辛伐他汀促进骨髓基质细胞的成骨分化

目的：观察辛伐他汀对骨髓基质细胞成骨分化的影响，探讨其刺激成骨的作用机制。方法：体外培养成年小鼠骨髓基质细胞，不同浓度的辛伐他汀作用72h后，RT-PCR检测骨钙素(osteocalcin，OCN)mRNA水平的变化，Western blot检测OCN和骨桥蛋白(osteopontin，OPN)表达水平的变化，细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)细胞化学染色及酶比活性测定。结果：辛伐他汀作用72h后，OCN的mRNA表达水平增高，OCN、OPN蛋白表达水平增高，呈剂量依赖关系，细胞ALP染色增强，ALP比活性显著增高。结论：辛伐他汀促进骨髓基质细胞的成骨分化，辛伐他汀刺激成骨的作用机制可能与此有关。     

兔骨髓基质细胞在诱导条件下的成骨特性

目的 观察兔骨髓基质细胞的生长特点及诱导条件下的成骨能力。方法 使用密度梯度离心分离兔骨髓基质细胞进行培养，保留贴壁细胞传代，观察在培养液中添加地塞米松，维生素C，β－甘油磷酸钠条件下骨髓基质细胞生长及成骨分化情况。结果 骨髓基质细胞呈成纤维细胞样表现，增殖能力强。诱导条件下第2代细胞的碱性磷酸酶活性明显增高，10－12d达到最高峰，并且出现矿化结节。结论 使用本实验方法，获得的骨髓基质细胞成骨能力肯定，增殖能力强，可作为骨组织工程的种子细胞。     

成纤维细胞生长因子对大鼠骨髓基质细胞诱导成骨的影响

目的 :探讨在体外培养中成纤维细胞生长因子(FGF)对大鼠骨髓基质细胞诱导成骨的影响。方法 :用IMDM培养基分离、培养出大鼠胫、股骨单层贴壁的骨髓基质细胞 ;用地塞米松 (Dex)、—甘油磷酸钠、抗坏血栓 (VitC)联合诱导培养 ;然后分 :A组 ,单纯诱导 ;B～E组 ,分别加入不同浓度的FGF对骨髓基质细胞 (MSC)的诱导分化过程干涉 ;选择 2 ,8,14 ,2 0 ,2 6d时间点比较各组的增殖指数、碱性磷酸酶活性、骨钙素含量及钙化结节形成率。结果 :当加入浓度为2 ,4 ,6 ,8mg·L-1的FGF后 ,培养细胞的碱性磷酸酶活性依次降低 ,分别为 :(82± 5 ,72± 5 ,5 8± 4 ,4 8± 4 )nkat·L-1,且 4组数据间有明显差异性 (P <0 0 5 ) ,但钙化结节形成率及骨钙素含量依次增加 ,分别为 :(1 998± 0 2 2 3,2 5 79± 0 2 38,3 0 6 7± 0 2 5 9,3 70 1± 0 2 93)ng·L-1,且 4组数据间有明显差异性 (P <0 0 5 ) .结论 :FGF浓度为 2mg·L-1时 ,ALP活性最高 ,钙化结节形成速度及骨钙素含量最小 ,且三者有明显剂量依赖性 (p <0 0 5 ) .     

骨髓基质细胞成骨影响因素的研究进展

骨髓包括造血系统和基质系统 ,所以骨髓组织除含有血系细胞外 ,还含有骨髓基质细胞 (bonemarrow stromal cells,BMSCs)。 BMSCs对骨髓血系细胞起支持诱导作用 ,其所含的少量多能基质干细胞是多种细胞的前体细胞。因为它在不同的诱导条件下 ,能向成骨细胞、成软骨细胞、成纤维细胞、脂肪细胞等中胚层组织细胞分化 ,所以近年来又将其称为“间充质干细胞”或“骨源性干细胞”[1] 。种子细胞的选择一直是困扰骨组织工程进展的难题之一 ,虽然已有研究利用骨外膜成骨细胞、松质骨来源的成骨细胞、软骨细胞作为种子细胞 ,但这些细胞已接近成熟 …     

大鼠骨髓基质细胞的生长特点和在诱骨条件下的成骨特性

目的 研究大鼠骨髓基质细胞(rMSCs)的生长特点和在诱导条件下的成骨特性。方法 使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓基质细胞进行培养,保留贴壁细胞传代,观察、测试在培养液中添加成骨诱导剂地塞米松（Dex)10^-8mol/L、β-甘油磷酸钠（β-GP）10mmol/L,抗坏血酸（AA）50μg/ml条件下骨髓基质细胞的生长变化和成骨分化。结果 形态学观察表明,rMSCs贴壁细胞呈集落生长,有成纤维细胞样外观,利用MTT法和流式细胞术（FCM）测定增殖的结果表明,传代次数增加,rMSCs的增殖活性升高。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞的增殖,而且对多次传代细胞促增殖作用明显。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞成骨、在诱导3周时即出现明显的钙化结节。组织化学染色结果显示,非诱导条件下MSCs的碱性磷酸酶（ALP）水平会随传代而升高,传3代rMSCs的ALP的表达较弱,诱导一周后ALP的表达明显升高,超过未加诱导剂的传一代大鼠成骨细胞（OB）的ALP表达。结论 本实验表明所培养的rMSCs仍处于低分化水平,具有骨祖细胞的特性。     

骨髓基质细胞定向成脂分化的实验研究

目的为了研究髓内脂肪细胞的作用,并为相关实验提供脂肪细胞来源,并观察地塞米松诱导骨髓基质细胞向脂肪细胞分化的作用。方法采用原代骨髓基质细胞体外培养技术,取大鼠双侧股骨骨髓细胞,用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液离心分离,获取骨髓基质细胞。以地塞米松作为脂肪细胞分化诱导剂处理骨髓基质细胞,油红O染色,光镜下脂肪细胞计数。结果以递增浓度(0,1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5moL/L)地塞米松处理骨髓基质细胞,并培养21天,1×10-5moL/L组中诱导分化生成的脂肪细胞达到90%以上,对照组中脂肪细胞几乎为0。各组脂肪细胞比例随地塞米松浓度增大而增多,具有一定的浓度依赖性。结论在高浓度的地塞米松诱导下,骨髓基质细胞可分化为脂肪细胞,这可能是激素性骨质疏松的发病原因之一。     

骨形态发生蛋白对人骨髓基质细胞的体外成骨分化影响

目的 提取牛骨形态发生蛋白，并观察其对人骨髓基质细胞的体外成骨分化作用，为将骨形态发生蛋白与骨髓基质细胞用于进一步的缺损修复研究提供实验依据。方法 从小牛骨中的提取骨形态发生蛋白，配制条件培养液，并作用于培养状态的人骨髓基质细胞，染色检测细胞碱性磷酸酶，I型胶原表达情况，放免法测定培养液中骨钙素含量。结果 人骨髓基质细胞经衣导培养后，碱性磷酸酶，I型胶原，骨钙素表达明显增加。结论 体外培养时，天然骨形态发生蛋白可促进人骨髓基质细胞的成骨分化。     

大鼠骨髓基质细胞的生长特点和在诱骨条件下的成骨特性

目的　研究大鼠骨髓基质细胞 (r MSCs)的生长特点和在诱导条件下的成骨特性。方法　使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓基质细胞进行培养 ,保留贴壁细胞传代 ,观察、测试在培养液中添加成骨诱导剂地塞米松 (Dex) 10 - 8mol/ L、β-甘油磷酸钠 (β- GP) 10 mm ol/ L,抗坏血酸 (AA) 5 0 μg/ ml条件下骨髓基质细胞的生长变化和成骨分化。结果　形态学观察表明 ,r MSCs贴壁细胞呈集落生长 ,有成纤维细胞样外观。利用 MTT法和流式细胞术 (FCM)测定增殖的结果表明 ,传代次数增加 ,r MSCs的增殖活性升高。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞的增殖 ,而且对多次传代细胞促增殖作用明显。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞成骨 ,在诱导 3周时即出现明显的钙化结节。组织化学染色结果显示 ,非诱导条件下 MSCs的碱性磷酸酶 (AL P)水平会随传代而升高。传 3代 r MSCs的 AL P的表达较弱 ,诱导一周后 AL P的表达明显升高 ,超过未加诱导剂的传一代大鼠成骨细胞 (OB)的 AL P表达。结论　本实验表明所培养的 r MSCs仍处于低分化水平 ,具有骨祖细胞的特性。     

骨髓基质细胞体外培养及成骨特性研究

目的 建立兔骨髓基质细胞(BMSC)向成骨细胞转化的体外培养方法，并观察其体外的成骨特性。方法 利用静置贴壁原理进行BMSC的体外培养，汇合后传代，部分细胞改用条件培养液继续培养。对培养的细胞进行形态学观察和组织学检测，并观察条件培养液对BMSC的功能影响。结果 条件培养液组细胞碱性磷酸酶(ALP)染色阳性，细胞重叠生长形成多层结构，伴有散在的矿化结节形成。条件培养液组细胞ALP染色率及活性较完全培养液组高，但增殖率相对降低。结论 培养的BMSC经诱导具有体外成骨能力。地塞米松、β甘油磷酸钠和维生素C可促使BMSC转化为成骨细胞，但抑制BMSC的增殖速度。     

细胞生长因子诱导骨髓基质干细胞成骨的研究进展

骨髓基质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSC)被认为是骨组织工程中最有应用前景的理想种子细胞[1].由于BMSCs具有分化多方向性的特点,而骨组织工程学要求其向单一方向分化,所以,BMSCs的定向诱导具有重要作用.就其成骨方向来说,常用的具有诱导作用生长因子有骨形态发生蛋白(BMP)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮生长因子(VEGF)等.它们不仅可单独作用,相互之间也存在着密切的关系,可复合使用.本文就细胞生长因子对BMSCs分化及增殖的诱导作用作一综述.     

兔骨髓基质干细胞诱导成骨的实验研究

目的:研究兔骨髓基质干细胞(BMSCs)的生长特点和在诱导条件下的成骨特性。方法:使用密度梯度法分离骨髓基质细胞并进行培养,传2代后运用成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠(β-Gp)、L-坏血酸(AA)进行诱导,测试骨髓基质细胞的生长变化和成骨分化。结果:形态学表明骨髓基质细胞呈集落生长,有成纤维细胞样外观,诱导后细胞生长较前明显减慢,逐渐变为立方形、锥形或梭形。汇合时细胞呈铺石状重叠生长,进而形成“钙结节”样表现。染色及电镜观察可见细胞诱导前后有明显区别,细胞增殖吸光度(OD值)及细胞碱性磷酸酶测试表明,随着时间的延长,细胞增殖变慢,但分化能力增强(P<0.05)。结论:骨髓基质细胞作为构建组织工程骨的种子细胞在地塞米松、β-甘油磷酸、L-坏血酸诱导下成骨具有可靠的重复性。     

Notch信号介导骨细胞过表达BMP4促进骨髓基质细胞成骨分化

目的 探究骨细胞MLO-Y4过表达骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein-4,BMP4)通过Notch信号对骨髓基质细胞ST2成骨分化的影响.方法 使用BMP4重组腺病毒(Ad-BMP4)以及阴性对照(Ad-GFP)分别感染MLO-Y4后与ST2共培养,分为GFP组及BMP4组;West...     

杜仲对大鼠骨髓基质细胞增殖及成骨分化影响的实验研究

目的:观察杜仲含药血清对骨髓基质细胞(BMSCs)增殖、成骨分化的影响,探讨其促进骨折愈合的细胞学机制。方法:SD大鼠18只,随机分为杜仲水提物、醇提物和对照组,每组各6只,分别灌胃相应药物取含药血清,观察各含药血清对BMSCs的影响,进行碱性磷酸酶染色、茜素红染色观察和碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量测定。结果:碱性磷酸酶染色、茜素红染色除空白对照组外均有钙复合物形成,碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量空白较对照组高。结论:杜仲有促进BMSCs增殖和成骨分化的作用。     

骨髓基质细胞体外成骨能力的实验研究

目的 研究骨髓基质细胞(BMSc)的体外成骨能力，为骨组织工程研究提供细胞来源。方法 采用密度梯度离心法将兔BMSc自小量骨髓中分离培养，并观察第2代BMSc在地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠诱导条件下的生长及成骨分化情况。结果 BMSc呈成纤维细胞样表现，增殖能力强，在诱导条件下碱性酸酶活性明显增高，并出现矿化结节。结论 BMSc体外增殖能力强，成骨能力肯定。地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠可促进BMSc向成骨细胞分化。     

骨髓基质干细胞与成骨的研究进展

实验证实骨髓基质干细胞具有间充质干细胞的特性，表现为较强的增殖能力和向多种间充质细胞分化的潜能，可向成骨系细胞方向分化。在体外培养时具成骨细胞样细胞表型，植人体内可产生矿化骨组织。本文对其体内外成骨实验进展作一综述。     

骨髓基质细胞的体外分离与培养及成骨分化的研究近况

骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是一类具有多向分化潜能的干细胞,其中部分细胞有自我复制、高度增殖和多向分化能力,在特定培养条件下可向骨、软骨、神经胶质细胞、心肌、骨胳肌、脂肪细胞、血管内皮细胞等间叶组织细     

小鼠骨髓基质成纤维细胞与成骨关系的实验研究

目的：研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系。方法：Luria多器官培养器体外器官培养法，肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术，结果：移植物在移植处形成软骨细胞团及骨基质，结论：骨髓基质成纤维细胞集落形成细胞（CFU－F）为基质多能干细胞，能增生分化为成骨所必需的基质细胞。     

小鼠骨髓基质成纤维细胞与成骨关系的实验研究

目的 :研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系。方法 :Luria多器官培养器体外器官培养法、肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术。结果 :移植物在移植处形成软骨细胞团及骨基质。结论 :骨髓基质成纤维细胞集落形成细胞 ( CFU-F)为基质多能干细胞 ,能增生分化为成骨所必需的基质细胞     

骨髓基质细胞培养和体外成骨研究（摘要）

骨髓基质细胞培养和体外成骨研究（摘要）研究生刘劲松导师曾才铭，王宏邦，李世和（昆明医学院第一附属医院骨科，昆明６５００３１）关键词骨髓，基质细胞，细胞培养，成骨作用中图分类号Ｒ６０５将家兔和人的骨髓细胞进行体外培养。接种后的最初７２ｈ，培养物中以造血...     

骨髓基质细胞体外培养的生物学特性和成骨能力初步鉴定

目的体外分离培养狗的骨髓基质细胞（BMSCs），诱导其向成骨细胞分化，初步鉴定其成骨潜能和生物学特性。方法抽取毕格犬髂骨骨髓体外分离培养获得BMSCs，DMEM、新生牛血清培养基进行原代培养，部分传代细胞以含10mmol／L地塞米松、50μg／ml抗坏血酸和10mmol／L β-甘油磷酸钠的矿化培养液诱导其向成骨细胞增殖分化。倒置相差显微镜进行细胞形态学和细胞生长增殖观察，VonKossa法染色检测体外矿化结节形成，细胞碱性磷酸酶染色检测BMSCs的成骨活性。结果体外分离培养的BMSCs经条件培养基诱导后表现出明显的成骨活性，体外矿化（骨样）结节的Von Kossa染色阳性；传代BMSCs碱性磷酸酶染色阳性。结论体外分离培养的BMSCs中含有骨源性前体细胞．传代细胞具有较强的成骨潜能。