分泌抗人Ig Kappa链和Lambda链单克隆抗体细胞株的建立及其抗体的临床应用(摘要)

Lawe 等(1981)报告用正常人 IgG 全分子免疫小鼠与 NS—1细胞系融合建立抗人 IgK和λ链 MCAb以后,Ling 等(1983)用本周氏蛋白 K 和 CL—Gr免疫小鼠制备抗人 Igλ链 MCAb,Mageed(1986)则用类风湿病人 IgM 免疫小鼠制备抗人 IgK 链 MCAb_1在国内有关杂志中却未见有针对该二抗原的单克隆     

大肠粘液癌的组织化学及免疫组织化学比较研究

以阿尔帝蓝PH2.5——过碘酸雪夫(AB(PH2.5)/PAS和高铁二胺——阿尔卡蓝PH2.5——过碘酸雪夫(HID/AB(PH2.5)/PAS)组化法及单克隆抗体(MCAb)癌胚抗原(CEA)、抗大肠癌单克隆抗体SC3A,SC6和SC13A与62例粘液腺癌和30例印戒细胞癌进行比较研究。结果证明在两组癌中的两种染色均以酸性粘液及唾液酸粘液为主。免疫组化结果证明4种抗体与两种癌反应的部位主要显示细胞浆和膜,其次为粘液内呈棕黄或棕褐色颗粒。其中MCAb、SC6和SC13A对粘液腺癌诊断价值比CEA反应高。是两种优于CEA肿瘤标记物。     

日本脑炎病毒内影像组抗独特型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的　制备具有内影像作用的分泌日本脑炎病毒 (JEV)抗独特型单克隆抗体 (AId m Ab)杂交瘤细胞系 .方法　以传统免疫法和硝酸纤维素膜 (NC膜 )皮下包埋免疫法 ,用具有高中和活性的抗 JEV m Ab 2 H 4和 2 F2分别免疫 BAL B/ c小鼠 ,按常规方法融合 ,经多种 EL ISA、表面等离子共振和动物免疫实验筛选并鉴定具有内影像作用的 AId m Ab.结果　获得了 3株可分泌 AIdm Ab的杂交瘤细胞系 .结论　所获 AId m Ab均以能模拟 JEV抗原 ,为 JEV受体的分离、纯化提供了条件 .日本脑炎病毒内影像组抗独特型单克隆抗体的制备及初步鉴定@丁…     

211At-抗胃癌单克隆抗体对人胃癌细胞DNA、RNA和蛋白质合成的影响

利用核素前体掺入法研究~(211)At-抗胃癌单克隆抗体对人胃癌细胞DNA、RNA和蛋白质合成的影响。结果表明:3.7×10~4Bq和1.85×10~5Bq的~(211)At标记抗胃癌单克隆抗体3H_(11)(~(211)At-3H_(11)MCAb)及Na~(211)At可对DNA、RNA和蛋白质合成产生不同程度的抑制效应,尤以对RNA合成的抑制作用明显,其作用具量效关系。~(211)At-3H_(11) McAb的抑制作用强于Na~(211)At。药物作用1.5小时后洗脱,合成作用可逐渐恢复,提示该药为干扰DNA代谢型药物。     

直接在小鼠脾内注射免疫原免疫产生MCAb

用可溶性抗原直接注入小鼠脾脏免疫,第4天取脾与SP2/0融合,用ELISA和间接血凝法(PHA)检测杂交瘤上清,测到阳性克隆。利用双亲细胞杂交产生单克隆抗体(MCAb),其中之一的脾细胞要求有大量增殖状态的特异性B细胞,才能分泌特异性抗体,这与免疫的关系极大。常见的方法要福氏完全佐剂加可溶性抗原首次免疫,间隔2-4周加或不加不完全佐剂的抗原加强一次,隔合前应连续以50～500ug不加佐剂的抗原进行静脉或腹腔加强。Spitz用直接脾内免疫产生MCAb的方法获得比较高的分泌MCAb的杂交瘤我们应用此法免疫人IgG、马钤薯病毒,轮状病毒获得抗人IgG MCAb并在融合后的培养板杂交瘤上清测到了抗马铃薯病毒阳性克隆。现将实验报告如下:     

抗HCG单克隆抗体细胞系的建立及应用

以注射用HCG免疫BALb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经4次克隆化筛选,建立分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤株,命名为IC_(12),经鉴定,单克隆抗体(mcAb)属于鼠IgG_1亚类。效价为ELISA法1:64000,胶乳凝集法1:512。化学交联HCG、MCAb聚苯乙烯胶乳,直接凝集试验(抗原对抗体),检测100例早孕尿液,阳性率100％,与市售常规妊娠胶乳试验相比已显示出非凡的特异性。     

HeLa细胞膜上日本脑炎病毒受体候选分子的初步鉴定

目的寻找HeLa细胞膜上可与日本脑炎病毒(JEV)结合的分子。方法采用免疫共沉淀(Co-IP)技术,分离HeLa细胞膜上可与JEV特异结合的分子,对SDS-PAGE特异条带进行质谱分析,并经Western blotting和酶联免疫吸附试验(ELISA)验证其与JEV的特异结合。结果 Co-IP复合物经SDS-PAGE分离出多个条带,选择最明显的3条带进行了质谱分析,结果显示分别为真核细胞翻译延长因子2(eEF2)、热休克蛋白90β(HSP90β)和微管蛋白α6。利用兔抗人HSP90β单克隆抗体进行Western blotting和ELISA实验,证实了细胞膜中确有HSP90β且可与JEV特异性结合。结论 HSP90β是HeLa细胞膜JEV受体的候选分子。     

测定T淋巴细胞亚群观察小儿细胞免疫功能

应用单克隆抗体(MCAb)分类方法,测定小儿外周血中辅助性T淋巴细胞(CD_4~ )和抑制性T淋巴细胞(CD_8~ )的比值(CD_4~ /CD_8~ ),检测小儿细胞免疫功能。结果表明:长期反复患感冒发热、抵抗力低下的患儿,传染性单核细胞增多症(传单)的患儿,其CD_4~ /CD_~ 的比值明显下降或倒置。测定免疫球蛋白均为正常。     

黄热病毒单克隆抗体的制备及免疫反应特性鉴定

目的 制备黄热病毒单克隆抗体并对其生物特性进行鉴定.方法 通过动物免疫、细胞融合、阳性克隆筛选等方法制备黄热病毒单克隆抗体,免疫Balb/c小鼠收集腹水,得到扩大制备的单抗,辛酸-饱和硫酸铵法纯化腹水.IFA法检测单抗与黄热病毒(YFV)、乙脑病毒(JEV)、登革病毒1-4型(DENV1-4)、西尼罗病毒(WNV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)的特异性反应,并对纯化前后的腹水进行效价分析;ELISA方法进行单抗的亚型分类.结果 获得8株黄热病毒的单克隆抗体,均与YFV有特异性反应,1株与JEV有交叉反应,余7株与其它4种虫媒病毒无交叉反应.抗体分型大部分为IgG;纯化后单抗蛋白含量大多在30 mg/ml以上.纯化后的4株单抗效价在1∶25600,3株在1∶12800,仅1株效价较低.结论 本研究目前获得了几株特异性好、效价高的黄热病毒单克隆抗体,为建立黄热病毒快速检测系统奠定了基础.     

恒河猴乙型脑炎动物模型的建立及应用

我们新设计了与人自然感染途径相似,并选用恒河猴背部皮下接种JEV方法,成功地复制成具有典型脑炎症状及病理改变的乙型脑炎动物模型,并进行了单克隆抗体(McAb)治疗JEV感染恒河猴的实验研究。JEV感染猴体温升到39℃以上的第2天,注射制剂进行实验治疗。结果显示,McAb经肌肉、静脉、硬脑膜下加肌肉等不同途径注射后,均有良好的疗效,对恒河猴的保护率达100%,其中以硬脑膜下加肌肉途径注射的效果最佳。恒河猴的JEV感染动物模型的建立,为深入研究日本脑炎的发病机理及其特异性防治创造了有力工具,具有一定理论和实际意义。     

乳鼠接种编码乙型脑炎病毒PrM/E蛋白的重组质粒DNA可诱发保护性免疫

目的：评价乙型脑炎DNA疫苗对乳鼠的免疫保护效果．方法：以DNA疫苗(pV/JE)、质粒载体对照(pVAX1)和PBS接种BALB／c乳鼠后，测定其病毒特异性的CTL活性、结合抗体、中和抗体，并以100LD50JEV攻击，观察保护效果．结果：DNA疫苗组的CTL活性为37．5％，而载体和PBS对照组的CTL活性分别为18％和8．5％．二次免疫后DNA疫苗组的免疫荧光抗体滴度为1：28．3(几何平均效价)，抗体阳转率为80％(8／10)；混合血清的中和抗体效价为1：40．JEV攻击后，DNA疫苗组小鼠获得75％(6／8)的保护率，而对照组小鼠全部死亡．结论：所构建的DNA疫苗可诱发乳鼠产生抗JEV的CTL活性、中和抗体及保护活性，为JEV新型疫苗的研制提供重要的实验依据．     

乙脑疫苗研究进展

目的 乙脑病毒(JEV)灭活疫苗应用以来，乙型脑炎的发病率大大下降，但由于它存在一些缺点，即(1)需多剂接种才能产生良好的免疫效果，(2)不良反应渐多如局部反应率达20％左右，全身反应率达10％，(3)价格昂贵，生产工艺复杂等影响其进一步推广。目前研究新的疫苗有两类，第一为减毒活疫苗，由SAl4衍生出的系列病毒株SAl4-14—2，SAl4—2—8，SAl4—5—3等皆证实毒力低，安全性好。对其核苷酸序列分析表明E138位(谷氨酸→赖氨酸)，E176(异亮氨酸→缬氨酸)可能是引起减毒的位点。第二为基因重组疫苗。IC47为无毒重组的JEV。动物实验证明它具有活性，无毒性，且一次注射就会使机体免疫保护能力大大提高，分子生物学证实它是E138位点的单点突变引起，因此IC47做为正规疫苗应用之前，须解决稳定剂型、清除毒力逆转的问题。     

急性胆管炎时TNF对肝脏的影响

为了研究急性胆管炎时肿瘤坏死因子(TNF)对肝脏的影响及抗TNF单克隆抗体(TNF—McAb)和头孢噻甲羧肟对肝脏的保护作用,本实验在大鼠急性胆管炎模型上,检测血浆TNF、内毒素(ET)水平及血清谷丙转氨酶(ALT)活性,观察肝组织一般结构和超微结构,结果显示:急性胆管炎组大鼠血浆TNF、ET水平及ALT活性显著升高(P<0.01),相应肝脏病理变化显著,TNF—McAb和头孢噻甲羧肟保护组血浆TNF、ET水平及血清ALT活性显著下降,肝组织病理变化较轻,结果提示;TNF是急性胆管炎时肝脏损害的重要介质;TNF—McAb和头抱噻甲羧肟对急性胆道感染肝损害有保护作用。     

对再生障碍性贫血患者T细胞亚群变化的观察

近年来，由于抗T淋巴细胞单克隆抗体（MCAb）的问世，对再生障碍性贫血（再障）的免疫紊乱研究提供了有效的方法。我们应用OKT系列     

慢病毒介导的RNA干扰对乙型脑炎病毒感染的抑制作用

目的:研究由慢病毒介导的RNA干扰对乙型脑炎病毒(JEV)感染细胞与小鼠的抑制作用。方法:以JEV的C、NS3、NS4A和NS5基因为靶点,设计特异性siRNA序列,并构建重组传导慢病毒。对慢病毒预处理的BHK21细胞接种JEV,并通过相对定量PCR、病毒蚀斑和间接免疫荧光实验检测慢病毒对JEV的抑制作用。对慢病毒预处...     

MMP—3的纯化

基质金属蛋白酶Ⅲ(MMP—3),由连接组织细胞分泌,以潜酶形式存在,经内肽酶作用成为有活性的酶。现认为MMP—3具有多方面作用。该文报告利用抗MMP—3单克隆抗体制备亲和层析柱,由新生儿成纤维细胞培养液纯化MMP—3至电泳纯,回收率79.8％.     

抗人精子单克隆抗体对生殖的影响

本文报告9株抗人精子单克隆抗体在体外对生殖的影响。TAT、SIT、SCMC和精子—地鼠去透明带穿卵实验表明:3株IgM类抗人精子单克隆抗体主要引起精子的头—头凝集,对精子有较强的补体依赖性细胞毒作用;6株IgG类抗人精子单克隆抗体主要引起精子的尾—尾凝集,并能阻止精子在宫颈粘液中的前向性运动;4/9株抗人精子单克隆抗体对精子穿卵有明显抑制作用,且两株联合应用有协同效应,提示有效而可靠的精子避孕疫苗应具有多个抗原决定簇。     

人精子单克隆抗体抑制精子穿透无透明带田鼠卵

本工作观察了4个人精子单克隆抗体(BAS_(1—4))对人精子穿透无明带田鼠卵的影响。取获能人精子加入不同稀释度的人精子单克隆抗体处理30min,再加入无透明带的田鼠卵15—20枚,经孵育3h后,观察精子穿卵情况。空白对照组和血清对照组分别用BWW液和灭活小鼠血清代替人精子单克隆抗体。用统计学处理比较实验组和血清对照组受精率及受精指数的差异。结果表明,4个人精子单克隆抗体中,除BAS_4对精子穿卵无抑制作用外,其余3个均有明显抑制作用。以上结果表明,我们所制备的人精子单克隆抗体不仅具有免疫学活性,也具有生物学活性。我们的初步结果为利用人精子单克隆抗体纯化人精子膜抗原,研究精子结构与功能的关系,以及发展一种可能用于局部的新型避孕方法或免疫避孕提供了基础。     

抗人A型红细胞ZMC_9单克隆抗体的纯化及理化性质

本文应用葡聚糖凝胶G-200柱层析和聚丙烯酰胺凝胶板状电泳,将细胞培养上清液及小鼠腹水中的单克隆抗体分离提纯,并对它的理化性质进行了研究.结果表明:①ZMC_9单克隆抗体(小鼠IgM)分子量为871000道尔顿.②纯化单克隆抗体在56℃加热5 min,即失去抗体活性,而未经纯化的单克隆抗体即使加热30min,抗体活性也毫无损失.③纯化单克隆抗体在pH 6～8环境中活性不变,pH超过8.0时活性有所下降,而未经纯化的单克隆抗体在pH 6～10范围内仍表现有活性.④将试剂冻干或加叠氮钠4℃保存,效价至少可维持一年以上.     

抗人TNF-α单克隆抗体对银屑病患者血清TNF-α的中和研究

目的:研究抗人TNF-α单克隆抗体对寻常型银屑病患者血清TNF-α的中和效应。方法:应用双抗体夹心ELISA方法检测正常人及患者血清应用单克隆抗体中和前后TNF-α的浓度改变。应用L929细胞检测正常人和患者血清抗体中和前后的生物学活性变化情况。结果:正常人与银屑病患者血清TNF-α的浓度分别为:(3.146±6.184)pg/ml及(62.723±38.379)pg/ml;其生物学活性分别为:(6.817±5.086)%及(57.498±9.125)%。抗体中和后患者血清TNF-α的浓度为:(0.503±1.178)pg/ml;中和后的生物学活性为:(25.378±14.863)%。结论:寻常型银屑病患者血清中TNF-α的浓度及生物学活性均高于正常对照,而抗人TNF-α单克隆抗体在体外可以很好地中和患者血清中TNFα的浓度及其生物学活性。