上调miR-125a对肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨上调microRNA-125a（miR-125a）对肺癌A549细胞凋亡的影响及可能机制。方法 人工合成miR-125a基因序列,将miR-125a基因克隆至真核表达载体pGenesil-1质粒,构建重组质粒pGenesil-miR-125a,同时设计并构建阴性对照质粒pGenesil-control。将以上载体经脂质体介导转染肺癌A549细胞并分为3组：成功转染pGenesil miR-125a的A549细胞（A549-miR-125a组）,成功转染pGenesil-control的A549细胞（A549-control组）,以及未进行转染的A549细胞（A549组）。采用实时定量PCR技术（QPCR）检测各组细胞的miR-125a表达水平,Annexin V-FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法检测p53基因的蛋白水平。结果 经酶切和测序鉴定证明pGenesil-miR-125a重组质粒构建成功。A549-miR-125a组的miR-125a水平为2.72±0.41,高于A549-control组的0.97±0.16和A549组的0.96±0.11（P＜0.01）;A549-miR-125a组的细胞凋亡率为（31.04±2.48）％,高于A549-control组的（6.91±0.72）％和A549组的（6.73±0.56）％（P＜0.05）;A549-miR-125a组的p53蛋白水平为3.91±0.46,高于A549-control组的1.01±0.06和A549组的0.99±0.04（P＜0.01）。结论 上调miR-125a可促进肺癌细胞的凋亡,提示其在肺癌的发生、发展中有重要作用,可能的机制是上调p53的蛋白表达。     

circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。［方法］ 通过集落形成实验、流式细胞术、CCK-8法评估circ_0001361和miR-486-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞克隆、凋亡以及细胞活力的影响。双荧光素酶检测circ_0001361与miR-486-3p的相互作用。［结果］ 干扰circ_0001361表达显著性促进细胞凋亡（7.16%±0.65% vs 25.27%±2.32%,P<0.001）、上调miR-486-3p表达（0.96±0.06 vs 3.08±0.29,P<0.001）、降低细胞光密度值（0.82±0.07 vs 0.44±0.04,P<0.001）和克隆形成数（84.47±7.23 vs 39.69±3.76,P<0.001）。过表达circ_0001361显著性下调miR-486-3p表达（1.00±0.00 vs 0.45±0.05,P<0.001）、促进细胞凋亡（7.36%±0.66% vs 20.44%±2.17%,P<0.001）、降低细胞细胞光密度值（0.86±0.06 vs 0.51±0.05,P<0.001）和克隆形成数（89.62±7.35 vs 45.81±4.48,P<0.001）。circ_0001361与miR-486-3p直接结合。下调miR-486-3p表达显著性减弱干扰circ_0001361对MDA-MB-231细胞克隆形成数、凋亡率和细胞光密度值的影响（P<0.001）。［结论］ 干扰circ_0001361通过促进miR-486-3p表达来诱导乳腺癌细胞凋亡,并抑制其增殖。     

miR-135a 通过下调SOX2 抑制喉癌Hep-2 细胞的恶性生物学行为和增强对奥沙利铂的敏感性

[摘要] 目的：探讨敲降miR-135a 对人喉癌上皮Hep-2 细胞的恶性生物学行为和奥沙利铂敏感性的影响。方法：收集2018年1 月至2018 年6 月郑州大学附属南阳医院南阳市中心医院行喉癌切除术10 例患者的喉癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测喉癌组织和Hep-2 细胞中miR-135a 的表达水平。miR-135 inhibitor 转染喉癌Hep-2 细胞后,采用CCK-8 检测Hep-2 细胞活性,集落形成实验检测Hep-2 细胞集落形成能力,Transwell 实验检测Hep-2 细胞的侵袭及迁移能力,WB实验检测Hep-2 细胞中SOX2蛋白的表达水平。0.5、1.0、1.5、2.0 μmol/L的奥沙利铂处理已转染miR-135 inhibitor 的Hep-2 细胞,CCK-8 实验检测Hep-2 细胞的增殖活性,Annexin-V-FITC/PI 染色流式细胞术检测Hep-2 细胞的凋亡率。采用miR-135a inhibitor 质粒、对照pcDNA 空载体（SOX2-Con）质粒、pcDNA-SOX2（SOX2-OE）质粒共转染Hep-2 细胞,构建miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组和miR-135a inhibitor+SOX2-OE组,检测此2 组细胞的增殖活性、集落形成能力、侵袭及迁移能力。结果：与癌旁组织比较,喉癌组织中miR-135a表达水平显著升高（P<0.01）;与正常NHP细胞比较,miR-135a 在Hep-2 细胞中表达水平明显上调（P<0.01）;转染miR-135a inhibitor导致Hep-2 细胞中miR-135a 表达水平明显降低（P<0.01）。敲降miR-135a 明显降低Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移、侵袭和SOX2 表达（均P<0.01）;明显增强细胞对奥沙利铂敏感性（P<0.01）;与miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组比较,miR-135a inhibitor+SOX2-OE 组的Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移与侵袭能力均明显增加（均P<0.01）;同时,用不同浓度的奥沙利铂处理此2 组细胞,相对于miR-135a inhibitor+SOX2-Con组,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2 细胞存活率显著升高（P<0.01）。结论：敲降miR-135a 可能通过下调转录因子SOX2 的表达抑制Hep-2 细胞的恶性生物学行为,并增强其对奥沙利铂的敏感性。     

miR-150-5p在甲状腺癌中的表达及其生物学功能研究

摘 要：［目的］ 探讨微小RNA-150-5p（miR-150-5p）在甲状腺癌组织中的表达水平及其通过PI3K/Akt信号通路对甲状腺癌细胞增殖和凋亡能力的影响。［方法］ qRT-PCR检测68例甲状腺癌患者病变组织及其相应癌旁组织中miR-150-5p的表达水平。将miR-150-5p抑制剂和阴性对照转染至人甲状腺癌TPC-1细胞株,以空脂质体作为对照,qRT-PCR检测转染结果,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,生物信息学网站Targetscan 预测miRNA-150-5p与PI3K的靶向结合情况,荧光素酶试验验证miR-150-5p与PI3K的靶向关系,Western blotting检测Cleaved caspase-3、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达。［结果］ 68例甲状腺癌患者病变组织及相应癌旁组织中miR-150-5p的相对表达水平分别为0.96±0.06和1.66±0.11,差异有统计学意义（P＜0.05）;空白对照组和阴性对照组中miR-150-5p的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,miR-150-5p抑制剂组中miR-150-5p的相对表达量为0.12±0.02,明显低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。空白对照组和阴性对照组24、48和72h细胞增殖率的差异无统计学意义（P＞0.05）,而miR-150-5p抑制剂组24、48和72h细胞增殖率分别为9.56%±1.38%、24.36%±4.66%和33.63%±5.32%,同一时间点均明显低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。空白对照组和阴性对照组48h细胞凋亡率的差异无统计学意义（P＞0.05）,而miR-150-5p 抑制剂组的细胞凋亡率为16.25%±2.98%,明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）。TargerScan网站预测结果显示,miR-150-5p可与PI3K互补结合,荧光素酶报告基因分析证实miR-150-5p与PI3K存在靶向结合位点。空白对照组和阴性对照组间PI3K、p-Akt和Cleaved caspase3蛋白表达的差异无统计学意义（P＞0.05）,miR-150-5p抑制剂组PI3K、p-Akt蛋白表达低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）,Cleaved caspase3蛋白表达高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）,3组间Akt蛋白表达的差异无统计学意义（P＞0.05）。［结论］ miR-150-5p在甲状腺癌组织中表达异常升高,干扰miR-150-5p表达能够抑制甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖,并通过上调Cleaved caspase-3促进细胞凋亡,其调控作用可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

白细胞介素-17对人喉癌细胞Hep-2的作用

目的 探讨白细胞介素-17(IL-17)对人喉癌细胞Hep-2增殖、凋亡和迁移的作用.方法将IL-17瞬时转染Hep-2细胞,即转染IL-17组,同时设置空载体组(pEGFP-N1)和正常对照组.荧光显微镜观察转染情况,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting分别检测转染前后IL-17 mRNA和蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力变化,流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化,细胞划痕修复实验和Transwell小室检测转染前后细胞迁移能力变化.结果 荧光显微镜下可以看到转染空载体pEGFP-N1和转染目的基因IL-17的Hep-2细胞出现绿色荧光.成功转染IL-17后Hep-2细胞在mRNA和蛋白水平均有IL-17的表达.与正常对照组相比,转染48 h后,转染IL-17组细胞的增殖能力明显减弱(0.34±0.03∶0.46±0.04,P=0.006).转染IL-17组细胞凋亡率明显高于正常对照组(26.80%±0.80%∶2.90%±0.31%,P=0.000).细胞划痕修复实验结果显示,转染IL-17组细胞相对划痕宽度明显大于正常对照组(1.59±0.01∶1.36±0.01,P=0.000).Transwell小室迁移实验结果显示,转染IL-17组细胞明显低于正常对照组细胞的迁移数量(26.33±2.08∶49.33±1.53,P=0.000).结论 IL-17能够抑制人喉癌细胞Hep-2的增殖能力,降低其迁移能力,增强其凋亡.因此,IL-17可通过多种途径抑制喉癌的发生发展.     

lncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-124-3p调控肝癌细胞凋亡和放射敏感性的研究机制

目的:探讨lncRNA PTPRG-AS1对肝癌细胞凋亡和放射敏感性的影响及作用机制。方法:培养正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和BEL-7402,qRT-PCR检测细胞中PTPRG-AS1和miR-124-3p表达水平。转染si-PTPRG-AS1、miR-124-3p mimics至HepG2细胞,抑制HepG2细胞中PTPRG-AS1表达或过表达miR-124-3p,流式细胞术检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放射敏感性,Western Blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。生物信息学软件预测PTPRG-AS1与miR-124-3p存在互补的核苷酸序列,双荧光素酶报告基因实验验证PTPRG-AS1与miR-124-3p之间的调控关系。结果:与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和BEL-7402中PTPRG-AS1表达显著升高（P＜0.05）,miR-124-3p表达显著降低（P＜0.05）。抑制PTPRG-AS1或过表达miR-124-3p均可促进肝癌HepG2细胞的凋亡,增强肝癌HepG2细胞的放射敏感性,抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达。PTPRG-AS1负调控miR-124-3p表达。抑制miR-124-3p表达可部分逆转抑制PTPRG-AS1表达对肝癌HepG2细胞凋亡的促进作用以及放射敏感性的增强作用。结论:抑制PTPRG-AS1表达可能通过上调miR-124-3p表达促进肝癌细胞的凋亡并提高其放射敏感性,是肝癌治疗的潜在作用靶点。     

新型硫色满酮衍生物抑制胃癌细胞生长与诱导胃癌细胞凋亡机制研究

摘 要：［目的］ 研究(顺)-3(氯代亚甲基)-5,7-二氯-硫色满-4-酮［(Z)-3( chloromethyl- ene)-5,7(dichloro)- thiochroman-4- ketone,CMDCT］对体外低、中、高分化的人胃癌细胞株生长抑制作用与诱导胃癌细胞凋亡机制研究。［方法］ MTT法测试CMDCT对3种胃癌细胞株的生长抑制;以中分化胃癌细胞(SGC-7901)为例,流式细胞术(FCM)和缺口末端核苷酸标记法(TUNEL)检测胃癌SGC-7901细胞的凋亡;ELISA法测定胃癌SGC-7901细胞内被激活的人半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的量;PCR检测Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3基因表达;Western blot检测胃癌SGC-7901细胞中Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3蛋白表达情况。［结果］CMDCT对3种胃癌细胞的生长具有显著抑制作用,随CMDCT浓度升高细胞生长的抑制率越高,当药物浓度为40μmol/L时,抑制率在(66．53%±2．47%)～(76．12%±1．35%)之间,和同浓度顺铂（DDP）组相比有较大差异;TUNEL检测胃癌SGC-7901细胞的凋亡指数：对照组为1．61%±0．23%;低浓度组为12．55%±1．44%;高浓度组61.15%±1．77%,加药组细胞凋亡指数明显高于对照组;流式细胞术结果显示,对照组凋亡率为4．78%±0．41%;加药组加入浓度10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L 药物后,凋亡率分别为(9．42%±1．27%),(21.07%±1．35%),(55．8%±10．03%),明显高于对照组细胞凋亡率;PCR和Western blot检测,与对照组对比,加药组的Bax、p53和Caspase-3基因和蛋白表达量均增高,均具有上调作用,Bcl-2基因和蛋白表达降低,呈下调趋势。 ［结论］ CMDCT对体外人低、中、高分化的3种胃癌细胞株均具有生长抑制作用,且可以诱导细胞凋亡,通过使具有促凋亡作用的p53、Bax、Caspase-3高表达,及抗细胞凋亡作用的Bcl-2的低表达,有效地诱导了胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

lncRNA MEG3通过调控miR-21表达增加肺癌细胞放射敏感性

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) MEG3对肺癌细胞H1299的放射敏感性调控机制。方法 运用qRT-PCR法检测具有放射抗性的H1299细胞中MEG3、miR-21-5p的表达。将过表达对照组(转染pcDNA3.1)、过表达MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-21-5p组(转染anti-miR-21-5p)、过表达MEG3+过表达miR-NC组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-NC)、过表达MEG3+过表达miR-21-5p组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-21-5p mimics)均用脂质体法转染。克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MEG3与miR-21-5p的结合力。结果 与正常肺上皮细胞相比,H1299细胞中MEG3表达明显降低,miR-21-5p表达明显升高;过表达MEG3或抑制miR-21-5p均可促进H1299细胞凋亡,增强放射敏感性;MEG3可靶向调控miR-21-5p的表达。过表达miR-21-5p可逆转MEG3对H1299细胞放射增强作用。结论 lncRNA MEG3可增强H1299细胞放射敏感性,其机制也许可能与靶向miR-21-5p有关。     

miR-26a/b调控p53/MDM2通路对胃癌细胞凋亡的影响

目的 探讨miR-26a/b调控p53/MDM2通路对胃癌细胞凋亡的影响。方法 实时荧光定量PCR检测胃癌细胞系MGC803、MKN-45和MKN-28中miR-26a/b的表达水平,荧光素酶报告系统分析miR-26a/b与MDM2 3’非翻译区（3’UTR）的结合情况;将化学合成miR-26a/b前体分子mimics和无关序列转染胃癌细胞MKN-45,化学合成miR-26a/b inhibitor转染胃上皮细胞GES-1后,Western blotting检测MDM2、p53及其下游分子p21和Bcl-2的表达,MTT法检测转染24、48、72 和96 h的细胞增殖情况;通过Annexin Ⅴ/PI双染检测miR-26a/b对MKN-45细胞凋亡情况。结果 与永生化胃上皮细胞GES-1相比,miR-26a/b在肿瘤细胞系MGC803、MKN-45和MKN-28中的表达均下调,在MKN-45中表达水平最低;荧光素酶活性检测显示,miR-26a/b过表达抑制MDM2 3’UTR报告载体（Wild）的荧光素酶活性,而对3’UTR突变型报告载体（Mutation）荧光素酶活性无明显影响。miR-26a/b抑制MKN-45细胞中MDM2表达并增强p53及下游分子表达,而在GES-1细胞中抑制miR-26a/b可以增强MDM2表达,降低p53及下游分子表达。MTT结果显示,miR-26a/b抑制MKN-45细胞的增殖,miR-26a/b inhibitor则明显促进GES-1细胞的增殖。通过AnnexinⅤ/PI检测细胞凋亡发现,miR-26a/b过表达的MKN-45细胞的凋亡率高于对照细胞（P＜0.01）。结论 miR-26a/b 能与MDM2 3’UTR 特异结合,调控p53/MDM2通路影响胃癌细胞的增殖及凋亡。     

BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p影响NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡

目的:探讨BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p调控非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:qRT-PCR检测BSN-AS2和miR-219a-5p在NSCLC组织和细胞系中的表达;原位杂交FISH检测BSN-AS2和miR-219a-5p的信号强度;双荧光素酶报告基因检验miR-219a-5p 靶向调控BSN-AS2;Transwell、CCK8和Tunel细胞凋亡分别检测BSN-AS2-miR-219a-5p轴对侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响;构建NSCLC裸鼠皮下移植瘤模型进行验证BSN-AS2-miR-219a-5p轴的调控作用。结果:BSN-AS2在NSCLC组织和细胞系中高表达,miR-219a-5p为低表达,BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p;siBSN-AS2组抑制NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,且促进细胞凋亡,而In-miR-219a-5p组促进NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,抑制细胞凋亡,siBSN-AS2+In-miR-219a-5p组相比siBSN-AS2组促进了NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,抑制细胞凋亡;BSN-AS2增加体内肿瘤细胞增殖和肿瘤生长,miR-219a-5p则能抑制。结论:BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p促进NSCLC细胞侵袭、迁移和增殖,且抑制凋亡,而干扰BSN-AS2-miR-219a-5p轴可能作为抗NSCLC的新靶点。     

miR-124-3p.1靶向PRDM2调节JAK/STAT通路对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 研究miR-124-3p.1对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。［方法］ 运用qRT-PCR法检测组织和细胞中miR-124-3p.1、PR结构域蛋白2(PRDM2)的表达;将miR-124-3p.1 mimics、miR-NC、anti-miR-124-3p.1 mimics、anti-miR-NC用脂质体法转染PANC-1细胞;Western blot检测细胞中PRDM2、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达;MTT法检测细胞增殖。［结果］ 与人正常胰腺组织细胞相比,胰腺癌组织细胞中PRDM2表达显著性升高,miR-124-3p.1表达显著性降低（P<0.05）;PRDM2为miR-124-3p.1的靶标。过表达miR-124-3p.1可抑制胰腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制JAK/STAT通路。［结论］ miR-124-3p.1可抑制胰腺癌细胞增殖和促进凋亡,可能与靶向PRDM2和抑制JAK/STAT通路有关。     

沉默LncRNA HOXD-AS1调控miR-454-3p表达增加H460细胞放射敏感性

目的 探究LncRNA HOXD-AS1靶向调控miR-454-3p表达对肺癌H460细胞放射敏感性影响。方法 qRT-PCR检测HOXD-AS1、miR-454-3p表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率,克隆实验检测细胞放射敏感性。蛋白印迹法检测细胞中Caspase-3、Cyclin D1、γ-H2AX的蛋白表达量。结果 照后细胞中HOXD-AS1表达升高(P<0.05),miR-454-3p表达降低(P<0.05)。沉默HOXD-AS1促进细胞凋亡、增加放射敏感性,促进Caspase-3、γ-H2AX蛋白表达,抑制Cyclin D1表达;HOXD-AS1可靶向结合miR-454-3p并可负向调控其表达。结论 沉默HOXD-AS1可靶向调控miR-454-3p促进肺癌细胞凋亡及抑制细胞存活进而提高放射敏感性。     

RNA干扰抑制Skp2表达对人喉癌细胞系Hep-2的影响

[目的]研究RNA干扰抑制Skp2表达对喉癌鳞状细胞p27表达、细胞增殖和凋亡的作用.[方法]利用脂质体将重组质粒转染Hep-2细胞,用慢病毒系统建立干扰Skp2基团的稳定细胞株;荧光实时定量PCR和Western blot法检测转染细胞株中Skp2和p27mRNA及其蛋白表达;采用MTr法和流式细胞仪检测转染细胞的增殖和凋亡情况.[结果]通过慢病毒siRNA技术,Skp2可持续稳定抑制Hep2喉癌细胞,siRNA可诱导抑制Skp2,增加p27表达,降低细胞增殖,增加喉癌细胞的凋亡.[结论]靶向Skp2基因的siRNA对Hep-2细胞的抑制作用可能是通过上调p27基因水平来实现的,Skp2是基因疗法治疗喉癌的有利靶点.     

miR-203抑制bcl-w表达促进膀胱癌细胞凋亡

摘 要：［目的］ 研究miR-203在膀胱癌组织中的表达,探讨其表达对膀胱癌细胞T24凋亡的影响。［方法］ 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测23例膀胱癌组织和癌旁正常组织中miR-203表达情况,免疫印迹法检测bcl-w蛋白的表达情况,Pearson法分析miR-203表达与bcl-w蛋白表达相关性;转入miR-203-mimic建立高表达miR-203的T24细胞,流式细胞仪检测miR-203表达对T24细胞凋亡的影响。［结果］ miR-203在膀胱癌组织中的相对表达量为1.40±0.47,显著低于其在癌旁正常组织中的表达量（2.99±0.59）（P=0.0001）;miR-203在膀胱癌组织中的表达与bcl-w蛋白表达呈负相关（r=-0.952,P<0.001）;miR-203靶向抑制T24细胞中bcl-w蛋白的表达,转入miR-203-mimic 24h和72h后,T24细胞凋亡率分别为8.33%±0.58%和17.07%±0.76%,均显著高于对照组T24细胞的3.63%±0.32%和4.16%±0.28%（P=0.012,P<0.001）。［结论］ miR-203在膀胱癌组织中低表达,其可以通过靶向抑制bcl-w的表达促进膀胱癌细胞T24的凋亡。     

lncRNA H19靶向miR-106a-5p调控乳腺癌细胞放射敏感性的分子机制

目的:研究lncRNA H19对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡及放射敏感性的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测MCF-7细胞中H19、miR-106a-5p的表达;将si-NC组（转染si-con）、si-H19组（转染si-H19）、si-H19+anti-miR-NC组（si-H19和anti-miR-NC共转染）、si-H19+anti-miR-106a-5p组（si-H19和anti-miR-106a-5p共转染）,均用脂质体转染至MCF-7细胞,再用4 Gy放射照射;MTT法检测各组细胞的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与对照组相比,放射照射组（IR）MCF-7细胞中H19显著降低,miR-106a-5p显著升高（P＜0.05）;敲减H19、过表达miR-106a-5p均可抑制MCF-7细胞增殖并促进凋亡,增强细胞的放射敏感性;H19靶向miR-106a-5p。抑制miR-106a-5p可逆转敲减H19对MCF-7细胞放射敏感性的增强作用。结论:敲减H19可抑制乳腺癌细胞增殖,促进凋亡,增强放射治疗的敏感性,其机制可能与靶向miR-106a-5p有关,可为提高乳腺癌的放射敏感性提供新靶点。     

miR-324-5p通过靶向调控DAPK1降低胰腺癌细胞的放射敏感性

目的:探讨死亡相关蛋白激酶1（death-associated protein kinase 1,DAPK1）在胰腺癌（pancreatic cancer,PaC）细胞放射敏感性中的作用,验证miR-324-5p通过靶向调控DAPK1影响胰腺癌细胞放射敏感性的机制。方法:通过生物信息学预测靶向DAPK1的miRNAs,并利用双荧光素酶报告基因检测miR-324-5p对DAPK1的调控作用。在PANC-1和MIA PaCa-2细胞中过表达miR-324-5p和DAPK1或抑制miR-324-5p后,对各细胞株进行放射诱导,检测细胞增殖和凋亡情况,以及凋亡相关分子的表达情况。结果:GEO数据集结果显示,胰腺癌组织中miR-324-5p的表达水平高于正常组织。与正常胰腺导管上皮细胞系（HPDE6-C7）相比,胰腺癌细胞系(Capan-1、Bxpc-3、PANC-1和MIA PaCa-2)中miR-324-5p表达水平更高（P均<0.001）。双荧光素报告基因检测结果表明,miR-324-5p靶向DAPK1的3' UTR,并且可下调DAPK1的表达。细胞实验结果证实,过表达miR-324-5p通过靶向调控DAPK1降低放射诱导的细胞凋亡和DNA的损伤,进而降低了胰腺癌细胞的放射敏感性。结论:miR-324-5p通过负调控DAPK1降低胰腺癌细胞对放射的敏感性,从而影响DNA修复和细胞凋亡。miR-324-5p/DAPK1途径可能为胰腺癌的靶向治疗提供了潜在的治疗靶点。     

CircCSNK1G1调节miR-381-3p/BRD4轴对喉癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircCSNK1G1调节miR-381-3p/溴结构域蛋白4(BRD4)轴对喉癌(laryngeal cancer, LC)细胞恶性生物学行为的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、western blot分别检测60例LC患者癌组织、癌旁组织及喉上皮细胞NP69及人LC细胞Hep-2、Tu212、M4E中CircCSNK1G1、miR-381-3p、BRD4蛋白表达;将人喉癌Hep-2细胞分为：control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-CircCSNK1G1组(转染si-CircCSNK1G1)、si-CircCSNK1G1+inhibitor-NC组(si-CircCSNK1G1和inhibitor-NC共转染)、si-CircCSNK1G1+miR-381-3p inhibitor组(si-CircCSNK1G1和miR-381-3p inhibitor共转染);RT-qPCR检测Hep-2细胞中CircCSNK1G1、miR-381-3p的表达水平;MTT法检测Hep-2细胞增殖;划痕实验检测Hep-2细胞迁移;Transwel...     

miR-193a-3p在食管癌细胞放射抵抗作用的初步研究

目的 探讨miR-193a-3p在食管鳞癌放射耐受性机制中的作用。方法 通过6 MV X射线对4个食管癌细胞系进行照射,采用MTT法检测出相对敏感系及耐受系细胞;茎环引物实时定量PCR法检测miR-193a-3p、miR-155、miR-22-3p在2个细胞中的表达,miR-193a-3p作为表达差异较为明显的microRNA被挑选进行下一步研究。分别合成并转染miR-193a-3p的mimic (3PM)或 antagomiR (3PA)序列及小干扰RNA (si-LOXL4)以提高或抑制其在细胞中的表达水平,MTT法和流式细胞分析术检测miR-193a-3p及其下游基因LOXL4对于放射敏感性的影响。结果 筛选出相对放射敏感细胞系(KYSE510)及耐受细胞系(KYSE410);miR-193a-3p在两系细胞中的表达水平差异显著高于miR-155、miR-22-3p (1.00:21.13);KYSE510细胞中转染mimic提高其表达后,与对照组相比,其放射敏感性降低,细胞凋亡比例显著下降11.10%(P<0.05),而KYSE410细胞中转染antagomiR后,其敏感性增加(P<0.05)。作为miR-193a-3p的下游基因,LOXL4的表达抑制也受到miR-193a-3p的调控,转染si-LOXL4降低其表达,与对照组相比放射敏感性也降低,细胞凋亡比例下降7.07%(P<0.05)。结论 miR-193a-3p可能通过调控基因LOXL4促进食管癌细胞放射耐受性。     

LncRNA UCA1对肺癌细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 研究长链非编码RNA (LncRNA) UCA1对肺癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响及其机制。方法 运用qRT-PCR法检测肺癌细胞A549、H1299和人正常肺细胞HBE中UCA1、miR-513a-5p表达。将si-con组(转染si-con)、si-UCA1组(转染si-UCA1)、miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、IR+si-con组(转染si-con+照射)、IR+si-UCA1组(转染miR-NC+照射)、IR+miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics+照射)、IR+miR-NC组(转染miR-NC+照射)、IR+si-UCA1+anti-miR-513a-5p组(共转染si-UCA1和anti-miR-513a-5p+照射)均用脂质体法转染至A549、H1299细胞,然后部分组进行4Gy照射。MTT法检测各组细胞增殖,克隆形成实验检测细胞增敏比,流式细胞术检测各组细胞凋亡,双荧光素没报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果 与HBE细胞相比,A549、H1299细胞中UCA1表达显著升高(P<0.05),miR-513a-5p表达显著降低(P<0.05)。抑制UCA1、过表达miR-513a-5p均可明显抑制A549、H1299细胞增殖、促进凋亡、提高放射敏感性(放射增敏比为1.897、2.146和1.615、1.872)。miR-513a-5p可抑制野生型UCA1细胞的荧光活性,且UCA1可负向调控miR-513a-5p的表达。抑制miR-513a-5p可逆转抑制UCA1对细胞的放射敏感性的增强作用。结论 抑制LncRNA UCA1可增强放射对肺癌细胞敏感性,其机制可能与靶向抑制miR-513a-5p有关。     

miR-485-3p通过调控ATR信号通路增强MGC803细胞放射敏感性研究

目的 研究miR-485-3p对胃癌细胞MGC803放射敏感性影响及其可能作用机制。方法 将miR-485-3p mimic或ATR siRNA转染MGC803细胞后X线照射,MTT、克隆形成实验和凋亡实验观察细胞生物效应(表达检测照射6 Gy,克隆形成实验0、2、4、6、8、10 Gy)。分别用RT-PCR和蛋白印迹法检测miR-485-3p和ATR表达水平,DIANA、TargetScan和miRanda软件预测和双荧光素酶实验验证miR-485-3p对ATR靶向作用。结果 MGC803细胞放射后miR-485-3p表达下调。miR-485-3p过表达降低了细胞增殖和存活分数,增加了细胞凋亡率。经靶基因预测软件发现ATR可能是miR-485-3p靶基因,双荧光素酶实验进一步验证了ATR是miR-485-3p直接靶点。miR-485-3p负调控ATR表达,转染ATR siRNA抑制ATR信号通路后放射敏感性升高。结论 miR-485-3p可能靶向ATR,通过抑制ATR信号通路活性调节MGC803细胞放射敏感性。