虫草素通过调控miR-524-5p表达抑制口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移及侵袭

摘要：目的:探讨虫草素通过调控微小RNA-524-5p（miR-524-5p）表达对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:体外培养口腔鳞癌细胞HSC3,分别使用不同浓度(10,20,40μmol·L-1)的虫草素处理;采用甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖; Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-524-5p的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（Cyclin D1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达量;分别将miR-524-5p mimics或anti-miR-524-5p转染至HSC3细胞后,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭。结果:与对照组比较,虫草素各浓度组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,迁移细胞数及侵袭细胞数显著减少（P<0.05）,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低（P<0.05）,p21、E-cadherin蛋白水平及miR-524-5p的表达水平显著升高（P<0.05）,且虫草素浓度组间的上述指标比较差异均有统计学意义（P<0.05）; miR-524-5p过表达可抑制HSC3细胞增殖、迁移及侵袭,而抑制miR-524-5p表达可减弱虫草素对HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:虫草素可能通过上调miR-524-5p的表达从而抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

低分子量肝素联合吉西他滨对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的探讨低分子量肝素(low molecular weight hepa-rin,LMWH)对吉西他滨(gemcitabine,GEM)抗肿瘤作用的影响及其作用机制。方法实验分为对照组、LMWH组、GEM组、LMWH与GEM联合应用组。MTT法测定药物对MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞增殖的影响;细胞划痕实验、Tr-answell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达;ELISA法检测乳腺癌细胞培养液中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)的表达。结果 LMWH对MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞的增殖没有明显影响,亦不能增强GEM的增殖抑制作用。30×104IU·L-1LMWH与2.5 mg·L-1GEM联合作用于MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞24 h的迁移抑制率分别为66.3%、76.5%,较单用GEM的迁移抑制率(MDA-MB-231细胞47.4%,MDA-MB-435细胞52.9%)明显提高。同时LMWH与GEM合用对乳腺癌细胞侵袭的抑制也明显高于GEM单用时的作用。GEM可下调MMP-9和HPA的表达,与LMWH合用时下调更加明显。结论 LM-WH具有增强GEM抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭的作用,其机制可能与下调MMP-9和HPA的表达有关。     

LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的　探讨LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞迁移和侵袭作用的影响。方法　qPCR检测30例TNBC患者肿瘤组织、癌旁正常组织以及6种乳腺细胞（乳腺正常细胞MCF-10A,乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468、BT549、T47D）LincRNA-P21和miR-17-3p的表达。取MDA-MB-231细胞,单独过表达LincRNA-P21（实验设对照组、pcDNA3.1空白组、pcDNA-LincRNA-P21组）,抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p空白组、miR-17-3p抑制剂组）,过表达LincRNA-P21+抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p抑制剂组和pcDNA-LincRNA-P21+miR-17-3p inhibitor组）。CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖,集落形成实验检测细胞的集落数量,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果　TNBC患者组织中LincRNA-P21的表达明显低于癌旁组织（0.48±0.03 vs. 1.03±0.06,t=11.714,P＜0.01）,miR-17-3p的表达显著高于癌旁组织（2.93±0.17 vs. 1.02±0.04,t=15.593,P＜0.01）。乳腺癌细胞系中LincRNA-P21表达量明显低于MCF-10A,miR-17-3p表达量高于MCF-10A（P＜0.01）。单独过表达LincRNA-P21或抑制miR-17-3p后,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力均明显下降。过表达LincRNA-P21的同时抑制miR-17-3p,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力出现进一步下降,且上调E-cadherin的表达,抑制Vimentin的表达（P＜0.05）。结论　LincRNA-P21通过竞争性结合miR-17-3p来抑制MDA-MB-231细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭。     

舒芬太尼通过调控miR-410-3p/TIAM1轴影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

摘要：目的:探讨舒芬太尼在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用与机制。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,用不同剂量(2,10,50 ng·ml-1)舒芬太尼干预24 h、转染miR-410-3p mimics或T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（TIAM1）干扰RNA至Hela细胞、或50 ng·ml-1舒芬太尼干预转染miR-410-3p抑制剂的Hela细胞24 h后,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞存活率,Transwell检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测细胞中miR-410-3p表达,蛋白印迹法检测细胞中细胞增殖抗原Ki67、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和TIAM1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-410-3p与TIAM1的调控关系。结果:舒芬太尼可降低Hela细胞存活率、迁移数、侵袭数及Ki67、MMP-2和TIAM1蛋白表达（P<0.05）,促进miR-410-3p表达（P<0.05）。上调miR-410-3p或下调TIAM1后,Hela细胞存活率、迁移数、侵袭数及Ki67和MMP-2蛋白表达均降低（P<0.05）。miR-410-3p靶向负调控TIAM1表达。下调miR-410-3p逆转舒芬太尼对Hela细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论:舒芬太尼可能通过调控miR-410-3p/TIAM1轴降低宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

舒芬太尼通过miR-365-3p/AKT1抑制胃癌细胞迁移、侵袭的研究

摘要：目的:探讨舒芬太尼对微小RNA-365-3p（miR-365-3p）/蛋白激酶B-α（AKT1）表达及其对胃癌细胞迁移、侵袭的影响。方法:采用不同浓度的舒芬太尼(终浓度0.5,5,50,500 nmol·L-1)分别处理胃癌细胞48 h,Transwell实验检测胃癌细胞迁移及侵袭能力,实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞中miR-365-3p的表达。分别将miR-NC（miR-NC组）、miR-365-3p mimics（miR-365-3p组）、anti-miR-NC（anti-miR-NC组）、anti-miR-365-3p（anti-miR-365-3p组）转染至胃癌细胞,检测胃癌细胞迁移及侵袭能力变化。靶基因网站预测miR-365-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因验证miR-365-3p与AKT1的靶基因关系。将anti-miR-365-3p、pcDNA-AKT1及其阴性对照分别转染至胃癌细胞12 h后用舒芬太尼处理48 h,分别为舒芬太尼+anti-miR-NC组、舒芬太尼+anti-miR-365-3p组、舒芬太尼+pcDNA3.1组、舒芬太尼+pcDNA-AKT1组,检测各组胃癌细胞迁移及侵袭能力变化,蛋白免疫印迹（Western Blot）检测细胞中钙黏附蛋白E（E-cadherin）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、p-AKT1蛋白表达。结果:舒芬太尼可抑制胃癌细胞迁移、侵袭及MMP-2表达,促进miR-365-3p、E-cadherin表达;miR-365-3p过表达可通过上调E-cadherin表达及下调MMP-2的表达进而抑制胃癌细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验证明AKT1是miR-365-3p的靶基因,miR-365-3p可负性调控靶基因AKT1的表达;抑制miR-365-3p表达或AKT1过表达可逆转舒芬太尼对胃癌细胞迁移、侵袭的抑制作用。结论:舒芬太尼可通过上调miR-365-3p表达而抑制AKT1表达进而抑制胃癌细胞迁移及侵袭。     

延龄草总皂苷抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231转移的作用及机制研究

目的观察延龄草总皂苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与迁移的影响及相关机制。方法培养乳腺癌细胞MDA-MB-231,加入延龄草总皂苷(1.5、3 mg·L~(-1))24 h后,采用细胞侵袭实验、划痕实验观察延龄草总皂苷对MDA-MB-231细胞侵袭与迁移的影响,以Western blot方法检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结果延龄草总皂苷能够有效地抑制MDA-MB-231细胞的侵袭与迁移,降低MMP-2与MMP-9的蛋白表达并呈现浓度依赖性。结论延龄草总皂苷能够有效地抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与迁移,其可能机制与降低MMP-2、MMP-9的表达水平有关。     

miR-619-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响北大核心CSCD

目的探究miR-619-5p在人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7增殖、迁移和侵袭中的作用及机制。方法乳腺癌和正常乳腺组织及细胞中miR-619-5p的表达利用生物信息学分析或经qRT-PCR法检测;分别转染miR-619-5p模拟物或抑制剂后,qRT-PCR法测定miR-619-5p、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子mRNA的表达;CCK-8法用于检测细胞增殖;划痕愈合实验和Transwell TM实验观察细胞迁移和侵袭能力转变;EMT相关分子的蛋白表达由Western blot检测。生物信息学预测miR-619-5p靶基因,并对潜在靶基因CREB1作初步分析。结果miR-619-5p在乳腺癌中低表达。与对照组相比,过表达miR-619-5p后,miR-619-5p表达水平上调,EMT上皮标志物表达上调,促EMT分子及间质标志物表达下调,细胞的增殖、迁移与侵袭能力削弱,CREB1表达下调;低表达miR-619-5p组结果与上述结果相反。结论乳腺癌组织及细胞中miR-619-5p表达更低,miR-619-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT,其效应可能通过靶向CREB1实现。     

下调 HOX转录反义 RNA对三阴性乳腺癌细胞 MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响

目的 研究下调HOX转录反义RNA(HOTAIR)水平对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响.方法 si-HOTAIR对MDA-MB-231细胞转染,实验分为对照组、si-阴性对照组、si-HOTAIR组,实时荧光定量法测定转染后MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平;分别用MTT法、流式细胞仪、Transwell小室实验测定转染后MDA-MB-231细胞活性、周期、侵袭能力;蛋白印迹法(WB)测定转染后MDA-MB-231细胞中c-myc、Ki-67、PCNA、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平.结果 与MCF-10A细胞组相比,对照组MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平升高[(1.85±0.21)比(1.06±0.13),P<0.05].与对照组、si-阴性对照组相比,si-HOTAIR组MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平(1.34±0.15)、细胞活性(98.04±6.28)％、侵袭能力(35.66±8.04)降低(P<0.05),细胞G0/G1期下调,阻滞在G2/M期;与对照组、si-阴性对照组相比,si-HOTAIR组MDA-MB-231细胞中c-myc、Ki-67、PCNA、MMP-9、MMP-2表达水平降低(P<0.05).结论 HOTAIR在MDA-MB-231细胞中高表达,下调HOTAIR表达水平可抑制MDA-MB-231细胞增殖、阻滞细胞周期、降低肿瘤细胞侵袭能力.     

miR-98-5p靶向CCR7对乳腺癌细胞MCF-7运动能力的影响及其机制研究

【目的】探究miR-98-5p靶向作用于趋化因子受体(CCR7)对乳腺癌细胞MCF-7运动能力的影响及相关机制。【方法】MCF-7细胞分为Ctrl组、miR-98-5p mimic组、miR-98-5p NC组、pc-CCR7组、miR-98-5p+pc-CCR7组,分别转染相应的miRNA和CCR7过表达载体,RT-PCR检测miR-98-5p和CCR7基因表达水平,荧光素酶报告实验检测miR-98-5p和CCR7靶向关系,Transwell法检测细胞侵袭,划痕法检测细胞迁移,Western blot检测CCR7、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)、E-钙粘着蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平。【结果】荧光素酶报告实验中,与CCR7 WT+miR-98-5p NC比较,CCR7 WT+miR-98-5p mimic荧光素酶活性显著降低。与Ctrl组比较,miR-98-5p mimic组中miR-98-5p表达水平、E-cadherin蛋白表达水平显著升高,CCR7基因和蛋白表达水平、细胞侵袭和迁移能力、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低,pc-CCR7组细胞侵袭和迁移能力、CCR7、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著升高,E-cadherin蛋白表达水平显著降低;与pc-CCR7组比较,miR-98-5p+pc-CCR7组细胞侵袭和迁移能力、CCR7、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高。【结论】miR-98-5p可靶向作用于CCR7,抑制乳腺癌细胞MCF-7运动能力,其作用机制与上皮细胞间充质转化(EMT)有关。     

芦荟大黄素对高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响

目的研究芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响及其作用机制。方法 MTT法检测AE对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Transwell chamber法检测AE对MDA-MB-231细胞侵袭重组基底膜能力和趋化性运动能力的影响;RT-PCR、Western blot法检测AE对MDA-MB-231细胞黏着斑激酶(FAK)mRNA和蛋白表达的影响。明胶酶谱法检测MDA-MB-231细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性。结果 80μmol·L-1 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭重组基底膜能力、趋化性运动能力,其抑制率分别为(52.98±5.46)%,(45.88±8.51)%。作用于MDA-MB-231细胞24 h后,AE下调FAK mRNA和蛋白表达,下调MDA-MB-231细胞分泌MMP-9。结论 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭能力、趋化性运动能力,其作用机制与其下调FAK表达和MMP-9的分泌有关。     

黄芩素抑制人乳腺癌细胞侵袭和迁移的实验研究

目的探讨黄芩素(baicalein)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭和迁移的作用及其机制。方法 MTT法检测Baicalein对细胞活力的影响;Transwell小室测定其侵袭力和迁移力;细胞划痕实验测定细胞运动能力;Western blot检测细胞MMP2、MMP9和uPA的表达。结果与对照组相比,50、100μmol·L-1的baicalein明显抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭(P<0.01)和迁移(P<0.01)。其中,baicalein对细胞侵袭抑制率分别为15%和44%,对细胞迁移的抑制率分别为50%和77%。50μmol·L-1的baicalein抑制了MMP2的表达水平,100μmol·L-1的baicalein分别抑制了MMP9和uPA的表达水平。结论 baicalein能够抑制MDA-MB-231细胞侵袭和迁移,其机制可能与直接抑制细胞侵袭和迁移能力,抑制MMP2、MMP9和uPA的表达有关。     

白芍总苷调控舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

探讨白芍总苷(TGP)对舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。TGP作用HSC3细胞或抑制LINC00319表达后,MTT检测HSC3细胞增殖,Transwell检测HSC3细胞的迁移和侵袭,蛋白印迹(Western Blot)检测细胞中CyclinD1、p21、MMP-2和MMP-9蛋白水平,qRT-PCR检测细胞中LINC00319和miR-608水平,双荧光素酶报告基因实验验证LINC00319和miR-608调控关系。TGP或抑制LINC00319表达后,HSC3细胞抑制率、p21蛋白及miR-608水平升高(P<0.05),细胞迁移和侵袭数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白水平及LINC00319水平降低(P<0.05)。LINC00319靶向负调控miR-608表达,LINC00319过表达逆转TGP对HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。TGP可能通过调控LINC00319/miR-608轴抑制舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭。     

吉西他滨联合西妥昔单抗对三阴乳腺癌细胞转移相关基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性的影响

目的：探讨吉西他滨联合西妥昔单抗对三阴乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响，并对可能的机制进行初步的探究。方法：将实验分为西妥昔单抗组（150 μg · mL^-1）、吉西他滨联合用药组（西妥昔单抗150 μg · mL^-1，吉西他滨2.8 μg·mL^-1）。通过MTT、Transwell实验检测联合用药对MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响，Western blotting实验检测合用药对MDA-MB-231细胞MMP-9、TIMP-1、p-IkB、NF-kB-p65表达水平的影响。结果：吉西他滨联合西妥昔单抗作用MDA-MB-231细胞后，其生长被不同程度的抑制，抑制率随吉西他滨浓度的增加而增高（P<0.05）；联合用药组MDA-MB-231细胞迁移、侵袭数目明显减少（P<0.05），同时MMP-9、p-IkB、NF-kB-p65的表达含量降低，TIMP-1表达含量增加。结论：吉西他滨联合西妥昔单抗对三阴乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移具有抑制作用，并明显抑制MMP-9的表达，其机制可能是通过抑制NF-kB通路实现。     

microRNA-515-5p调控c-MYC-p53信号轴对神经母细胞瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响

[摘要]目的：探讨microRNA-515-5p（miR-515-5p）对神经母细胞瘤（NB）SK-N-BE（2）和SK-N-AS细胞增殖、侵袭、迁移的影响及分子机制。方法：采用生物信息学技术结合多种软件预测方法,检测miR-515-5p在NB细胞中的表达。在NB细胞中瞬时转染miR-515-5p mimics,应用CCK8法和克隆形成实验、Transwell侵袭小室实验和体外划痕实验检测miR-515-5p对NB细胞转染后的增殖、侵袭和迁移的影响。采用Western免疫印迹（WesternBlot）检测miR-515-5p对c-MYC-p53信号轴的调控机制。结果：与对照组比较,转染miR-515-5p mimics的细胞集落平均形成率降低,细胞活性下降,且细胞侵袭和迁移能力降低（P<0.05）。WesternBlot检测结果显示miR-515-5p抑制c-MYC蛋白表达,但可促进P-p53活化（P<0.05）,对p53的表达无影响。结论：miR-515-5p通过调控c-MYC-p53信号轴抑制NB细胞的增殖、侵袭和迁移能力,可能作为NB分子治疗的潜在靶点。     

石见穿多糖通过调控DSCAM-AS1/miR-129-5p轴抑制oxLDL诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移和侵袭

摘要：目的:探讨石见穿多糖对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的人主动脉血管平滑肌细胞（HASMCs）增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法:体外培养HASMCs,不同剂量(0.25,0.5,1 g·L-1)的石见穿多糖干预oxLDL诱导的HASMCs、或oxLDL诱导转染DSCAM-AS1小干扰RNA的HASMCs、或1 g·L-1的石见穿多糖干预oxLDL诱导的转染DSCAM-AS1过表达载体的HASMCs后,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验和Transwell分别检测细胞迁移和侵袭,Western Blot检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,RT-qPCR法检测DSCAM-AS1和miR-129-5p表达。双荧光素酶报告基因实验验证DSCAM-AS1和miR-129-5p调控关系。结果:石见穿多糖可降低oxLDL诱导的HASMCs的OD值、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数及N-cadherin蛋白表达降低（P<0.05）,而促进E-cadherin蛋白表达（P<0.05）,且呈剂量依赖性。石见穿多糖可降低oxLDL诱导的HASMCs中DSCAM-AS1表达（P<0.05）,而促进miR-129-5p表达（P<0.05）,DSCAM-AS1靶向结合并负调控miR-129-5p表达。沉默DSCAM-AS1可降低oxLDL诱导的HASMCs的OD值、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数及N-cadherin蛋白表达降低（P<0.05）,而促进E-cadherin蛋白表达（P<0.05）。过表达DSCAM-AS1逆转石见穿多糖对oxLDL诱导的HASMCs增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:石见穿多糖可抑制oxLDL诱导的HASMCs增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与调控DSCAM-AS1/miR-129-5p轴有关。     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1靶向微小 RNA-339-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨长链非编码 RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法收集南阳市中心医院 2017年 1月 2019年 1月收治的 37例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织。将 MDA-MB-453细胞分为 CDKN2B-AS1阴性对照( si-NC组)、 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA(si-CDKN2B-AS1组)、 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA+miR-339-5p阴性对照( si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组)以及 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA+ miR-339-5p特异性寡核苷酸抑制剂( si-CDKN2B-AS1+anti-miR-339-5p组)。采用 RT-qPCR法对 CDKN2B-AS1及微小 RNA-339-5p(miR-339-5p)表达水平进行检测;细胞周期及增殖活性检测分别采用流式细胞术及 MTT实验;采用 Transwell小室技术对细胞迁移和侵袭进行检测;采用 Western blotting法对增殖标记蛋白细胞增殖核抗原 -67(Ki67)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子 1A(P21)、上皮型钙黏蛋白( E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达进行检测;荧光素酶报告实验检测 CDKN2B-AS1对 miR-339-5p的靶向调控。结果在乳腺癌组织中 CDKN2B-AS1表达水平上调［( 2.23±0.08)比( 1.00±0.06)］(P<0.05)。抑制 CDKN2B-AS1可增加 G0期细胞比例［(43.29±3.76)%比( 30.25±3.01)%］、 P21表达水平升高, S期细胞比例［(21.91±3.10)%比( 34.19±3.32)%］、细胞存活率［( 53.02±5.38)%比( 100.00±7.12)%］、迁移、侵袭数以及 Ki67、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平降低( P<0.05)。 CDKN2B-AS1靶向调控 miR-339-5p,抑制 miR-339-5p逆转抑制 CDKN2B-AS1对 MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论抑制 CDKN2B-AS可抑制乳腺癌 MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭,且靶向调控 miR-339-5p表达。关键词:乳腺肿瘤;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1;微小 RNA-339-5p(miR-339-5p);增殖;迁移;侵袭     

微小 RNA-744-5p靶向整合素连接激酶对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-744-5p(miR-744-5p)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 选取2016年2月至2018年11月枣庄矿业集团枣庄医院接收的经病理确诊的56例膀胱癌病人病理组织切片,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测56例膀胱癌组织和对应癌旁组织中miR-744-5p表达水平.分别转染miR-744-5p模拟物(mimics)、miR-744-5p抑制剂或共转染miR-744-5p mimics与整合素连接激酶(ILK)过表达载体至膀胱癌BIU-87、T739细胞,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blotting)检测过细胞中细胞周期蛋白(Cyclin D1)、P21、基质金属蛋白酶(MMP-2)和钙黏附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-744-5p与ILK调控关系.结果 与癌旁组织相比,膀胱癌组织中miR-744-5p表达水平显著降低[(0.98±0.10)比(0.25±0.02),P<0.05].过表达miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数及Cyclin D1和MMP-2蛋白表达降低(P<0.05),而P21和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05).抑制miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数升高(P<0.05).miR-744-5p靶向结合并负调控ILK,过表达ILK逆转过表达miR-744-5p对BIU-87和T739细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 膀胱癌组织中miR-744-5p呈低表达,过表达miR-744-5p可阻碍膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,而抑制miR-744-5p则起相反的作用,其可能通过靶向负调控ILK表达发挥作用.     

埃克替尼介导FXR受体通过下调miR-21水平抑制非小细胞肺癌细胞增殖及侵袭能力机制分析

摘要：目的:探讨埃克替尼介导FXR受体通过下调miR-21水平抑制非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖及侵袭能力机制。方法:体外培养人肺癌A549细胞,分为对照组、A组(埃克替尼10μmol·L-1)、B组(埃克替尼20μmol·L-1)、C组(埃克替尼40μmol·L-1)、D组(埃克替尼80μmol·L-1)和E组(埃克替尼80μmol·L-1+FXR抑制剂Z-guggulsterone)。取对数生长期细胞,根据相应方案进行转染处理,处理前、处理24,48,72 h时取细胞进行相关检测。采用实时PCR分析处理前后的miR-21和FXR的miRNA相对表达量。采用western blotting法检测FXR的蛋白表达水平。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制率。采用Transwell小室法进行细胞侵袭和迁移能力分析。结果:随着埃克替尼给药剂量的增加,FXR的miRNA相对表达量和蛋白表达水平以及miR-21的miRNA相对表达量降低,细胞增殖抑制率升高,细胞迁移和侵袭数减少（P<0.05）。与E组比较,D组FXR的miRNA相对表达量和蛋白表达水平以及miR-21的miRNA相对表达量升高,细胞增殖抑制率降低,细胞迁移和侵袭数增加（P<0.05）。随着处理时间的延长,各组FXR的miRNA相对表达量和蛋白表达水以及miR-21的miRNA相对表达量均降低,细胞增殖抑制率升高,细胞迁移和侵袭数减少（P<0.05）。结论:埃克替尼可抑制NSCLC细胞增殖及侵袭,埃克替尼介导FXR受体下调miR-21表达可能为其作用机制。     

circRASSF2靶向miR-1343-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨circRASSF2对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 逆转录荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测37例乳腺癌及癌旁组织中circRASSF2和miR-1343-3p表达水平；将乳腺癌MDA-MB-231细胞分为si-circRASSF2组、si-NC组、miR-NC组、miR-1343-3p组、si-circRASSF2+anti-miR-1343-3p组、si-circRASSF2+anti-miR-NC组；四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活性；克隆形成实验检测细胞克隆形成数；Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况；Western blot检测Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 9蛋白相对表达水平；双荧光素酶报告实验检测circRASSF2和miR-1343-3p的靶向关系。结果 与癌旁组织比较，乳腺癌组织中circRASSF2表达水平升高，miR-1343-3p表达水平降低（P<0.01）。与si-NC组比较，si-circRASSF2组MDA-MB-231细胞OD值降低，...     

右美托咪定调控miR-219a-5p/CACUL1通路抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

摘要：目的:探讨右美托咪定对子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响和机制。方法:采用不同浓度(5,10,20,40μmol·L-1)的右美托咪定处理子宫内膜癌细胞Ishikawa,细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞存活率,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,并确定用药浓度。实时定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测右美托咪定对Ishikawa细胞miR-219a-5p和细胞周期素依赖激酶2相关性Culin结构域1（CACUL1）表达的影响。采用上述方法检测抑制miR-219a-5p表达或过表达CACUL1对右美托咪定处理的Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-219a-5p和CACUL1的靶向调控关系。结果:右美托咪定可抑制Ishikawa细胞增殖活力和迁移侵袭能力（P<0.05）,且呈剂量依赖性。右美托咪定处理可促进miR-219a-5p表达,抑制CACUL1表达（P<0.05）。抑制miR-219a-5p表达或过表达CACUL1可逆转右美托咪定对Ishikawa细胞的增殖、迁移和侵袭的影响（P<0.05）。CACUL1是miR-219a-5p的靶基因,miR-219a-5p负性调控CACUL1表达。结论:右美托咪定通过调节miR-219a-5p/CACUL1轴抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。