miR-619-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响北大核心CSCD

目的探究miR-619-5p在人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7增殖、迁移和侵袭中的作用及机制。方法乳腺癌和正常乳腺组织及细胞中miR-619-5p的表达利用生物信息学分析或经qRT-PCR法检测;分别转染miR-619-5p模拟物或抑制剂后,qRT-PCR法测定miR-619-5p、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子mRNA的表达;CCK-8法用于检测细胞增殖;划痕愈合实验和Transwell TM实验观察细胞迁移和侵袭能力转变;EMT相关分子的蛋白表达由Western blot检测。生物信息学预测miR-619-5p靶基因,并对潜在靶基因CREB1作初步分析。结果miR-619-5p在乳腺癌中低表达。与对照组相比,过表达miR-619-5p后,miR-619-5p表达水平上调,EMT上皮标志物表达上调,促EMT分子及间质标志物表达下调,细胞的增殖、迁移与侵袭能力削弱,CREB1表达下调;低表达miR-619-5p组结果与上述结果相反。结论乳腺癌组织及细胞中miR-619-5p表达更低,miR-619-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT,其效应可能通过靶向CREB1实现。     

车前子多糖对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的:研究车前子多糖对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并初步探究其作用机制.方法:以人乳腺癌细胞MDA-MB-231为对象,采用MTT法检测不同质量浓度车前子多糖(8、16、32、64 mg/L)对细胞增殖能力的影响并计算细胞存活率;采用划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测不同质量浓度车前子多糖(8、16 m...     

miR-493-5p下调METTL3表达影响鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨miR-493-5p对鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因.方法 实验分为miR-NC组(转染miR-493-5p模拟物阴性对照)、miR-493-5p组(转染miR-493-5p模拟物)、anti-miR-NC组(转染miR-493-5p抑制剂阴性对照)、anti-miR-493-5p组(转染...     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法 购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人卵巢上皮细胞HOSEpiC以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区（3’-UTR）的野生型（WT）和突变型（mut）荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义（P<0.05）,选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-579-3p过表达抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨miR-579-3p在宫颈癌HeLa细胞中的表达及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,及其潜在机制。方法 将细胞分为H8组[正常培养正常宫颈上皮永生化细胞(H8细胞)]、HeLa组[正常培养宫颈癌细胞(HeLa细胞)]、HeLa+mimic-NC(HeLa细胞转染mimic-NC)和HeLa+mimic-miR-579组(HeLa细胞转染mimic-miR-579-3p)。用细胞计数试剂盒检测各组细胞的增殖情况,用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-579-3p和上皮细胞-间充质转化(EMT)相关基因mRNA的表达水平,用迁移实验和侵袭小室法检测细胞的迁移和侵袭情况。结果 H8组中miR-579-3p mRNA相对表达水平(1.00±0.04)显著高于HeLa组(0.12±0.01),差异有统计学意义(P<0.001)。HeLa+mimic-NC组和HeLa+mimic-miR-579组的miR-579-3p mRNA相对表达水平分别为0.13±0.01和0.83±0.10,第2天的增殖能力分别为165.91±9.46和111.35±9.66,侵袭细胞数分别为(124....     

活化Notch3信号通路抑制MDA-MB-231细胞的增殖

目的 活化Notch3信号可以通过上调p27的表达抑制MDA-MB-231细胞的增殖.方法 用脂质体转染法将质粒转入体外培养的MDA-MB-231细胞,用Western印迹法和RT-PCR检测Notch3和p27基因的表达用CCK-8检测细胞增殖率;用平板克隆检测细胞克隆形成率;用流式细胞仪检测细胞周期.结果 Western印迹法和RT-PCR检测结果显示,在MDA-MB-231细胞中表达Notch3后,p27的表达上调.过表达Notch3后的MDA-MB-231细胞增殖减慢,第3天起差异均有统计学意义(P＜0.01);克隆形成率降低,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期阻滞在G0/G1期,转目的基因组G0/G1期细胞所占比例(72.47±1.75)％与对照组(60.16±3.29)％相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 活化的Notch3信号通路可以上调p27表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖.这一发现或许能为三阴性乳腺癌的分子靶向治疗提供新的思路.     

褐藻素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究褐藻素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度褐藻素处理MDA-MB-231细胞后,采用CCK-8法测定细胞抑制率、Live/Dead^TM细胞成像试剂盒进行活死细胞荧光分析,TUNEL法、Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡,Western blotting方法检测Bcl-2、Bax、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达,采用试剂盒检测Caspase-9和Caspase-3/7活性。结果:褐藻素处理MDA-MB-231细胞24 h时,16μmol·L^-1褐藻素明显抑制细胞增殖,IC₅₀为68.79μmol·L^-1;处理48 h时,8μmol·L^-1褐藻素明显抑制细胞增殖,IC₅₀为38.08μmol·L^-1;褐藻素对乳腺癌细胞的细胞活力和增殖的抑制作用表现出一定的时间和剂量依赖性(P<0.05)。与阴性对照组相比,16,32,64μmol·L^-1     

川楝素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用

目的 探讨川楝素对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的抑制作用及其机制.方法 取对数生长期的MDA-MB-231细胞,采用0、6.25、12.50、25.00、50.00和100.00 nmol/L川楝素处理,绘制生长曲线.川楝素0、12.5和50 nmol/L处理72 h后,采用MTS法检测川楝素对MDA-MB-231细胞增殖,流式细胞仪检测乳腺癌细胞凋亡和周期,Western blot检测凋亡相关蛋白半胱氨酶蛋白酶3(Caspase-3)、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)和cleave-PARP表达.结果 川楝素呈时间和剂量依赖性抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖(P＜0.01).川楝素作用48、72和96 h的半数抑制浓度(IG0)分别为9.32、16.96和122.37nmol/L.川楝素能呈浓度依赖性诱导乳腺癌细胞凋亡(P＜0.01),阻滞细胞在S期(P＜0.01).以0、12.50和50.00 nmol/L川楝素处理MDA-MB-231细胞72 h,其早期凋亡率分别为8.12％、20.85％和67.21％,处于细胞周期S期的细胞占32.69％、47.90％和61.23％,凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP减少,cleaved-PARP增多.结论 川楝素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖具有抑制作用;其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞S期阻滞有关.     

miR-641对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 研究微小RNA641(miR-641)对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制.方法 实验分为miR-NC组、miR-641组、si-NC组、si-S100A7组、miR-641+pcDNA组、miR-641+pcDNA-S100A7组.以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测牛皮癣素(S100...     

miR-3127-5 p靶向TRIM28调控直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-3127-5p对三结构域蛋白家族28(TRIM28)的靶向作用以及对直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印记(Western blot)检测直肠癌组织中miR-3127-5p和TRIM28的表达水平.将直肠癌细胞SW1463分为miR-NC、miR-...     

lncRNA FGD5-AS1靶向miR-524-5p调控前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的 探讨lncRNA FGD5-AS1对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 培养正常人前列腺上皮细胞P69及前列腺癌细胞系LNCaP、DU145、PC-3;qRT-PCR检测lncRNA FGD5-AS1和miR-524-5p的表达水平;将LNCaP细胞分为si-lncRNA FGD5-AS1组、si-NC组、miR-524-5p组、miR-NC组、anti-miR-524-5p+si-lncRNA FGD5-AS1组、anti-miR-NC+si-lncRNA FGD5-AS1组;CCK-8检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆数;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测lncRNA FGD5-AS1和miR-524-5p的靶向关系。结果 与正常人前列腺上皮细胞P69相比,前列腺癌细胞系LNCaP、DU145、PC-3中lncRNA FGD5-AS1表达水平升高,miR-524-5p表达水平降低(P<0.05)。干扰lncRNA FGD5-AS1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活性降低,细胞克隆数、迁移和侵袭数量减少(P<0....     

miR-96在人乳腺癌中表达及其对乳腺癌细胞侵袭和迁移活性的影响

目的研究miR-96在人乳腺上皮细胞株和乳腺病变组织中表达状况及其对人乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法抽提4株人乳腺上皮细胞系和28例人乳腺病变新鲜组织总miRNA,实时定量PCR方法检测它们miR-96的表达状况;脂质体介导的转染方法将miR-96抑制物转染人乳腺癌MCF-7细胞株;通过MTS试剂盒检测细胞增殖能力,Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭及迁移能力。结果miR-96在高侵袭乳腺癌细胞株中表达较低侵袭乳腺细胞明显下调(P<0.01);人乳腺癌组织中miR-96表达较乳腺良性病变组织明显下调(P<0.01);miR-96抑制物转染乳腺癌MCF-7后,乳腺癌细胞侵袭和迁移活力较阴性对照组细胞明显增强(P<0.05),而细胞增殖活力改变无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-96在人乳腺癌细胞株和乳腺癌组织中存在表达下调,并对人乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力可能存在一定负性调控作用。     

虫草素通过调控miR-524-5p表达抑制口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:探讨虫草素通过调控微小RNA-524-5p (miR-524-5p)表达对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响.方法:体外培养口腔鳞癌细胞HSC3,分别使用不同浓度(10,20,40 μmol·L-1)的虫草素处理;采用甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;实时荧光定量...     

miRNA-183-5p在乳腺癌患者的表达及对乳腺细胞上皮间质转化、迁移和侵袭的影响

目的 研究miRNA-183-5p在乳腺癌患者体内的表达情况及对乳腺细胞上皮间质转化的影响.方法 采用Real-timePCR检测93例乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10A中miRNA-183-5p的表达水平.将MDA-MB-231分为3组:未做处理的对照组,转...     

circ-LRP6调控miR-515-5p/IL-6通路影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨环状RNA低密度脂蛋白受体相关蛋白6（circ-LRP6）对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法 选取44例卵巢癌患者的癌组织及癌旁组织,培养正常人卵巢上皮细胞HUM-CELL-0088及卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3、A2780,采用实时荧光定量PCR检测卵巢癌组织和细胞中circ-LRP6、微小RNA-515-5p（miR-515-5p）的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-515-5p与circ-LRP6之间的靶向关系;将circ-LRP6干扰表达载体、miR-515-5p过表达载体、miR-515-5p抑制表达载体与circ-LRP6干扰表达载体转染至卵巢癌细胞SKOV3中,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9、白细胞介素6受体（IL-6R）蛋白的表达;CCK-8法检测SKOV3细胞活性;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。结果 与癌旁组织及HUM-CELL-0088细胞相比,卵巢癌组织和SKOV3、OVCAR3、A2780细胞系中circ-LRP6表达水平显著升高,miR-515-5p表达水平显著降低（P<0.05）。双荧光素酶报告实验证实circ-LRP6可靶向负调控miR-515-5p的表达。低表达circ-LRP6或过表达miR-515-5p均可抑制Cyclin D1、MMP2、MMP9、IL-6R的表达,降低细胞活性,抑制细胞迁移和侵袭（P<0.05）。同时,抑制circ-LRP6和miR-515-5p表达可上调SKOV3细胞中Cyclin D1、MMP2、MMP9、IL-6R的表达,增强细胞活性,促进细胞迁移和侵袭（P<0.05）。结论 抑制circ-LRP6表达可能通过上调miR-515-5p抑制IL-6,从而抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭。     

沉默乳腺癌扩增序列2基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 研究沉默乳腺癌扩增序列2(BCAS2)基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响.方法 将细胞分3组:空白组、对照组和实验组.空白组细胞不做任何处理,对照组细胞转染空载体(3×108 TU·mL-1,10μL),实验组细胞转染慢病毒载体pGLV3-GFP-shBCAS2(3×108 TU·mL-1,10μL)...     

miR-613对高尔基体磷蛋白3调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的研究miR-613靶向调控高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)基因对乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法用脂质体技术分别将miR-NC、miR-613 mimic、anti-miR-NC、anti-miR-613、si-NC、si-GOLPH3、miR-613 mimic与pcDNA、miR-613mimic与pcDNA-GOLPH3转染至MCF-7细胞。用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-613和GOLPH3 mRNA的表达,用噻唑蓝法、Transwell法检测MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭。结果 HBL-100组和MCF-7组的miR-613表达量分别为1.03±0.09和0.37±0.04,GOLPH3 mRNA表达量分别为1.07±0.11和3.25±0.26,GOLPH3蛋白表达量分别为0.34±0.05和0.75±0.08,MCF-7组的上述指标与HBL-100组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-NC组和miR-613组72 h时细胞增殖率分别为(0.97±0.09)%和(0.63±0.06)%,迁移细胞数分别为(86.79±8.1...     

精氨白桦脂酸的制备及其对三阴性人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响

目的:制备精氨白桦脂酸,并考察其对三阴性人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响。方法:以精氨酸为增溶载体,采用共研磨法将等摩尔比的白桦脂酸与精氨酸制成精氨白桦脂酸。采用粉末X射线衍射法、红外光谱法、差示扫描量热法对精氨白桦脂酸进行表征;比较白桦脂酸和精氨白桦脂酸的溶解度;采用MTT法检测15、30、60、120μg/mL的白桦脂酸、精氨白桦脂酸和5氟尿嘧啶(5-FU)对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果:所制精氨白桦脂酸为不同于精氨酸与白桦脂酸物理叠加的新的物相,其中白桦脂酸的羧基与精氨酸中氨基进行了成盐反应,其未见明显的熔点峰。白桦脂酸几乎不溶于水,精氨白桦脂酸水溶液中白桦脂酸的溶解度为50.72μg/mL。与白桦脂酸比较,精氨白桦脂酸对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率明显升高(P<0.05),且与5-FU比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功制得溶解度较好的精氨白桦脂酸,其对MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用。