三七总皂苷调控miR-1231保护高糖下肾小球系膜细胞的研究

目的 探讨三七总皂苷(PNS)调控miR-1231对高糖诱导的肾小球系膜细胞(HMCs)增殖及炎症反应的影响。方法 将人肾小球系膜细胞(HMCs)分为空白对照组(CON),高糖组(HG)和三七总皂苷组(PNS)。采用CCK-8法检测PNS对高糖下HMCs增殖的抑制作用。采用Real-time PCR法检测miR-1231在各组的相对表达量,生物信息学分析法筛选与miR-1231相关的信号通路及其参与的生物学功能。采用ELISA法和Western blot法检测炎症因子的分泌情况。结果 CCK-8结果表明,与高糖组相比PNS在浓度为6.25～200μg/mL状态下,对细胞过度增殖的抑制作用呈现明显的浓度依赖性(P<0.05),且50μg/mL的PNS已能够显著改善高糖诱导下HMCs的异常增殖(P<0.01)。PCR的结果显示,与对照组相比,高糖组miR-1231表达显著下降;与高糖组相比,PNS干预后显著升高(P<0.01)。对miR-1231进行生物信息学分析,预测到miR-1231的靶基因有IGF1、TMED1、GSTT2等;用GeneOntology和KEGG数据...     

miR-155在糖尿病肾病大鼠及大鼠肾系膜细胞表达的研究

目的：探讨miR-155表达水平在链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病肾病（DN）大鼠及大鼠肾系膜细胞中是否存在同样的变化。方法：将雄性清洁sD大鼠8只随机分成实验组（DN组,n=4）和对照组（Nc组,n=4）,DN组大鼠腹腔注射足量STZ诱导DN大鼠。观察血糖及肾脏结构变化,用real—timePCR检测肾脏miR-155表达水平;大鼠肾系膜细胞分为高糖培养组和正糖培养组,培养24h、48h、72h,用real-timePCR检测miR-155表达水平。结果：与对照组相比,DN组大鼠肾脏miR-155表达水平下降（P〈0．05）：高糖培养的大鼠肾系膜细胞miR-155表达水平较正糖培养的表达水平下降（P〈0．05）,于48h表达水平最低。结论：miR-155在高糖培养大鼠肾系膜细胞表达下降。     

大黄素干预高糖培养大鼠肾小球系膜细胞的凋亡

背景:前期工作已经证实中药复方消可宁(制大黄、制附子、生黄芪)能有效防治早期糖尿病肾病并获得国家专利(专利号:200410064899X)。目的:观察大黄主要活性成分大黄素对高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法:用20,40,80μmol/L大黄素刺激高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率。结果与结论:苏木精-伊红染色及4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色结果显示大黄素对高糖培养的肾小球系膜细胞的凋亡有影响,且与浓度与时间成正相关,细胞凋亡率组间差异有显著性意义(P<0.05)。提示大黄素可诱导肾小球系膜细胞凋亡,且与药物浓度及时间成正相关。     

高糖条件对大鼠肾小球系膜细胞外基质表达的影响

目的 观察高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞分泌细胞外基质成分中透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原表达的影响，为临床治疗糖尿病肾病提供一定的实验依据。方法 (1)采用酶联免疫吸附试验测定经体外不同浓度高糖条件下培养的大鼠肾小球系膜细胞HA、LN、Ⅳ型胶原的表达；(2)利用四甲基偶氮唑蓝比色法动态观察不同葡萄糖浓度对GMC增殖的作用。结果 高糖浓度抑制GMC增殖，此抑制作用和糖浓度成正相关。在高糖环境下48～72h GMC分泌HA、LN、Ⅳ型胶原活性明显增加，其分泌表现为逐渐升高的趋势，并在1W内维持较高水平，各组间差异显著。证实ECM的增加不依赖于细胞增殖状态，对照组则处于一个较稳定的状态，说明高糖对GMC分泌ECM有明显的促进作用。结论 细胞外高葡萄糖环境抑制GMC增殖，且呈浓度依赖性，高糖环境中GMC产生ECM的含量明显增加，所以ECM过度积聚可能参与肾小球硬化的发生。     

高糖条件对大鼠肾小球系膜细胞外基质表达的影响

目的　观察高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞分泌细胞外基质成分中透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原表达的影响 ,为临床治疗糖尿病肾病提供一定的实验依据。方法　 (1 )采用酶联免疫吸附试验测定经体外不同浓度高糖条件下培养的大鼠肾小球系膜细胞HA、LN、Ⅳ型胶原的表达 ;(2 )利用四甲基偶氮唑蓝比色法动态观察不同葡萄糖浓度对GMC增殖的作用。结果　高糖浓度抑制GMC增殖 ,此抑制作用和糖浓度成正相关。在高糖环境下 4 8～ 72hGMC分泌HA、LN、Ⅳ型胶原活性明显增加 ,其分泌表现为逐渐升高的趋势 ,并在 1W内维持较高水平 ,各组间差异显著。证实ECM的增加不依赖于细胞增殖状态 ,对照组则处于一个较稳定的状态 ,说明高糖对GMC分泌ECM有明显的促进作用。结论　细胞外高葡萄糖环境抑制GMC增殖 ,且呈浓度依赖性 ,高糖环境中GMC产生ECM的含量明显增加 ,所以ECM过度积聚可能参与肾小球硬化的发生     

C肽对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:探讨C肽对体外高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1生长的影响。方法:对照组仅含低糖MEM培养液;实验组:高糖MEM培养液含不同浓度的C肽,分别培养24h,48h,72h,用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)检测细胞系HBZY-1的增殖情况。结果:高糖诱导大鼠系膜细胞系HBZY-1的增殖;不同浓度的C肽对高糖诱导的细胞系HBZY-1增殖影响程度不同。10,50,300nmol/LC肽作用24h可明显抑制细胞增殖(P<0.05),而0.5,900nmol/L作用不显著。结论:C肽可抑制高糖诱导的大鼠系膜细胞系HBZY-1的增殖;呈时间、剂量依赖效应。C肽可能对糖尿病肾病的防治起到有益的作用。     

雷公藤内酯醇对高糖时人肾小球系膜细胞MC P-1表达的影响

目的探讨高糖及雷公藤内酯醇（TP）对人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法将培养的人肾小球系膜细胞分为6组：正常对照组（5 mmol/L 葡萄糖）、高糖组（30 mmol/L 葡萄糖）、甘露醇组（5 mmol/L 葡萄糖＋25 mmol/L甘露醇）、TP甲组（30 mmol/L 葡萄糖＋5μg/L TP）、TP 乙组（30 mmol/L 葡萄糖＋10μg/L TP）、TP丙组（30mmol/L 葡萄糖＋15μg/L TP）,分别在24 h、48 h、72 h采用 RT-PCR法检测TP对高糖条件下系膜细胞内 MCP-1 mRNA 及蛋白表达的影响。结果高糖组人肾小球系膜细胞 MCP-1 mRNA及蛋白较正常对照组增加,且差异有显著性（P＜ 0.01）;TP各组比高糖组有明显下降（P＜ 0.01）;不同浓度的TP对高糖诱导的系膜细胞 MCP-1的表达抑制程度不同（P ＜ 0.05）。结论 TP可抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞 MCP-1的表达,且呈时间、剂量依赖关系,其可能对延缓糖尿病肾病中肾小球硬化有一定作用。     

脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF及PEDF的影响

目的观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)的影响,探讨脂联素对糖尿病肾病的保护作用机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:常糖组、高糖A组、B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L,其中以高糖B组作为脂联素干预的对照组);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次分别为2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml),作用24 h,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR法)测定各组细胞VEGF mRNA、PEDFmRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF、PEDF蛋白的含量。结果与常糖组相比,高糖各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及其蛋白表达升高(P﹤0.05),PEDF mRNA及PEDF蛋白表达降低(P﹤0.05);与高糖B组相比,脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及其蛋白表达降低(P﹤0.05),PEDF mRNA及PEDF蛋白表达升高(P﹤0.01)。结论高糖可上调大鼠肾系膜细胞VEGF表达,抑制PEDF的表达;脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达并提高其对PEDF的表达。     

肌肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的机制及影响

目的探讨和研究肌肽对高糖环境下肾小球系膜细胞(RMCs)增殖的影响及相关机制。方法以大鼠的RMCs作为研究对象,分别采用MTT法和BrdU-ELISA法进行肌肽在高糖环境下对RMCs增殖影响的观察。利用酶生化法进行丙二醇(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)含量以及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定。结果肌肽能够显著抑制高糖诱导下的RMCs增殖,在肌肽浓度5~30mmol/L呈现出一定程度的浓度依赖性,而且与其抗氧化作用密切相关。结论肌肽通过抗氧化作用来抑制高糖诱导的RMCs增殖,而且在一定范围内表现出浓度依赖的特性。     

肾上腺髓质素对肾小球系膜细胞的作用

肾上腺髓质素（ADM）是从人的嗜铬细胞中分离出的由52个氨基酸组成的活性多肽，对肾脏功能调节有重要作用，本文综述了ADM对系膜细胞增殖、凋亡的作用及与肾小球疾病的关系。     

缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞炎症介质的影响

目的 观察缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,探讨缬沙坦对糖尿病肾病的防治作用.方法 高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,于培养12、24、48小时,应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖程度,分别应用免疫细胞化学和蛋白质印迹法检测系膜细胞MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度.结果 高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显(0.815±0.007)A,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高(17.29±1.95)μg/L,缬沙坦干预后MCP-1及ICAM-1表达减弱,细胞增殖受抑制(0.652±0.004)A,Ⅳ型胶原浓度降低(13.19±0.89)μg/L.结论 缬沙坦可下调MCP-1及ICAM-1表达,抑制系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,发挥其独立于降压之外的肾脏保护作用.     

MiR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧心肌细胞损伤中的作用及其机制

目的:探讨miR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞损伤中的作用及其机制。方法:将体外培养的心肌细胞分为正常组、H/R组、白藜芦醇组、白藜芦醇+antimiR-NC组和白藜芦醇+anti-miR-146b组。采用荧光定量PCR检测miR-146b的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β,TNF-α和IL-6含量,MTT法检测细胞存活率,比色法检测LDH漏出率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测Bcl-2,caspase-3,NF-κB和TRAF6蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-146b和TRAF6的靶向关系。结果:与正常组相比,H/R组细胞中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而细胞上清液中IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与H/R组相比,白藜芦醇组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著升高,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);与白藜芦醇组相比,白藜芦醇+anti-miR-146b组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率,细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);而白藜芦醇+anti-miR-NC组与白藜芦醇组相比差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因和蛋白质印迹法证实TRAF6是miR-146b靶基因,且miR-146b可靶向调控其表达。结论:miR-146b抑制心肌细胞凋亡和炎症反应是白藜芦醇减轻H/R心肌细胞损伤的调控机制,其作用原理可能与靶向调控TRAF6有关。     

Evidence for a particular binding capacity of rat peritoneal macrophages to rat glomerular mesangial cells in vitro

The adhesion of normal rat peritoneal macrophages to normal rat glomerular epithelial or mesangial cells has been studied in vitro after a 60 min incubation at 37 degree C. After washing, the cell preparations were examined by phase contrast or scanning electron microscopy. Quantitative studies were also performed using macrophages labelled with 99mTc tin colloids. Peritoneal macrophages predominantly adhered to the cultured mesangial cells. The percent-age of labelled macrophages adhering to these cells was about 10 times higher than that of labelled macrophages adhering to the cultured epithelial cells. This percentage increased proportionally to the number of labelled macrophages added, and was strongly reduced by the prior incubation of macrophagic cells with aggregated IgG, with anti-fibronectin IgG, or with F(ab')2 fragments of anti-fibronectin IgG. Furthermore, the macrophage-mesangial cell interaction was significantly reduced by the prior incubation of mesangial cells with anti-fibronectin IgG or with F(ab')2 fragments of anti-fibronectin IgG. The data demonstrate that normal rat peritoneal macrophages preferentially adhere in vitro to normal rat glomerular mesangial cells, and that this binding may be modulated, at least, by: (a) the Fc receptor binding activity of macrophages; (b) the fibronectin molecules available at the surface of macrophages and of mesangial cells.     

表皮生长因子对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:探讨表皮生长因子对体外肾小球系膜细胞增殖作用的影响,为进一步研究系膜细胞增殖的发生机制提供依据。方法:通过肾小球系膜细胞体外培养技术,用含有不同浓度表皮生长因子的培养液培养系膜细胞,作用不同时间,以噻唑蓝法检测细胞增殖能力,观察不同浓度、作用时间下系膜细胞增殖情况。结果:表皮生长因子在0～100ng/mL浓度范围内,其促增殖作用随浓度的增加而增大,呈剂量依赖性(P<0.01),当浓度持续增高时,其促增殖能力有所降低(P<0.05)。加入10ng/mL表皮生长因子作用12～24h促增殖能力逐渐提高,24h达到高峰(P<0.05),随后又随着时间的延长而逐渐降低(P<0.05)。结论:表皮生长因子在一定浓度和时间范围内具有促进肾小球系膜细胞增殖的作用。     

大黄酸及大黄素诱导高糖大鼠肾小球系膜细胞的凋亡

背景：课题组前期实验证实中药复方消可宁能有效防治早期糖尿病肾病。目的：比较大黄酸与大黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响程度。方法：分别用不同浓度20,40,80μmol/L的大黄酸和大黄素刺激高糖培养的肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,DAPI荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率。结果与结论：苏木精-伊红染色及 DAPI 染色结果显示大黄酸对髙糖培养的肾小球系膜细胞凋亡的影响程度强于大黄素的影响程度。细胞凋亡率的对比显示大黄酸对髙糖培养的肾小球系膜细胞的早期凋亡率与晚期凋亡率均强于大黄素。说明低中高浓度的大黄酸、大黄素均可诱导肾小球系膜细胞凋亡,但大黄酸的药效强于大黄素。     

间质干细胞通过调控miR-92b修复顺铂诱导的急性肾损伤

目的探讨骨髓间质干细胞(BM-MSCs)修复顺铂诱导的急性肾损伤的分子机制。方法以6 mg/kg顺铂的剂量经腹腔注射大鼠体内,24 h后经尾静脉输注BM-MSCs(BM-MSCs组)或PBS(PBS组),以未注射顺铂者作为正常对照组;HE染色及免疫组织化学染色法检测BM-MSCs对肾损伤的修复情况;体外培养NRK-52E细胞并经顺铂作用6 h后,继续培养48 h(顺铂组)或与BM-MSCs共培养48 h(细胞组),未用顺铂处理的NRK-52E细胞作为对照组;qRT-PCR检测其miR-92b及其靶基因PTEN的表达水平,western blot检测其p-Akt蛋白的表达水平。结果 HE染色结果显示,BM-MSCs组的肾小管蛋白质管型明显少于PBS组,肾小管结构明显改善;免疫组织化学染色结果表明,BM-MSCs组的增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数[(131.0±14.4)个]明显高于PBS组[(42.2±6.1)个],差异有统计学意义(t=11.28,P0.01);qRT-PCR结果表明,体内试验中,与正常对照组miR-92b和PTEN基因的表达水平(1.11±0.78,1.01±0.21)相比,PBS组分别为4.64±1.06和0.61±0.2,差异有统计学意义(P0.05),BM-MSCs组分别为2.27±0.81和1.1±0.1,差异亦有统计学意义(P均0.05);体外实验中,与阴性对照组miR-92b和PTEN基因的表达水平(1.12±0.77,1.02±0.13)相比,顺铂组分别为7.64±0.72和0.58±0.2,差异有统计学意义(P均0.05),细胞组分别为4.38±0.50和1.15±0.23,差异亦有统计学意义(P均0.05);western blot检测结果显示,与顺铂组p-Akt蛋白的表达水平(0.96±0.18)相比,细胞组p-Akt蛋白表达水平为2.11±0.11,差异有统计学意义(P0.01)。结论 BM-MSCs能够修复顺铂诱导的急性肾损伤,可能通过下调miR-92b发挥作用。     

Mesangial cell proliferation inhibitors for the treatment of proliferative glomerular disease

Mesangial cells (MC) serve a number of functions in the renal glomerular capillary including structural support of the capillary tuft, modulation of glomerular hemodynamics, and a phagocytic function allowing removal of macromolecules and immune complexes. The proliferation of MC is a prominent feature of glomerular disease including IgA nephropathy, membranoproliferative glomerulonephritis, lupus nephritis, and diabetic nephropathy. In experimental animal models of nephritis, MC proliferation frequently precedes and is linked to the increase of extracellular matrix in the mesangium and glomerulosclerosis. Reduction of MC proliferation in glomerular disease models by treatment with heparin, low-protein diet, or antibodies to platelet-derived growth factor (PDGF), have been shown to reduce extracellular matrix expansion and glomerulosclerotic changes. Therefore, MC proliferation inhibitors may offer therapeutic opportunities for the treatment of proliferative glomerular disease. It is also known that the MC proliferation is inhibited by many kinds of pharmacological drugs, for example, angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitors, leukotriene D(4) (LTD(4)) antagonists, PDGF inhibitors, matrix metalloproteinases (MMP) inhibitors, 3-hydroxy-3 methyl glutaryl-coenzymeA (HMG-CoA) inhibitors, cyclin-dependent kinases (CDK) inhibitors, and others. This review summarizes the recently reported MC proliferation inhibitors with their pharmacological properties on the basis of their chemical structures.     

氟伐他汀对高糖状态下肾小球系膜细胞JAK/STAT信号蛋白表达的影响

目的 观察氟伐他汀对体外培养的肾小球系膜细胞信号蛋白Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)、STAT3表达的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和氟伐他汀干预.采用免疫沉淀和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测JAK2磷酸化表达;Westernblotting检测信号蛋白JAK2、STAT1、p-STAT1、STAT3和p-STAT3的表达;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中TGF-β1和纤维连接蛋白(FN)的含量.结果 与低糖组比较,高糖组肾小球系膜细胞p-JAK2(802±124比204±31)、p-STAT1(2 856.6±337.8比617.7±76.2)和P-STAT3(3 049.8±421.3比946.7±141.2)表达均明显增强;上清液中TGF-β1[(2.87±0.34)μg/L比(1.20±0.11)μg/L]和FN((6.34±0.61)mg/L比(3.24±0.26)mg/L]的含量均增高,TGF-β1 mRNA表达增加(P均＜0.01).与高糖组比较.高糖+氟伐他汀组p-JAK2(412±67)、p-STAT1(1 178.4±137.1)和p-STAT3(1 572.6±181.2)表达均明显下调,TGF-β1[(1.94±0.27)μg/L]和FN[(4.27±0.33)mg/L]含量减少,同时TGF-β1 mRNA表达降低(P均＜0.05).结论 高糖能激活肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径,氟伐他汀抑制肾小球系膜细胞TGF-β1和FN的分泌可能部分是通过影响JAK/STAT信号通路的激活而实现的.