基于数学模型的高危HPV E6/E7 mRNA定量分析在宫颈病变筛查中的作用

目的:研究高危人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA定量分析在宫颈病变筛查中的作用。方法:采用原位杂交技术对440例不同宫颈病变[炎症、低级别上皮内瘤变(CIN)、高级别CIN、浸润性鳞癌]患者行高危HPV E6/E7 mRNA拷贝数进行定量检测,建立数学模型对检测结果进行分析。结果:4组之间HPV E6/E7 mRNA阳性率不全相等,具有统计学差异(P0.005 0);炎症组与其他3组宫颈病变之间高危HPV E6/E7 mRNA阳性率均有统计学差异(P0.008 3)。拷贝数大小与病变程度呈正相关,可知当mRNA小于500时,炎症的可能性比较高;500~10 000时,很可能是CIN(包括低级别和高级别);大于10 000时,很可能是高级别CIN和癌症。结论:高危HPV E6/E7 mRNA拷贝数大小与宫颈病变程度正相关,其定量检测可作为宫颈病变联合筛查的一种有效补充工具。     

宫颈癌组织APOBEC3A蛋白的表达与高危型HPV感染的相关性研究

 目的： 探讨宫颈癌组织中载脂蛋白 B mRNA 编辑酶催化多肽样蛋白3A（APOBEC3A）表达与高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染的关系。方法： 采用免疫组化法检测26例宫颈癌、27例宫颈上皮内瘤变（CIN）I～III和22例正常宫颈组织APOBEC3A蛋白的表达,同时使用凯普分型检测试剂盒对3组样品分别进行高危HPV16/HPV18分型检测。以脂质体法转染APOBEC3A质粒进入HeLa细胞,RT-qPCR与Western blotting验证APOBEC3A对高危型HPV18 E6 mRNA以及蛋白表达的影响。结果：宫颈癌组织、CIN组织以及正常宫颈组织中APOBEC3A蛋白表达的阳性率分别为46.2%、92.6%和86.4%,宫颈癌组织中APOBEC3A蛋白表达较正常宫颈组织明显下降（P<0.01）。宫颈癌组织、CIN及正常宫颈组织中HPV16感染阳性率分别为92.3%、77.8%和54.5%; HPV18感染阳性率分别为80.8%、51.8%和68.2%;APOBEC3A蛋白表达与HPV18感染阳性率呈负相关(P<0.05)。增加HeLa细胞中APOBEC3A的表达明显降低了HPV18 E6 mRNA以及蛋白的表达。结论：在宫颈癌组织中APOBEC3A高表达可以对抗HPV18感染,并抑制HPV18 E6的转录和表达。     

不同宫颈病变组织中人乳头瘤病毒16型E5基因的研究

目的:探讨人乳头瘤病毒(Human papillomavirus type,HPV)16型E5早期基因在临床宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型及宫颈癌患者中的存在情况,判断HPV16E5是否能作为临床宫颈癌的早期诊断治疗靶点,以利进一步研究HPV16的致癌机制。方法:从临床标本中筛选出HPV16阳性标本61例,根据病理诊断分为5组(宫颈炎组、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈癌组),再应用PCR的方法分别测定各组组织中HPV16E5DNA的表达情况。结果:宫颈炎组E5DNA阳性率为58.33%,CINⅠ级为63.64%,CINⅡ级为70.00%,CINⅢ级为44.44%,宫颈癌为77.78%,各组间阳性率差异无统计学意义。结论:E5DNA不仅仅在宫颈癌早期存在,因而E5不能作为临床宫颈癌的早期诊断靶点,但可作为宫颈癌疫苗研究的靶点。     

P16,Ki67与HPV16/18在宫颈病变中的表达及其临床意义

目的:研究多肿瘤抑制基因P16、细胞核增殖抗原Ki67及高危型人乳头状瘤病毒(high riskhuman papilloma virus,HPV16/18)在宫颈病变中的表达和临床意义。方法:采用免疫组织化学Elivision两步法检测P16和Ki67在宫颈非特异性炎症、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelialneoplasia,CIN)I级、Ⅱ级和Ⅲ级及宫颈鳞状细胞癌中的表达,用原位杂交法检测HPV16/18的表达。结果:P16蛋白表达在非特异性炎症、CINⅠ级、Ⅱ级和Ⅲ级及宫颈癌中的阳性率分别为20.0%,55.6%,93.6%和100.0%;Ki67蛋白表达在非特异性炎症、CINⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级及宫颈癌中的阳性率分别为17.6%,61.1%,89.4%和100.0%,不同组别间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。而且P16和Ki67的阳性表达率及染色强度呈递增趋势,表达存在分层现象。HPV16/18在非特异性炎症、CINⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级及宫颈癌中的阳性率分别为30.0%,61.1%,82.9%和100.0%,宫颈病变中HPV16/18的阳性率显著高于非特异性炎症组。结论:P16和Ki67蛋白检测作为宫颈病变的有效的生物学标记,可联合HPV16/18 DNA检测应用于宫颈癌及其癌前病变的筛查和诊断中。     

宫颈癌及其前期病变HPV感染与基因型分布

目的了解宫颈癌及宫颈上皮内瘤变CIN患者的HPV的感染和其基因分型及主要感染型别情况。方法应用型特异PCR检测宫颈癌及其前病变的患者的HPV感染及其主要基因分型情况的分析。结果在本研究宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者中,宫颈癌的HPV感染率为91．0％,CINⅠ／Ⅱ／Ⅲ的HPV感染率为73．3％,主要高危型HPV基因型别依次为HPV16、HPV18、HPV58、HPV33。结论在宫颈上皮内瘤变患者中感染主要高危型HPV基因型别依次为HPV16、HPV18、HPV58、HPV33、HPV16在宫颈癌和CIN中的构成比随着宫颈病变的增加而明显增加。     

HPV16/18和HPV16E6/E7DNA在宫颈癌组织中的表达

目的检测HPV16/18和HPV16E6/E7 DNA在宫颈癌组织中的表达,探讨其在宫颈癌发病中的作用.方法应用PCR和琼脂糖凝胶电泳方法检测46例宫颈癌组织中HPV16/18和HPV16E6/E7DNA.结果 46例宫颈癌中56.5%(26/46)扩增HPV16/18 DNA,其中宫颈鳞癌25例,宫颈腺癌1例.正常对照组20例HPV16/18DNA均为阴性,与宫颈癌组相比差异有显著性(P<0.01).HPV16/18 DNA阳性拷贝对数值为4.32±2.45.HPV16E6,E7DNA分别有53.8%(14/26)、46.2%(12/26)扩增.结论 HPV16/18和HPV16E6/E7 DNA与宫颈癌的发生密切相关,是宫颈癌恶性转化的关键之一,预示着宫颈癌有较强的增殖能力和转移能力.     

常见HR-HPV各型在子宫颈组织中致癌能力的评估

目的探讨高危型人乳头状瘤病毒(high-risk human papilloma viruses,HR-HPV)各型与子宫颈病变进展的关系。方法对135例诊断结果为45例非子宫颈上皮内瘤变(non-squamous intraepithelial lesions,NSIL)、42例低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions,LSIL)、40例高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)、8例子宫颈癌(squamous cervical cancer,SCC)的子宫颈活检组织蜡块进行HPV及E6/E7 mRNA的检测,分别应用PCR-反向杂交法、支链DNA技术(Quantivirus冷光仪)检测。结果 HPV 16在NSIL、LSIL、HSIL、SCC中感染率依次22.22%、21.43%、47.50%、62.50%,呈逐渐递增趋势(P=0.007);单一感染时,HPV 16的E6/E7 mRNA拷贝数依次是1 425.76、3 747.25、1 325.98、86 015.36,与子宫颈病变严重程度具有相关性(P=0.028);多重感染时,HPV 16伴其它HPV感染组在NSIL、LSIL、HSIL、SCC中的E6/E7 mRNA拷贝数呈递增趋势,差异有统计学意义(P=0.040),而其它HPV(不包括HPV 16)感染组表达的mRNA拷贝数与病变严重程度呈负相关性(P=0.044)。结论 HPV 16与子宫颈病变进展的关系最为紧密;在所有HR-HPV中HPV 16的致癌能力最强。     

人乳头瘤病毒DNA及E6/E7 mRNA检测在宫颈病变诊断中的比较研究

目的通过对不同程度宫颈病变的患者分别进行人乳头瘤病毒(HPV)DNA和E6/E7 mRNA检测来评估它们在宫颈病变筛查中的作用。方法选取2013年8月至2014年8月因宫颈疾病就诊的患者163例,行超薄液基细胞学检查(TCT)以及阴道镜下活检组织病理学检查,剩余标本分别进行HPV DNA及E6/E7 mRNA检测,所有检测均以病理学检查作为金标准,比较HPV DNA检测和HPV E6/E7 mRNA检测对于不同程度宫颈病变诊断的敏感度和特异性。结果所有病例中,HPV DNA和E6/E7 mRNA检测阳性率分别为44.2%和31.9%。两种检测方法所得结果的符合率为81.2%。在对CIN3+的检测中两种方法敏感度相差无几[92.6%(95%CI,75.7-99.1)],但E6/E7 mRNA检测的特异性73.8%(95%CI,68.5-78.7)明显高于DNA检测59.7%(95%CI,54.3-65.7)。对于CIN2+而言,HPV DNA检测的敏感度92%(95%CI,82.8-98.7)略高于E6/E7 mRNA检测87.5%(95%CI,74.8-95.3),但E6/E7 mRNA检测的特异性78.4%(95%CI,72.6-82.7)显著高于HPV DNA检测64.8%(95%CI,58.3-69.9)。结论 HPV DNA检测和HPV E6/E7 mRNA检测在CIN3+的诊断中均具有良好且相当的敏感度,但HPV E6/E7mRNA检测在CIN2+以及CIN3+妇女的诊断中具有更高的特异性。     

维吾尔族妇女宫颈癌人乳头状瘤病毒感染与人类白细胞抗原Ⅰ类基因表达缺失的关系及其意义

目的 研究维吾尔族妇女宫颈癌中人乳头状瘤病毒(HPV)感染和人类白细胞抗原Ⅰ类(HLA-Ⅰ)家族基因HLA-A、B和C表达的关系,探讨HPV感染和HLA-Ⅰ类家族基因表达缺失在宫颈癌演进过程中的作用.方法 收集维吾尔族妇女宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ和宫颈鳞癌患者的新鲜组织标本共78例,提取总RNA,采用半定量RT-PCR方法鉴定HLA-A、B和C基因的mRNA表达水平.提取组织DNA,采用HPV通用引物和HPV分型芯片确定HPV亚型.结果 HLA-A、B和C基因的总体mRNA表达缺失率随着宫颈病变的加重而增加,在宫颈炎组织内为1/12,在CIN及宫颈鳞癌分别占70.0%(14/20)和84.8%(39/46),在恶性程度高的低分化癌组织中高达90.6%(29/32),并与高危型HPV16感染呈正相关(r=0.803,P＜0.01).结论 HLA-Ⅰ类基因的表达缺失是维吾尔族妇女宫颈癌发生的重要标志,而HPV16感染可能是HLA-Ⅰ分子表达缺失的前提条件.     

宫颈病变程度与人类乳头瘤病毒(16、18型)负荷的关系

目的探讨宫颈病变程度与人类乳头状瘤病毒(HPV)16、18型负荷的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,检测宫颈不同病变活检组织及石蜡包埋标本中HPV16、18型感染状况。结果正常宫颈上皮感染HPV16、18型阳性率为3%,CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级和宫颈癌感染HPV16、18阳性率分别为45.7%,69.5%,72.2%和74.6%。正常宫颈与CIN,宫颈癌HPV16、18阳性率差异有极显著性(P<0.0001)。宫颈糜烂(Ⅰ°、Ⅱ°、Ⅲ°),CIN(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级)及鳞癌HPV16、18阳性标本平均拷贝数分别为:3.58×103、1.80×105、1.19×107,随着病变程度加重而逐渐增加,差异有极显著性(P<0.0001)。结论宫颈病变程度与HPV16、18型负荷呈正相关。对宫颈病变组织标本行HPV16、18型检测,对判断宫颈病变发展趋势,积极处理癌前病变,阻断病程、预防宫颈癌的发生将起到重要作用。     

子宫颈癌中Hedgehog信号通路蛋白表达与人乳头状瘤病毒16型感染的关系

目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路蛋白在宫颈癌及其癌前病变中的临床病理学意义,并分析其与人乳头状瘤病毒(HPV)16型感染的关系.方法 32例正常宫颈上皮、71例宫颈上皮内瘤变(CIN;CIN Ⅰ 28例,CIN Ⅱ 18例,CIN Ⅲ25例)和80例宫颈鳞状细胞癌共183例选自延边大学医院、延边妇幼保健院和延边肿瘤医院病理科存档蜡块.应用PCR技术检测上述组织中HPV16型的感染情况,并应用Shh、Ihh、Ptch和Smo 4种Hh信号通路蛋白抗体、组织芯片和免疫组织化学EnVision法检测Hh信号通路蛋白在上述病变组织中的表达情况.结果 Shh、Ihh、Ptch和Smo在正常宫颈黏膜上皮中为弱阳性,而在宫颈癌和CIN Ⅲ中呈强阳性,其表达率均显著高于正常宫颈黏膜上皮(P均<0.05).80例官颈癌标本中HPV16阳性率是77.5%(62/80),而且Shh蛋白的强阳性率在HPV16型阳性的宫颈癌组织中显著高于HPV16阴性组(P<0.05).结论 Hh信号通路蛋白过表达可以作为宫颈癌及其癌前病变的早期辅助诊断指标并有望成为宫颈癌靶向治疗的新靶点,而且Shh蛋白的过表达与HPV16型感染密切相关.     

人乳头瘤病毒分型与宫颈病变关系的研究

目的探讨不同砸别人乳头瘤病毒（Human papilloma virus,HPV）感染与宫颈疾病发生发展的关系。方法应用核酸分子快速杂交基因分型技术,对375例宫颈病变患者（宫颈炎182例、CINI81例、CINⅡ68例、CINⅢ69例、宫颈癌15例）进行HPV感染基因型分型测定,同时进行宫颈细胞学检查。结果375例标本中HPV阳性检出率为35．2％,HPV在各类宫颈病变组的阳性枪出率分别为宫颈炎18．6％,CINI32．1％,CINⅡ57．3％,CINⅢ68．9％,宫颈癌86．7％,宫颈炎组和宫颈癌病变组HPV之间结果差异有统计学意义（x^2=105．0,P〈0．05）。HPV多重感染率为32．6％,其中最常见HPV感染亚型为HPV16。结论宫颈病变严重程度与感染HPV亚型的致病能力密切相关。HPV核酸分型检测对宫颈疾病诊断和治疗具有重要意义。     

临床宫颈组织标本HPV16 L1蛋白检测

 目的 检测HPV16阳性宫颈标本L1蛋白的表达,发掘宫颈损伤程度与L1蛋白表达的规律。方法 PCR法对宫颈炎、宫颈上皮内瘤变（CINⅠ~Ⅱ）、原位癌、早期浸润癌及中晚期癌标本进行型别检测,ELISA法及免疫组化法检测HPV16阳性标本中HPV L1蛋白表达。结果 54例宫颈组织中HPV16阳性为46例（85.2%）。随着宫颈损伤加重,HPV16阳性标本的抗原抗体反应逐渐减弱;免疫组化阳性反应仅出现于上皮组织内,反应强度及分布与宫颈损伤程度及癌变组织的分化状态有关。结论 HPV16 L1蛋白的表达同时受宫颈组织损伤程度及宿主细胞分化状态的影响。早期对HPV L1蛋白进行检测,可为宫颈癌的早期预防及临床诊治提供理论指导。     

Detection of human papillomavirus genotypes with liquid bead microarray in cervical lesions of northern Chinese patients

Human papillomavirus (HPV) is the main cause of cervical cancer. Blending multiplex polymerase chain reaction (PCR) amplification and multiplex hybridization to liquid bead microarray (LBMA), we detected and identified 25 common HPV genotypes using type-specific primers for HPV E6 and E7 genes in cervical lesions of northern Chinese patients. Of the 511 cervical samples, 349 (68.3%) were found to be HPV positive by HPV-LBMA. The distribution was 22 HPV positive of 100 in the control group (22%), 41 of 80 with chronic cervicitis (51%), 80 of 99 with cervical intraepithelial neoplasia (CIN) I (81%), 46 of 56 with CIN II (82%), 67 of 74 with CIN III (90%), and 93 of 102 with invasive cervical carcinoma (91%). HPV-16 was the most frequent genotype in the CIN and cervical cancer groups. The most common genotypes were HPV-16 (28%), HPV-58 (14%), HPV-52 (14%), HPV-18 (8%), and HPV-33 (7%) in the CIN group, and HPV-16 (63%), HPV-52 (9%), HPV-18 (7%), HPV-58 (7%), and HPV-33 (5%) in the cervical cancer group. HPV-LBMA found multiple genotypes in 1 of 22 control (4%), 64 of 193 CIN (33%), and 22 of 93 cervical cancer (24%). The HPV-LBMA results were compatible with those of PCR and DNA sequencing. HPV-LBMA is a simple, high-throughput method that provides useful information on viral genotype and multiple HPV infections in cervical lesions. In northern China, the most common high-risk HPV genotypes seem to be HPV types 16, 58, 52, 18, and 33. Genetic information on HPV in cervical specimens could provide particular benefits in the management of cervical lesions.     

子宫颈组织中人乳头瘤病毒16型E6基因片段的定量PCR检测

目的探讨子宫颈组织中人乳头瘤病毒(HPV)16型E6基因的含量与疾病严重程度的关系.方法用定量聚合酶链反应(PCR)检测20例慢性宫颈炎,6例宫颈非典型增生,18例宫颈癌组织中HPV16E6基因的拷贝数.结果HPV16E6基因在慢性宫颈炎,宫颈非典型增生及宫颈癌组织中的平均拷贝数(拷贝/μgDNA)分别为6.16×104,5.33×106和6.45×106.统计学处理表明,宫颈非典型增生及宫颈癌组织中E6基因的拷贝数显著高于慢性宫颈炎(P<0.01),宫颈癌组织中E6基因的拷贝数高于宫颈非典型增生组织,但差异无显著性(P>0.05).结论HPV16E6基因的拷贝数与宫颈疾病程度呈正相关,定量检测HPV16E6基因可作为监测宫颈癌高危人群的一种方法.     

解脲脲原体／HPV共感染与宫颈癌变的相关性探讨

目的 了解宫颈上皮内瘤变（CIN）宫颈癌患者下生殖道解脲脲原体感染情况,初步探讨解脲脲原体（UU）、HPV与CIN/宫颈癌的相关性.方法 选取2005年9月至2009年2月中山大学附属第六医院及第二医院因宫颈上皮内瘤变或宫颈鳞癌住院的患者124例为病例组.随即抽取同期医院体检中心健康体检女性300例为对照组.采用荧光定量PCR方法进行宫颈分泌物解脲脲原体DNA检测.用杂交捕获Ⅱ代和导流杂交基因芯片技术检测HPV感染情况.结果 病例组解脲脲原体阳性率68.5%,对照组解脲脲原体阳性率38.7%.病例组和对照组之间UU阳性率比较,差异有统计学意义.124例行HPV检测病例中,UU和HPV均阳性者占58.9%.结论 女性下生殖道解脲脲原体感染与宫颈上皮内瘤变/宫颈癌有一定的相关性.解脲脲原体感染与宫颈病变程度相关,尤其与高度宫颈上皮内病变和宫颈癌相关.UU对HPV感染导致的CIN/宫颈癌可能存在协同作用.     

Human papillomavirus (HPV) DNA copy number is dependent on grade of cervical disease and HPV type

The association between human papillomavirus (HPV) DNA copy number and cervical disease was investigated. Viral DNA copy number for the most common high-risk HPV types in cervical cancer (types 16, 18, 31, and 45) was determined in cervical cytobrush specimens from 149 women with high-grade cervical intraepithelial neoplasias (CIN II-CIN III), 176 with low-grade CIN (CIN I), and 270 with normal cytology. Quantitative, PCR-based fluorescent assays for each of the HPV genotypes and for the beta-globin gene were used. The amount of cellular DNA increased significantly with increasing disease; thus, HPV was expressed as copies per microgram of cellular DNA. The assay had a dynamic range of >10(7), allowing documentation for the first time of the wide range of HPV copy numbers seen in clinical specimens. Median HPV DNA copy number varied by more than 10(4) among the viral types. HPV16 was present in the highest copy number; over 55% of HPV16-positive samples contained more than 10(8) copies/microgram. Median copy number for HPV16 showed dramatic increases with increasing epithelial abnormality, an effect not seen with the other HPV types. HPV16 increased from a median of 2.2 x 10(7) in patients with normal cytology, to 4.1 x 10(7) in CIN I patients, to 1.3 x 10(9) copies/microgram in CIN II-III patients. Even when stratified by cervical disease and viral type, the range of viral DNA copies per microgram of cellular DNA was quite large, precluding setting a clinically significant cutoff value for "high" copy numbers predictive of disease. This study suggests that the clinical usefulness of HPV quantitation requires reassessment and is assay dependent.     

新疆维吾尔族妇女宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中FHIT、P16~(INK4a)、RARβ蛋白的表达及意义

目的探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)、P16INK4a与视黄酸受体β(retinoic acid receptor-beta,RARβ)蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈上皮内瘤变(cervical intra-epithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌中的表达及其意义。方法采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶链接(SP)法检测20例慢性宫颈INK4a炎、30例CIN(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各10例)以及40例浸润性宫颈鳞癌组织标本中FHIT、P16INK4a及RARβ蛋白的表达。结果(1)FHIT蛋白阳性表达率依次为慢性宫颈炎(90.00%)CIN(66.67%)浸润性宫颈鳞癌INK4a(27.50%)(P=0.000);P16和RARβ蛋白阳性表达率依次为浸润性宫颈鳞癌(82.50%;90.00%)CIN(46.67%;53.33%)慢性宫颈炎(0.00%;10.00%)(P=0.000;P=0.000)。(2)在宫颈各组织中,FHIT蛋白INK4a与P16INK4a蛋白表达呈负相关(r=-0.384,P=0.000);FHIT蛋白与RARβ蛋白表达呈负相关(r=-0.291,P=0.006);P16INK4a蛋白与RARβ蛋白表达呈正相关(r=0.445,P=0.000)。结论抑癌基因FHIT表达缺失与P16INK4a和RARβ过度表达与宫颈癌的发生发展密切相关,并且FHIT、P16INK4a、RARβ具有协同作用。FHIT蛋白与P16INK4a蛋白和RARβ蛋白的联合检测可作为宫颈癌早期诊断和宫颈癌进展的分子指标。