双色双融合荧光原位杂交方法检测bcr／ab1融合基因

本研究总结分析1295份双色双融合荧光原位杂交方法（DC—DF—FISH）检测的bcr／abl融合基因结果并与常规细胞遗传学结果对比,进一步证实双色双融合荧光原位杂交方法检测bcr／abl融合基因的敏感性及临床应用价值。应用bcr／abl双色双融合DNA探针对骨髓间期细胞行荧光原位杂交,回顾分析FISH和核型检测结果。结果表明：在所检测的539例患者的1295份骨髓标本中FISH阳性结果456份,涉及患者310例,核型正常的18例。核型分析失败的5例。310例FISH阳性病例中典型的DC—DF—FISH信号（2Y1G1R）234例,占75．5％（234／310）。非典型信号患者76例,其中变异信号66例,占FISH阳性病例的21．3％（66／310）。典型变异信号（1Y2G2R）16例,abl／和／或bcr缺失50例。213例多次DC—DF—FISH结果中,治疗后总转阴率为60％（128／213）,治疗过程中阴性阳性多次反复的达12例。结论：双色双融合FISH技术可以检测隐匿核型、变异核型、基因序列缺失、微小残留病（MRD）,是一个敏感、精确的白血病的诊断和治疗监测工具,有必要同细胞遗传学检查一样作为常规项目,尤其对于治疗后的病例,它在监测微小残留病及监测复发方面更优于常规细胞遗传学。     

间期双色双融合荧光原位杂交监测慢性髓系白血病异基因造血干细胞移植后bcr/abl融合基因

本研究探讨bcr/abl双色双融合荧光原位杂交（DD-FISH）的敏感性及临床应用价值.对19例慢性髓细胞白血病（CML）异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后微小残留病灶（MRD）用DD-FISH进行监测,同时与常规细胞遗传学（CC）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）结果相比较.样本取自骨髓,少数来源于骨髓片或外周血.结果表明：14例CML患者在Allo-HSCT后CC显示持续正常供者核型,RT-PCR转为阴性,移植2月后均为完全供者嵌合（DC）,DD-FISH检测结果持续为阴性,平均随访11.25月,MRD无增加.1例CC及RT-PCR阴性,而性染色体FISH为混合嵌合,DD-FISH阳性,监测无MRD增加,临床未治疗,疾病稳定.3例骨髓复发患者的DD-FISH及性染色体FISH均提示MRD明显增加,RT-PCR转为阳性,却只有1例CC异常,供者淋巴细胞输注（DLI）及甲磺酸伊马替尼治疗后均为DC,DD-FISH阴性,RT-PCR阴性.1例骨活检证实髓外复发患者骨髓或外周血样本的DD-FISH、CC及PCR均阴性,供受者完全嵌合.结论：间期双色双融合FISH可应用于CML异基因造血干细胞移植后MRD的监测,其操作简易快速,灵敏度高,且骨髓或外周血均可采用.动态监测能及时发现扩大的白血病细胞克隆.     

三例变异型Ph染色体的bcr/abl融合基因荧光原位杂交

大约 8 %的慢性粒细胞白血病 (ＣＭＬ)患者有变异型Ｐｈ染色体 (变异Ｐｈ易位 ) ,形态上可将其分为简单型和复杂型。国外有作者用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和染色体原位杂交技术研究发现 ,变异Ｐｈ易位的ＣＭＬ患者具有ｂｃｒ/ａｂｌ融合基因[1,2 ] 。我们应用双色荧光原位杂交技术 (ｄｕａｌ ｃｏｌｏｒｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ,Ｄ ＦＩＳＨ) ,检测 3例变异Ｐｈ易位ＣＭＬ患者的ｂｃｒ/ａｂｌ融合基因。对象和方法1　病例　变异型Ｐｈ染色体的ＣＭＬ患者 3例 ,男 1例 ,女 2例 ,发病年龄为 2 5～ 3…     

格列卫治疗后bcr/abl融合基因变异的研究

目的:应用荧光原位杂交法检测格列卫治疗后白血病bcr/abl融合基因的改变。方法:应用双色双融合法荧光原位杂交技术检测42例接受格列卫治疗的急慢性白血病患者骨髓细胞bcr/abl融合基因,对比治疗前后bcr/abl融合基因的改变。结果:所有患者治疗后均出现融合基因变异,与患者肿瘤负荷、分型和分期无关。结论:格列卫治疗可诱导bcr/abl基因发生融合变异。     

荧光原位杂交技术在白血病微小残留病检测中的应用

荧光原位杂交是利用非放射性物质标记核酸探针，通过免疫荧光在间期核和染色体上检测特异ＤＮＡ序列的一种分子遗传学技术，具有快速，安全，准确和灵敏等优点，它为肿瘤微小残留病（ＭＲＤ）的检测提供了一种新颖可靠的手段。     

BCR/ABL双色双融-荧光原位杂交技术的信号模式探讨

目的研究BCR/ABL双色双融合探针荧光原位杂交技术(dual color dual fusion BCR/ABL probe-fluorescence in situ hy-bridization,DCDF-FISH)在白血病遗传学异常检测中的常见信号模式,探讨各种信号模式与染色体异常的关系。方法采用BCR/ABL的DCDF-FISH技术和染色体核型分析技术对初诊的40例慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)、30例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)以及10例其它(包括AML和骨髓增生性疾病)患者骨髓标本进行检测,比较DCDF-FISH各种信号模式与染色体关系。结果DCDF-FISH检测见11种信号模式:2R2G为正常细胞信号模式;2R3G、3R2G及3R3G为无BCR/ABL融合基因的异常信号模式;1R1G2F、1R1G1F、1R2G1F和2R1G1F模式的核型都为t(9;22);1R1G3F核型模式为t(9;22)伴有Ph+;2R2G1F为三条以上染色体易位t(9;22;V);1R2G2F为t(9;22)伴多一条22号染色体,这些信号模式的细胞内都存在着BCR/ABL融合基因。结论BCR/ABL DCDF-FISH检测时存在着多种信号模式,明确各种信号模式的意义,对临床疾病的诊断、预后有重要指导意义。     

检测bcr/abl融合基因在急性淋巴细胞白血病治疗中的意义

目的了解急性淋巴细胞白血病患者治疗中bcr／abl融合基因的情况,探讨检测bcr-abl融合基因的临床意义。方法应用反转录一巢式聚合酶链反应（nest—PCR）检测52例急性淋巴细胞白血病（ALL）患者骨髓标本ber—abl融合基因。结果52例ALL患者bcr／abl融合基因阳性18例,其中ber—abl融合基因阳性者7例缓解,CR率为38．9％;阴性者27例缓解,CR率为79．4％。对34例缓解患者进行短期随访,共有13例复发。7倒诊断时ber／abl（＋）的缓解期患者,证实仍有6例存在bcr／abl残余克隆。此6例CR期有MRD存在的患者在随访时间内全部复发。而27例缓解期不存在MRD的患者有7例复发。MRD阴性者复发率为25．9％,MRD阳性者复发率为100％,复发率差异有统计学意义（P〈0．05）。结论急性淋巴细胞白血病患者治疗过程中检测bcr—abl融合基因有助于ALL病情观察;对于缓解期患者MRD的检测,增加了预后评估价值。     

bcr—abl融合基因及其检测

bcr-abl融合基因位于染色体t(9;22)(q34;q11),由位于9号染色体上的细胞原癌基因abl部分序列从其正常位置易位至22号染色体的BCR区而形成。在绝大多数病例中,断裂点集中在5.8 kb的M-BCR区,主要形成b2a2和b3a2二种形式的转录物及蛋白质,二者差异仅为75个碱基及25个氨基酸。bcr-abl融合基因及其表达的检测对CML有重要的诊断与预后价值。用Southern印迹杂交、间期或中期染色体原位杂交等方法检测DNA,发现Ph阴性或变异型Ph病人存在bcr-abl融合基因,检测到许多新的融合类型,并确认异基因BMT后白血病的复发是源于自身MRL。用优化的RT-PCR,定量RT-PCR或RNA原位杂交检测RNA,可精确定位罕见或混合的接合型,还发现正常人中bcr-abl基因有低量表达且有随年龄增长而增加的趋势。用Western印迹或酶联免疫反应检测,发现BCR-ABL蛋白与C-ABL蛋白之比在外周血与骨髓中相似且与Ph染色体重排率有线性关系,还发现如果P190继P210之后出现,则CML的预后很差。     

双色双融合荧光原位杂交探针检测慢性髓系白血病Bcr/Abl基因重排的研究

本研究探讨双色双融合荧光原位杂交技术(DC-DF-FISH)在慢性髓系白血病(CML)中的应用价值,应用常规R-显带技术、DC-DF-FISH、RT-PCR技术检测41例CML患者的染色体核型及bcr/abl融合基因.结果表明,对于初诊CML的18例患者,R-显带显示Ph染色体阳性检出率为94.4%(17/18),DC-DF-FISH阳性检出率也为94.4%(17/18),对于治疗后CML的18例患者,R-显带显示14例有可分析分裂相,其中有11例存在Ph染色体,阳性检出率为78.6%(11/14);而用DC-DF-FISH检测治疗后患者的阳性率为94.4%(17/18);移植后的5例患者R-显带均未检出Ph染色体,而FISH检测出1例bcr/abl基因阳性,RT-PCR证实了FISH的检测结论,但在移植患者中,RT-PCR无阳性发现.结论:双色双融合荧光原位杂交技术具有高度的准确性、可靠性,是检测CML患者bcr/abl基因重排的可靠方法,适用于CML的诊断、疗效判定及微小残留病灶的检测.     

应用国产ES探针检测慢性髓系白血病的bcr/abl融合及der(9)中间缺失

本研究旨在验证国产LSI bcr/abl ES探针检测慢性髓系白血病(CML)bcr/abl融合基因及衍生9号染色体中间缺失的有效性。应用国产LSI bcr/abl ES探针对97例经骨髓细胞形态学及常规细胞遗传学显带分析确诊的CML患者进行FISH检测,对具有der(9)中间缺失的病例再进行ASS基因探针的FISH检测,并取同期129例染色体核型正常的除外血液肿瘤性疾病及骨髓增殖性疾病患者作为阴性对照。结果显示:97例CML患者中91例染色体核型分析具有经典的t(9;22),6例为变异易位。经FISH检测所有患者均具有bcr/abl融合信号,其中16例具有der(9)中间缺失,占16.5%,在16例der(9)中间缺失的病例中13例具有ASS基因的缺失。129例阴性对照患者均未检测出bcr/abl融合。结论:国产LSI bcr/abl ES探针能有效识别bcr/abl融合及der(9)中间缺失,无假阴性及假阳性结果,ES-FISH检测结果与G显带核型具有很好的一致性。     

吉西他滨对慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞G-CSFR及bcr/abl mRNA的影响

为了观察吉西他滨对慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)及bcr/ablmRNA的作用,收集CML慢性期、急变期患者的及骨髓象正常的非血液病患者骨髓液,分为吉西他滨组(加入吉西他滨,调整浓度为10μg/ml)和对照组,培养48小时后收集细胞。采用流式细胞术检测各组标本骨髓G-CSFR的表达率;采用RT-PCR技术检测各组标本bcr/abl mRNA的表达。结果表明:吉西他滨组CML慢性期、急变期患者及骨髓象正常者骨髓G-CSFR的表达率分别为(50.72±8.57)%、(36.32±4.25)%和(59.42±7.62)%。对照组CML慢性期、急变期患者及骨髓象正常者骨髓粒系G-CSFR的表达率分别为(45.42±6.52)%、(30.58±5.68)%和(58.56±5.54)%。两组CML患者骨髓G-CSFR的表达率分别与骨髓象正常组比较,差异有显著性(p0.05),CML慢性期患者与急变期比较,差异有显著性(p0.05)。吉西他滨组CML患者G-CSFR的表达率与未加药组相应组别比较,差异有显著性(p0.05)。吉西他滨组CML慢性期、急变期患者bcr/abl mRNA表达水平比较,差异无显著性(p0.05)。吉西他滨组与对照组、CML慢性期、急变期患者G-CSFR表达率与bcr/abl mRNA表达水平呈负相关(p0.05)。结论:在体外培养下,吉西他滨可以提高CML慢性期、急变期患者骨髓G-CSFR的表达率,对bcr/abl mRNA表达的作用不明显,CML慢性期、急变期患者G-CSFR表达率与bcr/abl mRNA表达水平呈负相关。     

急性淋巴细胞白血病bcr/abl融合基因表达及其与免疫表型的关系

采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了M-bcr/abl和m-bcr/abl两种类型融合基因在48例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的表达,并且绝大多数病例同时进行了免疫表型和DNA倍体的流式细胞术分析。结果表明,25%(12/48)的病例M-bcr/abl或m-bcr/abl融合基因阳性,m-bcr/abl阳性率略高。分析bcr/abl阳性病例的免疫表型,发现大多数病例为B系标志阳性,但部分T系标志阳性的病例也检测出M-bcr/abl或m-bcr/abl,说明bcr/abl阳性ALL病例以B系标志阳性者居多,T系标志阳性的ALL病例也可为bcr/abl阳性。     

RT—PCR一步法检测慢性粒细胞白血病bcr／abl融合基因

应用ＲＴ－ＰＣＲ一步法检测了４２例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因，均显示ｂｃｒ／ａｂｌ基因阳性，其中２１例为１６８ｂｐ扩增带，１８例为９３ｂｐ扩增带，３例同时具有１６８ｂｐ和９３ｂｐ二条扩增带。ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因检测，对ＣＭＬ的诊断、治疗及预后判断均有重要意义。ＲＴ－ＰＣＲ一步法特异性好，敏感性高，简单快速，可节省试剂，值得推广应用。     

bcr/abl融合转录子阳性的B细胞型急性淋巴细胞白血病免疫表型特点

为探讨B细胞型急性淋巴细胞白血病(B-ALL)中bcr／abl融合转录子阳性白血病细胞的生物学特征，用流式细胞术检测26例bcr／aN阳性及32例bcr／abl阴性B-ALL病例的免疫表型，用PC双法检剩免疫球蛋白重链(IgH)基因重排。结果表明：所有的病例均为CDl9阳性。bcr／abl阳性与bcr／aN阴性B-ALL表面分子有显统计学差学异（P＜0．05)的是CD34(96．2％与65．6％)，CDl0(96．2％与71.8％)及CD38(43．8％与95．4％)。在26例bcr／abl阳性病例中，原始细胞共表达CDl0 ／CDl9 ／CD34 ，CDl0 ／CD34 ／HLA—DR 和CDl0 ／CD34 ／CD38—分别为92．3％(24／26)，73．1％(19／26)和56。2％(9／16)。对bcr／abl阳性组的17例进行了IgH基因重排检剩，10例阳性(58．8％)。14例bcr／abl阴性组中12例(85．7％)阳性。在32例bcr／aN阴性病例中，原始细胞共表达CDl0 ／CDl9 ／CD34 和CDl0 ／CD34 ／HLA—nR 分别为43．8％(14／32)和37.5％(12／32)，无1例表型为CDl0 ／CD34 ／CD38—。结论：bcr／abl阳性B-ALL患CD34和CDl0阳性率较高，而CD38阳性率较低，且IgH基因重排检出率较低，其独特的免疫表型特征是CDl0 ／CD34 ／CD38-。该研究结果提示该类型白血病细胞具有较早期的B系祖细胞免疫表型特点。     

慢性髓系白血病患者移植造血干细胞后bcr／abl融合基因变化的实时定量RT-PCR监测及其意义

为了探讨Ph阳性慢性髓系白血病（CML）患者异基因造血干细胞移植后不同时期bcr／abl融合基因水平变化的实时定量PCR监测及其意义，对21例CML患者骨髓移植后不同时期bcr／abl融合基因水平用实时定量PCR技术进行了连续监测。结果表明：21例bcr／abl融合基因阳性CML患者移植后7例未检测出融合基因，14例移植后1—6月仍可检出不同水平bcr／ab／融合基因。动态观察发现，9例bcr／abl融合基因处于较低水平，相对数在0．0074％～0．088％，于移植后第3—7月转为阴性。5例符合分子生物学复发标准，融合基因相对数在0．077％-75％。其中1例在骨髓移植后1、2、3个月融合基因相对数分别为0．95％、1．5％、0．16％，于移植后4个月自行转阴性；2例接受同一供者单个核细胞输注后bcr／abl转为阴性；2例发展为临床血液学复发，其中1例经化疗及同供者单个核细胞输注再次缓解，但bcr／abl阳性，另1例不治死亡。结论：对于ph阳性CML患者骨髓移植后连续定量监测bcr／abl融合基因水平可以了解疾病残留状态，预测分子学生物学复发，指导临床治疗，并评价疗效。     

慢性髓性白血病异基因造血干细胞移植后M-bcr/abl及m-bcr/abl融合转录子追踪观察

为研究慢性髓性白血病 (CML)异基因造血干细胞移植 (SCT)后M bcr/abl及m bcr/abl融合转录子表达特征 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术测定 72例CML患者SCT后不同时间骨髓M bcr/abl及m bcr/abl融合转录子的表达。结果显示 ,CML患者移植后 <6个月M bcr/abl阳性率 (79.2 % ,4 2 /5 3)显著高于 6 - 12个月(34.3% ,11/32 )及≥ 12个月 (35 .1% ,13/37) (P <0 .0 0 1) ,各时间段M bcr/abl阳性患者的临床复发率分别为1 9% (1/5 3) ,0 (0 /32 )及 16 .2 % (6 /37) ;6例临床复发患者中有 5例复发时M bcr/abl与m bcr/abl同时阳性。 14例遗传学缓解患者移植 6个月后M bcr/abl阳性的 17份标本无 1例m bcr/abl阳性。结论 :多数CML患者移植后M bcr/abl仍为阳性 ,一般在 6个月内转阴 ,移植后M bcr/abl阳性的患者不一定复发 ,同时追踪观察M bcr/abl及m bcr/abl融合转录子可能会有助于监测残存白血病。     

荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因的临床应用

本研究探讨应用荧光原位杂交技术( FISH)检测BCR/ABL融合基因在临床中的应用价值.对初诊考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者、急性淋巴细胞白血病患者及异基因造血干细胞移植后的慢性髓系白血病(CML)患者,行骨髓细胞学检查并用FISH法检测BCR/ABL融合基因.结果表明:①46例在初诊时考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者中,有22例患者诊断为CML,应用FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阳性(100％),骨髓细胞学检查显示CML者占86.4％ (19/22);另24例患者诊断为非CML的慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病,FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阴性(100％),而骨髓细胞学检查有3例支持CML诊断、1例支持MDS诊断;②7例急性淋巴细胞白血病患者,有3例FISH法检测BCR/ABL融合基因为阳性;③2例异基因造血干细胞移植后的CML患者,应用HSH法检测BCR/ ABL融合基因可检测到阳性细胞(分别为6.5％及1.2％).结论:FISH法检测BCR/ABL融合基因敏感、可靠,对慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的诊断及鉴别诊断有重要价值;可明确Ph+急性淋巴细胞白血病患者的诊断;在CML患者行异基因造血干细胞移植后监测微小残留病灶方面也有重要意义.