骨髓CD34+干细胞种植人工血管后血清中6-k-PGF1α和TXB2的变化与人工血管通畅率的关系

目的 研究骨髓CD34+细胞种植于人工血管后血清6-k-PGFlα和TXB2的变化情况,及其与新生内膜增生、血栓形成的关系.方法 选杂种犬12条,分为ePTFE血管实验组(4条),涤纶血管实验组(4条)膨体聚四氟乙烯(ePTFE)对照组(2条)和涤纶对照组(2条),实验犬采自体骨髓,提取CD34+细胞种植覆膜人工血管,对照犬采用单纯自体血预凝人工血管,经手术将血管植入同一条犬的下腔静脉和腹主动脉.在术前、术后3、7、14、30、60 d经股静脉采血测定血小板,血清PGF1α、TXB,浓度和PGF1α/TXB2的比值,并在60 d时获取全部人工血管标本,光学显微镜和电子显微镜观察新生内膜增生和血栓形成情况.结果实验组血小板及TXB2浓度先上升后下降并维持在一定水平,而对照组明显上升后维持在一个较高水平;实验组血清PGF1α及P/T先降低后升高,而对照组明显降低后维持在一个较低水平;对照组新生内膜较实验组明显增生,并有血栓形成.结论 骨髓CD34+干细胞种植人工血管能有效抑制PGF1α和P/T比值的过度降低、限制TXB2和血小板的过度升高,进一步抑制内膜的过度增生和血栓形成.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between the 6-Keto-PGF1α,TXB2 and the endotheliosis and thrombosis of the new endomembrance on the prostheses seeded by CD34 stem cells.Method Twelve dogs were evenly divided into two groups; ePTFE prostheses and weaved Dacron prostheses implanted into the abdominal aorta(AA) and inferior vena cava (IVC).in each group, 4 dogs were implanted by prostheses seeded by CD34+ stem cells, 2 dogs were implanted prostheses treated by autogenous blood only as control.The peripheral blood was collected in preoperative and 3 ,7,14,30,60 days postoperation.light and electron microscopy were applied to observe the endotheliosis and thrombosis of the new endomembrance when harvesting all the prostheses in the 60 days.Result The platelet, 6-Keto-PG F1α,TXB2 and P/T in experimental group was significantly different compared with control group.The new endomembrane in control group was significantly thickener than the experimental group.Conclusions CD34+ stem cell inhibits PGF1α and P/T ratio decrease, restrains TXB2 and platelet excessively rise, prevents intimal hyperplasia and thrombosis in a CD34+ stem cells seeded blood vessel prostheses.     

犬骨髓CD34＋细胞种植人工血管置换后短期内皮化的实验研究

目的：探讨骨髓CD34＋细胞种植于常用膨体聚四氟乙烯（expanded polytera fluoroethylene，ePTFE）人工血管和涤纶人工血管后二者的内皮化程度。方法：选杂种犬8条，依支架覆膜不同分为ePTFE组和涤纶组，每组实验犬2条，对照犬2条。实验犬采自体骨髓，提取CD34＋细胞种植覆膜支架，对照犬采用单纯自体血预凝覆膜支架。将人工血管植入犬的下腔静脉和腹主动脉。在术后第10、30天观察植入的人工血管通畅情况，采用免疫组织化学方法鉴定内膜细胞来源，在光镜和电镜下观察人工血管新生内膜表面内皮化情况。结果：术后第10天实验组与对照组差异无统计学意义；术后第30天腔面新生内膜内皮细胞自人工血管吻合口向中间逐渐减少（P〈0．05）；而对照组内膜表面第10、30天均无内皮细胞覆盖。结论：经纯化的CD34＋细胞种植于ePTFE和涤纶人工血管，均获得理想的内皮化。     

骨髓CD34~+干细胞种植人工血管应用于血管置换后内皮化和通畅率的研究

目的:探讨骨髓CD34+细胞分别种植于常用膨体聚四氟乙烯(expanded polytera fluoroethylone,ePTFE)人工血管和涤纶人工血管的内皮化程度和通畅率.方法:选杂种犬16条,依人工血管不同分为ePTFE血管实验组(6条)和涤纶皿管实验组(6条)及ePTFE对照组(2条)和涤纶对照组(2条),实验犬采自体骨髓,提取CD34+细胞种植覆膜人工血管,对照犬采用单纯自体血预凝人工血管,将ePTFE或涤纶人工血管分别植入所有实验犬的下腔静脉和腹主动脉.术后第30、60、100天取标本,观察通畅率,并分别用光学显微镜、电子显微镜和免疫组织化学方法观察新生内膜表面内皮化情况.结果:对照组静脉全部阻塞.实验组第30天人工血管腔面新生内膜内皮细胞密度自吻合口向中间方向逐渐减少,第60天的人工血管内皮基本覆盖管壁,第100天人工血管腔面内膜内皮细胞排列均匀完整,而对照组内膜表面无内皮细胞覆盖.结论:经纯化的CD34+细胞种植于ePTFE和涤纶人工血管较未种植的人工血管中远期有较好的内皮化和通畅率.     

骨髓种植人工血管在静脉系统的实验研究

目的研究骨髓种植的人工血管在静脉系统的应用 ,旨在探索一种新的、更理想的静脉代用品。方法选北京地区杂种犬 8条 ,实验组和对照组各 4条。实验组采用自体骨髓种植的涤纶双绒人工血管置换肾下下腔静脉 ,对照组则采用单纯自体血浆预凝人工血管。术后 10d获取人工血管标本 ,观察其通畅率 ,行光镜、电镜检查 ,比较新生内膜厚度、新生内膜表面内皮化情况 ,并通过检测6 keto PGE1α和TXB2水平 ,比较分析实验组和对照组抗血栓能力。结果实验组全部移植血管均通畅 ,对照组 2 / 4条通畅 ,光镜下实验组的内膜厚度明显薄于对照组 (P <0 0 1) ,电镜发现实验组人工血管达到完全内皮化 ,而对照组表面则无成片内皮细胞存在。实验组 6 keto PGF1α水平明显高于对照组 (P <0 0 1) ,而TXB2水平实验组低于对照组 (P <0 0 5 )。结论骨髓种植的人工血管在静脉系统 10d时能实现人工血管腔面的快速完全内皮化 ,新生内皮细胞具有抑制新生内膜增生和抗血栓形成的能力。     

ePTFE人工血管材料内衬自体骨髓内皮细胞的实验研究

目的:探讨自体骨髓内皮细胞衬里对ePTFE人工血管材料通畅性的影响。方法:24只犬随机分入实验组(12只)和对照组(12只)。实验组取犬自体骨髓,提取单核细胞种植ePTFE人工血管,行左髂动脉人工血管置换术;对照组采用普通ePTFE人工血管。分别于术后1月、3月行彩色多普勒超声观察其通畅率,并行组织染色及扫描电镜观察,比较人工血管表面内皮化情况。结果:术后1月时实验组人工血管通畅率及内膜厚度同对照组均无明显差别;但术后3月时实验组通畅率高于对照组,内膜厚度明显小于对照组(P0.05)。结论:自体骨髓内皮细胞衬里技术可明显提高ePTFE人工血管的短期通畅率,但其对远期通畅率的影响尚有待进一步观察。     

术前放疗对犬腹主动脉和下腔静脉人工血管置换术后人工血管内膜的影响

目的 观察术前放疗对犬腹主动脉、下腔静脉人工血管置换术后人工血管内膜的影响.方法 杂种犬18只,随机分为放疗组和对照组各9只.放疗组对标记的拟行人工血管移植的血管区行分割放疗,6周后于肾动脉下腹主动脉、下腔静脉行ePTFE人工血管置换术,4周后取标本.对照组除不放疗外各项操作同放疗组.观察两组动物人工血管的通畅率,并行HE染色和免疫组化PCNA和CD34染色.结果 放疗组有2犬术后当天死亡,对照组全部存活.放疗组术后3条静脉人工血管完全堵塞,对照组2条完全堵塞,两者差异无统计学意义(P>0.05).两组动脉人工血管均通畅,内膜完整,但内皮细胞覆盖不完全.放疗组的吻合口近、远端处CD34阳性细胞数差异无统计学意义,而在人工血管中部放疗组低于对照组(P<0.05);放疗组吻合口近、远端及人工血管中部内膜厚度均较对照组薄(P<0.05);而放疗组3个点PCNA阳性细胞表达较对照组为低(P<0.05).结论 术前放疗对人工血管置换术后4周内膜的增生有抑制作用,不会降低其通畅率.     

骨髓CD34+细胞种植的覆膜支架应用于静脉系统的初步研究

目的研究骨髓CD34^＋胞种植的覆膜支架在静脉系统应用的前景。方法选杂种犬12条，依支架覆膜不同分成PTFE组和涤纶组，每组实验犬4条、对照犬2条，实验犬采自体骨髓。提取CD34^＋细胞种植覆膜支架，对照犬则采用单纯自体血预凝覆膜支架．用导送系统将覆膜支架置人肾下下腔静脉，术后2周获取标本，观察其通畅率，并分别行光镜、电镜、免疫组化CD34和Ⅷ因子染色，观察新生内膜表面内皮化情况。结果除涤纶组有一条对照犬阻塞外，其他覆膜支架均通畅，光镜、电镜和免疫组化证实两组种植犬覆膜支架腔面覆盖新生内皮细胞，而对照组腔面无内皮细胞存在。结论骨髓CD34^＋细胞种植的阿FE和涤纶覆膜支架在静脉系统能实现腔面的快速内皮化。     

腹主动脉人工血管置换术后放疗对人工血管内膜的影响

目的:观察腹主动脉人工血管置换术后35Gy体外分割放疗对人工血管通畅率、内膜增生及血管内皮细胞(VEC)覆盖的影响。方法:对20只犬行腹主动脉膨体聚四氟乙烯（ePTFE）人工血管置换术。术后动物分成对照组和放疗组，每组10只。两组均于术后4，8周采集标本，行HE染色，增殖细胞核抗原（PCNA）及分化抗原簇34（CD34）免疫组化检测。结果:两组术后各有1例人工血管内血栓形成，通畅率均为90.0％。术后4周，放疗组和对照组人工血管内膜形成完整，内膜厚度和PCNA表达差异无统计学意义（均P>0.05），VEC覆盖均不完全；术后8周，放疗组内膜厚度较对照组明显变薄（P<0.05），对照组人工血管近端、中间、远端3处内膜厚度分别为(72.30±9.15)μm，(40.46±7.75)μm和(98.06±6.90)μm，放疗组人工血管近端、中间、远端3处内膜厚度分别为(37.67±6.77)μm， (21.16±4.98)μm和(56.64±5.13)μm，PCNA表达减少（P<0.05）；VEC均覆盖完整。结论:腹主动脉人工血管术置换后35Gy体外分割放疗不影响移植人工血管通畅率，对内膜VEC的覆盖亦无明显影响，但可抑制人工血管内膜增生和PCNA的表达。     

大剂量体外射线照射对ePTFE人工血管吻合口的影响

目的 观察术后大剂量体外射线照射对ePTFE人工血管吻合口的影响.方法 20只杂种犬均施行肾下平面腹主动脉ePTFE人工血管置换术,术后随机分为对照组及照射组各10只.照射组术后2周予35 Gy体外射线分割照射(等效于恶性肿瘤根治性剂量70 Gy),观察照射后ePTFE人工血管吻合口大体变化以及显微镜下吻合口组织形态的改变;并应用CD34行免疫组化分析,观察射线照射对局部内皮细胞覆盖的影响.结果 与对照组比较,在术后4,8周内,照射组人工血管吻合口区域出现较明显的组织形态学改变,未见人工血管吻合口不愈合、或破裂以及局部动脉瘤形成等情况;未出现人工血管血栓形成率的增加.吻合口两侧血管CD34均为阳性.结论 短期观察内大剂量的射线对人工血管吻合口不会造成严重的影响,不会产生严重的负面效应.     

犬自体微血管内皮细胞衬里ePTFE人工血管下腔静脉移植

采用犬自体网膜做血管内皮细胞离体衬里的进口ePTFE人工血管行下腔静脉移植。结果显示:离体衬里可在进口ePTFE人工血管腔面形成完全内皮化;衬里人工血管移植后观察5周,全部通畅,一直保持了完整内皮化,无附壁血栓,新内膜较薄(厚180μm±65μm,对照组厚873μm±194μm,P<0.001)。表明衬里的内皮层具备较好的抗切应力、抗凝血和抑制新内膜增生的作用,离体衬里内皮化是提高静脉移植人工血管通畅率的有效途径。     

脐血间充质干细胞心肌移植对梗死区CD4^＋T、CD8^＋T淋巴细胞分布的影响

目的研究犬脐血间充质干细胞（cbMSC）心肌移植对梗死区CD4^＋T、CD8^＋T淋巴细胞分布的影响。方法取犬脐带血,密度梯度离心法分离出单个核细胞,贴壁培养法扩增间质干细胞;采用随机数字表法将成年雄性杂种犬36只分为实验组和对照组,采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立急性心肌梗死动物模型;实验组取第4代细胞用5-氮杂胞苷诱导72h,LacZ报告基因标记后经冠状动脉移植入犬心脏的梗死区域,对照组注射等体积的IMDM培养液;采用免疫组织化学法检测表达pgal的移植细胞以及梗死区域CD4^＋T、CD8^＋T的分布,应用Image—Proplus 5．1软件进行图象分析。结果异体犬cbMSC移植心肌梗死区后可长期存活;图象分析显示,实验组移植后第2、4、8周时,CD4^＋T的累积光密度值（IOD）为44．35±7．03,19．29±4．11和20．27±3．51,CD4^＋T与CD8^＋T的10D比值为0．63±0．12,0．51±0．15和0．66±0．08;对照组CD4^＋T的10D值为65．78±10．27,28．02±2．59和29．79±6．83,CD4^＋T与CD8^＋T的IOD比值为1．28±0．20,1．34±0．09和1．50±0．16,两组比较实验组明显低于对照组。检测表明,实验组移植后第2、4、8周时CD8^＋T的IOD为69．88±7．84,37．80±8．83和30．81±7．42,高于对照组的51．28±10．01,20．87±4．50和19．91±2．87。结论初步的实验结果表明,犬cbMSC的同种异体移植能产生免疫耐受,其机制可能与其抑制CD4^＋T,减少局部浸润的CD4^＋T数量,降低局部CD4^＋T／CD8^＋T比值有关。     

术后静脉化疗对犬腹主动脉人工血管移植物影响的观察

目的探讨5-FU和DDP静脉联合化疗对犬人工血管移植物的影响。方法建立12只犬ePTFE人工血管重建腹主动脉模型,随机平分为化疗组和对照组。化疗组于术后第2周给予5-FU(10 mg/kg)和DDP(1 mg/kg)静脉联合化疗,1次/d,共5 d,对照组行同量液体输液;记录实验犬干预期间的生理指标;于化疗(输液)后4周(术后6周)获取5个平面标本,检测移植物内膜厚度及CD34和PCNA的表达。结果化疗组死亡1例(1/6),对照组无死亡(0/6);化疗组2例(2/5)人工血管少量附壁血栓形成,对照组未见(0/6)。组间比较:两组人工血管内膜厚度无统计学差异(P>0.05);化疗组人工血管中段的CD34阳性细胞率显著低于对照组(P<0.05),其余平面无统计学差异(P>0.05);两组内膜PCNA的表达无统计学差异(P>0.05)。组内比较:两组人工血管中段的内膜厚度及CD34阳性细胞率均低于吻合口(P<0.05或P<0.01);远端吻合口PCNA表达量均较近端吻合口高(均P<0.05),两端吻合口PCNA高于人工血管中段(均P<0.05)。结论术后2周行5-FU和DDP静脉联合化疗可能一过性影响人工血管移植物...     

骨髓CD34+细胞人工血管内皮化实验研究

目的探讨骨髓CD34^ 细胞种植的人工血管内皮化和通畅性。方法取犬骨髓,经免疫磁珠分离出CD34^ 细胞,内皮细胞生长因子(vascular endothelial grow factor,VEGF)诱导并扩增;种植聚四氟乙烯(polytetra fluoro ethylene,PTFE)人工血管,再植入犬的下腔静脉和腹主动脉。结果骨髓分离的细胞经流式细胞仪鉴定为CD34^ 细胞,CD34^ 细胞经VEGF诱导培养后经免疫细胞化学和透射电镜检测证实为内皮细胞。内皮化人工血管植入动脉闭塞率0,狭窄率12．5％;人工血管植入静脉闭塞率12．5％,狭窄率25．0％。结论骨髓经免疫磁珠可分离出CD34^ 细胞,CD34^% 细胞经VEGF诱导可定向分化为内皮细胞。骨髓CD34^ 细胞经体外培养种植于PTFE人工血管,获得理想的内皮化和通畅率。     

小口径脱细胞基质人工血管移植的研究

目的 探讨脱细胞基质( DCM)人工血管用于小口径血管移植的可行性.方法 40条雄性杂种犬随机分为DCM、膨体聚四氟乙烯(ePTFE)人工血管及自体颈外静脉3组行右颈总动脉置换术,彩超监测移植物通畅率.术后4、8周活体取材,标本行苏木素-伊红(HE)、免疫组织化学染色及扫描电镜检查.结果 3组移植物1周通畅率(75.0％、64.3％、100.0％)差异无统计学意义(P＞0.05);自体颈外静脉组4、8周通畅率( 100.0％、88.9％)优于DCM组(56.3％、26.7％)及ePTFE组(57.1％、23.1％,P＜0.05),后两组差异无统计学意义(P＞0.05).DCM人工血管4、8周血栓形成面积小于ePTFE人工血管,吻合口内膜内皮化程度高于后者.结论 小口径DCM人工血管在抑制血栓形成及加快内皮化方面优于ePTFE人工血管.     

~(125)I-VEGF人工血管补片促血管内皮化的初步研究

目的观察经125I-VEGF涂层的人工血管补片植入动物体内后能否加速血管内皮化,从而减少血栓形成,抑制再狭窄发生。方法 10只健康成年雄性新西兰纯种兔,体重2.5～3.0kg,随机分为实验组和对照组(n=5)。暴露动物颈静脉,夹闭近端及远端血管,实验组切开颈静脉后植入大小为10mm×5mm经125I-VEGF预处理的人工血管补片,8-0血管缝线缝合;对照组植入未经125I-VEGF预处理的人工血管补片。2周后取材行γ计数检测实验组人工血管补片残余125I-VEGF含量,HE染色及平滑肌激动蛋白、CD34免疫组织化学染色观察,并行内皮细胞计数及内膜厚度测量。结果 2周后实验组125I-VEGF预处理后的人工血管补片上125I-VEGF含量为(427.5±194.9)CPM,与植入前比较仅有2.0%±0.8%的125I-VEGF残留。HE染色观察示对照组2只动物颈静脉内形成血栓,实验组无血栓形成。实验组和对照组内皮细胞计数分别为(60.0±6.8)、(58.0±5.7)个,差异无统计学意义(P0.05)。实验组和对照组内膜厚度分别为(41.1±6.6)、(49.0±6.9)μm,差异有统计学意义(P0.05)。结论 125I-VEGF涂层的人工血管补片可以减少急性期血栓发生和抑制内膜增殖,形成连续的内皮细胞层,但其内皮细胞功能可能尚不成熟。     

糖尿病足坏疽正虚血瘀病机的物质基础

目的:探讨糖尿病足坏疽正虚血瘀病因病机的物质基础。方法:对35例糖尿病足坏疽患者与35例老年正常对照组,采用流式细胞仪检测白细胞分化抗原3(CD3+)、白细胞分化抗原4(CD4+)、白细胞分化抗原8(CD8+)水平,放射免疫法检测血浆内皮素(ET)、血栓素B(2TXB2)、前列腺素F1α(PGF1α)水平,硝酸还原法检测一氧化氮(NO)水平,并进行组间比较。结果:糖尿病足坏疽患者CD3+明显低于正常对照组(P0.01),CD4+/CD8+明显高于正常对照组(P0.01);ET、NO、TXB2/PGF1α明显高于正常对照组(P0.05,P0.01,P0.01)。结论:糖尿病足坏疽患者免疫功能低下、血管内皮、血小板功能异常为正虚血瘀病机的物质基础之一。     

重组arresten蛋白对自体移植静脉内膜增生的抑制作用

目的 观察原核表达人arresten重组蛋白对自体移植静脉内膜增生的抑制作用.方法 用pRSET原核表达系统表达并纯化人arresten重组蛋白.将Wistar大鼠颈外静脉移植于腹主动脉,建立大鼠自体静脉移植模型,实验分3组:假手术组、移植对照组和移植实验组.自术后第3天起,皮下注射给予arresten重组蛋白(每日4 mg/kg体重)处理.4周后取移植静脉组织标本,进行病理组织学观察与免疫组织化学染色分析.结果 移植组移植静脉均呈现典型的内膜增生、肥厚,导致血管管腔狭窄;新生内膜主要有过度增殖的α-SMA染色阳性平滑肌细胞组成.移植实验组移植静脉内膜增生受到明显抑制,新生内膜面积(0.12±0.07)mm2及新生内膜/中膜面积比(0.373±0.085)均显著低于对照组[(0.38±0.11)mm2,1.621±0.086,P<0.01];并且实验组移植静脉新生内膜细胞PCNA标记指数显著低于对照组[(15.62±3.97)%比(56.36±3.49)%,P<0.01].结论 重组arresten蛋白通过抑制新生内膜平滑肌细胞的增殖能有效抑制自体移植静脉内膜增生的发生发展,在防治血管重建术后再狭窄方面显示出良好的应用前景.     

致敏树突状细胞联合射频消融治疗对荷瘤大鼠免疫机能的影响

目的探讨经冻融肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DCs）联合应用于射频消融术（RFA）后治疗大鼠实体瘤对大鼠抗肿瘤免疫的影响。方法30只荷Walker256实体瘤SD大鼠随机分成三组，每组10只：对照组1仅行RFA治疗；对照组2行RFA＋未致敏DC治疗；实验组行RFA＋冻融抗原致敏DC治疗。治疗前及治疗后第4天经流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4^＋、CD8^＋及CD4^＋／CD8^＋比值；同时，超声评价治疗前后各组肿瘤体积变化，记录大鼠的荷瘤生存期，各组间比较。结果治疗后，实验组大鼠外周血CD4^＋T细胞及CD4^＋／CD8^＋比值的升高较两对照组比明显，与对照组2比差异显著（P〈0．05）；实验组外周血CD8^＋T细胞的降低显著大于两对照组（P〈0．05）。实验组大鼠肿瘤生长速度显著慢于对照组，其荷瘤生存期较对照组明显延长（P〈0．05）。结论肿瘤抗原致敏树突状细胞联合射频消融治疗可有效改善大鼠的抗肿瘤免疫机能，从而延缓肿瘤生长、延长荷瘤大鼠寿命。     

犬自体骨髓干细胞在缺血肢体中新生血管形成中的作用

目的:探讨犬自体骨髓干细胞在缺血组织的新生血管形成中的作用.方法:抽取犬骨髓,经免疫磁珠系统分离出CD 34细胞,体外扩增并向血管内皮细胞诱导分化;建立犬双下肢缺血动物模型,将诱导分化细胞移植入一侧缺血肢体中作为实验组,另一侧缺血肢体植入等体积的生理盐水作为自体对照组.移植后6周,检测缺血肢体中新生血管的形成.结果:细胞移植后6周,动脉造影显示实验组缺血肢体侧枝循环增加,明显多于对照组.微血管密度检测实验组为(14±2.3)个/高倍镜视野,明显高于对照组(6±2.1)个/高倍镜视野(P<0.05).激光共聚焦显微镜证实缺血肢体中移植的自体骨髓干细胞参与了新生血管形成.结论:自体骨髓干细胞移植可以促进缺血肢体组织中的新生血管形成.     

应用钛环钉行人工血管旁路术的实验研究

目的　探讨应用钛环钉行人工血管旁路术后人工血管及髂动脉腔表面内皮细胞形态学变化。方法　选用14 只健康雄性恒河猴,用3 mm 直径的ePTFE 人工血管置换左髂总动脉,近端用60 无创缝线吻合,远端用73Ⅱ型血管吻合器吻合。术后4 周,取出吻合口行光镜及电镜检查。结果　钛环钉组血管损伤反应轻,吻合口有完整内膜覆盖;而缝线组损伤反应重,吻合口内膜覆盖不完整,有血栓样组织沉积。结论　钛环钉组吻合口在术后4 周均形成完整的内膜,对预防吻合口早期血栓形成及晚期内膜增生有重要意义