棉酚联合放疗诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的:研究棉酚(gossypol)联合放疗对宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制与促细胞凋亡作用,以探讨棉酚的抗肿瘤作用机制.方法:利用MTT法检测棉酚对HeLa细胞生长抑制率的影响;采用丫啶橙/溴化乙锭双染色法、FCM观察细胞凋亡形态并检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测Bcl-2和Bcl-xL蛋白的表达水平.结果:棉酚对HeLa细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量及时间依赖性;棉酚、放疗、棉酚联合放疗能明显诱导HeLa细胞凋亡,且棉酚联合放疗组的诱导作用明显优于2者单独处理组.棉酚、放疗和棉酚联合放疗均可降低HeLa细胞内Bcl-2和Bcl-xL蛋白的表达水平,但棉酚联合放疗组的作用弱于2者单独处理组.结论:棉酚可抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖并诱导细胞凋亡,可能增加放疗对宫颈癌HeLa细胞的敏感性.     

Induced apoptosis and necrosis by 2-methylfuranonaphthoquinone in human cervical cancer HeLa cells

2-Methylnaphtho[2,3-b]furan-4,9-dione (FNQ3) has been reported to be more cytotoxic to human malignant tumor cell lines than are the corresponding normal epithelial cells. Therefore, we examined the dose response of FNQ3 against human cervical cancer HeLa cells in culture. When 1.25 mg/ml FNQ3 was applied, apoptosis was induced, as determined by an immunohistochemical staining of fragmented genome DNA and cell profiles. Significant inhibition of Bcl-2 oncogene protein expression by the same concentration of FNQ3 also was demonstrated by an immunohistochemical staining method to visualize the expressed cells and Western blot in polyacrylamide gel electrophoresis. Flow-cytometric spectra showed S-phase arrest in cell cycles and the appearance of sub-G1 phase consistent with apoptosis. On the other hand, concentrations of 5 microg/ml or more of FNQ3 induced necrosis. These results show that FNQ3 may act as an antitumor agent to induce apoptosis by affecting Bcl-2 expression and cell cycles, or necrosis as the result of primary mitochondrial injuries.     

紫杉醇诱导子宫颈癌H eLa细胞自噬性凋亡的观察

目的观察紫杉醇对体外培养的子宫颈癌HeLa细胞自噬性凋亡的影响,并初步探讨其可能的机制。方法不同浓度（1.2、6、12、24、36 mg/L）的紫杉醇处理体外子宫颈癌HeLa细胞6、12、24、48、72小时后,用MTT法测定其生长抑制率,倒置显微镜及透视电镜观察细胞形态学变化,通过流式细胞术分别测定细胞凋亡率、细胞周期分布,RT-PCR检测自噬基因Beclin1表达的变化情况。结果紫杉醇呈剂量和时间依赖性抑制子宫颈癌HeLa细胞增殖;紫杉醇12 mg/L处理的HeLa细胞,早期（24小时内）可出现明显的细胞自噬性变化,细胞凋亡数明显增加,G2/M期阻滞,且自噬基因Beclin1的表达明显增高。结论紫杉醇具有抑制子宫颈癌HeLa细胞增殖、诱导细胞自噬性凋亡等作用,诱导子宫颈癌HeLa细胞发生自噬性凋亡,其机制可能与上调自噬基因Beclin1的表达水平有关。     

上调2型大麻素受体诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:通过构建基因真核表达载体,探讨人2型大麻素受体(human cannabinoid receptor 2,hCB2R)对人子宫颈癌HeLa细胞体外凋亡的作用及机制.方法:选用人脑组织的cDNA作为模板,进行hCB2R基因的RT-PCR扩增,构建重组质粒GV230-hCB2R及其对照空质粒GV230并转染HeLa细胞,Western blotting法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测hCB2R表达及细胞内定位;流式细胞术检测HeLa细胞凋亡,Western blotting法及实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中hCB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达.结果:与空质粒转染组相比,GV230-hCB2R转染HeLa细胞后表达相对分子质量40 000的hCB2R蛋白,且细胞膜和细胞质中均有hCB2R的表达;GV230-hCB2R转染组的细胞凋亡率显著高于GV230空质粒对照组[(14.51±4.51)％vs(6.29±0.57)％,t=1.72,P＜0.05];与空质粒对照组相比,hCB2R转染组细胞内Bax和Bad 的表达水平明显上调(P＜0.05),而Bcl-2的表达明显下调(P＜0.05).结论:hCB2R对子宫颈癌HeLa细胞的生长表现出明显的抑制作用,其作用机制可能与hCB2R直接参与了细胞凋亡相关蛋白的表达变化有关.     

3-Chloro-2,5-dihydroxybenzyl alcohol activates human cervical carcinoma HeLa cell apoptosis by inducing DNA damage

We have isolated 3-chloro-2,5-dihydroxybenzyl alcohol (CHBA) from marine-derived fungus Aspergillus sp. and characterized its apoptosis-inducing properties against human cervical carcinoma (HeLa) cells. Significantly decreased rates of proliferation and viability (IC50 approximately 35 microM) as well as evidence of apoptosis were observed with CHBA. Nuclear changes observed under fluorescence microscopy confirmed apoptosis occurrence and showed a typical pattern of chromatin condensation. Furthermore, results from Annexin V-FITC/PI dual staining indicated that CHBA induced earlier apoptosis of HeLa cells in a concentration- and time-dependent manner. CHBA also induced cytochrome c release from mitochondria into the cytosol and subsequent caspase activation involving caspase-9 and -3 by Western blotting assay was observed. We also found that CHBA was able to induce DNA damage and inhibit DNA replication followed by S phase arrest. The very sensitive alkaline microgel electrophoresis technique (comet assay) was used for estimation of the CHBA-induced DNA single strand breaks. These findings suggest that CHBA induces HeLa cell apoptosis by cytochrome c release and caspase activation pathway and that the effect of CHBA on apoptosis of HeLa cells is associated with DNA damage. Because of the ease of synthesis and structural manipulation, CHBA may have the potential to be developed into an anticancer agent.     

siRNA靶向抑制RPL6基因表达对人宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）靶向抑制核糖体蛋白L6（RPL6）基因表达对人宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响。方法 优化siRNA转染条件,将2条靶向抑制RPL6基因的siRNA载体片段（siRPL6-1、siRPL6-2）分别高效转染人宫颈癌HeLa细胞（抑制组）,同时设转染无义序列（siControl）的空转染组及不进行任何处理的对照组。分别于转染24、48、72、96 h后采用实时定量PCR（qRT-PCR）检测RPL6表达水平以筛选抑制率高的siRPL6载体用于后续实验。噻唑蓝比色（MTT）法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式细胞术检测各组转染48、96 h后的细胞凋亡和细胞周期情况, Western blotting检测各组转染96 h后的cyclin A、CDK2和p21CIP1表达情况。结果 抑制组的RPL6 mRNA水平均低于空转染组和对照组（P＜0.05）,siRPL6-2片段的干扰效率高于siRPL6-1,故后续实验选择siRPL6-2片段;与其余两组相比,抑制组转染后的增殖抑制率、凋亡率及caspase-3活化率均升高,且G0／G1期细胞比例升高,但S期和G2／M期细胞比例均降低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）;抑制组转染后的p21CIP1水平升高,cyclin A和CDK2 水平降低,与空转染组和对照组的差异有统计学意义（P＜0.05）。空转染组和对照组以上指标的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 通过siRNA抑制RPL6基因表达可抑制增殖并诱导凋亡和细胞周期阻滞,对宫颈癌防治有一定价值。     

Anti-proliferative and pro-apoptotic effects of 3,3'-diindolylmethane in human cervical cancer cells

The antitumor effects of Indo-3-carbinol (I3C) have been proven in many human carcinoma cells. However, the roles of 3,3-diindolylmethane (DIM), an important polymer converted from I3C under pH 5.0-7.0, on the growth and proliferation of cervical cancer HeLa and SiHa cells still remain unrevealed. In the present study, we investigated the potential anti-proliferative and pro-apoptotic effects of DIM on HeLa and SiHa cells. Cell proliferation was detected by Cell Counting kit-8 and apoptosis was analyzed by flow cytometry. In addition, morphological changes accompanying cell apoptosis were observed using an inverted microscope after Hoechst 33258 staining. In addition, expression changes of proteins involved in the MAPK and PI3K pathways were determined by western blotting. DIM treatment inhibited the proliferation and induced apoptosis of HeLa and SiHa cells significantly in a time- and dose-dependent manner. Moreover, SiHa cells were more sensitive to DIM treatment than HeLa cells (P<0.05). In addition, the expression of ERK, p38 and p-p38, which are involved in the MAPK pathway, was downregulated by DIM treatment. Another protein involved in the MAPK pathway, JNK, was upregulated. Furthermore, DIM treatment significantly suppressed the expression of Akt, p-Akt, PI3K p110α, PI3K p110β, PI3K class III, GSK3-β, p-PDK1 and p-c-Raf which are involved in the PI3K pathway. These results demonstrate that DIM exerts antitumor effects on HeLa and SiHa cells through its anti-proliferative and pro-apoptotic roles, especially for SiHa cells. The molecular mechanism for these effects may be related to its regulatory effects on MAPK and PI3K pathway and apoptosis proteins. DIM may be a preventive and therapeutic agent against cervical cancer.     

核糖体蛋白 S7对宫颈癌 HeLa 细胞凋亡的影响

目的：初步探讨核糖体蛋白 S7（RPS7）对宫颈癌 HeLa 细胞凋亡的影响。方法用构建的带增强绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的 RPS7重组表达质粒 pIRES2-EGFP-RPS7转染 HeLa 细胞作为实验组,以转染空载体 pIRES2-EGFP 的细胞作为对照组,流式细胞仪检测带绿色荧光细胞的含量, Western blotting 检测细胞中 RPS7蛋白表达;用带有荧光染料藻蓝蛋白（APC）的磷脂结合蛋白-V （Annexin-V）试剂对瞬时过表达和稳定干扰 RPS7的细胞进行染色,流式细胞仪分析细胞凋亡水平。结果在获得的瞬时过表达RPS7的 HeLa 细胞中,细胞凋亡水平明显高于转染空载体的细胞[（10．00±0．60）％∶（5．73±0．61）％],差异有统计学意义（t ＝8．63,P ＝0．001）。另一方面,抑制 RPS7表达的Sh-RPS7细胞凋亡水平低于对照细胞[（3．08±0．49）％∶（5．97±0．63）％],差异有统计学意义（t ＝6．40,P ＝0．003）。结论上调 RPS7表达具有促进 HeLa 细胞凋亡的作用,而下调 RPS7表达可抑制HeLa 细胞的凋亡。     

Toll样受体8在人宫颈癌细胞株HeLa中的表达及其激动剂对HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察Toll样受体8(TLR8)在人官颈癌细胞株HeLa中的表达,探讨TLR8激动剂CL075对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,检测13种肿瘤细胞系中TLR8 mRNA和经CL075作用后HeLa细胞中环氧化酶2(COX-2)、Bcl-2和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达水平;采用免疫荧光技术对HeLa细胞中TLR8蛋白的表达进行定位观察;采用流式细胞术检测不同浓度CL075作用下HeLa细胞的细胞周期和凋亡的变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HeLa细胞的增殖状态。结果 与其他肿瘤细胞株相比,HeLa细胞中TLR8mRNA的表达水平最高,达703.7±20.6。TLR8蛋白主要定位于HeLa细胞的胞浆中。0.1、0.5和1.0 μg/ml的CL075分别作用于HeLa细胞48 h后,G2/M+S期细胞所占的比例逐渐增高,其中1.0μg/ml CL075作用组G2/M+S期细胞所占的比例最高,达(57.67±1.73)％,明显高于空白对照组[(39.02±2.33)％,P＜0.01]。经不同浓度的CL075处理后,HeLa细胞的凋亡水平与空白对照组相比,无明显改变(P＞0.05);但经顺铂处理后,凋亡细胞明显增多(P＜0.01)。MTT法检测结果显示,与空白对照组比较,CL075作用于HeLa细胞48和72 h后,HeLa细胞的增殖能力明显增强(P＜0.01)。CI075作用于官颈癌HeLa细胞24和48 h后,COX-2、Bcl-2和VEGF mRNA的表达水平明显升高(P＜0.05)。结论宫颈癌HeLa细胞中TLR8的表达水平及其与配体相互作用的信号,可能是肿瘤发生和发展的重要因素之一。TLR8可能是宫颈癌治疗的一个潜在靶点。     

紫花牡荆素体外抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的研究

Objective  

The aim of the study was to investigate the effect of Casticin on proliferation inhibition of human cervical cancer HeLa cells in vitro and to unravel the associated mechanisms.     

MLN2238对宫颈癌HeLa细胞生长抑制和放射增敏及其机制探讨

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MLN2238对宫颈癌HeLa细胞生长抑制和放射增敏作用及其机制。方法：采用CCK-8法检测MLN2238对HeLa细胞生长的抑制效应,克隆形成实验检测MLN2238辐射敏感性的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,线粒体荧光探针显像检测线粒体活性变化,蛋白质印迹法测定细胞中蛋白表达情况。结果：MLN2238对HeLa细胞有明显的抑制作用,0．05μmol／L抑制率为3．95％,0．1μmol／L为14．89％,0．5μmol／L为29．37％,1μmol／L为38．95％,5μmol／L为54．44％,10μmol／L为70．52％,30／μmol／L为81．76％,其效应呈剂量依赖性,F=1172．02,P〈0．001。0．1μmol／L的MLN2238对HeLa细胞有放射增敏作用,其放射增敏比（sensitizingen—hancementratio,SER）为1．40。MLN2238联合X射线对HeLa细胞存在交互作用,对照组细胞凋亡分数为（2．64±0．07）％,单药组为（2．76±0．38）％,单照4Gy组为（9．50±0．14）％,单照8Gy组为（21．04±0．04）％,联合4Gy组为（11．12土0．19）％,联合8Gy组为（26．18±0．35）％,细胞凋亡率逐渐增加,差异有统计学意义,F兰20．23,P=0．0022。0．1μmol／L的MLN2238可影响细胞线粒体活性,导致线粒体膜损伤加重,增加细胞凋亡。MLN2238与X射线联合作用能增加凋亡相关蛋白Bax／Bcl-2的表达。结论：MLN2238对宫颈癌HeLa细胞有生长抑制和放射增敏作用,MLN2238对宫颈癌HeLa细胞可能通过线粒体途径介导的凋亡而增强其辐射敏感性。     

紫花牡荆素体外抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的研究

背景与目的:紫花牡荆素(Casticin)是一种从蔓荆子中提取的具有广泛药理活性的多甲基黄酮化合物.有研究表明Casticin能诱导多种肿瘤细胞凋亡,但其对人宫颈癌细胞的作用尚缺乏文献资料.本研究旨在探讨Casticin抑制体外培养人宫颈癌HeLa细胞增殖作用及其机制.方法:MTT法检测Casticin对人宫颈癌HeLa细胞活性的抑制作用;平皿集落形成法检测Casticin对HeLa细胞集落形成率的影响;流式细胞术(FCM)检测Casticin对HeLa细胞周期的影响;采用Western blot分析蛋白表达的变化.结果:Casticin对人宫颈癌HeLa细胞增殖活性有较强的抑制作用,呈剂量和时间依赖性,作用48 h的IC50值为2.82 μ g/mL;与对照组比较,细胞集落形成率明显下降(P＜0.05);Casticin作用48 h,以浓度依赖方式阻滞HeLa细胞于G2/M期,同时降低Cyclin B1蛋白表达,增高P21蛋白表达.结论:Casticin抑制HeLa细胞的增殖作用可能与其降低Cyclin B1蛋白表达、活化P21蛋白有关.     

3-溴丙酮酸对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用

目的：研究3-溴丙酮酸（3-BrPA）对宫颈癌HeLa细胞生长及增殖的影响。方法：HeLa细胞经不同浓度3-BrPA作用后,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测HeLa细胞的增殖情况,倒置显微镜及荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期分布及坏死或凋亡情况。结果：经3-BrPA作用一段时间后：MTT检测发现在一定浓度范围内（50-200）μmol/L对HeLa细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,与对照组比较,各浓度组差异均有统计学意义（P〈0.01）。倒置显微镜下可见HeLa细胞生长稀疏,细胞透亮度下降,细胞皱缩、破碎。Hoechst染色后荧光显微镜下呈现典型的凋亡核固缩表现。细胞周期分析结果表明,可诱导HeLa细胞G2/M期阻滞（P〈0.01）。流式细胞仪及荧光显微镜观察表明3-BrPA可诱导细胞坏死和凋亡（P〈0.01）。结论：3-BrPA对宫颈癌细胞增殖有显著抑制作用。     

抗氧化剂PDTC对卡铂诱导宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)联合卡铂对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响.方法:体外培养HeLa细胞,药物作用分为空白组、PDTC组、卡铂组和PDTC+卡铂联合组.各组药物处理后,MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况,免疫细胞化学方法观察核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65在细胞质和细胞核中表达水平的变化.结果:MTT法检测结果显示,PDTC能够有效地抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,呈时间和剂量依赖关系;小剂量(12.5 μmol/L)PDTC 和卡铂联合应用较单用卡铂,能明显提高细胞生长抑制率(P<0.01).FCM法检测结果显示,各用药组较对照组以及PDTC+卡铂联用组与单用卡铂组比较,宫颈癌HeLa细胞的凋亡率差异有统计学意义(P<0.01).HeLa细胞经PDTC作用后,G0/G1期细胞比例较对照组明显增加(P<0.01),S期细胞比例降低(P<0.01);卡铂单用组使细胞周期阻滞于G2/M期;联合用药组使细胞周期进一步阻滞于G2/M期,且与对照组比较,降低了S期细胞比例(P<0.01).免疫细胞化学法检测结果显示,NF-κBp65在宫颈癌HeLa细胞中主要表达于细胞质,卡铂诱导24 h后细胞质中NF-κBp65转移至细胞核,其活性增强,而PDTC能够抑制此作用.结论:卡铂能够诱导NF-κBp65的活化.小剂量(12.5 μmol/L)PDTC 和卡铂联合应用较单用卡铂,能明显增加对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率和细胞凋亡率.PDTC可能提高宫颈癌HeLa细胞对卡铂的敏感性.     

Targeting pro-apoptotic trail receptors sensitizes HeLa cervical cancer cells to irradiation-induced apoptosis

PURPOSE: To investigate the potential of irradiation in combination with drugs targeting the tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) death receptor (DR)4 and DR5 and their mechanism of action in a cervical cancer cell line. METHODS AND MATERIALS: Recombinant human TRAIL (rhTRAIL) and the agonistic antibodies against DR4 and DR5 were added to irradiated HeLa cells. The effect was evaluated with apoptosis and cytotoxicity assays and at the protein level. Membrane receptor expression was measured with flow cytometry. Small-interfering RNA against p53, DR4, and DR5 was used to investigate their function on the combined effect. RESULTS: rhTRAIL and the agonistic DR4 and DR5 antibodies strongly enhanced 10-Gy-induced apoptosis. This extra effect was 22%, 23%, and 29% for rhTRAIL, DR4, and DR5, respectively. Irradiation increased p53 expression and increased the membrane expression of DR5 and DR4. p53 suppression, as well as small-interfering RNA against DR5, resulted in a significant downregulation of DR5 membrane expression but did not affect apoptosis induced by irradiation and rhTRAIL. After small-interfering RNA against DR4, rhTRAIL-induced apoptosis and the additive effect of irradiation on rhTRAIL-induced apoptosis were abrogated, implicating an important role for DR4 in apoptosis induced through irradiation in combination with rhTRAIL. CONCLUSION: Irradiation-induced apoptosis is strongly enhanced by targeting the pro-apoptotic TRAIL receptors DR4 or DR5. Irradiation results in a p53-dependent increase in DR5 membrane expression. The sensitizing effect of rhTRAIL on irradiation in the HeLa cell line is, however especially mediated through the DR4 receptor.     

Cav3.1在宫颈癌组织中的表达及靶向下调Cav3.1对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:分析Cav3.1在宫颈癌组织中的表达及靶向下调Cav3.1对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用免疫组织化学染色法检测Cav3.1在68例宫颈癌组织和40例非癌宫颈组织中的表达;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、Western blot检测宫颈癌HeLa细胞中Cav3.1的表达;采用siRNA瞬时转染技术靶向下调Cav3.1表达,CCK-8检测下调Cav3.1表达后宫颈癌HeLa细胞增殖情况,流式细胞仪检测下调Cav3.1表达后宫颈癌HeLa细胞凋亡情况;Western blot检测宫颈癌HeLa细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3的表达。结果:Cav3.1在宫颈癌组织中的表达显著高于对照组（P＜0.01）。宫颈癌HeLa细胞中Cav3.1的表达水平显著高于HcerEpic 细胞（P＜0.01）。与对照组相比,siRNA-Cav3.1组的Cav3.1相对表达水平显著下降（P＜0.01）。与空白对照组、mock组相比,siRNA-Cav3.1组HeLa细胞的增殖能力减弱,凋亡能力增强,差异有统计学意义（P＜0.01）。Western blot显示siRNA-Cav3.1组Bax、Cleaved-Caspase3的相对表达量比对照组升高,而Bcl-2降低(P＜0.01)。结论:Cav3.1在宫颈癌组织和细胞中高表达。靶向下调Cav3.1可以抑制HeLa细胞的增殖、促进其凋亡。Cav3.1在宫颈癌的生物学行为中可能起着关键的作用,有望成为一种新的有效的宫颈癌治疗靶点及肿瘤检测的分子生物学标志物。     

携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

目的:探讨携带凋亡素基因(apopptin)的溶瘤腺病毒ATV感染对人宫颈癌HeLa 细胞自噬和凋亡的影响。方法: 分别用携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV与对照病毒Ad-MOCK(均为前期工作构建）感染HeLa 细胞后,应用WST-1 法检测ATV感染对HeLa 细胞增殖的影响,流式细胞术检测ATV感染对HeLa 细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting 法检测ATV感染对HeLa 细胞自噬相关蛋白LC3、P62 与mTOR表达的影响,MDC染色法检测ATV 感染对HeLa 细胞自噬水平的影响。结果:ATV感染后抑制HeLa细胞增殖,并具有一定的时间效应关系;以ATV 100 MOI感染72 h 后抑制率达到59.26%,其抑制能力明显强于同时间段对照组(P<0.01)。ATV 感染48 h,ATV 组HeLa 细胞凋亡率显著高于对照组[(38.995±4.009)% vs (14.680±1.174)%,P<0.01]。感染后的HeLa 细胞,随着ATV 作用时间的延长,S 期出现阻滞,48 h 阻滞最强,显著高于对照组[ 58.490±2.447)% vs (43.235±4.419)%,P<0.05]。与对照组相比,ATV 感染HeLa 后,LC3 表达量6、12 h 逐渐增高,12 h 达到最大值（P<0.01）,24 h 表达量最低（P<0.01）;P62 蛋白在24 h 出现最高表达水平（P<0.01）;而mTOR随着作用时间延长逐渐降低（48 h 时,P<0.01）。荧光显微镜下可见HeLa细胞核周区域MDC阳性染色,随着ATV作用时间延长,自噬小体明显增多;与对照组相比,6、12h 自噬小体数量显著增多(28.000±2.828) vs (8.500±2.121), (37.000±4.243) vs (14.000±1.414);均P<0.01],24 h 相对减少[(12.000±2.828) vs (17.000±1.414),P<0.01]。结论: 携带凋亡素基因的ATV溶瘤腺病毒可促进人宫颈癌HeLa 细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞。     

胆固醇酯转运蛋白对人宫颈癌HeLa细胞辐射增敏性的影响

目的:研究胆固醇酯转运蛋白(cholesteryl ester transfer protein,CETP)高表达对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响。方法:采用脂质体介导法将构建插入全长CETP基因的pcDNA3载体转染人宫颈癌HeLa细胞,获得稳定高表达CETP的HeLa细胞,同时转染pcDNA3空质粒为对照;克隆形成实验检测细胞的存活率;FCM法检测细胞的凋亡率;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的表达。结果:X-射线照射后,CETP高表达的HeLa-CETP细胞的放射增敏比SERD0和SERDq分别为1.42和2.09,而未转染细胞与转染空质粒的细胞照射后,细胞存活率差异无统计学意义。FCM结果显示,在X-射线照射后,HeLa-CETP细胞的凋亡率明显高于未转染细胞与转染空质粒的细胞(P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,提高CETP的表达可以降低抗细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和NF-кB的表达,而增加促细胞凋亡Bax蛋白的表达。结论:导入外源性CETP基因,提高HeLa细胞中CETP表达水平可明显增加HeLa细胞的放射敏感性,其作用机制可能与增加辐射诱导细胞凋亡和改变凋亡相关蛋白的表达有关。