广西五步蛇毒小肽的分离纯化及抗肿瘤作用

目的：从广西五步蛇毒分离出小分子活性组分，研究其对肿瘤细胞株的抑制作用。方法：经Sephadex G-75凝胶过滤、超滤和DEAE—Sepharose—CL-6B离子交换层析法从广西五步蛇毒中分离纯化获得一种小分子的肽类，采用MTT法检测其对多种体外培养的癌细胞株的生长抑制情况。结果：从广西五步蛇毒中分离纯化得到的单一的小肽，其对卵巢癌细胞株（A2780）、人胃癌细胞（SGC-7901）以及鼠乳腺癌细胞株（782）有抑制作用并呈明显的剂量依赖关系，作用24h的IC50分别为0．264、0．648、0．173μg／mL。结论：应用凝胶过滤和离子交换层析方法可以从广西五步蛇毒中分离出单一组分的小分子肽，其对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用。     

尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶在兔体内的药物动力学

本文采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测(ELISA)技术,研究家兔一次快速iv 75,150及300μg/kg的凝血酶样酶(thrombin—like enzymes,TLEs)后24 h内血浆药物代谢动力学。结果表明,TLEs在家兔的血浆浓度时间过程以三室模型模拟较为合适,三种剂量的各参数的均数之间经F检验除中央室表观分布容积外无显著差别。其t_(1/2α)为3.86～5.12min,t_(1/2β)为43.3～59.8min,t_(1/2γ)为17.6～19.5h。     

~(131)I标记尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶在动物体内的分布

用氯胺T法对尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒的抗血栓组分凝血酶样酶进行~(131)Ⅰ标记,观察其在大、小鼠体内的分布。以实验组和给予同剂量凝血酶样酶混合Na~(131)Ⅰ的对照组的放射性参入量(脏器与血液放射比)的比值作为凝血酶样酶在组织中分布的依据。结果表明,一次快速ⅳ凝血酶样酶后2h分布最多的为肾、其次为肺、脾、肾上腺和肝。给药后4h,肾、脾、肺和肝比2h时高,心脏含量较少,其它组织未见有分布。尿中含量高,表明其主要经肾脏随尿排泄;经胆汁排出则很少。     

尖吻蝮蛇毒中一种新类凝血酶的分离纯化

用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱技术,从尖吻蝮蛇毒中纯化得到一个具有凝血活性的组分.经Superdex 75 HR10/30预装柱检测,纯度达99.91%.SDS-PAGE显示为单一条带,还原、非还原条件下分子量分别为59.25k、52.58k.该组分的凝血酶比活为41.5u/mg,精氨酸酯酶比活为14.29u/mg,但不激活血浆凝血因子ⅩⅢ.EDTA不能抑制其凝血活性,而苯甲磺酰氟则产生不可逆抑制作用.结果表明该酶是一种新尖吻蝮蛇毒类凝血酶.     

五步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的肾纤维蛋白沉积的作用

目的观察五步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的兔肾纤维蛋白沉积的作用。方法用脂多糖(LPS)诱导的兔肾血栓模型作为本实验的研究方法。生理盐水作阴性对照组;尿激酶作阳性对照组。兔肾组织学检查及测定血浆FDP含量以观察五步蛇毒纤溶酶FⅡ对兔肾纤维蛋白沉积的溶解作用。结果阴性对照组,给药2、6h后,兔肾组织有大量的纤维蛋白的沉积,FDP含量分别为(7821±479)%和(8427±621)%;阳性对照组,给药2、6h后,肾组织有少量纤维蛋白的沉积,FDP含量分别为(13334±427)%和(21017±542)%。FⅡ分别以01mg·kg-1·h-1(低)、03mg·kg-1·h-1(中)、06mg·kg-1·h-1(高)3个剂量滴注。低剂量组的兔肾组织有纤维蛋白的沉积,但比阴性对照组减少;中剂量组的兔肾组织有少量纤维蛋白的沉积;高剂量组的兔肾组织几乎无纤维蛋白的沉积;血浆FDP含量在低、中和高剂量组均比阴性对照组增加,并有量效关系(P<005)。结论步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的兔肾纤维蛋白沉积有良好的降解作用。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化研究

目的从赤子爱胜蚓(Eisenia Foelide)中分离纯化出一种相对分子质量(Mr)较小的纤维蛋白溶解组分———蚯蚓纤溶酶(EFE),为其注射剂的研制开发打下基础。方法采用盐析、透析、凝胶过滤色谱、离子交换色谱等方法分离纯化EFE,用SDS-PAGE对纯化的活性组分进行Mr测定,用酶谱分析方法初步探讨蚯蚓中存在的其它纤溶酶活性组分。结果分离纯化得到了EFE单一组分,经SDS-PAGE EFE呈单一条带,Mr约为25 000。经酶谱分析发现纤溶酶活性组分Mr分布在25 000~50 000之间。结论反复使用色谱技术可分离纯化EFE,并得到单一组分。     

应用HPSEC法测定蛇毒凝血酶样酶纯度和分子量

在对全国蛇毒凝血酶样酶产品的全面考察后，本文报道了采用高效体积排阻色谱法对其纯度及分子量的测定结果．国内蛇毒凝血酶样酶样品的纯度达到９８％以上，分子量测定结果为３７５００±２０００．     

我国蛇毒凝血酶样酶的生物化学、药理学和临床应用

<正> 蛇毒对血液系统的作用早已为人们所关注,大量的实验研究和临床应用表明,蝮亚科蛇毒,特别是它们所含有的凝血酶样酶(Thro-mbin like Enzyme TLE)成份及其制剂:去纤酶(Defibrase)、抗栓酶(Svatel、2、3)和清栓酶都具有明显的抗凝、去纤、溶栓、抗血脂等功能,为临床应用提供了可靠的实验依据,取得了显著的临床效果。现结合我们的工作,对我国的蛇毒凝血酶样酶及其制剂的生物化学、药理学和临床应用近况作一介绍。一、蛇毒TLE的分离纯化由蛇毒所得的TLE绝大多数为酸性蛋白质,因而多采用阴离子交换剂及分子筛(葡聚糖凝胶)柱层析分离、纯化。常用阴离子交换剂为:DEAE-葡聚糖凝胶,DEAE-纤维素,QAE-葡聚糖凝胶,羟基磷灰石,DEAE-生物     

尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶(TLE)的酶联免疫吸附分析(ELISA)

本文以辣根过氧化物酶(HRP)为标记酶,聚苯乙烯微量血凝板为固相载体,运用夹心酶联免疫吸附(ELISA)技术研究了部分纯化的尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶(TLE)的微量检测,并用四参数方程模拟了TLE的对数剂量反应曲线。     

激肽释放酶的快速分离纯化新工艺

目的 为了简化激肽释放酶的制备过程,提高激肽释放酶的纯度、收率和稳定性,建立了一种新的分离纯化工艺.方法 直接将胰酶溶解后上DEAE-琼脂糖快胶新型阴离子交换柱吸附,两步洗脱后目标蛋白加入保护剂PEG,经过丙酮低温沉淀,室温干燥即可得到激肽释放酶精品.结果 比活力大于550 U·mg-1,收率达73.6%,重复性较好.结论 所用工艺可快速分离纯化激肽释放酶.     

长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化方法研究

目的:研究长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的简单分离纯化方法。方法:采用DEAE-Sephadex A-25及Sephadex G-25层析的方法,比较二者对长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶简单分离纯化的效果。结果:从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离出类凝血酶,SDS-PAGE电泳显示为一条带,分子量大约为35.5kDa,达到电泳纯。理化性质研究表明,此类凝血酶具有体外凝血活性,体外凝血酶比活力为12.57IU.mg-1,用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐测得该酶的精氨酸酯酶比活力为137.65IU.mg-1。用蛋白酶抑制剂和乙二胺四乙酸对该酶进行抑制实验,结果表明该酶属于丝氨酸蛋白酶,而不是金属蛋白酶。结论:本方法可用于长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化。     

蝮蛇蛇毒类凝血酶的研究

为研制蝮蛇抗栓酶的换代产品，开发单一组分的类凝血酶制剂。采用离子交换和亲和层析等现代纯化方法，从东北白眉蝮蛇蛇毒中分离出了单一组分的类凝血酶。半成品经高效液相色谱凝胶柱测定，纯度大于90％，最高可达97.94％，分子量38200D，SDS－PAGE电泳测定为一条带，分子量为42100D，活性为1137BU／mg，比活性为1705BU／mg·pro，不含出血毒和神经毒，冻干成品制剂全部符合注射用品标准。     

尖吻蝮蛇毒纤溶酶的柱层析分离

应用Sephadex G100、DEAE-Sepharose CL6B、Sephadex G75柱层析分离方法,对尖吻蝮蛇毒进行分离。实验表明,采用上述3种柱层析分离得到的纤溶酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳上为一条区带的单一蛋白。     

蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及性质研究

目的 :寻找一种分离纯化蝮蛇毒纤溶酶的工艺并研究其理化性质。方法 :采用DEAE SepharoseCL 6B和HeparinCL 6B层析方法 ,从蝮蛇毒中分离纯化纤溶酶。结果 :蝮蛇毒纤溶酶经HPLC为单一峰 ,等电聚焦电泳为一条带 ,其等电点为 4.5 5 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为 2 9.4kD。该酶对热不稳定 ,在 pH6～ 9时稳定 ,氨基酸组成分析表明含酸性氨基酸较多。结论 :用此工艺可制得高纯度的蝮蛇毒纤溶酶。     

尖吻蝮蛇毒中一种新抗凝血因子的纯化及特性研究

应用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱,从尖吻蝮蛇毒中分离出一个新的抗凝血因子.经Superdex 75 HR 10/30预装柱检测,纯度达99.9%.SDS-PAGE检测为单一条带,相对分子量52.2k.该因子有显著的抗凝血活性,延长白陶土部分激血活酶时间的临界浓度为0.2mg/ml,无纤溶活性、磷脂酶A2活性和出血活性.     

长白山白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的纯化

从长白山白眉蝮蛇蛇毒中纯化具有溶栓功效的纤溶酶。方法：用 ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ５０离子交换、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５凝胶过滤层析和 ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ ５０三步柱层析分离方法,对长白山白眉蝮蛇蛇毒进行分离纯化,得到了一种纤溶酶活性组分。结果：经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱表征该酶为单一蛋白,其分子量为 ２３．３６７ ｋＤ。结论：为进一步研究其结构和功能提供了可靠依据。     

白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化

目的用白眉蝮蛇蛇毒分离纯化纤溶酶。方法利用离子交换层析、亲和层析、分子筛层析技术进行分离纯化纤溶酶。结果得到了电泳纯的纤溶酶,其相对分子质量为24000。结论该工艺可以快速地分离纯化白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶：     

中国皖南尖吻蝮蛇毒中细胞毒素的分离纯化和抗癌活性研究

目的寻找皖南尖吻蝮蛇毒中的抗癌组分并初步研究其性质.方法以DEAE-Sepharose FF,SOURCE 30S柱层析纯化粗毒;以MTT法检测细胞毒活性;以SDS-PAGE(银染)测定纯度;以还原性及非还原SDS-PAGE测定分子量;又测定了它们的热稳定性和pH稳定性.结果得到两个电泳纯的蛇毒类抗癌组分,分别命名为ACTX-6和ACTX-8,分子量为98kDa和27kDa,都不是糖蛋白,其中ACTX-6由两个分子量相近的亚单位以二硫键连接而成;它们对肺癌细胞A549最敏感;ACTX-6对热稳定而ACTx-8对热不稳定;ACTX-6的稳定pH范围为7-9,而ACTX-8在6-9的范围内活性都比较稳定.     

Pharmacokinetics of thrombin-like enzyme from venom of Agkistrodon halys ussuriensis Emelianov determined by ELISA in the rat.

A thrombin-like enzyme (TLE) was separated and purified from the venom of a northeast Chinese snake Agkistrodon halys ussuriensis Emelianov. Experiments were performed in rats to determine the pharmacokinetic parameters following an intravenous (i.v.) or a subcutaneous (s.c.) injection of the thrombin-like enzyme. The plasma levels of TLE were estimated by enzyme-linked immunosorbent assay. The method exhibited high reproducibility and accuracy in correlating optical densities with TLE concentrations (0.2–30 ng ml⁻¹, r=0.99). The plasma concentration-time course after i.v. administration of 50 μg kg⁻¹ TLE was well fitted by a two-compartment open model. The half-life of the -phase was 18.0±3.2 min, and that of the β-phase 3.9±0.7 h. The apparent volume of distribution was 1.8±0.5 l kg⁻¹, and clearance was 5.4±0.5 ml min⁻¹ kg⁻¹. When the TLE was injected s.c. at a dose of 0.75 mg kg⁻¹, the changes in plasma concentration were best described by a two-compartment model with a first-order absorption. The maximal plasma level of 51±2.7 ng ml⁻¹ was reached at 5.2±0.5 h. The absorption rate constant was 0.3±0.03 h⁻¹. The area under the plasma concentration-time curve (AUC) was 2.8±0.8 μg h⁻¹ ml⁻¹.