微小 RNA-490-3p靶向 FK506相关蛋白 14表达抑制骨肉瘤 MG63细胞侵袭和迁移的实验研究

目的探讨微小 RNA-490-3p(miR-490-3p)对骨肉瘤 MG63细胞侵袭、迁移的影响及其机制。方法 2019年 9月至 2020年 4月,从中科院上海细胞库购买人骨肉瘤细胞株 MG63进行体外培养,分为对照组(未转染)miR-NC组(转染 miR-NC)、 miR-490-3p组(转染 miR-490-3p mimics),miR-490-3p+pcDNA组(共转染 miR-490-3p mimics与空载体、)和 miR-490-3p+FKBP14组(共转染 miR-490-3p mimics与 FKBP14过表达载体),采用 RT-PCR检测 miR-490-3p表达, Transwell小室法检测细胞侵袭、迁移,蛋白质印迹法检测钙黏蛋白 E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、上皮间质转化因子 Twist转录因子( Twist)和 FK506相关蛋白 14(FKBP14)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测 miR-490-3p和 FKBP14的靶向关系。结果与对照组比较, miR-490-3p组细胞中 miR-490-3p表达水平明显升高( 3.68±0.37比 1.02±0.10,P<0.05),而侵袭细胞数( 33.25±2.02比     

下调miR-374a通过靶向TCF21抑制宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移、侵袭的分子机制

摘要：目的:阐明下调miR-374a靶向转录因子21（TCF21）调控宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制。方法:采用Realtime PCR法检测微小RNA（miR）-374a在正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞中的表达变化。在宫颈癌细胞Si Ha中转染miR-374a inhibitor,MTT检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞侵袭以及迁移能力变化,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达变化。在线靶基因预测软件预测miR-374a的靶基因可能为TCF21,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在宫颈癌细胞Si Ha中共转染miR-374a inhibitor和TCF21 siRNA,检测细胞增殖、侵袭、迁移变化。结果:miR-374a在正常宫颈上皮细胞中的表达水平明显低于宫颈癌细胞。转染miR-374a inhibitor后的宫颈癌细胞Si Ha增殖、迁移和侵袭能力下降,细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达减少。miR-374a靶向负调控TCF21表达。TCF21 siRNA逆转miR-374a inhibitor对宫颈癌细胞Si Ha增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论:下调miR-374a通过靶向TCF21抑制宫颈癌细胞Si Ha增殖、迁移、侵袭。     

MicroRNA-17通过调节MMP-2影响滋养层细胞的侵袭与迁移

目的研究microRNA-17(miR-17)对滋养细胞HTR8-SVneo迁移及侵袭的影响,并探讨金属蛋白酶-2(MMP-2)在其中的作用。方法采用Transwell侵袭实验与划痕实验,分析miR-17 mimics或miR-17 inhibitor对HTR8-SVneo细胞侵袭与迁移能力的影响;荧光定量PCR和Western blot检测MMP-2的表达水平。双荧光素酶实验探究miR-17与MMP-2相互作用。前述转染细胞中进一步转染pcDNAMMP2,探究MMP-2对细胞侵袭和迁移能力的影响。结果与对照组相比,转染miR-17 mimic组中miR-17转录水平显著增加,HTR8-SVneo细胞侵袭和迁移能力显著下降。而miR-17 inhibitor显著增加细胞侵袭和迁移能力。miR-17靶向调节MMP-2的表达,且MMP-2逆转miR-17对滋养层细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-17可抑制HTR8-SVneo细胞的迁移和侵袭,这一作用是通过降低MMP-2表达实现。     

miR-105-5p靶向SIRT1调控脂肪酸代谢影响胃癌细胞生物学行为的研究

目的 探讨miR-105-5p对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及脂肪酸代谢的影响,阐明miR-105-5p与沉默信息调节因子1(SIRT1)基因的靶向关系。方法 选取人胃黏膜上皮细胞GES-1、人胃癌HepG2细胞,将不同质粒转染到HepG2细胞,分为miR-105-5p组(转染miR-105-5p mimic)、si-miR-105-5p组(转染miR-105-5p inhibitor)、miR-NC组(转染mimic NC)、NC组(转染inhibitor NC)、Scramble组(转染Scramble)、miR-105-5p+Scramble组(转染miR-105-5p mimic、Scramble)及miR-105-5p+sh-SIRT1组(转染miR-105-5p mimic、sh-SIRT1)。MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,ELISA检测细胞磷脂、三酰甘油含量,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-105-5p、SIRT1 mRNA表达水平;Western blot检测细胞SIRT1、FASN、ACC1及FABP5表达水平。生物信息预测...     

舒芬太尼调控 miR-1抑制肝癌细胞 MHCC97-H增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨舒芬太尼调控微小RNA-1(miR-1)表达对人肝癌MHCC97-H细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 本研究起止时间为2018年3月至2019年9月,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测不同浓度的舒芬太尼对人肝癌MHCC97-H细胞活力的影响,qRT-PCR检测舒芬太尼对MHCC97-H细胞中miR-1表达的影响;通过脂质体转染法将miR-1抑制剂(inhibitor)及阴性对照转染至MHCC97-H细胞,实验分为Control组、舒芬太尼(Sufentanil)组、转染对照(Sufentanil+NC)组和转染(Sufent-anil+miR-1)组.细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测各组MHCC97-H细胞增殖能力,Transwell实验检测各组MHCC97-H细胞侵袭能力,划痕实验检测各组MHCC97-H细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组MHCC97-H细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况.结果 不同浓度的舒芬太尼对肝癌MHCC97-H细胞活力具有不同程度的抑制作用;与Control组比,Sufentanil组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(1.00±0.09)比(2.25±0.24)]明显升高(P<0.05),细胞增殖[(0.54±0.05)比(0.34±0.03)]、侵袭[(106.24±8.25)个比(51.34±5.02)个]和迁移能力[(37.36±4.01)％比(16.34±1.72)％]降低(P<0.05),MMP-2[(0.33±0.04)比(0.15±0.02)]和MMP-9[(0.24±0.02)比(0.11±0.01)]的表达下调(P<0.05);与Sufentanil+NC组比,Sufentanil+miR-1组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(2.20±0.21)比(1.42±0.15)]明显降低(P<0.05),细胞增殖[(0.32±0.03)比(0.46±0.04)]、侵袭[(52.36±5.14)个比(91.16±6.06)个]和迁移能力[(17.11±1.71)％比(29.85±3.10)％]升高(P<0.05),MMP-2[(0.15±0.02)比(0.27±0.02)]和MMP-9[(0.13±0.01)比(0.19±0.02)]的表达上调(P<0.05).结论 舒芬太尼可通过调控miR-1的表达抑制人肝癌MHCC97-H细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与调控MMP-2和MMP-9表达有关.     

外源高表达miR-133b抑制骨肉瘤的增殖与转移

目的分析miR-133b对骨肉瘤细胞增殖与转移的影响。方法q RT-PCR检测人骨肉瘤细胞系(MG-63)与人正常成骨细胞系(h FOB)中miR-133b的表达水平;运用MTT实验检测miR-133b对人骨肉瘤MG-63细胞的生长能力的作用;运用划痕实验检测miR-133b对人骨肉瘤MG-63细胞的迁移能力的作用;Transwell侵袭实验检测miR-133b对人骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力作用。结果qRT-PCR检测结果显示,MG-63细胞中miR-133b的表达水平明显低于h FOB细胞的表达水平(P<0.01);MTT检测发现,外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的生长(P<0.01);划痕实验检测发现,外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的迁移能力(P<0.01);Transwell侵袭实验显示,外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖与转移。     

丙泊酚通过miR-802/PTCH1/SHH通路抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭的研究

目的：探讨丙泊酚通过miR-802/PTCH1/SHH通路对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响。方法：使用不同浓度丙泊酚处理人宫颈癌细胞HeLa为丙泊酚组,使用二甲基亚砜处理细胞为对照组。采用噻唑蓝实验和Transwell实验分别检测HeLa细胞活力、侵袭和迁移能力;通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-802和PTCH1 mRNA的表达水平。通过生物信息学分析以及双荧光素酶报告基因系统验证了miR-802和PTCH1之间的靶关系。分别将NC mimic、miR-802 mimic转染至HeLa细胞中,命名为NC mimic组、miR-802 mimic组。将NC inhibitor、miR-802 inhibitor、Vector和pcDNA-PTCH1转染至10μg/mL丙泊酚处理的HeLa细胞中,分别命名为丙泊酚+NC inhibitor组、丙泊酚+miR-802 inhibitor组、丙泊酚+Vector组和丙泊酚+pcDNA-PTCH1组,检测细胞活力、侵袭和迁移能力。采用蛋白质印迹法检测PTCH1和Gli1蛋白表达水平。结果：与对照组比较,丙泊酚组HeLa细胞活...     

敲减microRNA-27a通过Wnt/β-catenin信号通路抑制肾细胞癌增殖和转移

目的探究miR-27a在肾细胞癌(RCC)增殖与转移中的作用及其机制。方法RT-qPCR检测RCC癌组织、癌旁组织、RCC细胞(Caki-1、786-O和ACHN)和正常肾小管上皮细胞(HK2)中miR-27a表达。将miR-27a inhibitor转入786-O和ACHN细胞,CCK-8实验检测细胞增殖;集落形成实验检测细胞集落形成;伤口愈合实验和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭;Western blot和免疫荧光检测β-catenin表达。采用LiCl(Wnt/β-catenin信号激动剂)处理已转染miR-27a inhibitor的ACHN细胞后,检测细胞增殖、侵袭与迁移。结果RCC癌组织中miR-27a表达量明显高于癌旁组织,并随分期进展而增加。与HK2细胞相比,RCC细胞中miR-27a表达均升高。转染miR-27a inhibitor后,786-O和ACHN细胞的集落形成、细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显降低。miR-27a inhibitor降低ACHN细胞中β-catenin的表达,LiCl能促进已转染miR-27a inhibitor的ACHN细胞的增殖、迁移与侵袭能力。结论miR-27a在RCC癌组织及RCC细胞中高表达,敲减miR-27a通过Wnt/β-catenin信号通路抑制RCC细胞增殖和转移。     

miR-155通过调节ETS1促进鼻咽癌细胞侵袭转移能力的研究

目的 观察微小RNA(micro RNA)miR-155在鼻咽癌细胞侵袭转移中的作用。方法 以鼻咽癌CEN1和5-8F细胞作为研究对象,分别转染miR-155 NC、miR-155 inhibitor、miR-155 mimics和ETS1 siRNA,运用Transwell实验检测miR-155和ETS1对鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的作用,RT-qPCR检测细胞miR-155表达;蛋白印记实验检测ETS1、MMP2和MMP9蛋白表达。结果 与miR-155 NC组相比,miR-155 inhibitor组细胞侵袭[(237.33±15.63)个vs.(117.00±5.72)个]和迁移[(331.00±9.42)个vs.(262.00±11.05)个]能力均降低(P<0.05),ETS1[1.00 vs.(0.77±0.04)]、MMP2[1.00 vs.(0.58±0.05)]和MMP9[1.00 vs.(0.38±0.06)]蛋白表达均下调(P<0.05);miR-155 mimics组细胞侵袭[(134.00±8.83)个vs.(326.00±12.68)个]和迁移[...     

miR-98-5p靶向CCR7对乳腺癌细胞MCF-7运动能力的影响及其机制研究

【目的】探究miR-98-5p靶向作用于趋化因子受体(CCR7)对乳腺癌细胞MCF-7运动能力的影响及相关机制。【方法】MCF-7细胞分为Ctrl组、miR-98-5p mimic组、miR-98-5p NC组、pc-CCR7组、miR-98-5p+pc-CCR7组,分别转染相应的miRNA和CCR7过表达载体,RT-PCR检测miR-98-5p和CCR7基因表达水平,荧光素酶报告实验检测miR-98-5p和CCR7靶向关系,Transwell法检测细胞侵袭,划痕法检测细胞迁移,Western blot检测CCR7、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)、E-钙粘着蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平。【结果】荧光素酶报告实验中,与CCR7 WT+miR-98-5p NC比较,CCR7 WT+miR-98-5p mimic荧光素酶活性显著降低。与Ctrl组比较,miR-98-5p mimic组中miR-98-5p表达水平、E-cadherin蛋白表达水平显著升高,CCR7基因和蛋白表达水平、细胞侵袭和迁移能力、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低,pc-CCR7组细胞侵袭和迁移能力、CCR7、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著升高,E-cadherin蛋白表达水平显著降低;与pc-CCR7组比较,miR-98-5p+pc-CCR7组细胞侵袭和迁移能力、CCR7、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高。【结论】miR-98-5p可靶向作用于CCR7,抑制乳腺癌细胞MCF-7运动能力,其作用机制与上皮细胞间充质转化(EMT)有关。     

miR-140-5p在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞侵袭转移的影响

目的研究miR-140-5p在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞MG-63及U2OS侵袭转移的影响。方法 qRT-PCR及免疫原位杂交法检测miR-140-5p在骨肉瘤组织中的表达情况; qRT-PCR检测miR-140-5p在骨肉瘤细胞M G-63、U2OS及正常成骨细胞系hFOB 1. 19中的表达;在MG-63、U2OS细胞中转染miR-140-5p mimic以上调miR-140-5p的表达,qRT-PCR确认转染成功; Transwell实验检测不同miR-140-5p表达水平对骨肉瘤细胞MG-63、U2OS侵袭转移的影响。结果与癌旁组织比较,miR-140-5p在骨肉瘤组织中表达降低;与正常成骨细胞系h FOB 1. 19比较,miR-140-5p在骨肉瘤细胞MG-63、U2OS中表达降低;在MG-63、U2OS中转染miR-140-5p mimic后,miR-140-5p表达升高,M G-63、U2OS细胞侵袭转移能力下降。结论 miR-140-5p在骨肉瘤组织及细胞系MG-63、U2OS中表达下降,上调其表达水平可抑制MG-63、U2OS细胞侵袭转移。     

绞股蓝皂苷调节HMGB1-RAGE信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨绞股蓝皂苷(Gyp)调节高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法 使用不同浓度(0～400μmol/L)绞股蓝皂苷处理MG63细胞,CCK-8检测细胞活力。将MG63细胞分为对照组(Control组)、绞股蓝皂苷低、中、高浓度组(Gyp-L组、Gyp-M组、Gyp-H组,50、100、200μmol/L Gyp)、绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1阴性对照组(Gyp-H+pcDNA-NC组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-NC质粒)和绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1组(Gyp-H+pcDNA-HMGB1组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-HMGB1质粒)。Edu检测细胞增殖水平;Transwell小室和划痕愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力;ELISA检测转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶(MMP-9)和白介素-6(IL-6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测通路、凋亡及EMT相关蛋白。随后建立骨肉瘤移植小鼠模型,在体检验绞股蓝皂苷对骨肉瘤移...     

miR-760靶向调节黑色素瘤抗原家族D1抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的研究北大核心CSCD

目的 探讨microRNA-760(miR-760)靶向负调节黑色素瘤抗原家族D1(NRAGE)表达对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用。方法 将胃癌NCI-N87细胞分为空白组、miR-760 NC组、miR-760 mimics组、miR-760 mimics+NRAGE NC组和miR-760 mimics+NRAGE OE组。空白组用RPMI 1640培养基培养;miR-760 NC组、miR-760 mimics组分别转染miR-760 NC、miR-760 mimics;miR-760 mimics+NRAGE NC组同时转染miR-760 mimics和空载pcDNA3.1质粒;miR-760 mimics+NRAGE OE组同时转染miR-760 mimics和NRAGE过表达pcDNA3.1质粒。用蛋白质印迹法检测NRAGE的表达水平,用Transwell实验法检测NCI-N87细胞的迁移、侵袭能力。结果 空白组、miR-760 NC组和miR-760 mimics组的NRAGE蛋白相对表达水平分别为0.95±0.06,0.93±0.09和0.27±0.04;迁移细胞数分别为(268.65±14.08),(261.43±13.25)和(163.25±11.37)个;侵袭细胞数量分别为(183.58±10.65),(176.29±9.93)和(95.73±8.29)个;miR-760 mimics组的上述指标均较空白组、miR-760 NC组显著降低(均P<0.05)。NRAGE OE可显著减弱miR-760 mimics对上述指标的影响(均P<0.05)。结论 miR-760可能通过靶向下调NRAGE表达,抑制胃癌NCI-N87细胞的增殖、迁移及侵袭。     

EM患者子宫内膜组织的ESCs中miR-539表达水平及其靶向MMP-9对ESCs侵袭和迁移的影响

目的 探究子宫内膜异位症（EM）患者子宫内膜组织的子宫内膜基质细胞（ESCs）中miR-539表达水平, 以及miR-539靶向基质金属蛋白酶9（MMP-9）对ESCs侵袭和迁移的影响。方法 收集60例EM患者子宫内膜异位 组织及47例正常子宫内膜组织,分离ESCs原代培养,实时荧光定量PCR检测miR-539和MMP-9 mRNA表达水平, 并采用双荧光素酶报告基因检测其靶向关系。利用Lipofectamine 3000试剂转染ESCs,并将其分为miR-539 mimics 组、mimics NC组、miR-539 inhibitors组和inhibitors NC组。CCK-8检测各组细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移; Transwell检测细胞侵袭;Western blot法检测各组细胞中MMP-9蛋白表达水平。结果 EM组miR-539 mRNA水平 显著低于对照组,MMP-9 mRNA水平显著高于对照组（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示miR-539与MMP-9 具有明显的靶向关系（P＜0.05）。与mimics NC组相比,miR-539 mimics组ESCs细胞增殖、划痕愈合率、侵袭细胞数 量及MMP-9蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）;与inhibitors NC组相比,miR-539 inhibitors组ESCs细胞增殖、划痕 愈合率、侵袭细胞数量及MMP-9蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）。结论 miR-539可靶向调节MMP-9表达水 平,影响ESCs的增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA-206调控膜联蛋白A2表达对肺癌细胞增殖与迁移和侵袭能力的影响

目的 分析微小RNA(miR)-206调控膜联蛋白A2表达对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 取人肺腺癌A549细胞分为miR-NC组、miR-206组、miR-206 inhibitor组、miR-206 inhibitor NC组,依照分组转染质粒;采用荧光素酶报告实验检测分析miR-206与膜联蛋白A2的...     

微小 RNA-216b-5p对骨肉瘤 MG63细胞功能的影响及其与高迁移率族蛋白 B1的靶向关系

目的 探讨微小RNA-216b-5p(miR-216b-5p)对骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的靶向关系.方法 将体外培养的MG63细胞分为mimics-NC组、miR-216b-5p mimics组、inhibitor-NC组和miR-216b-5p inhibitor组,采用实时荧光定量PCR检测miR-216b-5p的表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p和HMGB1的靶向关系,蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测HMGB1蛋白的表达.结果 与mimics-NC组相比,miR-216b-5p mimics组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(5.36±0.54)比(1.00±0.11)]和细胞凋亡率[(20.36±3.15)％比(8.58±1.22)％]明显升高,而细胞增殖活力、侵袭能力和细胞中HMGB1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);miR-216b-5p inhibitor组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(0.24±0.03)比(0.96±0.08)]和细胞凋亡率[(2.05±0.38)比(9.27±1.16)]较inhibitor-NC组明显降低,而细胞增殖活力、侵袭能力和HMGB1蛋白的表达水平较inhibitor-NC组均明显升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-216b-5p的靶基因.结论 miR-216b-5p可能通过靶向调控HMGB1表达,抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡.     

葡萄糖转运蛋白-1的表达对骨肉瘤细胞生物学特征的影响

目的 探讨葡萄糖转运蛋白-1(GLUT1)在骨肉瘤组织中的表达及干扰其表达对骨肉瘤细胞生物学特征的影响.方法 选取择期行手术治疗的初诊骨肉瘤患者57例,利用实时荧光定量PCR技术检测骨肉瘤及癌旁组织中GLUT1基因表达;培养人骨肉瘤MG63细胞,根据转染物不同分为siRNA-GLUT1组、siRNA-NC组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术和蛋白质印迹法分别检测各转染组细胞中GLUT1基因和蛋白表达,MTT法检测各转染组细胞增殖能力,利用流式细胞技术检测各转染组细胞凋亡情况,Transwell法检测各转染组细胞迁移和侵袭能力.结果 骨肉瘤组织中GLUT1 mRNA相对表达量1.95±0.18,显著高于癌旁组织的1.27±0.13,差异有统计学意义(P＜0.05);骨肉瘤组织中GLUT1 mRNA相对表达量与临床分期、淋巴结转移和肺部转移有关(P＜0.05);MTT检测结果显示,siRNA-GLUT1组细胞吸光度A值在24、48、72、96 h时均低于siRNA-NC组和空白对照组,均差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞检测结果显示,siRNA-GLUT1组细胞凋亡率(25.7±2.6)％,显著高于siRNA-NC组(6.3±1.4)％和空白对照组(6.9±1.7)％,差异有统计学意义(P＜0.05);siRNA-GLUT1组迁移细胞数和侵袭细胞数低于siRNA-NC组和空白对照,均差异有统计学意义(P＜0.05).结论 GLUT1在骨肉瘤组织中呈高表达,特异性抑制GLUT1基因表达可有效抑制人骨肉瘤MG63细胞增殖,加速细胞凋亡,减少细胞迁移及侵袭.     

长链非编码 RNA MIR4435-2HG靶向微小 RNA-1-3p调控信号通路磷脂酰肌醇激酶 /蛋白激酶 B对胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA MIR4435-2HG(LncRNA MIR4435-2HG)通过调控微小RNA-1-3p(miR-1-3p)的表达对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制.方法 体外培养正常胰腺细胞系hTERT-HPNE与胰腺癌细胞系PANC-1、SW1990、PaTu8988、BxPC-3,将胰腺癌PaTu8988细胞按照随机数字表法分为si-MIR4435-2HG组(转染MIR4435-2HG siRNA)、si-con组(转染siRNA Control)、miR-1-3p组(转染miR-1-3p mimics)、miR-con组(转染miR-1-3p阴性对照)、si-MIR4435-2HG+an-ti-miR-1-3p组(共转染MIR4435-2HG siRNA与miR-1-3p抑制剂)、si-MIR4435-2HG+anti-miR-con组(共转染MIR4435-2HG siR-NA与miR-1-3p抑制剂的阴性对照),同时将未经任何处理的细胞作为NC组.采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中MIR4435-2HG与miR-1-3p的表达;双荧光素酶报告基因检测MIR4435-2HG与miR-1-3p的相互作用.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析敲低MIR4435-2HG及上调miR-1-3p表达对胰腺癌细胞增殖的影响;Transwell迁移及侵袭实验检测MIR4435-2HG及上调miR-1-3p表达对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响.蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)及磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白的表达.结果 MIR4435-2HG在胰腺癌细胞中的表达水平明显高于正常胰腺细胞;MIR4435-2HG可特异性结合miR-1-3p并调控其表达活性;敲低MIR4435-2HG与上调miR-1-3p表达后,可抑制胰腺癌PaTu8988细胞增殖,明显减弱细胞迁移及侵袭能力[其中NC组、miR-con组、si-MIR4435-2HG组增殖活性分别为48 h:(1.21±0.10)、(1.18±0.12)、(0.86±0.09),细胞迁移数量分别为(90.56±9.16)、(88.56±8.91)、(26.49±2.10),细胞侵袭数量分别为(160.79±16.12)、(155.09±15.49)、(69.23±7.10),均P<0.05],下调PaTu8988细胞中cyclin D1、MMP2、MMP9、p-Akt、PI3Kp110α、PI3Kp110β的表达;抑制miR-1-3p表达可促进胰腺癌PaTu8988细胞增殖、迁移及侵袭.结论 敲低LncRNA MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-1-3p表达并抑制PI3K/Akt信号通路活化而降低细胞增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达,进而减弱胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.     

微小RNA-143-3p对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响北大核心CSCD

目的研究微小RNA-143-3p(microRNA-143-3p,miR-143-3p)通过调节基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase-2,MMP2)对胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭的影响。方法体外培养胶质瘤U87 MG细胞,并随机分为miR-NC组和miR-143-3p mimic组;miR-NC组为转染阴性对照寡核苷酸的U87 MG细胞,miR-143-3p mimic组为转染miR-143-3p模拟物的U87 MG细胞。以细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测胶质瘤U87 MG细胞存活率,以划痕实验检测胶质瘤U87 MG细胞迁移能力,以Transwell实验检测胶质瘤U87 MG细胞侵袭能力,以蛋白质印迹(Western blot)法检测胶质瘤U87 MG细胞中MMP2表达水平。结果48 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(94.33±7.59)%和(71.43±7.01)%;72 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(93.45±8.11)%和(68.31±6.51)%;miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞迁移率分别为(42.03±5.72)%和(21.33±1.98)%;细胞侵袭数目为62.09±8.35和41.46±6.27;MMP2的表达量分别为1.01±0.10和0.68±0.07;以上指标,miR-143-3p mimic组与miR-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-143-3p通过MMP2抑制胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭。     

舒芬太尼通过调控miR-410-3p/TIAM1轴影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

摘要：目的:探讨舒芬太尼在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用与机制。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,用不同剂量(2,10,50 ng·ml-1)舒芬太尼干预24 h、转染miR-410-3p mimics或T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（TIAM1）干扰RNA至Hela细胞、或50 ng·ml-1舒芬太尼干预转染miR-410-3p抑制剂的Hela细胞24 h后,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞存活率,Transwell检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测细胞中miR-410-3p表达,蛋白印迹法检测细胞中细胞增殖抗原Ki67、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和TIAM1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-410-3p与TIAM1的调控关系。结果:舒芬太尼可降低Hela细胞存活率、迁移数、侵袭数及Ki67、MMP-2和TIAM1蛋白表达（P<0.05）,促进miR-410-3p表达（P<0.05）。上调miR-410-3p或下调TIAM1后,Hela细胞存活率、迁移数、侵袭数及Ki67和MMP-2蛋白表达均降低（P<0.05）。miR-410-3p靶向负调控TIAM1表达。下调miR-410-3p逆转舒芬太尼对Hela细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论:舒芬太尼可能通过调控miR-410-3p/TIAM1轴降低宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和侵袭能力。