肾综合征出血热(HFRS)病毒McAb在临床早期诊断中应用的研究

本研究用间接荧光抗体试验检测77例临床诊断为HFRS病人外周血白细胞中病毒抗原。阳性率为50.7％,在早期病例中(第2—5病日)阳性率为64.3％(27/42),并发现病日越早、病情越重,阳性率越高。在间接免疫荧光中应用了抗HFRS病毒MCAb 4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者与3种McAb表现为5种反应类型,不同McAb对抗原的检出率也不相同。将McAb组合可提高阳性检出率。在抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。将HFRS抗原检测和急性期IgM测定联合应用,可提高HFRS早期诊断的阳性率和准确性。     

烟台地区肾综合征出血热患者血清抗体检测和汉坦病毒序列测定

目的 了解烟台地区肾综合征出血热(HFRS)患者血清中IgG、IgM抗体水平，确定引起该地区HFRS流行的汉坦病毒的型别分布。方法 收集临床HFRS急性期和恢复期患者血清；用EMSA检测IgG、IgM抗体；用交叉空斑减少中和试验检测中和抗体；采用Trizol法提取患者血清中HFRS病毒RNA，用套式PCR产物做TA试验，测定核苷酸序列。结果 HFRS患者血清IgM阳性率为82．2％(88／107)，IgG阳性率为85．7％(66／77)。该地区两城市38份HFRS患者血清中，有32份属家鼠型病毒(SE0)感染，另6份未能定型；另一城市16份HFRS患者血清中，有15份属姬鼠型病毒感染，1份未定型。该地区HFRS病毒与SE0的同源性达90％以上。结论 引起烟台地区HFRS流行的汉坦病毒，属于以SE0为主的混合型病毒。     

双抗原夹心法ELISA在检测抗肾综合征出血热总抗体中的应用

目的建立可以检测不同来源血清中抗汉坦病毒抗体的简单、灵敏的方法。方法汉坦病毒核蛋白重组表达纯化后，同时作为捕获作用的固相抗原和检测作用酶标记抗原，建立检测血清中抗汉坦病毒总抗体的双抗原夹心法ELISA法，并与常用的IFA法进行比较分析。结果检测不同血清时特异性为100％，敏感性高于IFA法4～8倍。且不需考虑更换检测试剂，不同来源的血清样本对检测结果没有明显的影响。结论本方法操作简单，成本低，具有较高的敏感性和特异性，适合用于汉坦病毒感染的监测、调查和临床诊断以及宿主动物间病毒感染流行的调查与监测。     

化学发光酶联免疫法检测汉坦病毒IgM抗体的研究

目的建立化学发光酶联免疫分析法（CLEIA）检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清中IgM抗体。方法以抗人IgM-μ链抗体包被黑色不透明聚乙烯板，辣根过氧化物酶标记汉坦病毒核蛋白作为检测抗原以及luminol-H2O2作为发光底物，建立CLEIA法并对CLEIA与IgM抗体捕获酶联免疫吸附法（MacELISA）进行比较。结果CLEIA与MacELISA相关系数0．97；对于51份确诊的HFRS患者急性期血清CLEIA检测敏感度100％，MacELISA为90．2％；对48份正常人血清两种方法检测特异度均为100％；CLEIA次内变异系数范围5．02％-12．7％，次间变异系数范围0．4％～7．0％，与MacELISA相当。结论化学发光酶联免疫分析法是一种更为灵敏，准确和稳定的方法，适用于检测HFRS早期患者血清中IgM抗体。     

应用抗人μ链McAb和APAAP法检测HFRS患者血清中IgM抗体

<正> 肾综合征出血热(HFRS)患者的早期特异性诊断多采用免疫荧光法检测血清中IgM抗体。最近有报道采用抗人μ链McAb荧光结合物检测患者血清IgM抗体。本文以HFRS病毒陈株感染Wish细胞作为抗原     

HBV-前S_2抗原和抗体在乙型肝炎中的临床意义

本文用酶免疫法检测了HBV-前S_2抗原和抗体在乙型肝炎患者血清中的变动。结果表明,在急性HBV感染时,病程一月内前S_2抗原的阳性效为86.9％,抗前S_2抗体的阳性率为27.3％;在病程1～6个月间,前S_2抗原的阳性率降至34.7％,抗前S_2抗体的阳性率升至60％。前S_2抗原在HBeAg和HBV-DNA阳性血清中的检出率(84.2％)明显高于在HBeAg和HBV-DNA阴性血清中的检出率(20.0％),而抗前S_2抗体则相反。在慢性活动性肝炎时,前S_2抗原的检出率为80％,在慢性迁延性肝炎时的检出率为82.6％,抗前S_2抗体在慢性乙型肝炎病人血清中的检出率均很低。本文结果提示前S_2抗原的表达与HBV病毒的复制相关,而抗前S_2抗体的出现可作为预示HBV感染恢复的指标。     

重组冠状病毒核衣壳蛋白血清抗体检测

目的 SARS冠状病毒的核衣壳(Nucleocapsid)蛋白(N蛋白)是病毒的主要结构抗原，重组N蛋白可用作抗原检测患者血清中相应抗体。方法 以纯化的目的蛋白N-1，N-2分别包被96孔板，检测正常人群及患者血清中抗SAKS病毒抗体。结果 检测SAKS感染患者血清，N-1阳性检出率为55．68％，N-2阳性检出率为56．82％，与华大基因试剂盒相比符合率分别为90．12％和87．65％。结论 重组核衣壳蛋白可做为检测SARS抗体的抗原蛋白。     

长春地区人群人类疱疹病毒6型抗体的检测

目的：建立检测血清中人类疱疹病毒6型（HHV-6）抗体的间接免疫荧光方法（IFA），检测人群中HHV-6抗体的水平。方法：用HHV-6GS株感染脐血单个核细胞制备抗原片，建立检测血清中HHV-6抗体的IFA法，并对长春市人群血清中的HHV-6抗体水平进行检测。结果：成功地建立了检测XHV-6抗体的间接免疫荧光方法，对长春市人群血清中的XHV-6抗体水平进行检测表明，XHV-6抗体阳性率为65．2％。结论：建立了特异性的IFA法，用于HHV-6感染的调查。     

逆转录-聚合酶链反应对肾综合征出血热早期的诊断

为了选择更为敏感,特异,快速的肾综合征出血热（HFRS）的诊断方法。我们建立了碘化钠—异流氰酸胍—氯仿法提取汉坦病毒（HV）核酸（RNA）用于逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同病型HFRS患者一周内血清中HV－RNA且与酶联免疫吸附法（ELISA）检测HFRS-IgM进行比较。45例HFRS患者血清中HV－RNA阳性率为82．2％,其中轻、中、重型阳性中分别为75％,78.5％,86.9％。HFRS-IgM阳性率55．5％,其中轻、中、重型阳性率分别为37.5％,50.0％,65/2％。RI-PCR法检出率高于ELISA法,差别有显著性。RT-PCR法和ELISA法均可以用于HFRS的早明诊断。但前者更为敏感。     

抗人免疫球蛋白轻链单克隆抗体的临床应用——鼻咽癌EB病毒血清学诊断

作者报道用181医院研制的抗人免疫球蛋白轻链单克隆抗体,用免疫酶法检测病理确诊的鼻咽癌患者302例,与多克隆抗体IgA对比,发现:(1)抗壳抗原的抗体阳性率;前者为100％,后者为99.7％;几何平均滴度(GMT):前者为1:52.07,后者为1:47.29;②抗早期抗原的抗体阳性率:前者为66.9％     

应用免疫金银直接染色法诊断肾综合征出血热

应用免疫金银直接染色法（Ｄ－ＩＧＳＳ）对肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）感染的Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞进行ＨＦＲＳＶ抗原检测，发现Ｅ６细胞的胞浆和细胞膜上能清楚地观察到黑色均匀的银颗粒，而用ＨＦＲＳＶ免疫兔血清ＩｇＧ作阻断试验，却未见银颗粒。在此基础上对３２例ＨＦＲＳ患者检测外周血白细胞中的ＨＦＲＳＶ抗原，并和间接免疫荧光法（Ｉ－ＩＦＡ）进行对照，结果病程１０天以内Ｄ－ＩＧＳＳ法阳性率达到１０００％，个别病例病程２３天仍能检出ＨＦＲＳＶ抗原，而ＩＦＡ法在病程１１天以后阳性率明显下降，病程１４天后未检出ＨＦＲＳＶ抗原。说明Ｄ－ＩＧＳＳ法敏感性明显高于ＩＦＡ法。为对比外周静脉血和手指末稍血白细胞中ＨＦＲＳＶ抗原检出率，对３２例患者进行同步采血，结果ＨＦＲＳＶ抗原检出率无显著性差异（Ｐ＜００５）。我们认为Ｄ－ＩＧＳＳ法检测ＨＦＲＳ患者末稍血中的ＨＦＲＳＶ抗原，是简而易行的方法，可用于ＨＦＲＳ早期诊断。     

The defined antigen substrate sphere system with direct immunohistoperoxidase for detection of soluble dengue antigen in sera of patients with dengue hemorrhagic fever.

The defined antigen substrate sphere system is a simple method for detecting antigen or antibody in the circulation. The technic is based on the coupling of antigen or antibody with Sepharose 4B beads that have been activated by cyanogen bromide. In this study the activated beads were exposed to dengue antigen in the serum from a patient with dengue hemorrhagic fever and then stained with antidengue antibody conjugated with horseradish peroxidase. The positive reaction showed brown beads by light microscopy, whereas the negative reaction gave colorless beads. The authors examined 134 specimens from 91 cases. The results were positive in 53.85%. The dengue antigen appeared in the sera on the day before shock or subsidence of fever. The percentages of sera containing soluble dengue antigen were greatest on the day of shock or subsidence of fever (33.33%) and on the fifth day of fever (28.07%). The highest titers of soluble dengue antigen (1:40 to 1:80) appeared in the sera of patients who had Grade III disease on the day of shock. The dengue antigen appeared most often in sera that had high titers of dengue antibody. It is postulated that this detected dengue antigen may be a part of soluble immune complexes formed during the hyperimmune stage of the immune response, and plays a significant role in the pathogenesis of dengue hemorrhagic fever and shock syndrome.     

肾综合征出血热病毒特异性双价纯化免疫血清F（ab）2的制备和临床治疗应用

１９８８年至１９９１年对收治的发病５日以内的肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病人应用姬鼠型ＨＦＲＳＶ陈株及家鼠型ＨＦＲＳＶＲ２２株，免疫猪所制备的特异性双价纯化免疫血清Ｆ（ａｂ）２（称Ｆ（ａｂ）２血清），治疗ＨＦＲＳ病人６５例作为研究组，以４４例作为对照组。治疗结果表明：①球结膜水肿渗出减轻，２４小时出血减轻；②白细胞病毒抗原消失迅速；③研究组出院平均早９．１天；④在洽疗后２、４日，对照组的特异性免疫荧光ＩｇＭ抗体明显高于研究组的。⑤其他实验室检测指标都以研究组为优。提纯后的免疫血清Ｆ（ａｂ）２无抗体－介导反应，无副作用及过敏反应。它含有特异性中和抗体及其他免疫因子，可中和清除体内的病毒抗原，减轻病毒血症及毛细血管壁的损伤，阻断病情发展，促进病情恢复。     

小盾纤恙螨体内肾综合征出血热病毒增殖的初步研究

为进一步观察小盾纤恙螨感染肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）后的体内增殖，直接取饲养的小盾纤恙螨幼虫和若虫，每２０天为一批制成无菌滤液，接种Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞测定ＴＣＩＤ５０／ｍｌ滴度，动态观察ＨＦＲＳＶ在螨体内的增殖。结果表明：在小盾纤恙螨幼虫期除采集至测定６０天批未测出ＨＦＲＳＶ滴度和未分离到ＨＦＲＳＶ外，其余１２批均在不同时间内测出ＨＦＲＳＶ滴度和分离到ＨＦＲＳＶ，滴度均在１０－１～１０－５之间。３批若虫亦有２批测出ＨＦＲＳＶ滴度和分离到ＨＦＲＳＶ，滴度为１０－５。所分离的ＨＦＲＳＶ用ＰＣＲ扩增技术亦检测出ＨＦＲＳＶＲＮＡ。这为小盾纤恙螨作为ＨＦＲＳ的传播媒介提供了进一步的证据。     

肾综合征出血热病毒宫内感染的临床研究

目的 研究肾综合征出血热(HFRS)病毒宫内感染情况及其对婴儿的影响。方法 对妊娠期感染HFRS病毒者，于其分娩时留取母血和脐带血进行抗—HFRS IgG检测，同时对顺产新生儿采取静脉血进行抗—HFRS IgM检测，并应用血凝抑制试验(HI)对HFRS病毒进行分型，另外对顺产的新生儿进行全面查体和定期随访观察。结果 母血抗—HFRS IgG均阳性，死胎的27例脐带血抗—HFRS IgG阳性23例，孕妇痊愈后自然分娩的12例中脐带血和静脉血有2例抗—HFRS IgG阳性，而抗—HFRS IgM阴性。并发现14例顺产新生儿生长发育全部正常。结论 HFRS病毒存在宫内感染，并易致死胎，但对顺产婴儿未发现致畸作用。     

A novel mu-capture enzyme-linked immunosorbent assay based on recombinant proteins for sensitive and specific diagnosis of hemorrhagic fever with renal syndrome.

Hantavirus nucleocapsid protein has recently been identified as a major antigen inducing an early and long-lasting humoral immune response in patients with hemorrhagic fever with renal syndrome. A mu-capture enzyme-linked immunosorbent assay utilizing recombinant nucleocapsid proteins of Hantavirus strains Hantaan 76-118 (Hantaan serotype) and CG 18-20 (Puumala serotype) as diagnostic antigens and specific monoclonal antibodies as the detection system has been developed. Histidine-tailed recombinant proteins were expressed in Escherichia coli and purified in a single step by affinity chromatography on a nickel-chelate resin. The assay was evaluated with a panel of sera from patients with hemorrhagic fever with renal syndrome originating from various geographic regions. The overall sensitivity of the mu-capture enzyme-linked immunosorbent assay (both recombinant antigens) was 100%, and its specificity was also found to be 100%. Immunoglobulin M antibodies were detected as early as on day 3, and maximum titers were obtained between days 8 and 25 after onset of the disease. The assay was regularly found to be positive within 3 to 4 months but in some cases up to 2 years after the acute phase of the disease.     

IgG subclasses in human immune response to wild and attenuated (vaccine) Junin virus infection

Different proportions of IgG subclasses have previously been reported to distinguish the immune response elicited by primary and recurrent viral infections, as well as viral vaccines. The goal of this study was to study the IgG subclasses composition in the immune response of patients with Argentine hemorrhagic fever, and vaccinees with Candid #1 strain of Junin virus. Twenty-four individuals inoculated with Candid #1 vaccine and 67 patients with Argentine hemorrhagic fever were studied. Blood samples were drawn at 30, 60, and/or 180 days post-inoculation with Candid #1 and 30, 60, and 90 days after clinical onset of the disease. Specific anti-Junin virus IgG subclasses were titrated with specific human monoclonal antibody fluorescence isothiocyanate conjugate (FITC) by immunofluorescent assay (IFA). IgG(1) anti-Junin virus was found in every subject studied and IgG(3) was also detected in some patients with a severe form of Argentine hemorrhagic fever. IgG(2) and IgG(4) were not detected in any serum sample studied. The mean titer of specific IgG(1) in vaccinees was significantly lower than in patients with Argentine hemorrhagic fever (P < 0.05), but no difference was found between mild and severe cases of the disease (P > 0.05). The results of this study demonstrated a central role of IgG(1) in human recovery from infection with every strain of Junin virus, an observation stressed by the immune response to Candid #1 vaccine, which resulted in no difference in IgG subclasses composition from that found in mild cases of Argentine hemorrhagic fever.     

流行性出血热IgM抗体检测(抗体捕捉ELISA法)

本文报道应用IgM-抗体捕捉酶联免疫吸附法(IgM antibody-capture ELISA,或称反向间接酶联免疫吸附法,Reverse indirect ELISA)检测流行性出血热(Epidemic hemorrhagic fever,EHF)患者血清特异性IgM抗体的结果。该方法能特异、敏感地测出EHF患者发病第2天的血清IgM抗体,阳性率为87.5(7/8),第4病日阳性率达95％(57/60),而病程第7天的38例患者血清全部阳性。15例非EHF发热病人及10例正常人血清无1例阳性,并经2-MB试验与加热试验证明了其特异性。另外,研究表明,对于类风湿因子(RF)干扰所致假阳性反应,本实验所采用的阴性抗原平行对照设计能成功地予以校正而排除。     

流行性出血热特异性循环免疫复合物的动态观察和分析

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测了８８例流行性出血热患者２２８份血清中特异性循环免疫复合物，并与胶固素－ＥＬＩＳＡ检测循环免疫复合物的结果进行了比较。结果表明，胶固素－ＥＬＩＳＡ检出循环免疫复合物１８３份（８０．２６％），抗原特异性ＥＬＩＳＡ检出ＩｇＧ型循环免疫复合物１８８份（８２．４５％），ＩｇＭ循环免疫复合物２０５份（８９．９１％），ＩｇＡ型循环免疫复合物１４７份（６４．４７％）。在各类特异性循环免疫复合物中，ＩｇＭ型在各病期检出率最高，ＩｇＧ型次之，ＩｇＡ型最低。在发病初期，各类特异性循环免疫复合物检出率均较高，极期达高峰，随病情缓解而渐降低。对特异性循环免疫复合物检出率与流行性出血热患者病情程度相关性的观察表明，轻型患者检出率较中，重型患者为低，而中、重型间检出率差别不明显。此外，轻型患者特异性循环免疫复合物动态变化明显，极期达高峰后很快下降，而中、重型患者检出率下降趋势较缓慢。上述结果直接证实了流行性出血热循环免疫复合物的形成是特异性病毒抗原刺激机体免疫应答的结果，并构成了流行性出血热免疫发病机制中的重要环节。