阿胶强骨口服液含药血清对人成骨细胞钙离子摄取和钙化能力的影响

根据中医医“肾主骨”理论，既往从整体和骨组织水平的研究认为补肾中药可以通过调节下丘脑-垂体-多个靶腺轴的功能，促进肠钙吸收，调节体内微量元素的平衡，改善骨的内部结构等机制防治骨质疏松，但其他对人成骨细胞钙离子摄取和钙化能力影响的机制尚不清楚。本试验从细胞学水平观察补肾中药阿胶强骨口服液对人成骨细胞钙代谢的影响，为“肾主骨”理论提供客观依据。[第一段]     

骨宝含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶活性及护骨素mRNA表达的影响

目的：观察骨宝含药血清对SD大鼠成骨细胞（OB）中护骨素（OPG）mRNA表达的影响。方法：①将20只10月龄SD雌性大鼠随机分为2组,每组10只,分别为骨宝组和生理盐水对照组,制备含药血清和空白血清,MTT法确定最佳添加剂量;②取1d龄SD大鼠颅骨分离培养OB,分为骨宝含药血清组和对照组,磷酸对硝基苯酯法（PNPP法）检测OB碱性磷酸酶（ALP）活性,荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测OB中OPG mRNA的表达。结果：①15%浓度的骨宝含药血清对OB的增殖具有明显的促进作用（P〈0.05）;②骨宝含药血清组中OB的ALP活性2.527±0.185高于对照组1.839±0.040（P〈0.05）,骨宝含药血清组中OB的OPG mRNA表达量1.457±0.031高于对照组0.852±0.090（P〈0.05）。结论：骨宝含药血清能上调OB中OPGmRNA的表达,增强OB的ALP活性,可能是骨宝防治骨质疏松症的作用机制之一。     

强骨口服液对成骨细胞成骨能力的影响

强骨口服液（药物组成:仙灵脾、骨碎补、何首乌、杜仲等）,由江苏先声药物研究有限公司提供,批号:20031205;NaF,上海三爱思试剂有限公司。      

甲状旁腺激素对成人成骨细胞护骨素和护骨素配体及其相关因子的调节

目的：探讨甲状旁腺激素（PTH）调节骨吸收作用的途径和机制。方法：观察PTH对人成骨细胞(HOB)表达护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)及其相关因子,如肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体(TRAIL)、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）的影响,用RT-PCR法检测OPG,OPGL,TRAIL及M-CSF基因表达情况,用Western blotting分析法检测OPG和OPGL蛋白表达情况。结果：PTH下调HOB细胞中OPG的表达,上调OPGL,M-CSF及TRAIL的表达。结论：PTH通过降低成骨细胞中OPG与OPGL的比值,增加M-CSF和TRAIL的表达,促进破骨细胞生成、活化,促进骨吸收。     

不同微种植体支抗材料对护骨素与护骨素配体基因表达的影响

目的评价不同种植体支抗材料镍铬合金、钴铬合金、钛和聚乳酸酯对人成骨样细胞MG-63的细胞毒性及护骨素(Osteoprotegerin,OPG)与OPG配体即破骨细胞分化因子(Receptor activator nuclear factor-kappa Bligand,RANKL)mRNA的表达量的影响。方法选择人成骨样细胞系MG-63作为细胞毒性的实验对象,分为5组,即对照组,浓度为0.05%的镍铬、钴铬、聚乳酸酯、钛微粒各一组。用MTT法检测细胞存活率;用半定量RT-PCR检测在相同浓度的各种材料的作用下,人成骨样细胞内OPG/RANKL mRNA的表达变化。结果浓度为0.05%的不同粒子对人成骨样细胞MG-63的细胞毒性及OPG/RANKL mRNA的表达量的影响:(1)镍铬微粒对细胞生长有一定的抑制作用,钛微粒则有较强的抑制作用;钴铬微粒和聚乳酸酯微粒对细胞的增殖无明显的副作用。(2)镍铬微粒对细胞OPG的表达产生抑制作用,与对照组比较,差别有统计学意义;钴铬微粒和聚乳酸酯微粒对细胞OPG的表达无明显影响,与对照组比较差别无统计学意义;钛粒子诱导OPG在细胞中的表达量大大增加,与对照组比较差别具有统计学意义。(3)镍铬微粒可有效诱导人成骨样细胞中RANKL的表达,钴铬微粒对RANKL的表达具有一定的诱导效果,两者与对照组比较,镍铬微粒诱导效果更强,呈现显著性差异,钴铬微粒则呈现一般性显著;而钛微粒则显著增加RANKL的表达量;聚乳酸酯对人成骨样细胞中RANKL的表达则无明显的诱导作用,与对照组比较,差别无统计学意义。结论聚乳酸酯材料的细胞毒性最小,对OPG/RANKL mR-NA的表达量影响最小;钛次之;而镍铬、钴铬合金对OPG/RANKL mRNA的表达量有一定的影响。     

左归丸含药血清对成骨细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的通过观察左归丸含药血清对成骨细胞骨保护素(OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)mRNA表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法体外分离、培养成骨细胞,实验分为3组:正常血清组、卵巢切除血清组、卵巢切除含药血清组。采用原位杂交法,检测成骨细胞OPG、RANKL mRNA的表达。结果卵巢切除血清组与正常血清组相比,成骨细胞OPG mRNA的表达显著下调,而RANKL mRNA表达明显上调;卵巢切除含药血清组与卵巢切除血清组相比,成骨细胞OPG mRNA的表达明显上调,RANKL mRNA的表达明显下调;而与正常血清组相比,无显著性差异。结论在去势状态下,左归丸含药血清一方面直接抑制RANKL的分泌,使破骨细胞活性降低;另一方面促进成骨细胞分泌OPG,使之与RANKL的结合增多,进而使破骨细胞活性降低,从而达到治疗骨质疏松的目的。     

葡萄糖对MG63细胞株护骨素、护骨素配体及其相关因子表达的影响

目的:观察不同葡萄糖浓度对人成骨肉瘤MG63细胞株护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、转化生长因子-β(TGF-β)表达的影响.方法:MG63细胞经不同浓度(5.5、16.7、33.3 mmol/L)葡萄糖处理后,用RT-PCR法检测上述基因表达情况.结果:高糖能下调MG63细胞中OPG及TGF-β的表达(P＜0.05),上调OPGL、M-CSF和TRAIL的表达(P＜0.05). 结论:高糖环境可能导致成骨细胞中OPG及TGF-β的表达减少, OPGL、M-CSF和TRAIL等细胞因子的表达增多,使破骨细胞的数目和活性增加,骨吸收增强和骨量丢失,这可能是糖尿病骨质疏松症的一个重要的发病机制.     

巴戟天多糖对骨质疏松大鼠血清护骨素表达影响的研究

目的探讨巴戟天多糖对骨质疏松大鼠血清护骨素（OPG）表达的影响及调节作用。方法将24只SD大鼠随机分为对照组、模型组和干预组,模型组及干预组采用切除卵巢方法建立骨质疏松模型,干预组给予巴戟天多糖100mg·kg^―1·d^―1,30d后观察各组大鼠股骨远端骨密度、血清OPG、白介素-1（IL-1）及肿瘤坏死因子-（TNF-）表达水平。结果造模30d后,模型组大鼠骨密度及OPG表达水平低于对照组和治疗组（P〈0.05）,IL-1与TNF-表达水平高于对照组和治疗组（P〈0.05）;治疗组骨密度低于对照组（P〈0.05）,IL-1和TNF-表达水平与对照组的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论巴戟天多糖对切除卵巢大鼠OPG表达水平具有上调作用,其可能通过降低TNF-和IL-1表达水平来发挥对OPG表达水平的调节作用,进而发挥对骨质疏松的保护作用。     

脂联素对人成骨细胞护骨素和核因子κB受体活化素配体表达的影响

目的 探讨脂联素影响骨代谢的可能作用机制.方法 体外培养人成骨细胞,(1)分别加入0、3、10和30 mg/L的脂联素作用48 h;(2)加入0或30 mg/L脂联素分别作用12、24、48 h;采用荧光定量PCR和ELISA方法检测护骨素和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的表达.另将人成骨细胞与CD14+外周血单个核细胞(PBMC)共培养,加入30 mg/L脂联素作用14 d,行破骨细胞标志酶抗酒石酸磷酸酶染色.结果 0、3、10和30 mg/L的脂联素作用48 h,成骨细胞护骨素mRNA和蛋白表达分别为100%±9%、68%±7%、47%±8%、30%±5%与(9.2±0.3)、(6.6±0.4)、(4.1±0.4)、(2.6±0.4)ng/ml,RANKL mRNA和蛋白表达分别为100%±5%、165%±8%、213%±6%、316%±10%与(1.3±0.2)、(2.1±0.1)、(2.3±0.2)、(2.8±0.1)ng/ml.脂联素对护骨素表达的抑制和对RANKL表达的促进作用均呈剂量和时间依赖性(P＜0.05).脂联素干预成骨细胞与CD14+PBMC共培养体系可诱导破骨细胞生成.结论 脂联素可通过抑制护骨素表达、诱导成骨细胞RANKL表达,诱导破骨细胞生成,这可能是脂联素影响骨代谢的作用机制之一.     

再生颗粒对兔股骨头坏死骨保护素和骨保护素配体mRNA表达影响的实验研究

目的:研究再生颗粒对兔股骨头坏死骨保护素和骨保护素配体mRNA表达水平的影响。方法:选用肌注甲强龙20mg/(kg.d),2次/周,连续注射4周制造兔股骨头坏死模型,再生颗粒治疗4周、8周后实时定量PCR检测骨保护素和骨保护素配体mRNA的表达情况。结果:再生颗粒治疗组在各时间点骨保护素的表达水平明显高于对照组,而骨保护素配体的表达明显低于对照组。结论:再生颗粒可以提升兔股骨头坏死骨保护素mRNA的表达水平,抑制骨保护素配体的表达,从而促进坏死骨组织的修复。     

蛇床子素对新生大鼠颅骨成骨细胞中OPG、RANKLmRNA表达的影响

目的：研究蛇床子素对新生大鼠颅骨成骨细胞中OPG、RANKLmRNA表达的影响。方法：新生大鼠颅骨成骨细胞分离培养后，取第4代细胞，以5×10^4／mL接种于100cm^2培养瓶中，常规培养3d后，更换为无血清DMEM培养液，细胞饥饿过夜。然后每瓶分别加入含不同浓度蛇床子素的培养液，每浓度4瓶，连续给药48h和72h。每日通过相差显微镜观察细胞的形态、生长状况及治疗组和对照组之间的差别。提取和鉴定成骨细胞总RNA。结果：在培养液中加入不同浓度的蛇床子素培养48h后，1×10^-7mol／L组OPG、OPG／RANKL与对照组比较差异有统计学意义；培养72h后，1×10^-6mol／L组OPG／RANKL、1×10^-7mol／L组OPGmRNA的相对表达量以及OPG／RANKL与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．01，P〈0．05）。结论：蛇床子素能通过OPG—RANKL—RANK系统影响骨重建。     

OPG RANKL在2型糖尿病大鼠血清龈沟液中的表达

目的:通过检测2型糖尿病、牙周炎大鼠龈沟液和血清中骨保护素(OPG)和核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的表达水平,探讨OPG和RANKL在2型糖尿病牙周炎发生、发展中所起的作用。方法:通过结扎、喂食高脂高糖、注射链脲佐菌素的方法,分别建立单纯牙周炎和2型糖尿病大鼠实验模型,并通过血糖、胰岛素敏感性指数、牙周情况的检查,确认建模成功。第8周末检测龈沟液和血清中OPG和RANKL的表达水平并进行统计学分析。结果:与对照组相比,牙周炎大鼠龈沟液OPG表达减少,RANKL表达增加(P<0.05);2型糖尿病大鼠龈沟液OPG表达减少,RANKL表达增加(P<0.05);血清中OPG、RANKL表达均增加(P<0.05)。结论:OPG与RANKL的失衡可能是导致牙周炎发生发展的主要原因之一,而作为全身因素的2型糖尿病可能造成宿主本身对牙周炎的高度易感性,加快OPG与RANKL的失衡。     

含利塞膦酸骨水泥对SD大鼠成骨细胞OPG、RANKL和OC表达的影响

目的 利用大鼠胎鼠分离提取成骨细胞,观察含15％磷酸二氢钙＋0.5％利塞膦酸骨水泥和1％利塞膦酸骨水泥对体外培养的大鼠成骨细胞OPG、RANKL和OC基因表达的作用.方法 实验分成空白对照组、15％磷酸二氢钙＋0.5％利塞膦酸骨水泥浸提液组和1％利塞膦酸骨水泥浸提液组.实验组细胞培养基中加入相对应的磷硅酸钙骨水泥的PBS浸提液,浸提液以1：7与DMEM培养基混合作为细胞培养基;空白对照组成分以无菌PBS与DMEM培养基混合作为细胞培养基,每组6个平行,培养72 h后,提取细胞总RNA,应用RT·PCR法检测细胞中OPG、RANKL和OC的mRNA表达.结果 实验组成骨细胞中OPG和OC的mRNA表达较对照组的表达明显升高,RANKL的表达明显低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 含15％磷酸二氢钙的0.5％利塞膦酸骨水泥和1％利塞膦酸骨水泥浸提液对SD大鼠胎鼠成骨细胞OPG和OC的表达具有促进作用,同时降低了RANKL的表达.     

补肾健脾方药对卵巢切除大鼠骨密度、骨矿含量影响的实验研究

为探讨补肾健脾方药对卵巢切除大鼠骨密度、骨矿含量的影响,取10月龄SD雌性大鼠40只,随机分为模型组、正常对照组、E3阳性对照组、中药组,每组10只,正常对照组行假手术,其余3组行完整双侧卵巢除术。术后第3天开始灌胃给药,连续用药满12周后处死,分离L3腰椎体及左侧股骨,进行骨矿密度、骨矿含量、表观骨密度测定。结果显示补肾健脾方药能明显维持切除卵巢大鼠椎体及股骨的骨矿密度、骨矿含量和表观密度。     

健脾活血补肾汤对CIA大鼠血清IL-17及OPG／RANKL表达的影响

目的通过观察健脾活血补肾汤对关节炎（collageninduced arthritis,CIA）模型大鼠血清中炎性细胞因子白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）、骨保护蛋白（osteoprotegerin,OPG）及核因子KB受体活化因子配体（receptor activator for nuclearfactor—KBligand,RANKL）表达水平的影响,探索健脾活血补肾汤保护强直性脊柱炎关节骨质破坏潜在的分子药理机制。方法利用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原建立大鼠关节炎（CIA）模型,自造模成功后第3天起分别按健脾活血补肾汤高、中、低剂量给药组及生理盐水给予大鼠灌胃处理,每天1次,连续灌胃30d,处死大鼠,心脏采血取血清,用ELISA夹心法检测大鼠血清中IL～17、0PG及RANKL表达水平。结果健脾活血补肾汤高、中、低各剂量组CIA大鼠血清IL－17及RANKL水平均较模型组明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;而OPG水平较模型组显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论健脾活血补肾汤可能通过降低CIA模型大鼠血清中IL－17及RANKL表达水平,升高OPG表达水平,而起到延缓关节炎性损伤所致的骨质破坏的作用。     

补肾活血中药对椎体成形术后患者的视觉模拟评分及骨密度的影响

目的：观察补肾活血中药对椎体成形术（ PVP）后患者临床症状改善的促进作用。方法：选择确诊为骨质疏松性椎体压缩性骨折的96例患者,均采用标准的PVP手术,根据患者术后是否服用补肾活血中药将其分为： A组48例为治疗组（口服补肾活血中药＋钙剂）; B组48例为对照组（口服钙剂）。分别于术后3个月、6个月、12个月应用视觉模拟评分（ VAS）和骨密度来评价患者疼痛改善及骨质改变情况。结果：所有患者均顺利完成手术,术后患者疼痛均得到迅速缓解。术后3个月、6个月和12个月两组患者VAS评分、骨密度均较术前有明显改善（ P ＜0.05）。组间比较发现,术后3个月时VAS评分、骨密度差异无显著性（ P ＞0.05）;但术后6个月及术后12个月时两组间VAS评分、 ODI评分比较差异有显著性（ P ＜0.05）。结论： PVP是治疗骨质疏松性椎体压缩骨折的有效方法,同时,术后口服补肾活血中药可对患者的疼痛缓解和骨质改善起促进作用,随着用药时间的延长,作用越明显。     

补肾益髓中药复方对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制以及补肾益髓中药复方的疗效机理。方法:肌注地塞米松复制GIOP大鼠模型,实验设正常组、模型空白组、补肾益髓中药复方组、补中益气颗粒组、血府逐瘀胶囊组、骨疏康颗粒阳性对照组,造模及灌胃给药9周。应用XR-26型双能X线骨密度仪测定股骨骨密度,实时定量RT-PCR及Western Blot检测肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型空白组股骨骨密度明显降低(P<0.01),肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型空白组比较,补肾益髓中药复方组股骨骨密度明显升高(P<0.01),肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.01)。结论:肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达降低可能是GIOP的发病机制之一;补肾益髓中药复方可能通过上调肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达,有效防治GIOP。     

复方中药对去卵巢大鼠骨密度、骨生物力学和血清雌二醇、孕酮水平等的实验研究

目的研究复方中药对去卵巢大鼠骨密度、骨生物力学和血清雌二醇、孕酮水平等的影响。方法78只3月龄雌性SD大鼠，随机分为8组：空白组、假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、尼尔雌醇组、复方中药小剂量加骨粉组、复方中药中剂量加骨粉组、复方中药大剂量加骨粉组、复方中药中剂量组。给药3个月后处死。测定各组大鼠左侧股骨密度(BMD)；测量大鼠右侧股骨最大载荷(E)和破坏挠度(R)；放射免疫法测定大鼠血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平；并测定大鼠最后体重情况和子宫湿重。结果模型组骨密度值显著低于假手术组(P＜0．05)，复方加骨粉小剂量组骨密度较模型组有上升趋势之外，其他用药各组骨密度与OVX组相比无明显差异；OVX组破坏挠度的值较SHAM组有一定的下降趋势，复方中剂量组的破坏挠度较OVX组和尼尔雌醇组都明显升高(P＜0．05)；复方中剂量加骨粉组与模型组相比对破坏挠度值也有较明显的升高趋势；复方中剂量的加骨粉与不加骨粉两组，最大栽荷较模型组都有上升趋势；OVX组的E2及孕酮水平显著低于SHAM组(P＜0．001)，尼尔雌醇组显示一定的促进E2及孕酮水平升高的趋势；中药各组对去卵巢大鼠的血清雌二醇与孕酮水平无明显升高作用。OVX组较SHAM组子宫重量显著下降(P＜0．001)，尼尔雌醇组与OVX组相比显示一定的增加子宫重量的作用，各中药组与模型组相比，仅复方小剂量加骨粉组有一定的增加子宫重量的趋势。模型组体重较SHAM组显著上升(P均＜0．05)，尼尔雌醇组较模型组体重显著减轻(P＜0．001)，与其他各中药组之间差异也具有显著性(P＜0．001)。各中药组与模型组相比，体重无明显变化。结论尼尔雌醇对去卵巢大鼠骨密度和骨结构的改善无明显作用。可能主要通过提高去卵巢大鼠雌激素水平来改善骨质疏松症；复方中药显示一定升高骨密度的趋势，在中剂量时，能提高去卵巢大鼠骨质疏松模型骨生物力学性能，并且不依赖钙的加入；对OVX大鼠雌激素水平、子宫湿重及体重变化无明显影响。     

雷洛昔芬对去卵巢大鼠骨丢失的防治作用

目的 了解雷洛昔芬(RLX)对去卵巢大鼠骨代谢、骨组织形态学等指标的影响。方法 3月龄雌性SD大鼠32只，随机分为假手术组(SHAM)、卵巢切除组(OVX)、卵巢切除加乙烯雌酚组(DES)、卵巢切除加雷洛昔芬组(RLX)，每组8只，5个月后处死。取大鼠血、尿检测骨代谢生化指标及骨组织形态学检查。结果 和SHAM及OVX组相比。RLX及DES组能明显上调血清E2、Ca^2 、ALP的水平和增加骨密度。RLX及DES两组相比，各项指标无统计学意义。结论 RLX对防治去卵巢大鼠的骨丢失与DES一样有效，RLX可替代DES防治绝经后骨质疏松。     

补肾、健脾、活血中药复方对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠肾组织Runx2mRNA及蛋白表达影响的比较研究

目的:观察糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠肾组织Runx2 mRNA及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制及补肾中药复方的疗效机理,并与健脾、活血中药复方比较.方法:肌注地塞米松复制GIOP大鼠模型,实验设正常组、模型空白组、补肾中药复方组、健脾中药复方组、活血中药复方组、骨疏康颗粒阳性对照组.造模及灌胃给药9周.应...