银杏叶提取物对大鼠缺血再灌注皮质内氨基酸动态平衡的影响

目的 :研究不同浓度银杏叶提取物 (GBE)对大鼠缺血再灌注损伤皮质内氨基酸动态平衡的影响。方法 :将119只 Wistar大鼠随机分为 17组 ,假手术组 7只 ,缺血组 -缺血 3h组 ,缺血 3h分别再灌注 1h、2 h、 3h组各 7只 ;治疗组 (即在缺血前 30分钟给予 GBE5 mg/kg、 10 mg/kg、 15 mg/kg,腹腔给药 ) -缺血 3h、缺血 3h分别再灌注 1h、 2 h、 3h组各 7只。动物模型参照 Zivin JV的大脑中动脉线栓模型并加以改进。结果 :比较缺血组和治疗组 ,可见给予 GBE后能明显减少谷氨酸 (Glu)、天门冬安酸 (Asp)的产生 ,增加了γ-氨基丁酸 (GABA )的生成和释放 ,5 mg/kg组与 10 mg/kg、 15 mg/kg组间有显著差别 ,而后二者间无显著差别。结论 :血小板活化因子拮抗剂 GBE可通过增强抑制性氨基酸的合成、释放 ,降低兴奋性氨基酸的合成、释放来保护缺血的神经元的 ,且与用药剂量有关。     

银杏叶提取物对大鼠皮质缺血再灌注后自由基系统动态平衡的影响

目的　研究不同浓度银杏叶提取物 (GBE)对大鼠脑缺血再灌注损伤皮质内自由基动态平衡的影响。方法　将 119只Wistar大鼠随机分为 17组 ,假手术组 7只 ,缺血组—缺血 3h组 ,缺血 3h分别再灌注 1h、2h、3h组各 7只 ;治疗组 (即在缺血前 30分钟给予GBE 5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg ,腹腔给药 )—缺血 3h ,但缺血 3h分别灌注 1h、2h、3h组各 7只。动物模型参照Zivin的大脑中动脉线栓模型并加以改进。结果　比较缺血组和治疗组 ,可见给予GBE后能明显减少丙二醛 (MDA)的产生 ,增加的超氧化物歧化酶 (superoxidedismutase ,SOD) ,SOD的测定采用黄嘌呤法 ,谷胱甘肽过氧化物酶 (glutathioneperoxi dase ,GSH PX)生成和释放 ,5mg/kg组与 10mg/kg、15mg/kg组间有显著差别 ,而后二者间无显著差别。结论　血小板活化因子拮抗剂GBE可通过增强SOD和GSH PX的合成、释放 ,降低MDA的合成、保护缺血的神经元 ,且与用药剂量有关。     

黄体酮对脑缺血再灌注大鼠紧密连接蛋白ZO-1和occludin表达的影响

目的探讨黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注后血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1、occludin表达及血脑屏障通透性的影响。 方法将42只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（6只）和缺血再灌注组,后者再按再灌注时间分为缺血2h再灌注3h、6h、12h、24 h、48 h及72h组（各6只）。缺血再灌注组用线栓法制备成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。采用荧光分光光度法测定缺血侧脑组织中伊文氏蓝(EB)含量来评价血脑屏障的通透性,Western blotting法检测脑组织ZO-1和occludin的表达。取EB漏出最多组的时间点,增设黄体酮干预组和溶剂对照组（各6只）,与相同时间点的缺血再灌注组比较,观察黄体酮对ZO-1、occludin表达及血脑屏障通透性的影响。 结果 缺血2h再灌注3h时脑组织EB含量开始增加,再灌注24 h时达高峰;ZO-1、occludin的表达在缺血2h再灌注3h时开始下降,再灌注24 h时达最低。黄体酮干预组EB含量明显低于缺血2h再灌注24 h组,差异有统计学意义(P＜0.05)。黄体酮干预组ZO-1和occludin的表达水平均明显高于缺血2h再灌注24 h组,差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论 黄体酮町抑制缺血再灌注大鼠紧密连接蛋白ZO-1和occludin表达的降低,从而起到保护血脑屏障的作用。     

亚低温在急性脑缺血中对氨基酸和自由基含量的影响

目的研究亚低温状态下,急性脑缺血时皮质内四种氨基酸和自由基含量的改变,探讨亚低温对缺血脑组织的保护机制。方法将63只Wistar大鼠随机分为9组,假手术组7只,缺血组(手术后将其颞厂讥温度控制在36．5+-0．5℃)-缺血3h组,缺血3h分别再灌注1h、2h、3h组各7只;亚低温组(手术后将其颞肌温度控制在32．5±0．5℃)-缺血3h,缺血3h分别再灌注1h、2h、3h组各7只。动物模型参照Zealonga的大脑中动脉线栓模型并加以改进。结果比较缺血组和低温组,可见低温组缺血皮质内的谷氨酸(Glu)、天门冬安酸(Asp)、丙醛(MDA)的产生明显减少,而超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的生成和释放明显增加,γ-氨基丁酸(GABA)的含量亦增加。结论亚低温状态下4种氨基酸含量及自由基系统的改变是其保护缺血神经元的重要机制。     

蛇床子素在缺血再灌注脑损伤模型中的脑保护作用

目的研究蛇床子素（osthole）在缺血再灌注脑损伤中的脑保护作用。方法实验用SD大鼠55只随机分为假手术组、模型组和三个不同剂量给药组（Ost）,其中模型组和给药组采用四血管阻塞法大鼠全脑缺血模型（4VO模型）。各给药组于缺血15min再灌注后1h给予5mg／kg、25mg／kg、125mg／kg蛇床子素腹腔注射治疗。各实验组动物在进行神经功能学评分后,分别用于分析海马CA1区细胞组织形态学变化和caspase3蛋白半定量分析,评价蛇床子素在缺血再灌注脑损伤后的脑保护作用。结果缺血15min再灌注后1h给药的各蛇床子素治疗组大鼠的行为学评分和组织形态学分析结果均明显优于模型组（P〈0．01）并在25mg／kg剂量时表现出最大保护效果,其caspase3表达水平显著降低。结论蛇床子素在脑缺血再灌注脑损伤后有一定的脑保护作用。     

大鼠全脑缺血再灌注后ADM表达及其保护机制

目的研究肾上腺髓质素（ADM）在大鼠海马CA1区表达与预缺血处理对缺血脑保护作用的关系。方法将60只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、预缺血再灌注组及缺血组,缺血再灌注组和预缺血再灌注组又按再灌注时间再分为再灌注1,2,3及7d组。每组6只动物用改良的四血管阻断法制备大鼠全脑缺血模型。测定各组动物海马CA1区神经元密度及ADM的表达,分析两者的关系。结果假手术组、缺血再灌注组CA1区没有明显细胞坏死,缺血组、预缺血再灌注1d组可见大量细胞坏死;预缺血再灌注2d、3d、7d组亦可见部分细胞坏死,其中预缺血再灌注3d组在预缺血再灌注各组中细胞存活细胞数目最多,其中神经密度密度明显高于缺血组及预缺血再灌注1d、2d和7d组（P〈0.05）。免疫组化显示假手术组、缺血再灌注3d和7d组、预缺血再灌注7d组及缺血组ADM表达水平较低,缺血再灌注1d、2d组及预缺血再灌注3d组ADM表达水平较高,与假手术组,缺血组,缺血再灌注3d和7d组,预缺血再灌注1d、2d和7d组比较差异显著（P〈0.05）。结论 ADM参与了缺血预处理诱导缺血耐受的过程,在一定的时间窗内缺血预处理的神经保护作用存在量效关系。     

亚低温治疗大鼠缺血性脑水肿研究

目的研究亚低温对延迟时间窗再灌注的局灶脑缺血大鼠缺血性脑水肿的治疗作用。方法 SD雄性大鼠96只,线栓法制作大脑中动脉闭塞模型后随机分为缺血3 h组、缺血6 h组、缺血9 h组(每组各30只),分别在造模3 h、6 h和9 h后拔出线栓,使大脑中动脉再灌注。各缺血组按照再灌注后是否给予亚低温治疗及亚低温持续时间分为常温、亚低温3 h和亚低温5 h三个亚组,每个亚组有10只大鼠。另设假手术组6只。缺血组大鼠在再灌注24 h后处死取脑,假手术组在术后24 h处死取脑,干-湿重法测定各组缺血侧脑组织含水量并进行比较。结果与假手术组比较,缺血组缺血侧脑组织含水量明显增高。缺血3 h组中3 h亚低温和5 h亚低温亚组的缺血侧脑组织含水量与缺血3 h常温组比较,差异有统计学意义(79.39%±2.44%vs82.16%±1.50%,P0.05;79.20%±1.55%vs 82.16%±1.50%,P0.05)。其余各缺血组中经过亚低温治疗的大鼠与常温亚组的脑组织含水量无统计学差异。结论亚低温可减轻缺血早期(3 h)再灌注的脑组织水肿,保护缺血脑组织,而对晚期(6 h和9 h)再灌注的缺血性脑水肿无论亚低温时间长短均无明显保护作用。     

槲皮素-3半乳糖苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注炎症损伤机制的影响

目的研究槲皮素-3-半乳糖苷(金丝桃苷)对缺血性脑血管病的神经保护作用。方法78只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血对照组、金丝桃苷缺血组(Hyp组),后2组又根据观察时间点不同分为脑缺血2h后再灌注,3h、6h、12h、48h六个亚组,每组各6只,线栓法建立大鼠缺血再灌注模型。SABC免疫组化染色法分别记录各组不同时间点的P-选择素和E-选择素阳性反应血管数。结果自3h起同时间点金丝桃苷苷组P-选择素、E-选择素水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论金丝桃苷能有效抑制大鼠缺血/再灌注早期P、E-选择素的表达,有显著脑保护作用。     

巴曲酶对大鼠大脑缺血及缺血再灌注ET1基因表达的影响

本实验采用大鼠急性脑缺血及缺血再灌注模型，研究巴曲酶对脑缺血及脑缺血再灌注时内皮素（ET1）基因表达的影响。用中大脑动脉（MCA）线检法大鼠模型，共12只，分为缺血组及缺血再灌注组（每组各6只），每组又分为巴曲酶组及盐水组（对照组）。缺血组在缺血后24h，再灌注组则在缺血1．5h及再灌注24h后用原位杂交，并采用IBHS图像分析系统研究ET1基因表达。发现巴曲酶组或对照组手术侧大脑皮质及尾壳核ET1mRNA表达均显著高于对侧（非手术侧）。但是巴曲酶组手术侧的ET1mRNA表达显著低于对照组。结果提示，巴曲酸可使缺血及缺血再灌注ET1基因表达下调。这可能是巴曲酶对缺血再灌注的脑保护作用机理之一。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后瞬时感受器电位C1、M7的表达变化

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后瞬时感受器电位(TRP)C1和TRPM7的表达变化,进一步探讨局灶性脑缺血再灌注损伤的分子病理机制.方法 将50只Wistar大鼠按照随机数字表法分为假手术组、缺血2h再灌注3 h组、缺血2h再灌注12h组、缺血2h再灌注24h组、缺血2 h再灌注72 h组,每组10只.线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,应用RT-PCR、Western blot和免疫组化染色方法分别检测再灌注后不同时相缺血侧皮层TRPC1和TRPM7 mRNA和蛋白水平的表达.结果 假手术组TRPC1和TRPM7均有均有少量表达.脑缺血2 h再灌注3 h TRPC1表达开始增加,随再灌注时间的延长表达逐渐增强,至再灌注12 h达高峰,然后逐渐减弱,再灌注72 h时仍高于假手术组水平,差异均有统计学意义(P<0.05).TRPM7表达也随再灌注时间的延长而增加,高峰在再灌注24h.结论 TRPC1和TRPM7参与了局灶性脑缺血再灌注损伤的病理过程.     

一种C-Jun N-末端激酶肽抑制剂在沙土鼠全脑缺血中的保护作用

目的 为了进一步研究海马C1区域神经细胞活动中JNK的作用，我们评价了一种JNK抑制剂即D-JNKI1在沙土鼠一过性大脑缺血模型中对迟发性神经细胞死亡（DND）的作用。方法 55只沙土鼠随机分为11个组。5组沙土鼠先接受5min前脑缺血处理，再灌注3h后，通过立体定向方法。向每组沙土鼠右侧侧脑室内分别注入不同浓度的D-JNKI1（2μL PBS内加入0．00012，0．0012，0．012，0．12，1．2μmol／L D-JNKI1，每组n=5）。对照组（n=5）：沙土鼠先接受5min前脑缺血处理，再灌注3h后，通过立体定向方法方法向右侧侧脑室内仅注入PBS2μL。腹腔内注射组（n=5）沙土鼠；先接受5min前脑缺血处理，再灌注3h后，1．2μmol／L D-JNKI1溶于0．5mL PBS腹腔内注射。假手术组（n=5）；沙土鼠仅暴露双侧颈总动脉，未夹闭。预处理组（共3组，n=15）：先将0．0012μmol／L D-JNKI1，0．00012μmol／L D-JNKI1溶于2μL PBS，分别注入两组沙土鼠的右侧侧脑室内，另外一组沙土鼠的右侧侧脑室内仅仅注入PBS2μL，30min后三组均夹闭双侧颈总动脉2min，48h后再次接受双侧颈总动脉夹闭5min。所有沙土鼠从接受夹闭5min双侧颈总动脉后4d处死，作冰冻切片和Niss1染色。结果 缺血再灌注3h后用D-JNKI-1治疗，有神经保护作用，最好的神经保护效应浓度为0．0012μmol／L。D-JNKI-1预处理加强了2min预处理所诱导的缺血耐受效应。结论D-JNKI1在沙土鼠全脑缺血模型中对海马CA1区域的迟发性神经细胞死亡有潜在的神经保护作用。     

脑缺血后钠通道Na(v)1.6的表达变化

目的 观察大鼠缺血脑组织中Na(v)1.6的表达变化及钠通道阻滞剂Riluzole对其表达的影响,探讨Na (v)1.6与脑缺血的关系.方法 105只SD大鼠按随机数字表法分假手术组(n=15)、脑缺血组(n=45)和Riluzole治疗组(n=45),后2组应用线栓法制作成大鼠右侧大脑中动脉永久性闭塞模型,Riluzole治疗组在造模后30 min按8 mg/kg静脉注射给药,1次/d.缺血后6 h、1 d、2 d、3 d、7 d时观察大鼠神经功能缺损情况,应用免疫荧光染色和实时定量PCR方法检测纹状体区Na(v)1.6的表达,TTC染色检测脑梗死体积的变化.结果 缺血组和Riluzole治疗组大鼠神经功能缺损在缺血后2 d表现最严重,相同时间点缺血组较Riluzole治疗组神经功能评分增高,比较差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光染色显示缺血组和Riluzole治疗组Na(v)1.6表达均在缺血后1 d达高峰,随后下调.实时定量PCR显示缺血组Na(v)1.6 mRNA在缺血后6 h、1 d表达上调,2 d、3 d、7 d表达下调;Riluzole治疗组Na(v)1.6 mRNA缺血后6 h～7 d表达均呈下调趋势;相同时间点Riluzole治疗组Na(v)1.6 mRNA较缺血组表达下调,比较差异有统计学意义(P＜0.05).缺血组和Riluzole治疗组脑梗死体积均在缺血后3 d时最大,相同时间点Riluzole治疗组脑梗死体积比缺血组小,比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Riluzole可以下调Na(v)1.6表达,减轻缺血性脑损伤,Na(v)1.6可能参与缺血性脑损伤的发病过程.

Abstract：

Objective To observe the changes of Na(v)1.6 expression in rats after acute cerebral ischemia and the effect of Riluzole (the sodium channel blocker) on these changes, and discuss the relationship between level of Na(v)l.6 and cerebral ischemia. Methods One hundred and five healthy SD rats were randomly divided into sham-operated group (n=15), ischemia control group (IC, n=45) and Riluzole therapy group (RT, n=45). Rat models of focal acute cerebral ischemia in the later 2 groups were established by permanent occlusion of right middle cerebral artery. Riluzole at a dosage of 8 mg/kg was given once daily to the rats of the RT group 30 min after ischemia. Tissues from the striatum were collected at different time points (6 h, and 1, 2, 3 and 7 d after ischemia); the expressions of Na(v)1.6 in the striatum were detected by immunofluorescence staining and real-time quantitative PCR at each time point; and the infarct volume was observed by triphenyltetrazolium chloride staining at each time point.Results The rats in the IC group and RT group showed neurologic impairment, especially 2 d after ischemia; rats of the IC group presented significantly higher scores of neurological function scale than those of the RT group at the same time point (P＜0.05). Immunofluorescence staining showed that the expression of Na (v)1.6 was up-regulated, and reached its peak level 1 d after ischemia but then, was down-regulated both in the IC group and RT group. Real-time quantitative PCR showed that the expression of Na(v)1.6 in the IC group was up-regulated 1 d after ischemia, and then down-regulated 2, 3 and 7 d after ischemia, however, that in the RT group was down-regulated 6 h after ischemia; the mRNA expression of Na (v)1.6 in the RT group was obviously down-regulated as compared with that in the IC group at the same time point (P＜0.05). The infarction volume became the largest 3 daRer ischemia both in the IC group and RT group; the infarction volume in RT group was smaller than that in IC group at the same time point (P＜0.05). Conclusion The expression of Na(v)1.6 is down-regulated after cerebral ischemic injury to mitigate acute cerebral ischemic injury, indicating that Na (v)1.6 might involve in the development of cerebral ischemic injury.     

脑缺血再灌注损伤后室旁区巢蛋白和干细胞因子表达的研究

目的 研究大鼠缺血性脑损伤后室旁区巢蛋白（nestin）和干细胞因子（SCF）基因表达的变化规律，探讨肌苷治疗中枢神经缺血性损伤的作用机制。方法 成年健康雌性SD大鼠68只，以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型，随机分为治疗组（注射肌苷注射液100mg／kg）和对照组（注射相同剂量的生理盐水），各32只，另外4只作假手术组（不插线）。应用原位杂交技术检测脑缺血再灌注后脑组织室旁区nestin和SCF的表达。结果 假手术组室旁区nestin和SCF表达很弱。对照组缺血侧nestin的表达除2h、6h、2d、14d以外各时间点均显著高于假手术组（P〈0．01）。治疗组nestin表达较对照组于各时间点均显著升高（P〈0．01）。对照组缺血侧SCF的表达除2h、2d、14d以外各时间点均显著高于假手术组（P〈0．01）。治疗组SCF表达较对照组于各时间点均显著升高（P〈0．01）。结论 肌苷可以促进大鼠脑缺血再灌注后nestin、SCF的表达，推测具有促进神经干细胞生成的作用。     

The effect of granulocyte-colony stimulating factor in global cerebral ischemia in rats

Granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) is an endogenous peptide hormone of the hematopoietic system that has entered Phase I/II clinical trials for treatment of ischemic stroke. Severe intraoperative hypotension can lead to global cerebral ischemia and apoptotic neuron loss within the hippocampus. We tested G-CSF in a rat model of global cerebral ischemia. Global cerebral ischemia was induced in male Sprague-Dawley rats (280-330 g) with the 2-vessel occlusion model (hemorrhagic hypotension to a mean arterial pressure of 30-35 mm Hg and bilateral common carotid artery occlusion for 8 min). Three groups of animals were used: global ischemia without treatment (GI, n=49), global ischemia with G-CSF treatment (GI+G-CSF, n=42), and sham surgery (Sham, n=26). Rats in the treatment group received G-CSF (50 mug/kg, subcutaneously) 12 h before surgery, on the day of surgery, and on postoperative Day 1 and were euthanized on Days 2, 3, and 14. Mild hyperglycemia was observed in all groups. T-maze testing for spontaneous alternation demonstrated initial improvement in the G-CSF treatment group but no long-term benefit. Measurement of daily body weight demonstrated an initial trend toward improvement in the G-CSF group. Quantitative Nissl histology of the hippocampus demonstrated equivalent outcomes on Days 3 and 14, which was supported by quantitative TUNEL stain. Immunohistochemistry and Western blot demonstrated an initial increase in phosphorylated-AKT in the GI+G-CSF group on Day 2. We conclude that G-CSF treatment is associated with transient early improvement in neurobehavioral outcomes after global ischemia complicated by mild hyperglycemia, but no long-term protection.     

Hypothermia and brain-derived neurotrophic factor reduce glutamate synergistically in acute stroke

Moderate hypothermia and application of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) have separately been identified as neuroprotective strategies in experimental cerebral ischemia. To assess their separate and combined effects on striatal glutamate release in the hyperacute phase of stroke, we inserted microdialysis probes into the striatum of rats 2 h before permanent middle cerebral artery occlusion (MCAO). The animals (N = 28) were randomly assigned to one of four treatment strategies commencing 30 min after MCAO: (1) hypothermia at 33 degrees C (n = 7); (2) intravenous BDNF infusion [300 microg/(kg/h) for 2 h, n = 7]; (3) combination of hypothermia and BDNF (n = 7); (4) control group (saline, n = 7). Infarct size at 5 h after MCAO was assessed with the silver-staining method. Total infarct volume was significantly reduced in the hypothermia (202.7 +/- 3.5 mm(3), P = 0.0002) and BDNF group (206.5 +/- 6.9 mm(3), P = 0.0006) as compared to control group (254.4 +/- 9.3 mm(3)). In the combination group, infarct size was further reduced with overall significance in post hoc tests (157.3 +/- 6.2 mm(3), P < 0.0001). Postischemic glutamate concentrations in the control group constantly remained significantly higher than in all other treatment groups. At 255 and 270 min after MCAO, striatal glutamate in the combination group decreased significantly more than in animals treated with hypothermia or BDNF alone.Combining hypothermia and BDNF therapy in the acute stage of ischemia has a synergistic effect in attenuating striatal glutamate release and reducing early infarct size.     

门冬氨酸钾对局灶性脑缺血再灌注大鼠的保护作用研究

目的 观察门冬氨酸钾对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的保护作用。 方法 采用雄性SD大鼠右侧大脑中动脉闭塞模型,缺血2 h,再灌注22 h。大鼠随机分为5组,每组10 只,在缺血后1 h经腹腔注射给予生理盐水（1 ml/kg）或不同剂量门冬氨酸钾（10 mg/kg、25 mg/kg、 62.5 mg/kg和125 mg/kg）,观察不同剂量门冬氨酸钾对大鼠脑缺血再灌注后神经功能缺损和梗死 体积的影响。另取32只大鼠随机分为溶剂对照组和门冬氨酸钾组,在缺血后1 h腹腔注射生理盐水 （1 ml/kg）或门冬氨酸钾（62.5 mg/kg）,同时设立假手术组16只,检测三组大鼠脑组织三磷酸腺苷 （adenosine triphosphate,ATP）和乳酸水平（每组10只）,以及凋亡性细胞情况（每组6只）。 结果 与溶剂对照组比较,62.5 mg/kg剂量的门冬氨酸钾能显著改善神经功能缺损（P <0.001）, 降低梗死体积（P =0.011）;与溶剂对照组比较,25 mg/kg剂量的门冬氨酸钾能减少梗死体积 （P =0.040）,但神经功能评分无差异;10 mg/kg和125 mg/kg剂量的门冬氨酸钾组神经功能评分和 梗死体积与溶剂对照组均无差异。与溶剂对照组比较,门冬氨酸钾（62.5 mg/kg）能减少ATP的下降 （P =0.036）和细胞凋亡（P <0.001）。 结论 门冬氨酸钾对大鼠局灶性脑缺血再灌注后的细胞凋亡有保护作用。