Salubrinal抑制射线诱导NF-κB活化增加口腔癌细胞凋亡

目的 探讨Salubrinal调控射线诱导口腔癌细胞凋亡的作用机制。方法 构建放射抗拒口腔癌细胞KBR (4 Gy/次,7~10d 1次共4次);克隆形成实验检测Salubrinal预处理后口腔癌细胞放射敏感性;蛋白印迹法检测射线及Salubrinal调控口腔癌细胞NF-κB-HIF-1α信号通路及凋亡标志蛋白cleaved PARP的表达;Annexin V、PI染色、流式细胞仪检测凋亡分数。结果 克隆形成实验示Salubrinal增加口腔癌细胞放射敏感性,KB及KBR细胞放射增敏比分别为1.19和1.24。蛋白印迹法结果示射线诱导口腔癌细胞NF-κB-HIF-1α细胞活化具有时间依赖性,而Salubrinal抑制射线诱导其异常活化。Salubrinal增加射线诱导口腔癌细胞凋亡标志蛋白cleaved PARP表达及凋亡指数,而NF-κB激活剂TNF-α逆转了这一作用,提示Salubrinal通过抑制NF-κB活化增加射线调控口腔癌细胞凋亡。进一步应用NF-κB抑制剂Bay11-7082同样增加射线诱导口腔癌细胞凋亡,KB及KBR细胞系Bay11-7082+IR组cleaved PARP的表达为2.67±0.26、1.91±0.17,IR组为2.1±0.16、1.44±0.15(P<0.05)。结论 Salubrinal抑制射线诱导NF-κB活化增加射线诱导口腔癌细胞凋亡进而调控口腔癌细胞放射敏感性。     

NF-κB与放射线诱导的人食管癌细胞上皮间质转化间的关系

目的 探讨NF-κB与放射线诱导的人食管癌细胞上皮间质转化（EMT）间的关系。方法 累积照射食管癌Eca109细胞60 Gy,得到Eca109R60细胞,克隆形成实验检测其放射抵抗性,显微镜下观察细胞形态学变化。Real-time PCR和免疫细胞化学检测Eca109和Eca109R60细胞NF-κB、E-cadherin和Vimentin的表达情况。结果 Eca109R60细胞具备了EMT样表型且放射抵抗性更强。Eca109R60细胞中E-cadherin mRNA表达明显下调（P=0.003）,Vimentin、NF-κB mRNA表达升高（P=0.004,P=0.004）。相关性分析显示NF-κB与E-cadherin mRNA表达呈负相关,与Vimentin未见有明显相关性,但已显示出正相关的趋势。免疫细胞化学法检测Eca109R60细胞E-cadherin阳性染色程度明显减弱,Vimentin、NF-κB p65阳性染色程度明显增强。结论 Eca109R60细胞放射抗性可能由EMT与NF-κB信号通路相互作用调控。     

NF-κB诱捕ODN促进宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的 探讨NF-κB在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织以及宫颈癌组织中的表达情况以及NF-κB诱捕ODN对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响。方法 选取2013年2月至2014年2月南京医科大学第二附属医院妇产科收治的42例宫颈癌患者,以及同期诊治的宫颈上皮内瘤样病变患者22例、正常宫颈组织12例,进行免疫组织化学检测NF-κB信号激活情况;在体外培养的宫颈癌HeLa细胞株中,分别转染NF-κB特异诱捕ODN和错义ODN,使用MTT和流式细胞技术检测细胞增殖、凋亡情况。结果宫颈癌组织中NF-κB的表达明显增加;使用NF-κB诱捕ODN阻断NF-κB信号激活能够显著抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,并增强顺铂诱导的细胞凋亡。结论 NF-κB诱捕ODN可以通过阻断NF-κB信号活化,从而抑制细胞增殖并增强顺铂诱导的细胞凋亡,为宫颈癌治疗提供了新的作用靶点和治疗方向。     

抑制内质网应激信号通路PERK-eIF2α介导NF-κB抑制口咽癌细胞增殖

目的：探讨内质网应激信号通路PERK-eIF2α参与调控口咽癌细胞增殖具体机制。方法：采用MTT实验分别检测不同浓度（0 μmmol/L、1 μmmol/L、10 μmmol/L、50 μmmol/L）PERK通路抑制剂GSK2606414和NF-κB抑制剂Bay11-7082对口咽鳞癌细胞（Fadu、Detroit 562）增殖的影响;应用Western Blot实验检测PERK-eIF2α-NF-κB通路活化情况;Annexin V、PI染色、流式细胞仪检测凋亡分数。结果：首先应用PERK抑制剂预处理细胞,MTT结果示,随着GSK2606414预处理浓度的增加,Fadu细胞和Detroit 562细胞的存活率均逐渐降低（F = 56.06,P = 0.000;F = 71.13,P = 0.000）。其次沉默PERK诱导细胞凋亡。我们进一步探讨其机制,发现沉默PERK抑制NF-κB磷酸化,提示PERK-eIF2α信号通路异常活化诱导NF-κB磷酸化。最后我们抑制NF-κB验证上述结果,MTT结果示,随着Bay11 7082预处理浓度的增加,Fadu细胞和Detroit 562细胞的存活率均逐渐降低（F=57.48,P=0.001;F=116.76,P=0.001）;同时,Bay11-7082组Fadu细胞、Detroit 562细胞凋亡比例分别较各自的control组明显增加,差异有统计学意义（t=12.38、20.88,P=0.007、0.002);均显示抑制细胞增殖诱导凋亡。结论 抑制内质网应激信号通路PERK-eIF2α介导NF-κB抑制口咽癌细胞增殖。     

E1A基因通过抑制NF-κB信号通路增加鼻咽癌细胞放射敏感性实验研究

目的 探讨E1A基因对人鼻咽癌细胞放射敏感性的影响及其可能机制。方法 通过腺病毒载体介导,将E1A基因转染至鼻咽癌CNE-2R细胞,采用RT-PCR鉴定E1A基因的表达;分别给予未转染组(PBS组)、转染空载体Ad-β-gal组(Ad-β-gal组)和转染E1A组(Ad-E1A组)的CNE-2R细胞0、2、4、6、8 Gy照射,应用克隆形成实验检测各组CNE-2R细胞放射敏感性的变化;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;蛋白印迹法检测各组细胞NF-κB、CK2α、Bcl-2及Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 RT-PCR确认E1A基因已整合到CNE-2R细胞中且稳定表达;Ad-E1A组CNE-2R细胞克隆形成率明显少于PBS和Ad-β-gal组的克隆形成率,Ad-E1A组CNE-2R细胞SF2为0.217小于 PBS组和Ad-β-gal组的0.602和0.585(P<0.05),Ad-E1A组α/β值为24.68大于PBS组和Ad-β-gal组的5.268和5.132(P<0.05);流式细胞术显示单独放射可促进CNE-2R细胞的凋亡,当与E1A基因联合使用时,细胞凋亡率明显增加(P<0.05);蛋白印迹法显示E1A基因可下调NF-κB/P65、CK2α、Bcl-2和上调Cleaved caspase-3的表达。结论 E1A基因可以通过抑制CK2的表达阻断NF-κB信号通路以及促进细胞凋亡,来提高鼻咽癌细胞对放射的敏感性。     

阿糖胞苷诱导NF-κB活化与白血病细胞凋亡的关系

目的：研究地塞米松(DXM)和长春新碱(VCR)对阿糖胞苷(Ara—C)诱导HL60—n白血病细胞凋亡与核因子—κB(NF—κB)活化的影响。方法：采用TdT介导的dUTP缺口末端标记(Tunel)和DNA电泳技术检测H160—n细胞凋亡；采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测HL60—n细胞NF—κB活化水平。结果：Ara—C同时具有诱导HL60—n细胞凋亡和NF—κB活化的作用；DXM lμmol/L和VCR0．1μmol/L能显著增强Ara—C诱导的HL60—n细胞凋亡和抑制Ara—C诱导的HL60—n细胞的NF—κB活化，细胞凋亡增强率分别为39．1％和59．2％(均P＜0．05)，NF—κB活化抑制率分别为31．0％和47．0％(均P＜0．05)。结论：Ara—C诱导HL60—n细胞凋亡的同时激活NF—κB；DXM和VCR可通过抑制NF—κB活化，增强其诱导HL60—n细胞凋亡的作用。     

NF-κB调节肿瘤放射敏感度机制的研究进展及临床应用展望

NF-κB作为核转录因子调节众多基因的转录活性包括免疫调节、生长调节、肿瘤的发生和细胞的损伤修复。放射治疗是肿瘤治疗的主要方法,提高肿瘤细胞的放射敏感度可以显著提高肿瘤的控制率和患者的生存期。本文将对NF-κB调节肿瘤细胞放射敏感度的机制及其在放射治疗方面的临床应用前景进行综述。     

雷公藤甲素抑制DNA修复诱导细胞凋亡增加肺癌细胞放射敏感性

目的探讨雷公藤甲素对肺癌细胞放射敏感性的影响。方法培养肺癌细胞H1299、A549、H157和H838, 采用细胞克隆形成实验筛选出放射抵抗最强的细胞为H1299, 选择H1299细胞进行实验。采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度的雷公藤甲素对H1299细胞增殖能力的影响, 筛选雷公藤甲素最佳作用浓度为50 nmol/L, 最佳作用时间48 h。H1299细胞分为对照组、雷公藤甲素组(50 nmol/L)、4 Gy组和雷公藤甲素+4 Gy组, 流式细胞仪检测H1299细胞凋亡情况, Western Blot检测p-Chk2、p-ATM、p-p53、Bcl-2、Bax和cleaved-Caspase 3蛋白的表达水平。结果 4 Gy组细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase 3、p-Chk2、p-ATM和p-p53蛋白表达水平[分别为(12.38±1.34)%、0.42±0.04、0.38±0.04、0.98±0.11、0.73±0.08和0.95±0.09]均高于对照组[分别为(3.26±2.43)%、0.22±0.02、0.23±0.03、0.32±0.03、0.21±0.02...     

抑制NF-κB的表达对射线诱导HeLa细胞株凋亡的影响

背景与目的：TNF、某些化疗药物以及电离辐射可以活化NF-κB,从而抑制细胞凋亡。NF-κB的活化可以通过特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸脂（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）得到抑制。本实验的目的在于探讨抑制NF-κB的表达在宫颈癌HeLa细胞对射线诱导的细胞凋亡中的影响。方法：将HeLa细胞分为实验组加入PDTC（100μmol/L）及对照组不加PDTC。两组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4、6Gy,均作用2 h。用Western blot法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法测细胞增殖。结果：辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC可以抑制由射线介导的NF-κB的增加。抑制了由射线介导的NF-κB的增加,不仅使得HeLa细胞的增殖受到明显的抑制（P〈0.05）也使凋亡指数大大增加（P〈0.001）。结论：在宫颈癌HeLa细胞中抑制NF-κB的表达可以增加由射线介导的细胞凋亡,增加了细胞对射线的反应。     

丹酚酸B对非小细胞肺癌细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 探讨丹酚酸B对人非小细胞肺癌放射敏感性的影响及其可能机制。方法 MTT检测丹酚酸B对非小细胞肺癌A549、H1299细胞系的毒性作用。克隆形成实验检测丹酚酸B对放射敏感性的影响。Transwell实验检测丹酚酸B对肿瘤细胞迁移能力影响。蛋白印迹法检测丹酚酸B调控射线诱导的去泛素化酶OTUD7B及迁移标志蛋白MMP-2、MMP-9、E-cadherin、AKT及p-AKT的表达。结果 丹酚酸B能抑制A549、H1299细胞增殖。克隆形成实验显示丹酚酸B可增加A549、H1299细胞放射敏感性,放射增敏比分别为1.45、1.38。Transwell实验结果显示丹酚酸B可抑制细胞迁移能力(P<0.05)。蛋白印迹法结果示射线诱导A549、H1299细胞OTUD7B表达并有时间依赖性,而丹酚酸B能通过阻抑OTUD7B表达进而抑制MMP-2、MMP-9、p-AKT表达、促进E-cadherin表达。结论 丹酚酸B具有增强A549、H1299细胞放射敏感性的作用,其可能机制是丹酚酸B通过下调射线诱导的OTUD7B表达,抑制上皮-间质转化的进程而实现的。     

lncRNA MEG3 increases the radiosensitivity of lung cancer cells by regulating miR-21

Objective To investigate the regulatory mechanism of long-chain non-coding RNA (lncRNA) MEG3 on the sensitivity of lung cancer cell line H1299 to irradiation. Methods The expression of MEG3 and miR-21-5p in lung cancer cell line H1299 was detected by qRT-PCR. Overexpression control group (transfected with pcDNA3.1), MEG3 overexpression group (transfected with pcDNA3.1-MEG3), miR-NC inhibition group (transfected anti-miR-NC), miR-21-5p inhibition group (transfected with anti-miR-21-5p), MEG3 overexpression+miR-NC overexpression group (co-transfected with pcDNA3.1-MEG3 and miR-NC), MEG3 overexpression+miR-21-5p overexpression group (co-transfected with pcDNA3.1-MEG3 and miR-21-5p mimics) were all transfected into H1299 cells by liposome method treated with 4Gy irradiation. Cell survival fraction was detected by colony formation assay. Cell apoptosis was detected by flow cytometry. The binding of MEG3 to miR-21-5p in cells was assessed by dual luciferase reporter assay. Results Compared with normal lung epithelial cells, the expression of MEG3 was significantly decreased, whereas the expression of miR-21-5p was significantly increased in the radioresistant lung cancer cells H1299. Overexpression of MEG3 or inhibition of miR-21-5p could promote the apoptosis and enhance the radiosensitivity of H1299 cells. MEG3 could targetedly regulate the expression of miR-21-5p. Overexpression of miR-21-5p could reverse the enhanced radiosensitivity of MEG3 to H1299 cells. Conclusion LncRNA MEG3 can enhance the sensitivity of lung cancer cells H1299 to irradiation. The mechanism may be related to targeting miR-21-5p.     

lncRNA MEG3通过调控miR-21表达增加肺癌细胞放射敏感性

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) MEG3对肺癌细胞H1299的放射敏感性调控机制。方法 运用qRT-PCR法检测具有放射抗性的H1299细胞中MEG3、miR-21-5p的表达。将过表达对照组(转染pcDNA3.1)、过表达MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-21-5p组(转染anti-miR-21-5p)、过表达MEG3+过表达miR-NC组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-NC)、过表达MEG3+过表达miR-21-5p组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-21-5p mimics)均用脂质体法转染。克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MEG3与miR-21-5p的结合力。结果 与正常肺上皮细胞相比,H1299细胞中MEG3表达明显降低,miR-21-5p表达明显升高;过表达MEG3或抑制miR-21-5p均可促进H1299细胞凋亡,增强放射敏感性;MEG3可靶向调控miR-21-5p的表达。过表达miR-21-5p可逆转MEG3对H1299细胞放射增强作用。结论 lncRNA MEG3可增强H1299细胞放射敏感性,其机制也许可能与靶向miR-21-5p有关。     

抑制LINC00958表达调控miR-422a促进结直肠癌细胞凋亡及放射敏感性的机制

目的 探讨lncRNA LINC00958对结直肠癌细胞凋亡及放射敏感性的影响以及其作用机制。方法 将pcDNA、pcDNA-LINC00958、si-NC、si-LINC00958、miR-NC和miR-422a质粒分别转染到SW480细胞中,并分别记为pcDNA组、pcDNA-LINC00958组、si-NC组、si-LINC00958组、miR-NC组和miR-422a组;将anti-miR-NC和anti-miR-422a质粒分别与si-LINC00958共转染到SW480细胞中,并分别记为si-LINC00958+anti-miR-NC组和si-LINC00958+anti-miR-422a组;分别将miR-NC和miR-422a分别转染到WT-LINC00958和MUT-LINC00958组细胞中,检测荧光活性;转染均用脂质体法。采用qRT-PCR检测miR-422a和LINC00958的表达;Western blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞克隆形成实验检测对结直肠癌细胞放射敏感性的影响;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果 结直肠癌细胞中LINC00958高表达,miR-422a低表达;抑制LINC00958表达和过表达miR-422a,可促进结直肠癌细胞凋亡,并增加细胞放射敏感性。LINC00958可靶向调节miR-422a表达;抑制miR-422a,逆转了抑制LINC00958表达对结直肠癌细胞的放射增敏和细胞凋亡促进的作用。结论 抑制LINC00958表达,增加结直肠癌细胞的放射敏感性,并促细胞凋亡,其机制可能与调控miR-422a有关,将为结直肠癌治疗提供新靶点和新思路。     

Inhibiting lncRNA LINC00958 expression promotes apoptosis of colorectal cancer cells and increases the radiosensitivity throuth targeting miR-422a

Objective To investigate the effect of lncRNA LINC00958 on the apoptosis and radiosensitivity of colorectal cancer cells and its underlying mechanism. Methods The pcDNA, pcDNA-LINC00958, si-NC, si-LINC00958, miR-NC, and miR-422a plasmids were transfected into SW480 cells and assigned into the pcDNA group, pcDNA-LINC00958 group, si-NC group, si-LINC00958 group, miR-NC group, miR-422a group, respectively. Anti-miR-NC and anti-miR-422a plasmids were co-transfected into SW480 cells with si-LINC00958, and assigned into the si-LINC00958+anti-miR-NC group and si-LINC00958+anti-miR-422a group. miR-NC and miR-422a were transfected into the WT-LINC00958 and MUT-LINC00958 cells, respectively. The fluorescence activity was detected. Cell transfection was performed by liposome method. The expression levels of miR-422a and LINC00958 were measured by qRT-PCR. The expression levels of proteins were detected by Western Blot. Cell apoptosis was assessed by flow cytometry. The radiosensitivity of colorectal cancer cells was evaluated by cell clone formation assay. The fluorescence activity was detected by dual luciferase reporter assay. Results High expression of LINC00958 and low expression of miR-422a were observed in colorectal cancer cells. Inhibition of LINC00958 expression and overexpression of miR-422a could promote cell apoptosis and increase cell radiosensitivity of colorectal cancer cells. LINC00958 could target the regulation of miR-422a expression. Inhibition of miR-422a reversed the effect of inhibiting the expression of LINC00958 on increasing the radiosensitization and promoting cell apoptosis of colorectal cancer cells. Conclusions Inhibition of LINC00958 expression increases the radiosensitivity and promotes the apoptosis of colorectal cancer cells. The mechanism may be related to the regulation of miR-422a, which will provide new targets and new ideas for the treatment of colorectal cancer.     

肝激酶B1增强肺癌H460细胞放射敏感性的体内研究

目的 研究肝激酶B1(LKB1)对肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤放射敏感性的影响。方法 构建肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予空载质粒(pEGFP-Ctrl)、照射+空载质粒(IR+pEGFP-Ctrl)、过表达LKB1质粒(pEGFP-LKB1)、照射+过表达LKB1质粒(IR+pEGFP-LKB1)处理;观察移植瘤生长情况,计算抑瘤率及放射增敏比;并采用免疫组织化学和蛋白印记技术检测各组瘤组织中LKB1表达情况,分析LKB1与放射敏感性的关系。结果 相较于pEGFP-Ctrl组,IR+pEGFP-Ctrl组、pEGFP-LKB1组和IR+pEGFP-LKB1组的肿瘤生长都受到不同程度的抑制,抑瘤率分别为31.30%、14.78%和43.48%,其中IR+pEGFP-LKB1组较其他组最为明显。IR+pEGFP-LKB1组LKB1的放射增敏系数为1.18。转染pEGFP-LKB1组的LKB1在免疫组织化学和蛋白印记水平上表达增高,其余组未见LKB1表达。结论 成功构建肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤模型,LKB1具有增强肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤放射敏感性作用。     

GOLPH3对食管癌细胞系增殖凋亡及放射敏感性影响研究

目的 研究GOLPH3对食管癌细胞系增殖凋亡及放射敏感性的影响。方法 以qRT-PCR和蛋白印迹法分别检测食管癌细胞系和正常食管上皮细胞GOLPH3 mRNA和蛋白水平,在OE33细胞中转染GOLPH3 siRNA,同时给予照射处理。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞克隆实验检测放射敏感性,蛋白印迹法检测活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的Caspase-9(Cleaved Caspase-9)蛋白水平。结果 食管癌细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白水平明显高于正常食管上皮细胞(P<0.05)。GOLPH3 siRNA可明显下调食管癌OE33细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白水平。下调GOLPH3或者照射处理以后的食管癌细胞的增殖活性降低,细胞凋亡率升高,并且细胞中Cleaved Caspase-3、Bax、Cleaved Caspase-9蛋白水平也升高(P<0.05)。下调GOLPH3后的OE33细胞经照射处理以后,细胞增殖活性下降更多,细胞凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3、Bax、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高更多(P<0.05)。下调GOLPH3后OE33细胞经照射处理后,细胞放射增敏比为1.673。结论 GOLPH3在食管癌细胞中高表达,下调其表达可以增加OE33细胞放射敏感性,诱导细胞凋亡并抑制其增殖。