甘肃乌拉尔甘草有效菌株内生细菌活性物质初步研究

目的：考察甘肃乌拉尔甘草具有抑菌作用的内生细菌的活性物质。方法：利用HPLC检测,以甘草苷、甘草酸单铵盐标准品为参照,对甘草有效菌株内生细菌JTYB-001、JTYB-053、JTZB-001发酵液抑菌活性成分进行分析。结果：三菌株代谢产物出峰时间分别为（RT=21．071分钟）、（RT=21．041）、（RT=21．067）,与甘草酸单铵盐标准品的出峰时间（RT=21．031分钟）相近,采用面积法对其定量,产量分别约为0．033、0．005,0．013mg／mL。结论：甘肃乌拉尔甘草野生与栽培品有效菌株内生细菌JTYB-001、JTYB-053、JTZB-001三菌株分别含有与宿主相同药理活性的甘草酸类物质。     

甘肃乌拉尔甘草野生与栽培品内生菌的分离及鉴定

目的：通过对甘肃乌拉尔甘草野生与栽培品内生菌的分离,对甘草同属不同品种内生菌的优势菌种进行初步鉴定,比较二者的生理活性差异。方法：采用NA、PDA培养基对甘草野生与栽培品内生菌进行分离和纯化,并以分离频率比较判断各自优势菌种。结果：野生甘草分离到内生细菌65株,内生真菌7株,优势菌种为青霉菌属和曲霉属;栽培甘草分离到内生细菌54株,内生真菌6株,优势菌种为青霉菌属;野生与栽培甘草的内生真菌分属于6个属,相同的有5个属,不同的2个属为丝核菌属和木霉属。结论：野生与栽培甘草具有相趋同数量和种类的内生细菌与内生真菌,但二者内生真菌的菌属及优势菌种存在明显差异。     

当归内生真菌分离及其次级代谢产物活性评价

目的 分离当归内生真菌并对其次级代谢产物进行生物活性评价。方法 以当归及其根际土壤为材料,选用6种培养基采用组织匀浆法分离内生菌,采用96孔板法测定次级代谢物的抑菌活性,紫外分光光度法评价4种酶抑制活性。结果 从当归的根、茎、叶及土壤中共分离纯化得到153株真菌,对腺苷脱氨酶、β-内酰胺酶、黄嘌呤氧化酶和酪氨酸酶有一定抑制活性样品分别为45.83%、52.78%、51.39%、55.56%;对4种指示菌有广谱抑制作用样品为1.39%,菌株6B对大肠埃希菌ATCC25922、ATCC35218的最低抑菌浓度为62.5、7.81μg/mL。结论 当归内生真菌资源丰富,是活性化合物发现的良好来源,具有一定研究价值。     

药用植物刺五加内生真菌的分离及其抑菌活性研究

 目的研究药用植物刺五加内生真菌及其次生代谢产物的抑菌活性,旨在获得有良好抑菌活性的菌株,以寻找新型抗菌物质。方法以枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、单增李斯特菌、酿脓链球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和白假丝酵母为实验菌株,用菌饼法及纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行了抑菌实验。结果从药用植物刺五加中分离到42株内生真菌,其中有37株真菌对至少1种实验菌株有抑菌活性,占总分离菌株的88.10%;有12株内生真菌次生代谢产物对至少1种指示菌有抑菌活性,占总分离菌株的28.57%。结论药用植物刺五加的内生真菌及其次生代谢产物中存在着丰富的抑菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供资源。     

药用植物五味子内生真菌的分离及其抑菌活性研究

 目的研究药用植物五味子内生真菌及其次生代谢产物的抑菌活性,旨在获得有良好抑菌活性的菌株,以寻找新型抗菌物质。方法以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、单增李斯特菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、酿脓链球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和白假丝酵母为试验菌株,用菌饼法及纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行了抑菌实验。结果从药用植物五味子中分离到36株内生真菌,其中有33株内生真菌对指示菌均表现出不同的抑菌活性,占总分离菌株的91.67%;有30株内生真菌的发酵液对指示菌株也有一定的抑制作用,占总分离菌株的83.33%。结论药用植物五味子的内生真菌及其次生代谢产物中存在着丰富的抑菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供资源。     

见血封喉内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的 分离和鉴定见血封喉Antiaristoxicaria根韧皮部中的内生真菌,并检测其抑菌活性.方法 以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌methicillin-resistant Staphylococcus gtureus (MRSA)和白色念珠菌Candida albicans作为指示菌,采用杯碟法对内生真菌发酵上清液进行抑菌试验.结果 从见血封喉根的韧皮部中分离出6株内生真菌,经形态鉴定分属于聚端孢霉属(Trichothecium LK.ex Fr.)、枝顶孢霉属(Acremonium LK.ex Fr.)和丝核菌属(Rhizoctonia DC.ex Fr.).其中内生真菌J6的发酵上清液对MRSA有抑菌活性,抑菌圈直径为18 mm.结论 首次对见血封喉内生真菌进行了研究,内生真菌J6对MRSA有明显的抑菌活性,其抑菌活性成分值得进一步研究.     

药用植物车前内生真菌分离及其抑菌活性初步分析

目的：研究药用植物车前可培养内生真菌多样性及其抑菌活性特征。方法：通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择小麦全蚀病菌、枸杞黑果病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和黄瓜立枯病菌5 种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌4 种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。结果：从车前根茎叶组织器官中分离出13 株内生真菌,以茎部最多,叶部次之,根部最少;经形态学初步分类鉴定归于2 个目,2 个科,5 个属;其中有11 株菌对1 种或多种植物病原真菌指示菌有不同程度的抑制作用,占菌株总数的84.6%,6 株内生真菌对1 种或多种供试细菌指示菌具有不同程度的抑制作用,占分离菌株总数的46.2%;3 株活性菌株PAEFS001、PAEFS007、PAEFS008 分别对5 种供试植物病原真菌指示菌具有明显抑制作用,菌株PAEFS001 属于束丝菌属,菌株PAEFS007 和PAEFS008 同属于曲霉属;1 株活性菌株PAEFS003 分别对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌2 种供试细菌指示菌有明显的抑制作用,属于梭孢霉属;药用植物车前内生真菌具有明显的抑菌活性,抑制植物病原真菌的范围较宽,对革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用明显,具有一定的选择性。结论：从药用植物车前内生真菌寻找新的抑菌活性物质是可行的,通过对其进行开发和利用,对提高药用植物车前的综合利用价值具有重要意义。     

滇牡丹内生真菌的分离及其抑菌活性研究

 目的 研究滇牡丹内生真菌的种群组成及其代谢产物的抑菌活性,获得抗菌活性较好的菌株,以寻找新型抗菌物质。方法 采用内生菌常规分离法对健康滇牡丹植株的根、茎、叶进行内生真菌的分离鉴定。以11 种指示菌,采用纸片扩散法对分离获得的内生真菌进行抑菌活性实验。结果 从滇牡丹植物中分离到81株内生真菌,经形态鉴定,分属于19个属。抑菌实验表明,有46株内生真菌对至少1种指示菌有抑制作用,占分离总菌株的56.8%。 结论 滇牡丹内生真菌中存在着丰富的抗菌天然活性物质,可为寻找新型抗菌物质提供资源。     

中华地鳖虫肠道内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的:研究中华地鳖虫肠道内生真菌及其抑菌活性,为发现新型活性天然产物提供一条重要的途径。方法:采用平板分离法从地鳖虫肠道内分离内生真菌,利用滤纸片法对其进行抑菌活性研究,并对菌株的总DNA进行提取,利用通用引物ITS1和ITS4对菌株18S rDNA ITS序列进行扩增和测序,将测序结果进行同源性比对分析,确定活性菌株的分类地位。结果:从中华地鳖虫肠道中共分离出8株内生真菌。其中,菌株DB-1对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌都有一定的抑制作用,经比对分析后鉴定菌株DB-1为深绿木霉Trichoderma atroviride。结论:中华地鳖虫肠道内具有抑菌活性的内生真菌资源可做进一步研究利用。     

水仙内生真菌的分离及抑菌和抗肿瘤活性研究

目的 分离纯化水仙根茎中的内生真菌,并对分离得到的真菌进行抑菌和抗肿瘤活性筛选。方法 用组织分离法分离纯化水仙内生真菌后,以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、大肠杆菌Escherichia coli、绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa、肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae和人肝癌细胞HepG2作为受试对象,采用滤纸片法和MTT法对内生真菌菌株发酵液的醋酸乙酯提取物进行抑菌和抗肿瘤活性检测。结果 从水仙根茎共分离到18株内生真菌,各菌株发酵液的醋酸乙酯提取物对4种供试细菌和HepG2细胞都有抑制作用。在质量浓度10 mg/mL时,SX-R202和SX-S102对大肠杆菌和绿脓杆菌抑菌圈直径分别达到18 mm和20 mm;在质量浓度1 mg/mL时,SX-R201、SX-R202、SX-R203和SX-R204对HepG2细胞增殖抑制率分别为（86.0±1.1）%、（89.8±1.3）%、（62.9±0.9）%和（90.6±1.0）%。结合形态学特征和分子生物学鉴定确定SX-R201为尖孢镰刀菌属Fusarium sp. 菌株、SX-R202和SX-R203为青霉属Penicillium sp. 菌株、SX-R204和SX-S102为曲霉属Aspergillus sp. 菌株。结论 水仙内生真菌的抑菌和抗肿瘤效果明显,值得进一步研究。     

铁皮石斛内生真菌的分离及其体外抑菌和抗肿瘤活性初步研究

目的分离铁皮石斛Dendrobium officinale内生真菌,研究内生真菌的分布并初步探讨和筛选具有抑菌和抗肿瘤活性的特异菌株。方法利用组织分离法和分子生物学方法分离、鉴定内生真菌;以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌作为受试对象,采用对峙法和管碟法分别对内生真菌及其发酵代谢产物的醋酸乙酯萃取相进行抑菌实验;采用MTT法对内生真菌代谢产物醋酸乙酯萃取相进行体外抗肿瘤活性检测。结果从铁皮石斛中分离得到28株内生真菌,分子鉴定结果显示,分离的内生真菌归属于10个属,其中镰刀菌属为优势属。抑菌实验结果显示28株内生真菌中,有7株至少能对1种指示菌有抑菌作用,其代谢产物的醋酸乙酯萃取相对3种指示菌和Hep G2细胞具有不同程度的抑制作用。结论铁皮石斛内生真菌种群丰富,从中分离得到的内生真菌具有潜在的抑菌和抗肿瘤活性,为进一步开发抑菌、抗肿瘤候选药物奠定基础。     

甘草地上部分化学成分研究

目的研究甘草Glycyrrhiza uralensis地上部分的化学成分。方法通过硅胶、凝胶等柱色谱及高效液相色谱技术进行分离纯化,根据理化性质和核磁数据对化合物进行结构鉴定。结果从甘草地上部分乙醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为(2S)-3′-(2-hydroxy-3-methylbut-3-enyl)-4′,5,7-trihydroxy-dihydroflavanone(1)、乔松素(2)、sigmoidin B(3)、licoflavanone(4)、6-异戊烯基柚皮素(5)、短叶松素(6)、高良姜素(7)、染料木素(8)、红车轴草素(9)、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷(10)、芦丁(11)、α,α′-dihydro-3,5,3′-trihydroxy-4′-methoxy-5′-isopentenyl-stilbene(12)。结论化合物1为新化合物,命名为羟甘草黄烷酮;化合物3、6、7和9是首次从甘草属植物中分离得到。     

甘草地上部分寡糖富集纯化及其抗衰老活性研究

目的 制备甘草地上部分寡糖,对其进行表征及体内外抗衰老活性评价。方法 用水回流提取甘草地上部分,经过AB-8型大孔吸附树脂、DEAE-52纤维素、Sephadex LH-20树脂等富集纯化寡糖;通过凝胶渗透色谱法测定样品相对分子质量,薄层色谱法鉴别样品中是否含有葡萄糖和果糖,并通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除实验评价其体外抗氧化能力;通过秀丽隐杆线虫氧化应激、热应激、寿命、脂褐素测定等实验评价其体内抗衰老活性。结果 富集纯化得到的甘草地上部分寡糖样品相对分子质量为180~1800,不含葡萄糖和果糖。样品对DPPH自由基有较好的清除作用,半数抑制浓度为0.220 2 mg·mL^–1。甘草地上部分寡糖能显著延长氧化应激、热应激下线虫的寿命,减少线虫体内脂褐素的沉积。结论 甘草地上部分提取分离纯化得到的寡糖样品具有良好的体内外抗氧化、抗衰老活性。     

基于UPLC-LTQ-Orbitrap MS探究生、炙甘草黄酮类成分及其抗氧化活性差异

目的：探究甘草蜜炙前后黄酮类成分变化与其抗氧化活性的关系。方法：提取蜜炙前后甘草总黄酮,采用紫外分光光度法、超高效液相色谱串联线性离子阱高分辨质谱法分别进行含量测定及成分分析,采用总抗氧化能力测定法、超氧阴离子自由基清除法、羟自由基清除法及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除法4种体外方法测定其抗氧化活性。结果：甘草蜜炙后总黄酮抗氧化活性明显提高,总黄酮含量较生品降低;质谱结果显示,生、炙甘草共有成分中甘草查耳酮A等10个黄酮类成分含量上升,反曲刺酮素B等5个成分含量下降,其中甘草查耳酮A含量提升最显著。结论：蜜炙甘草总黄酮抗氧化活性的提高可能主要在于生、炙甘草黄酮成分含量的差异,其中甘草查耳酮A含量的变化对总黄酮抗氧化活性的提升起重要作用,为甘草“生熟异用”研究提供了依据。     

乌拉尔甘草化学成分研究进展

甘草为我国传统中药,其来源为乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草G. inflata Bat.、光果甘草G. glabra L.的干燥根及根茎,其中乌拉尔甘草是临床的主流品种。乌拉尔甘草中主要含有黄酮、三萜、苯丙素、多糖等类化学成分。查找中国知网、PubMed等数据库的相关文献,对乌拉尔甘草的化学成分进行整理、分析和归纳总结,为其化学成分的进一步研究及相关质量评价体系的建立提供参考。     

不同光质对甘草苗期生长及活性成分含量的影响

目的：探究不同光质对甘草苗期生长及活性成分积累的影响特征。方法：采用白光（对照）、红光、蓝光、红蓝光（红光∶蓝光=2∶1）和蓝红光（蓝光∶红光=2∶1） 5种光质处理甘草,分别在光质处理36、106 d测定甘草的生长指标,建立甘草根部12个活性成分含量的测定方法,结合聚类分析探析不同光质对甘草活性成分积累的影响特征。结果：红光促进甘草株高增长的作用较其他光质大,红光下甘草株高比对照高40.9%～45.1%;红蓝光促进甘草根部生长的作用明显,不同光质下甘草根长、根粗和根干质量增长量变化趋势一致,均为红蓝光>红光>白光>蓝红光>蓝光;不同光质处理106 d甘草的根冠比均大于处理36 d,红蓝光处理106 d甘草的根冠比最大,是对照的2.8倍。聚类分析结果表明,甘草的活性成分随不同光质处理时间的延长而增大,不同光质下甘草酸、芹糖异甘草苷、异甘草苷等9个活性成分含量随不同光质处理时间的增加呈升高趋势。红蓝光促进甘草中甘草酸、芹糖异甘草苷、异甘草苷、异甘草素、新异甘草苷、甘草素和甘草苷积累的作用较其他光质大,分别比对照高88.24%、17.39%、284.31%、156....     

阳春砂仁根内生真菌解磷功能评价及分类学鉴定

目的对产自于云南的阳春砂仁根内生真菌进行分离、纯培养、解磷功能评价及分类学鉴定。方法通过PDA和MEA培养基分离砂仁根内生真菌,并纯化培养;利用无机磷源Pikovaskaia’s(PVK)固体和液体培养基筛选具有解磷功能的内生真菌,并通过生长圈直径、生物量、有效磷含量、pH值、磷酸酶活性来分析菌株解磷能力和解磷机制;通过核糖体18SPCR扩增,对具有解磷效果的菌株进行分子鉴定。结果研究发现,分离自阳春砂仁根部的24株内生真菌,有10株为深色有隔内生真菌(dark septate endophytes,DSE)。通过难溶性PVK固体培养基筛选发现,共有8株菌可形成解磷生长圈,其中JP-20和JP-23生长直径均大于9 cm,其次为JP-15,生长圈直径为6.06 cm;PVK液体培养基筛选结果显示,菌株JP-23具有较强的解磷效果,生物量显著高于可溶性磷源,液体基质中有效磷含量显著升高,pH明显下降,酸性磷酸酶活性增加。经分子鉴定,初步认定菌株JP-23为枝孢属Cladosporiumsp.菌株(GenBank:MK629004)。结论菌株JP-23可通过调节基质pH值和分泌酸性磷酸酶来分解、吸收难溶性磷源。为研究植物-微生物磷吸收作用机制及砂仁生态种植提供数据支持和理论依据。     

川芎内生真菌的分离与鉴定

目的:探讨川芎内生真菌类群与川芎品种和产地的关系。方法:采用平板分离法分离川芎的内生真菌,采用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果:从6个产地的川芎根茎样品共获得内生真菌50株,经形态观察分类鉴定为1纲、3目、4科、13属。结论:不同产地及不同品种川芎的内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异,推测川芎内生真菌种群可能和川芎的特定生境有关。     

乌拉尔甘草TIFY基因家族鉴定及调控分析＊

目的 为了探索乌拉尔甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）TIFY基因家族的特征并预测其功能，本研究在全基因组层面，应用生物信息学方法对乌拉尔甘草TIFY基因家族进行鉴定和分析。方法 在乌拉尔甘草全基因组数据基础上，利用NCBI、MEME及TBtools等工具，结合基因保守结构域，对乌拉尔甘草TIFY基因家族的序列特征、分类、系统发育和基因表达模式进行分析。结果 在乌拉尔甘草中鉴定到TIFY家族基因成员18个（GurTIFY1-GurTIFY18），分别属于TIFY、JAZ、PPD、ZML四个亚家族，编码的核苷酸长度为444-1266 bp，氨基酸长度在147-421 aa之间，等电点为4.57-9.68，分子质量为16741.11-44426.5 Da，含有10个保守基序和4个保守结构域。基因表达结果表明GurTIFY基因中GurTIFY15、GurTIFY4、GurTIFY1、GurTIFY11等在乌拉尔甘草叶和根中的表达水平具有显著差异性。结论 本研究为深入理解TIFY基因响应非生物胁迫的调控机制和参与次生代谢物质累积的功能奠定基础，并为乌拉尔甘草优质品种选育提供科学参考。