pituitary tumor transforming gene 1)表达的关系.方法:选择基因芯片筛选的大鼠前列腺雄激素应答基因PTTG1,应用Northern Blot检测其在去势大鼠补充雄激素Mib(Mibolerone)前后在前列腺组织中的表达.应用免疫组化检测PTTG1在人前列腺癌组织中的表达,进一步以Northern Blot检测雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP及雄激素非依赖性前列腺癌细胞系 PC3和DU145中PTTG1的表达情况.结果:PTTG1在去势7 d的大鼠前列腺组织中没有表达,而补充Mib 2 d后即有显著的表达;PTTG1主要表达于人前列腺癌上皮细胞;0.1 nmol/L Mib作用48 h可显著上调LNCaP细胞PTTG1的表达;与LNCaP细胞比较,PC3和DU145中PTTG1的基础表达水平更高.结论:雄激素可显著上调大鼠前列腺组织及人前列腺癌细胞中PTTG1的表达,提示PTTG1可能在人前列腺癌的发生、发展中发挥重要的作用.     

MADD抑制人前列腺癌PC-3细胞凋亡作用的研究

目的：检测含促分裂素原活化蛋白激酶激活死亡结构域蛋白（MAPK-activating death domain-containing protein,MADD）在前列腺癌组织及良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia,BPH）组织中的表达并探讨其对前列腺癌细胞凋亡的作用。方法：收集40例人前列腺癌及35例BPH组织,免疫组化染色技术检测MADD的表达情况;Western blot技术检测MADD在人前列腺癌细胞株（LNCaP、PC-3和PC-3M）和良性前列腺细胞株（BPH1）中的表达情况;应用MADD siRNA转染人前列腺癌PC-3细胞,Western blot检测其MADD、caspase-3和PARP表达,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡变化。结果：MADD在前列腺癌组织中的表达高于BPH组织（P=0.000）;人前列腺癌细胞株LNCaP、PC-3M和PC-3中MADD表达水平明显高于良性前列腺细胞株BPH1（P=0.009、P=0.001、P=0.000）,沉默PC-3细胞中MADD表达,导致活化型caspase-3和PARP降解产物表达增加,并诱导PC-3细胞凋亡增加和增殖活力降低（P=0.000）。结论：前列腺癌组织中MADD表达明显增高,MADD在前列腺癌中可能作为凋亡抑制因子发挥功能。     

染料木黄酮通过PI3K/AKT途径抑制雄激素非依赖性LNCaP细胞

目的 利用LNCaP细胞建立去势抵抗前列腺癌细胞模型,研究染料木黄酮(GEN)对去势抵抗前列腺癌细胞生长的影响及可能的机制.方法 在无激素的血清环境下长时间培养LNCaP细胞,获得稳定生长的雄激素非依赖性 LN-CaP前列腺癌细胞,并鉴定细胞.以不同浓度的 GEN(0、6. 25、12. 5、25、50、100、200 μmol/L)分别作用于雄激素依赖性LNCaP和雄激素非依赖性LNCaP细胞24、48、72 h ,利用CCK-8法检测细胞增殖活性,Western blot法检测前列腺特异性抗原(PSA)、P53抑癌基因、细胞周期蛋白(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原( PCNA)在雄激素非依赖LNCaP细胞中的表达水平. Western blot法检测其对PI3K/AKT信号通路的调节作用.结果 GEN对雄激素非依赖性LNCaP细胞增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖关系. Western blot显示雄激素非依赖性前列腺癌细胞内PCNA、Cyclin D1随着GEN浓度的增加逐渐下调,P53随着GEN浓度的增加逐渐上调(P＜0. 05). GEN抑制了PI3K和AKT的磷酸化.结论 GEN可以在体外抑制雄激素非依赖性LNCaP细胞的增殖,其作用可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路,进而抑制细胞增殖实现的.     

雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌雄激素受体表达水平的变化

目的:从雄激素受体表达水平变化的角度,探讨雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化的可能机理。方法:体外培养雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP细胞)和雄激素非依赖性前列腺癌细胞株(PC-3细胞),应用流式细胞术测定两种细胞株在生理盐水和二氢睾酮(DHT)作用下雄激素受体(AR)的表达水平。结果:两种细胞株均有AR表达,两种条件下AR的表达水平分别为:LNCaP细胞生理盐水处理组85.99±4.97,DHT处理组93.74±3.63;PC-3细胞生理盐水处理组8.52±1.57,DHT处理组9.52±1.75,两种条件下LNCaP细胞的AR表达水平均高于相应条件下PC-3细胞的AR表达水平,两者有显著性差异(P<0.05)。DHT作用下LNCaP细胞的AR表达水平显著高于生理盐水作用下LNCaP细胞的AR表达水平(P<0.05);DHT作用下PC-3细胞的AR表达水平与生理盐水作用下PC-3细胞的AR表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:雄激素依赖性前列腺癌细胞过表达AR,并且二氢睾酮能促进其表达AR;雄激素非依赖性前列腺癌细胞AR表达较少,二氢睾酮对其AR表达无明显作用,雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化可能与前列腺癌雄激素受体表达水平下降有关。     

Survivin在前列腺癌细胞LNCaP和PC-3中的表达及意义

目的:探讨Survivin在前列腺癌激素非依赖进展中的可能作用。方法:采用流式细胞术测定前列腺癌雄激素依赖型细胞LNCaP和雄激素非依赖型细胞PC-3在雄激素剥夺时的凋亡情况,进而用Western-Blot鉴定这两株细胞中的Survivin表达情况,初步分析其在前列腺癌的激素非依赖存活中的作用。结果:在去雄激素情况下LNCaP凋亡细胞数显著高于PC-3;同时,Western-Blot证实Survivin在PC-3细胞中的表达显著高于LNCaP细胞。结论:Survivin在雄激素依赖型和雄激素非依赖型的前列腺癌细胞中的表达存在差异,而这种差异可能在前列腺癌细胞雄激素缺失时的生存发挥重要作用。     

抑癌基因PDLIM4在前列腺癌细胞中的差异表达

目的 探讨PDLIM4基因在正常前列腺上皮细胞(RWPE1)、前列腺癌细胞(PC-3、DU145、LNCaP)、前列腺癌多药耐药细胞(PC-3/Doc)及其他耐药细胞(K562/A02、H460/Doc)中的差异表达.方法 采用定量PCR(qPCR)、Western blot、免疫荧光等方法检测PDLIM4基因在各种细胞株中的表达;利用Western blo和DNA甲基转移酶(DNMTs)活性检测分析细胞中DNMTs的表达及活性.结果 PDLIM4基因在RWPE1高表达,在DU145、LNCaP细胞中基本无表达,在前列腺癌PC-3细胞中表达甚低,而在与其对应的多药耐药PC-3/Doc细胞中高表达(P＜0.05),并且在耐药细胞株中的高表达具有组织特异性.DNMTs在RWPE1表达水平低于前列腺癌细胞,但在PC-3和PC-3/Doc中无差异.酶活性分析表明,PC-3/Doc中DNMTs的活性低于PC-3细胞(P＜0.05).结论 PDLIM4基因在前列腺癌细胞中低表达,这种特异性的在前列腺癌耐药细胞中表达显著上调可能是由DNMTs活性降低所致.     

DNA甲基化酶抑制剂对前列腺癌中XAF1 mRNA表达的影响

目的 探讨前列腺癌中XAF1mRNA表达及DNA甲基化抑制剂对其表达的影响.方法 培养前列腺癌细胞株LNCaP、DU145和PC3及肾癌细胞株A498,提取正常人外周血单核细胞(PBMC)、A498和PBMC用作阳性对照.搜集临床10例前列腺癌及邻近前列腺组织作对照.RT-PCR法检测各细胞株和正常人外周血单核细胞中XAF1 mRNA表达,甲基化特异性PCR法检测甲基化酶抑制剂(5'-aza)处理前后前列腺癌细胞株LNCaP、DU145中XAF1 mRNA表达.结果 LNCaP和DU145中XAF1 mRNA的表达水平低于肾癌细胞株A498,PC3中XAF1 mRNA不表达.8例患者中有6例XAF1 mRNA在癌组织中的表达低于邻近前列腺组织.使用5'-aza处理后的LNCaP和DU145中XAF1 mRNA均以全长形式表达.结论 XAF1mRNA在LNCaP和DU14中均为低表达,在PC3不表达.DNA 5'-aza可诱导前列腺癌细胞株中XAF1 mRNA的全长表达.     

前列腺癌荷瘤小鼠药物去势后survivin基因表达的研究

目的：探讨药物去势方法对前列腺癌荷瘤小鼠生存素（survivin）基因表达的影响。方法：应用雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP和非依赖性细胞系PC3构建两种BALB／C鼠肿瘤模型。采用RT—PCR和Western blot方法检测动物药物去势前、后两种癌结节中survivin基因和蛋白的水平。TUNEL法检测细胞的凋亡。结果：两种癌结节细胞中均检测到survivin mRNA，在对照组人非癌前列腺组织中均无表达。药物去势前LNCaP组水平略高于PC3组，但差异不显著。药物去势前、后两种癌结节细胞的survivin mRNA水平未见明显改变。LNCaP组药物去势前Survivin蛋白含量相对值与PC3组比较差异不显著；药物去势后LNCaP组的Survivin蛋白水平显著下降（P〈0．01），PC3组无显著改变。LNCaP组呈现了较多的凋亡细胞，PC3组偶见凋亡细胞。结论：survivin基因转录后水平的调控差异可能是前列腺癌不同的激素依赖性的机制之一。     

前列腺癌相关基因PAX5启动子甲基化的临床意义

目的：探讨PAX5基因启动子甲基化作为前列腺癌生物标志物的临床价值。 方法：采用Real time RT-PCR检测前列腺细胞系（RWPE-1、LNCaP、PC-3、DU145）中PAX5 mRNA的表达,甲基化特异性PCR(MSP)法分析4株前列腺细胞的甲基化状态;去甲基化药物处理后,Real time RT-PCR法检测肿瘤细胞PAX5基因mRNA表达; Real time MSP法检测64例前列腺癌患者、22例前列腺增生患者与47例健康体检者血清中PAX5基因启动子甲基化水平,并统计分析血清PAX5基因启动子甲基化水平与临床病理参数的相关性;运用ROC曲线分析PAX5基因启动子甲基化在前列腺癌诊断中的价值。结果：Real time RT-PCR结果显示,与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,PAX5 mRNA在3株前列腺癌细胞中均表达下调;LNCaP、PC-3、DU145前列腺癌细胞均可检测到PAX5基因启动子甲基化,而正常前列腺上皮细胞RWPE-1不存在PAX5基因启动子甲基化;去甲基化药物可恢复PAX5基因mRNA表达;Real time MSP结果显示,前列腺癌患者的血清PAX5基因启动子甲基化水平显著高于前列腺增生患者和健康体检者;前列腺癌患者的血清PAX5基因启动子甲基化率与Gleason评分和TNM分期有关;ROC结果显示PAX5基因的诊断价值优于PSA。结论：本研究结果提示启动子甲基化是前列腺癌细胞中PAX5基因表达下调的主要原因,血清PAX5启动子甲基化是一种潜在的前列腺癌诊断标志物。     

血清PSA、F-PSA及F-PSA/PSA比值对前列腺癌的诊断价值

目的探讨T-PSA、F-PSA、F-PSA/T-PSA比值对前列腺癌的诊断价值。方法采用全自动电化学发光免疫分析仪（ECLIA）检测86例健康男性、46例前列腺增生和48例前列腺癌患者血清T-PSA和F-PSA,计算F-PSA/T-PSA比值,并进行统计分析。结果前列腺癌患者血清T-PSA明显高于前列腺增生组及正常对照组（P〈0.01）,F-PSA/T-PSA比值明显低于前列腺增生组及正常对照组（P〈0.01）,T-PSA与前列腺癌分期存在正相关性（r=0.786,P〈0.001）,Ⅲ-Ⅳ期患者的T-PSA明显高于Ⅰ-Ⅱ期,而F-PSA/T-PSA比值与前列腺癌分期无相关性（P〉0.05）。结论T-PSA和F-PSA对前列腺癌有较高的诊断价值,F-PSA/T-PSA比值可用于前列腺癌和前列腺增生的鉴别诊断。     

血清性激素和C-反应蛋白水平与前列腺癌患者相关性的临床研究

目的：探讨血清性激素和C-反应蛋白水平与前列腺癌患者相关性。方法：采用化学发光免疫分析测定了83例前列腺癌患者（prostate cancer,PCA）、65例良性前列腺疾病（其中33例良性前列腺增生和32例急性前列腺炎）和64例正常对照组的血清性激素和C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）水平并进行了比较性分析。结果：83例PCA血清睾酮（testosterone,T）水平较之65例良性前列腺疾病和64例正常对照组明显降低（均P〈0.05）,血清FSH和LH水平较之良性前列腺疾病和正常对照组明显增高（均P〈0.01）。而良性前列腺疾病与正常对照组相比差异无统计学意义（均P〉0.05）, PCA和良性前列腺疾病血清雌二醇（estradiol,E2）水平与正常对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。83例PCA血清CRP水平比正常对照组明显增高（P〈0.01）,而良性前列腺疾病比正常对照组明显增高（P〈0.05）。结论：PCA具有性激素代谢紊乱现象,其特点是血清T水平降低,血清卵泡刺激素和黄体生成素水平增高,血清E2水平正常,而血清CRP水平明显增高。     

人脐带间充质干细胞抑制前列腺癌转移的作用及机理研究

目的观察人脐带间充质干细胞(UMSCs)是否能抑制前列腺癌的生长和转移,并探讨其机制。方法 以组织贴壁法分离人UMSCs。UMSCs与LNCaP、PC-3前列腺癌细胞Transwell共培养12 h、24 h、48 h和72 h,检测前列腺癌细胞的增殖状态,计算共培养72 h时UMSCs对前列腺癌细胞增殖的抑制率。UMSCs与LNCaP、PC-3前列腺癌细胞Transwell共培养48 h,检测UMSCs对前列腺癌细胞侵袭力的抑制情况,计算抑制率。采用MILLIPLEX MILLIPLEX?_MAP液相芯片技术检测共培养72 h后培养上清液中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1、TIMP-2的表达。结果与UMSCs共培养后,前列腺癌细胞的增殖受到了抑制。LNCaP增殖速度在共培养72 h时低于对照组（P<0.05）,细胞增殖抑制率为37.21%;PC-3增殖速度在共培养48 h和72 h时低于对照组（P<0.05）,72 h时细胞增殖抑制率为31.27%。Transwell侵袭实验结果提示共培养48 h后,前列腺癌细胞侵袭力受到抑制,侵袭力抑制率分别为48.35%（LNCaP）和46.91%（PC-3）。共培养72 h后,LNCaP和PC-3分泌的MMP-2、MMP-9较对照组减少（P<0.05）,TIMP-1、TIMP-2的表达较对照组增加（P<0.05）。结论UMSCs可通过分泌MMPs的拮抗剂TIMPs来抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭转移能力。     

Differential proteome analysis of conditioned medium of BPH-1 and LNCaP cells

Background  Although the introduction of serum prostate-specific antigen (PSA) measurements into clinical practice has revolutionized the care of patients with prostate cancer, there are well-recognized limitations of PSA, and there is a critical need to identify additional prostate cancer biomarkers to assist in early detection and prognosis. In this regard, high resolution proteomic technology has the unexceptionable superiority to find those high abundance biomarkers. The purpose of this study was to search new tumor markers by proteomic technology.

Methods  The proteins in conditioned medium (CM) of BPH-1 and LNCaP cells were profiled by two-dimensional electrophoresis and identified by matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). The corresponding mRNA levels of some identified proteins were analyzed by RT-PCR.

Results  Totally 11 differentially expressed proteins (6 up-regulated including creatine kinase, brain (CKB), triosephosphate isomerase 1 (TPI1), isocitrate dehydrogenase 2 (IDH2) and 5 down-regulated including glutathione S-transferase pi (GST-pi)) in the CM were identified using MALDI-TOF-MS and database search. The expression pattern between mRNA and CM protein levels of CKB, IDH2, TPI1 and GST-pi in BPH-1 and LNCaP was similar.

Conclusion  We proved a feasible and effective way to search new tumor markers by a proteomics-based strategy and identified 11 potentially useful proteins in CM of BPH-1 and LNCaP cells to distinguish prostate cancer from benign prostatic hypertrophy.

     

色素上皮衍生因子在前列腺癌发展与转移中的抑制作用

目的 观察色素上皮衍生因子(PEDF)在前列腺癌发生发展中对前列腺癌抑制的作用.方法 通过免疫组化S-P法及Western印迹检测正常前列腺组织、良性前列腺增生组织、前列腺癌组织以及前列腺癌细胞系PC-3、Lncap中PEDF的表达情况,结合临床资料进行统计分析,评价PEDF表达情况与前列腺组织癌变之间的关系;同时联系前列腺癌不同病理分级,并研究其与PEDF表达之间的关系.结果 在正常前列腺组织及良性前列腺组织中PEDF均处于高表达状态,远远高于前列腺癌组织及前列腺癌细胞系中PEDF的表达[7例正常前列腺组织中7例PEDF阳性表达;20例良性前列腺增生组织19例PEDF阳性表达;83例前列腺癌组织中24例(28.9%)PEDF阳性表达].PEDF的表达情况与前列腺癌病理分级相关,低分化的前列腺癌组织中PEDF的表达量低于高分化的前列腺癌组织.在转移的前列腺癌组织中PEDF的表达率为12%,低于未转移的前列腺癌组织中的43.1%.结论 PEDF与前列腺癌的发生呈负相关,PEDF表达量越低前列腺癌细胞的恶性度越高,越具有转移侵袭的能力.     

前列腺特异性抗原的放免测定在前列腺疾病中的应用

采用放射免疫分析法测定了６７例前列腺疾病患者及３０例其它肿瘤（直肠癌、膀胱癌等）及女性生殖系统肿瘤患者与５４例正常人血中的前列腺特异性抗原（ＰＳＡ）的浓度，以探讨其在前列腺疾病中的应用价值。结果显示：前列腺增生（ＢＰＨ）、前列腺硬结可疑癌及前列腺癌（ＰＣ）患者血清ＰＳＡ水平均显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）且ＰＣ患者血清ＰＳＡ水平大部分大于４０μｇ／Ｌ，显著高于ＢＰＨ和前列腺硬结可疑癌患者（Ｐ＜０．０１），而其它肿瘤及女性生殖系统肿瘤患者血清ＰＳＡ水平则无明显升高（Ｐ＞０．０５）。因而认为血清ＰＳＡ的放免测定可为前列腺疾病的临床诊断提供可靠依据。     

胃癌患者血清炎性因子水平检测的临床意义

目的观察胃癌患者血清炎性因子表达水平,并探讨其临床意义。方法通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫比浊法检测108例胃癌患者血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,并与85例胃良性病变患者和120例健康体检者对应指标进行比较。结果胃癌组患者HMGB1、CRP、IL-6、IL-8和TNF-α表达水平明显高于胃良性病变组和健康对照组(P<0.05,P<0.01)。胃癌组患者血清炎性因子水平与肿瘤淋巴结转移分期密切相关,随着胃癌病情加重,HMGB1、CRP、IL-6、IL-8和TNF-α水平逐渐升高,Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者各炎性因子水平明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05,P<0.01)。结论血清炎性因子与胃癌的发生发展密切相关,可作为反映胃癌进展的标志物。