鱼藤素通过AKT/FoxO1信号通路诱导胃癌细胞凋亡的作用机制

目的：研究鱼藤素(De)诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡的其作用机制。方法：运用CCK-8细胞活力检测法考察不同浓度(10、20、40、60、80、100 mol/L)鱼藤素作用24、48 h对SGC-7901胃癌细胞的细胞毒性;将SGC-7901胃癌细胞分为对照组及20、40 mol/L鱼藤素药物组,给药作用24 h后,蛋白质印迹法检测p-AKTThr308、叉头框蛋白O1(FoxO1)、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）等蛋白的表达水平;运用蛋白激酶B（AKT）基因转染使SGC-7901胃癌细胞中AKT过表达,然后给予20、40 mol/L鱼藤素给药作用24 h,以未用AKT基因转染的SGC-7901胃癌细胞作为对照组蛋白质印迹法检测p-AKTThr308、FoxO1、Bcl-2等蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测FoxO1、Bcl-2、Bax mRNA的表达水平。结果：不同浓度的鱼藤素对SGC-7901胃癌细胞均具有一定的细胞毒性;20、40 mol/L鱼藤素给药作用24 h能够显著降低SGC-7901胃癌细胞中p-AKTThr308、Bcl-2等蛋白的表达水平,升高FoxO1的表达水平;与对照组比较,AKT基因转染后,SGC-7901胃癌细胞中p-AKTThr308、Bcl-2等蛋白表达水平升高,FoxO1蛋白表达降低,与模型组比较,20、40 mol/L鱼藤素给药作用后能够降低p-AKTThr308、Bcl-2等蛋白的表达水平,降低Bcl-2 mRNA的表达水平,升高FoxO1及Bax的表达水平。结论：鱼藤素能够通过作用于AKT/FoxO1信号通路诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡。     

胃镜下局部注射大蒜素对进展期胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨胃镜下大蒜素局部应用对进展期胃癌的影响及作用机制。方法 进展期胃癌患者80例,胃镜及病理均证实为腺癌,分为两组;大蒜素组40例,术前48 h胃镜下病变处局部注射大蒜素,对照组40例局部注射生理盐水;手术切除胃癌组织,采用美国Becton Dickinson公司产的FACS-420型流式细胞仪检测,观察胃癌组织周期（G0/G1期、S期、G2/M期）各时相百分比、细胞凋亡率、增殖指数（proliferation index,PI）,以及胃癌组织细胞凋亡相关基因（Fas、Bax、Bcl-2）蛋白表达。结果 大蒜素组与对照组细胞凋亡率（%）分别为9.60±1.52、2.20±0.58, G0/G1期（%）分别为72.12±8.35、69.56±5.15, G2/M期（%）分别为9.54±3.20、13.20±3.05,PI值分别为27.80±8.35、30.40±5.15;两组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）;大蒜素组可增加凋亡促进基因Bax基因蛋白、凋亡始动基因Fas基因蛋白的表达（P＜0.05,P＜0.01）,降低凋亡抑制基因Bcl-2基因蛋白的表达（P＜0.05）。结论 本项研究初步证明胃镜下局部注射大蒜素能够抑制进展期胃癌组织细胞生长、增殖,并促进胃癌细胞凋亡。     

红芪多糖对线粒体途径介导的膀胱癌细胞凋亡的影响

目的：观察红芪多糖对线粒体途径介导的膀胱癌细胞凋亡的影响,并探讨可能机制。方法：取对数期T24细胞,随机分为对照组（常规培养）、红芪多糖组（加入红芪多糖0.8 μg/L）、SP600125组（加入SP600125 10 μmol/L）、联合组（加入红芪多糖0.8 μg/L、SP600125 10 μmol/L）。MTT法检测细胞增殖能力;双染法检测细胞凋亡率;JC-1法检测细胞线粒体损伤;免疫印迹法检测细胞相关蛋白表达。结果：与对照组比较,红芪多糖组24、48、72 h吸光度值、线粒体膜电位、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达量降低;凋亡率,Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白表达量,p-c-Jun氨基末端激酶（JNK）/JNK、p-c-Jun/c-Jun升高（均P<0.05）。SP600125组24、48、72 h吸光度值,线粒体膜电位、Bcl-2蛋白表达量升高;凋亡率,Bax、Caspase-3蛋白表达量,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun降低（均P<0.05）。与红芪多糖组比较,联合组24、48、72 h吸光度值、线粒体膜电位、Bcl-2蛋白表达量升高;凋亡率,Bax、Caspase-3蛋白表达量,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun降低（均P<0.05）。结论：红芪多糖可抑制膀胱癌T24细胞增殖,并通过介导线粒体途径促进其凋亡,作用机制可能与激活JNK/c-Jun信号通路有关。     

电针对局灶性脑缺血大鼠半暗带神经细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达的影响

目的：研究电针百会、曲鬓、前顶穴对局灶性脑缺血大鼠半暗带内神经细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达的影响。方法：W istar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,各组再随机分出6h、24h、48h、72h、7d时间点5个小组。采用线拴阻塞大鼠右侧大脑中动脉方法复制局灶性脑缺血动物模型。电针组术后立即进行电针刺激,假手术组、模型组术后不给电针处理。各组术后分别在相应时间点取脑检测半暗带神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达情况。细胞凋亡使用原位末端标记法（TUNEL法）检测,检测Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达使用免疫组织化学法。结果：假手术组各时间点偶见凋亡神经细胞出现。与假手术组比较,模型组6h、24h、48h、72h时间点细胞凋亡明显增加。针刺组24h、48h时间点细胞凋亡与模型组比较明显减少。假手术组Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达呈低水平。模型组6h、24h、48h时间点Bcl-2、Bax蛋白表达以及模型组6h、24h时间点c-Fos蛋白表达与假手术组比较明显增多。与模型组比较,针刺组6h、24h、48h、72h时间点Bcl-2蛋白表达增多,针刺组6h、24h、48h时间点Bax蛋白表达减少,针刺组6h时间点c-Fos蛋白表达减少、24h时间点c-Fos蛋白表达增多。结论：电针对局灶性脑缺血大鼠半暗带神经细胞凋亡有明显抑制作用,该抑制作用与电针调节Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达有关。     

桑皮素对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨桑皮素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制及其凋亡诱导作用。方法用10、15、20μmol/L桑皮素作用Hela细胞24 h后,在扫描电镜、透射电镜及倒置显微镜下观察细胞形态学变化;利用MTT法检测桑皮素对Hela细胞的增殖的影响;应用Hoechst单染实验检测Hela细胞的凋亡情况;采用qRT-PCR和Western blot检测Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结果桑皮素(2.5、5、7.5、10、15、20、25μmol/L)处理Hela细胞24、48 h,能明显的抑制Hela细胞增殖(P<0.05),且呈浓度依赖性。桑皮素(10、15、20μmol/L)处理Hela细胞24 h,细胞呈现早期凋亡。与0μmol/L桑皮素组比较,桑皮素(10、15、20μmol/L)能显著上调Bax mRNA及蛋白表达(P<0.05),下调Bcl-2 mRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论桑皮素通过上调Bax表达和下调Bcl-2表达,从而诱导Hela细胞发生凋亡。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人膀胱癌5637细胞株作用的研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人膀胱癌5637细胞株的作用及其作用机制。方法实验分为EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组和空白对照组。采用CCK-8法检测各组人膀胱癌5637细胞活性抑制情况,采用吖啶橙(AO)荧光染色观察各组人膀胱癌5637细胞形态,免疫组化法检测各组人膀胱癌5637细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果 EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组培养24 h、48 h和EGCG各组培养72 h的细胞存活率均明显低于空白对照组(P均0.05),且呈浓度依赖性明显降低(P0.05)。AO荧光染色显示空白对照组呈均匀绿色荧光,EGCG各组随着药物浓度的增加,呈绿色荧光凋亡细胞逐渐增多。与空白对照组比较,EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组人膀胱癌5637细胞中Bcl-2蛋白阳性表达细胞数明显减少而Bax蛋白阳性表达细胞数明显增多。结论 EGCG能抑制人膀胱癌5637细胞活力,其机制可能与调控Bcl-2、Bax蛋白表达有关。     

藤梨根正丁醇提取物在人食管癌细胞生长中的作用

目的：观察藤梨根正丁醇提取物对培养人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用,探讨藤梨根对人食管癌细胞的作用机制。方法：MTT比色法检测藤梨根正丁醇提取物在不同浓度（1、10、100μg/ml等）及不同时间（24、48、72 h等）对Eca-109细胞的生长抑制作用,TUNEL法检测其对癌细胞生长的诱导凋亡效应,免疫组化SP法检测凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达。结果：藤梨根正丁醇提取物对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强,其生长抑制率可达87.2%;提取物对瘤细胞有明显的凋亡效应,而在对照组未见有明显凋亡现象;提取物对瘤细胞作用24、48、72 h后分别与对照组比较,用药组Bax蛋白表达明显增强（P〈0.01）,同时伴有Bcl-2表达的减弱,在72 h后最明显,差异有显著意义（P〈0.01）。结论：藤梨根正丁醇提取物能有效抑制人食管癌Eca-109细胞生长。     

肉桂醛诱导食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞凋亡作用及机制研究

目的探究肉桂醛对食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖活性及凋亡的作用,并探讨其机制。方法 MTS实验检测不同质量浓度(1.88、3.75、7.50、15.00、30.00μg/m L)肉桂醛对Eca109细胞增殖活性的影响;倒置相差显微镜观察Eca109细胞形态学变化;流式细胞术检测不同质量浓度肉桂醛对Eca109细胞周期分布和凋亡的影响;Westernblotting检测不同质量浓度肉桂醛作用24h对Eca109细胞凋亡相关蛋白Caspase-3/Caspase-9、促凋亡蛋白Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平的影响。结果质量浓度为15.00、30.00μg/m L的肉桂醛作用Eca109细胞24 h后,与对照组相比,肉桂醛组细胞增殖活性显著降低(P0.05);经肉桂醛作用后,Eca109细胞呈现明显的凋亡形态学变化;经不同质量浓度肉桂醛处理Eca109细胞24 h后,G0/G1期细胞比例明显下降(P0.05),而G2/M期细胞比例明显增加(P0.05);肉桂醛处理Eca109细胞24h后,细胞凋亡率明显上升(P0.05);与对照组相比,经不同质量浓度肉桂醛处理24 h后,Eca109细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9出现明显的裂解片段(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显上调(P0.05)。结论肉桂醛可抑制食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与上调凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9、促凋亡蛋白Bax表达,以及下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达有关。     

脂联素对高糖环境下人心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的探讨脂联素（ADPN）对高糖环境下人心肌细胞株（HCM）的凋亡及凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响,揭示脂联素对高糖环境中心肌细胞可能的保护机制。方法将培养的HCM随机分为正常对照组、高糖组、高糖＋脂联素组,分别培养24h、48h、72h,运用MTT法测定不同时间段细胞增殖情况;流式细胞术测定细胞凋亡率;实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术测定细胞Bax/Bcl-2表达情况。结果与对照组相比,高糖持续作用抑制细胞增殖,增加细胞凋亡率,并使Bax表达上调,而Bcl-2表达下降。脂联素组细胞增殖明显增加,并通过下调Bax和上调Bcl-2抑制细胞凋亡,且该作用呈时间依赖性,与高糖组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论脂联素可以抑制心肌细胞凋亡,对高糖作用下的心肌细胞具有保护作用。     

鱼藤素对人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖和凋亡的影响及对核受体共激活因子-3的调控作用

目的 观察鱼藤素对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI-8226细胞增殖和凋亡的影响及其对核受体共激活因子-3(SRC-3)的调控作用,研究鱼藤素诱导凋亡作用与其调节SRC_3的相互关系.方法 采用MTT法检测细胞增殖活性,Annexin-V FITC/PI双标法及Hoechst 33258染色法分析细胞凋亡的改变,RT-PCR法检测鱼藤素对RPMI-8226细胞内SRC-3基因表达的影响;免疫组化法检测鱼藤素对RPMI-8226细胞SRC-3蛋白的影响和分布情况.结果 鱼藤素能明显抑制RPMI-8226细胞的增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,其作用24 h的IC50为(54.55±0.40)nmol/L.此外,鱼藤素具有较强的诱导RPMI-8226细胞凋亡的效应,25 nmol/L即能诱导(17.04±0.73)%的RPMI-8226细胞发生凋亡;当药物浓度达到100 nmol/L时,总凋亡率达(63.57±1.36)%.在RPMI-8226细胞中SRC-3高表达,且主要分布于细胞核,经鱼藤素干预后,SRC-3的mRNA和蛋白表达水平明显下降.结论 鱼藤素能明显抑制RPMI-8226细胞的增殖,并诱导其凋亡.而鱼藤素诱导的SRC-3表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用.     

雷公藤甲素对食管癌细胞凋亡及氧化应激的影响

目的:研究雷公藤甲素(Triptolide)对食管癌细胞凋亡及氧化应激的影响并初步探讨其机制。方法:取对数生长期Eca-9706食管癌细胞,以不作任何处理的Eca-9706细胞为空白对照组,设雷公藤甲素低(10 nmol/L)、中(30 nmol/L)、高(50 nmol/L)浓度组,用MTT法检测细胞活力,PI/Annexin V双染流式检测细胞凋亡,分光光度计法检测细胞中GSH-Px、T-SOD活性及MDA含量,Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、p-Nrf2、t-Nrf2蛋白表达。结果:与空白对照组比较,雷公藤甲素干预后食管癌细胞增殖率显著降低,细胞凋亡率显著升高,p-Nrf2、Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高,GSH-Px、T-SOD活性显著降低,MDA含量显著升高,其中雷公藤甲素高浓度组作用最显著(P0.05)。结论:雷公藤甲素能抑制食管癌Eca-9706细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制Nrf2/ARE通路进而促进细胞氧化损伤有关。     

重组水蛭素对人肝细胞癌生长的影响及分子机制研究

目的:探讨重组水蛭素对人肝癌细胞增殖、凋亡能力的影响及可能的分子机制。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,分4组:空白对照组,以PBS溶液进行假干预;重组水蛭素组,以1.0 U/m L重组水蛭素干预;凝血酶组,以1.0 U/m L凝血酶干预;混合组,以1.0 U/m L凝血酶+1.0 U/m L重组水蛭素干预。采用MTT、流式细胞技术分别观察细胞增殖能力及细胞凋亡的变化。采用qRT-PCR技术检测Bcl-2及Bax的mRNA表达变化,免疫蛋白印记技术检测细胞内Bcl-2及Bax蛋白的表达变化。结果:与空白对照组相比,重组水蛭素组细胞增殖能力较空白对照组与凝血酶组均显著降低、凋亡比例显著升高(P<0.05),而凝血酶组细胞增殖能力显著升高、凋亡比例显著降低(P<0.05);混合组细胞增殖能力较凝血酶组均显著降低、凋亡比例显著升高(P<0.05),而与空白对照组相比无明显统计学差异(P>0.05)。与空白对照组相比,凝血酶组细胞内Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平显著升高而Bax mRNA及蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);重组水蛭素组细胞内Bcl-2mRNA及蛋白的表达水平明显降低而Bax mRNA及蛋白的表达水平明显升高(P<0.05);混合组Bcl-2及Bax表达未发生显著变化(P>0.05)。结论:重组水蛭素不仅可以显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,并促进其凋亡发生,而且能够有效逆转凝血酶导致的生长促进及凋亡抵抗作用。     

高良姜素促进胰腺癌PCNA-1细胞凋亡和自噬并抑制移植瘤生长

【目的】 探讨高良姜素对胰腺癌PCNA-1细胞的抑制作用及机制。【方法】 ①体外研究：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞相对存活率,确定高良姜素浓度与处理时间。先设置空白对照组,阳性药物对照组（40 μmol·L-1顺铂）,高良姜素低、中、高剂量组（20、40、80 μmol·L-1）。再设置空白对照组、高良姜素高剂量组、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）siRNA组（转染MAPK siRNA）、高良姜素+MAPK siRNA 组（转染MAPK siRNA +80 μmol·L-1高良姜素）。流式细胞术测定细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-9、B细胞淋巴瘤蛋白2（Bcl-2）、Bcl-2相关的X蛋白（Bax）、微管相关蛋白 l 轻链 3（LC3）Ⅰ/LC3Ⅱ、P62、液泡分选蛋白 34（Vps34）、Beclin1,自噬相关蛋白质 Atg7、Atg5,p-MAPK/ MAPK的表达水平。②体内研究：裸鼠皮下注射PCNA-1细胞构建移植瘤模型,测量移植瘤体积和质量,蛋白免疫印迹法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、P62、Vps34、Beclin1、Atg7、Atg5的表达。【结果】后续细胞实验选择20、40、80 μmol·L-1高良姜素处理PCNA-1细胞24 h。与空白对照组比较,高良姜素高剂量组PCNA-1细胞凋亡率明显降低（P < 0.01）,Caspase-3、Caspase-9、Bax、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、Vps34、Beclin1、Atg7、Atg5、p-MAPK/MAPK蛋白表达明显上调（P < 0.01）,Bcl-2 和P62蛋白表达水平明显下调（P < 0.01）,而抑制MAPK后可逆转上述现象。高良姜素可减小裸鼠胰腺癌PCNA-1细胞移植瘤体积和质量,各蛋白表达情况同细胞实验结果相一致。【结论】 高良姜素可通过活化MAPK促进胰腺癌PCNA-1细胞的凋亡和自噬,并抑制移植瘤生长。     

大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2、Bax、FADD表达及对细胞凋亡的影响

目的观察大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、FADD表达对细胞凋亡的影响。方法20只SD大鼠随机分为假手术组（n=4）、模型组（n=16）。线栓法制备大脑中动脉闭塞模型（MCA0）,TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学法染色检测Bcf-2、Bax、FADD蛋白。结果与假手术组比较,模型组凋亡神经细胞计数随再灌注时间的延长显著增加,再灌注后24h表达达高峰,差异有统计学意义（P〈0．01）。模型组Bcl-2、Bax、FADD蛋白表达随再灌注时间的延长,表达逐渐增强。缺血再灌注6h后Bcl-2蛋白表达达高峰;缺血再灌注24h后Bax蛋白表达达高峰;缺血再灌注72h后FADD蛋白表达达高峰,均有统计学意义（P〈0．01）。结论Bcl-2、Bax、FADD表达在脑缺血半暗带区,随再灌注时间延长,表达逐渐增强,与细胞凋亡表达规律一致。     

高良姜素诱导人乳头瘤病毒阳性的宫颈癌细胞凋亡实验研究

目的研究高良姜素对人乳头瘤病毒(HPV)阳性人宫颈癌细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法选择2株HPV阳性人宫颈癌细胞(Si Ha、He La)和1株HPV阴性人宫颈癌细胞(C-33-A),用不同浓度的高良姜素(20、40、80μmol/L)分别处理24、48、72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法测定高良姜素对3株宫颈癌细胞增殖的影响;不同浓度高良姜素处理宫颈癌细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;Western blotting法检测Bcl-2家族蛋白表达情况。结果高良姜素可以剂量和时间依赖性地降低HPV阳性宫颈癌细胞Si Ha和He La的活力;而对于HPV阴性的宫颈癌细胞C-33-A活力无明显影响;细胞周期检测显示高良姜素可以使Si Ha和He La细胞的生长阻滞在G1或G2/M期;流式细胞仪分析发现40μmol/L高良姜素作用于Si Ha和He La细胞48 h后,细胞出现明显凋亡,而C-33-A细胞仅有少量凋亡;Western blotting检测发现40μmol/L高良姜素处理后,HPV阳性宫颈癌细胞中促凋亡蛋白Bad、Bid、Bax表达量升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w表达量降低。结论高良姜素能抑制HPV阳性宫颈癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2、Bcl-w基因的表达及上调Bad、Bid、Bax基因的表达有关。     

木犀草素通过调控JAK2/STAT3信号通路对Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的探究木犀草素通过调控JAK2/STAT3信号通路对Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法木犀草素(10、20、30、40μmol/L)、JAK2抑制剂AG490(40μmol/L)单独或共同处理Hela细胞24 h。利用MTT检测Hela细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达。结果木犀草素(30、40μmol/L)处理24 h后可抑制Hela细胞的增殖,促进Hela细胞凋亡(P0.01)。与对照组比较,AG490、木犀草素(40μmol/L)单独处理Hela细胞24 h,p-JAK、p-STAT3及Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加。与AG490组相比, AG490与木犀草素(40μmol/L)共同处理Hela细胞,细胞增殖能力下降(P0.01)。结论木犀草素可能通过JAK2/STAT3信号通路来调控Hela细胞的增殖和凋亡。     

苦参素诱导人食管癌Eca-109凋亡作用及机制的研究

目的：探讨苦参素诱导人食管癌Eca-109凋亡作用及其机制。方法：运用倒置显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态变化;运用流式细胞术检测细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果：苦参素1 mg/mL、2 mg/mL作用24 h后,倒置显微镜和透射电子显微镜观察Eca-109细胞均出现典型的凋亡形态变化;流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性（P〈0.05）;Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性（P〈0.05）;但细胞凋亡峰不明显。结论：苦参素对人食管癌Eca-109有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关。     

姜黄素联合FOLFOX诱导胃癌细胞发生凋亡及其机制研究

目的观察姜黄素联合FOLFOX（folinic acid fluorouracil oxaliplatin）对胃癌细胞株BGC-823生长的影响,并探讨其可能的发生机制。方法设立空白对照组、姜黄素组、FOLFOX组［5-FU（0.1 mmol/L）+奥沙利铂（5 μmol/L）］及姜黄素联合FOLFOX组。CCK8法检测细胞活性,Hoechst染色观察细胞凋亡,Caspase-3试剂盒检测Caspase-3活性, 实时荧光定量PCR法测定Bcl-2、Bax mRNA表达的变化,Western blot法测定Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果各用药组均能抑制BGC-823细胞增殖、诱导细胞凋亡、增加Caspase-3的活性、降低Bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达而增加Bax mRNA及Bax蛋白表达,且姜黄素联合FOLFOX组疗效优于姜黄素组及FOLFOX组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论姜黄素联合FOLFOX组能够明显抑制BGC-823细胞的增殖,其联合作用可能通过促进Bax的表达及Caspase-3的活性、抑制Bcl-2表达,从而加速肿瘤细胞的凋亡。     

乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法将人结肠癌HT29细胞分为空白组、乙酰紫草素组(10μmol/L)、奥沙利铂组(1μmol/L)和联合给药组(10μmol/L乙酰紫草素+1μmol/L奥沙利铂),MTT法检测HT29细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HT29细胞凋亡率、qRT-PCR法检测HT29细胞Ki-67、Bcl-2及Bax mRNA表达,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白表达。结果人结肠癌HT29细胞经乙酰紫草素、奥沙利铂和联合给药处理24、48、72 h后,细胞增殖抑制率均增加,其中联合给药组细胞增殖抑制率最高(P<0. 05)。药物处理HT29细胞48 h后,与空白组比较,乙酰紫草素组、奥沙利铂组和联合给药组凋亡率、Bax mRNA表达增加(P<0. 05),而Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0. 05);联合给药组的细胞凋亡率、Bax mRNA表达均高于乙酰紫草素组和奥沙利铂组,Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达低于乙酰紫草素组和奥沙利铂组。结论乙酰紫草素和奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡作用,可能与调控PI3K/Akt信号通路有关,且两者联用时效果更好。     

青蒿琥酯对急性髓系白血病细胞株MV4-11增殖凋亡的调控作用

【目的】 探讨青蒿琥酯抗急性髓系白血病（AML）的作用。【方法】 取对数生长期AML细胞株MV4-11,用不同浓度青蒿琥酯分别处理24、48、72 h,四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞增殖抑制率,选择青蒿琥酯处理48 h对MV4-11细胞的半数抑制浓度（IC50）进行后续实验。将细胞随机分为对照组、青蒿琥酯组、复合物C组与青蒿琥酯+复合物C组,MTT法测定细胞存活率,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡情况,定量聚合酶链反应（qPCR）法检测细胞中B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）的mRNA水平,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）通路相关蛋白的表达水平。【结果】 青蒿琥酯可以抑制 MV4-11 细胞增殖,呈时间、剂量依赖性,处理 48、72 h 对 MV4-11 细胞的 IC50分别为1.58、1.39 μg/mL。与对照组比较,青蒿琥酯组细胞存活率降低,凋亡率升高,G0/G1 期细胞增加,S 期、G2/M 期细胞减少,Bax mRNA相对表达量升高,Bcl-2 mRNA相对表达量降低,p-AMPK、Bax蛋白表达水平上调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平下调（均P＜0.05）;与对照组比较,复合物C组细胞存活率升高,凋亡率降低,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,Bax mRNA相对表达量降低,Bcl-2 mRNA相对表达量升高,p-AMPK、Bax蛋白表达水平下调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平上调（均P＜0.05）;与对照组比较,青蒿琥酯+复合物C组p-AMPK蛋白表达水平上调,p-mTOR蛋白表达水平下调（均P＜0.05）。与青蒿琥酯组比较,复合物C组与青蒿琥酯+复合物C组细胞存活率升高,凋亡率降低,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,Bax mRNA 相对表达量降低,Bcl-2 mRNA相对表达量升高,p-AMPK、Bax蛋白表达水平下调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平上调（均P＜0.05）。与复合物C组比较,青蒿琥酯+复合物C组细胞存活率降低,凋亡率升高,G0/G1 期细胞增加,S 期、G2/M 期细胞减少,Bax mRNA 相对表达量升高,Bcl-2 mRNA 相对表达量降低,p-AMPK、Bax蛋白表达水平上调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平下调（均P＜0.05）。【结论】 青蒿琥酯对MV4-11细胞具有抑制增殖、诱导凋亡的作用,其机制可能与激活AMPK信号通路有关。