紫草素对宫颈癌细胞株Caski侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨紫草素对宫颈癌细胞株Caski细胞侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制情况;采用Transwell小室侵袭迁移实验检测Caski细胞侵袭迁移情况;采用qPCR方法检测Caski细胞GSK-3β、Wnt2B表达情况;采用Western bloting方法检测Caski细胞β-Catenin、p-β-Catenin蛋白含量。结果:紫草素可抑制Caski细胞的增殖,具有时间-浓度依赖性,并可抑制细胞的侵袭迁移,增加Caski细胞GSK-3β mRNA和p-β-Catenin蛋白的表达量,减少Caski细胞Wnt mRNA和β-Catenin蛋白的表达量。结论:紫草素可能通过抑制Caski细胞Wnt/β-Catenin信号通路抑制Caski细胞的侵袭迁移。     

石见穿多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨石见穿多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。方法不同浓度石见穿多糖(0、0.25、0.5、1 mg/mL)处理人OS MG63细胞24 h,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,RT-PCR检测人OS细胞β-catenin mRNA表达,Western blot检测人OS MG63细胞Vimentin、E-cadherin蛋白表达。结果石见穿多糖抑制细胞迁移、侵袭(P<0.01),降低β-catenin mRNA及Vimentin蛋白表达(P<0.05,P<0.01),促进E-cadherin蛋白表达(P<0.01),且上述作用呈现剂量依赖性。结论石见穿多糖能抑制人OS MG63细胞的迁移和侵袭能力,这种作用可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而阻断EMT过程而引起的。     

orchinol对胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移和Wnt3a/β-catenin信号通路的影响

研究中药绶草中分离得到的主要的9,10-二氢菲类单体化合物orchinol对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的抑制作用及初步的分子机制。体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别加入终浓度为5,10,20,40,80μmol·L-1的orchinol处理细胞24,48,72 h,采用MTT法检测orchinol对SGC-7901细胞活力的影响;利用伤口愈合实验、Transwell实验分别分析5,10,20μmol·L^-1orchinol作用48 h后对SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测orchinol对SGC-7901细胞β-catenin,Wnt-3a,DvL2,cyclinD1,GSK-3β蛋白表达水平的影响。结果显示,orchinol在5~80μmol·L^-1能以剂量和时间依赖性的方式抑制SGC-7901细胞的活力,orchinol分别处理细胞24,48,72 h后,其对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为77.79,42.96,7.85μmol·L^-1;与对照组相比,5,10,20μmol·L^-1orchinol作用48 h,可明显抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移的能力(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖关系;Western blot结果显示,orchinol可显著下调β-catenin,Wnt3a,DvL2,cyclinD1蛋白、显著上调GSK-3β蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。以上结果提示orchinol能显著抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,其机制可能是与orchinol抑制Wnt3a/β-catenin信号通路及下游基因蛋白的表达有关。     

左旋紫草素靶向Wnt/β-catenin通路抑制宫颈癌HeLa细胞增殖侵袭迁移的机制研究

目的?观察左旋紫草素对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移及Wnt/β-catenin通路蛋白的影响。方法?设置左旋紫草素浓度梯度为0、0.5、1、2、4、8 μmol/L，干预HeLa细胞，MTS法检测细胞增殖活力，并筛选最佳干预浓度进行后续实验。后续实验中分为对照组、左旋紫草素 0.5、1、2 μmol/L组。划痕实验检测HeLa细胞24、48 h后细胞的迁移能力；Transwell实验检测左旋紫草素作用HeLa细胞24 h后细胞侵袭能力；Western Blot检测左旋紫草素作用HeLa细胞24 h后Wnt/β-catenin通路相关蛋白Wnt5a、β-catenin、p-LRP、LRP的表达。结果?左旋紫草素1、2、4、8 μmol/L在24 h可明显抑制HeLa细胞增殖（P<0.05，P<0.01），其抑制作用呈现浓度依赖性；与对照组比较，左旋紫草素0.5、1、2 μmol/L组细胞穿过率明显降低，细胞穿过基质胶的能力随着药物浓度的加大而降低（P<0.01），同时Wnt5a、β-catenin、p-LRP蛋白表达下降（P<0.05，P<0.01）。结论?左旋紫草素可通过下调Wnt/β-catenin信号通路，抑制HeLa细胞增殖、侵袭、迁移功能。     

中医药调控Wnt/β-catenin通路治疗肝细胞癌的研究进展

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是一种发病率高、早期发病不易察觉、预后较差的恶性肿瘤,严重威胁人们的健康。现代精准医学给HCC患者带来了生存的希望,但由于副作用大、成本高等原因导致患者接受度低。借助分子生物学、网络药理学等技术,中医药治疗HCC多靶点、多成分、高疗效及副作用小等优势逐渐凸显。本研究通过收集整理中医药调控Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)通路防治HCC具体机制相关研究,归纳总结了单味中药或有效成分、中药复方通过干扰细胞内β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase 3,GSK-3)β、Wnt等相关因子,逆转上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),干预上游非编码RNA表达等方面调控Wnt/β-catenin通路,进而发挥阻滞细胞周期进展、抑制生长、促凋亡,抑制侵袭转移,降低耐药等作用。可为HCC靶向药物的开发和治疗方案的选择提供参考。     

Wnt/β-catenin信号通路在肝癌转移侵袭中的调控机制

Wnt信号传导途径与肿瘤有着密切的关系,其通路的异常活化参与人类多种癌症的发病过程。转移和侵袭是肝癌的基本特征,也是影响肝癌治疗效果的重要因素。肝细胞癌的转移侵袭与Wnt/β-catenin信号通路密切相关。β-catenin是Wnt/β-catenin信号传导途径中的关键调控因子,其表达程度与患者淋巴结转移及肝内转移呈正相关。此外,Wnt/β-catenin信号通路下游转录因子T细胞因子4(Tcf-4)基因表达与肝癌的转移密切相关。因此,Wnt/β-catenin信号通路成员基因突变和(或)异常表达奠定了肝癌细胞转移和侵袭的分子学基础。以Wnt/β-catenin信号通路为切入点,深入探讨肝细胞癌转移的作用机理和分子机制,对筛选肝细胞癌的预后指标和寻找新的治疗靶点、深化和完善肝细胞癌转移侵袭的基础理论研究具有十分重要的意义。     

褐藻糖胶对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226中Wnt/β-catenin通路的影响研究

目的探讨褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡过程中Wnt/β-catenin通路的变化。方法应用褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPM18226的凋亡,观察多发性骨髓瘤细胞株经10,25,50,100μg/m L浓度褐藻糖胶分别作用24,48,72 h后细胞增殖抑制率。将细胞分为3组:空白组不予药物干预,褐藻糖胶组给予25μg/m L褐藻糖胶培养,Wnt通道抑制剂(DKK-1)组给予DKK-1培养。用Annexin V-FITC/PI双染法检测3组RPMI822细胞凋亡率,通过Western blot方法检测3组β-catenin与c-myc蛋白表达情况。结果随褐藻糖胶浓度的增高和作用时间的延长,细胞增殖抑制率明显增高(P均<0.05)。褐藻糖胶组细胞凋亡率明显高于空白组;褐藻糖胶组和DKK-1组β-catenin和c-myc蛋白表达水平均明显低于空白组(P均<0.05),褐藻糖胶组与DKK-1组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论褐藻糖胶能够诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226发生凋亡,与DKK-1作用相当,并且褐藻糖胶能够有效抑制多发性骨髓瘤细胞株中Wnt/β-catenin通路的活化状态,为有效治疗多发性骨髓瘤患者提供了理论依据。     

中药复方调控Wnt/β-catenin信号通路防治骨质疏松症研究进展

骨质疏松症,是一种骨强度与骨密度降低以及骨脆性增加的全身代谢性骨病。成人的骨质由成骨细胞的骨形成和破骨细胞的骨吸收共同维持,当骨吸收超过骨形成时,则易形成骨质疏松症。Wnt/β-catenin信号通路与成骨细胞增殖、分化和骨形成有关,在调节骨质方面至关重要。近年来,Wnt/β-catenin信号通路调节骨质疏松症的作用机理逐步明确,基于Wnt/β-catenin信号通路的中药复方也取得较好疗效。研究发现,中药复方通过调控Wnt/β-catenin信号通路发挥防治骨质疏松症的作用。因此,从Wnt/β-catenin信号通路入手,探讨中药复方防治骨质疏松症的作用机制,为临床防治骨质疏松提供新思路。     

中医药调控Wnt/β-catenin信号通路防治肝纤维化的研究进展

肝纤维化是多种肝脏慢性疾病的共同病理过程,且被认为是肝硬化、肝癌的必经阶段,因此,抗肝纤维化治疗对患者的预后具有重要的现实意义。Wnt/β-catenin信号通路是调控许多肝脏疾病的关键信号通路之一,可通过调控炎症反应、细胞凋亡、氧化应激干预肝纤维化的进程,而靶向干预该通路,如DDK1、Niclosamide、ICG-001、PRI-724、PSH等拮抗剂的长期有效性和负面作用尚未证实。大量研究表明中医药在抗肝纤维化的地位日益受到关注。基于肝纤维化虚实夹杂的中医病因病机,中药以补虚、解毒、化瘀和标本兼治等治法多靶点、多层次调节Wnt/β-catenin信号通路发挥肝保护作用。本文就Wnt/β-catenin通路与肝纤维化的关系阐述中医药延缓肝纤维化的潜在作用,以期为防治肝纤维化提供策略。     

隐丹参酮调控Wnt/β-catenin 信号通路对胃癌细胞抑制作用的研究

目的：探究隐丹参酮调控Wnt/β-连环蛋白（β-catenin） 信号通路对胃癌细胞的抑制作用。方法：将人胃癌BGC-823 细胞株分为对照组,隐丹参酮低、中、高剂量组（以下简称低、中、高剂量组）,高剂量+SKL2001 组,高剂量+XAV939 组。低、中、高剂量组在培养过程中加入20、40、80 μmol/L 的隐丹参酮;高剂量+SKL2001 组中加入80 μmol/L 隐丹参酮与20 μmol/L SKL2001;高剂量+XAV939 组中加入80 μmol/L 的隐丹参酮与1 μmol/L 的XAV939。采用MTT 法、Transwell 小室法、细胞划痕实验分别检测细胞的增殖能力及迁移侵袭能力。采用RT-PCR 与蛋白免疫印迹法检测细胞中蓬乱蛋白DSH 同源物2（Dvl2）、糖原合成酶激酶-3（GSK-3β）、β-catenin 和G1/S-特异性周期蛋白-D1（Cyclin D1） 表达水平。结果：与对照组比较,低、中、高剂量组处理24 h、48 h、72 h 后细胞增殖抑制率、GSK-3β 蛋白及mRNA 表达上升（P＜0.05）,Dvl2、β-catenin、Cyclin D1 蛋白及mRNA 表达降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性（P＜0.05）。细胞划痕48 h 后,低、中、高剂量组细胞迁移能力、过膜细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）,且随着剂量增加而降低（P＜0.05）;与高剂量组比较,高剂量+SKL2001 组迁移能力、过膜细胞数及划痕愈合率均增高（P＜0.05）;与高剂量+SKL2001 组比较,高剂量+XAV939 组迁移能力、过膜细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）。结论：隐丹参酮能通过抑制Wnt/β-catenin 信号通路的活性对胃癌细胞起抑制作用。     

健脾复方通过Exo-Wnt3a/5a调控Wnt/β-catenin信号通路抑制大肠癌侵袭转移机制研究

目的:探究大肠癌侵袭转移中健脾复方对Wnt3a/5a调控Wnt/β-catenin信号通路的作用机制.方法:建立裸鼠人肠癌转移瘤模型,使用低、中、高剂量的健脾复方进行治疗干预,同时设阳性对照组及空白对照组,收集裸鼠血清,并保留瘤体,使用WB检测Exo-Wnt3a/5a、β-catenin、MMP-7、C-MYC、Cyc...     

臭牡丹总黄酮通过调控Wnt/β-catenin通路影响A549细胞上皮间质转化研究

目的探讨臭牡丹总黄酮对人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制。方法将pcDNA3.1+空载体与S45位点突变的β-链蛋白(S45A-β-catenin)真核过表达载体转染A549细胞,给予臭牡丹总黄酮干预。MTT法检测细胞的相对存活率,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞β-catenin、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转录因子Snail 2(Slug)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β的表达水平。结果转染S45A-β-catenin质粒后,A549细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显增强,β-catenin、vimentin蛋白表达水平显著上调,E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β蛋白的表达水平显著下调。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭能力,对转染S45A-β-catenin质粒组的细胞作用尤为明显。对转染空载质粒的A549细胞,可上调E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β表达,下调β-catenin、vimentin表达;对转染S45A-β-catenin质粒的A549细胞,可下调β-catenin、vimentin表达。结论抑制细胞中β-catenin的高表达并调控下游的一系列因子,从而影响Wnt/β-catenin通路诱导的上皮间质转化(EMT)现象可能是臭牡丹总黄酮抑制肺癌侵袭、转移的重要作用机制之一。     

桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠Wnt4/β-catenin信号通路中p-GSK-3β的影响

目的 探讨慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾纤维化(RIF)过程中,桃核承气汤对Wnt4/β-catenin信号通路p-GSK-3β的影响。方法 100只清洁级Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、治疗组,各25只,模型组和治疗组行5/6肾切除术,假手术组仅做双肾被膜剥离术,正常组不做处理。造模成功后,治疗组予桃核承气汤灌胃,其余3组予等量生理盐水灌胃,给药时间共为8周。Western Blot法检测肾组织中Wnt4/β-catenin信号通路的相关蛋白含量,光镜观察肾组织。结果 Wnt4、p-GSK-3β、β-catenin蛋白含量,治疗组比模型组显著降低(P<0.05);光镜观察,模型组的肾小球结构固缩,肾间质纤维增生严重,治疗组明显减轻。结论 桃核承气汤对CRF的作用机制,可能与降低Wnt4、p-GSK-3β、β-catenin蛋白含量从而调节Wnt4/β-catenin信号通路有关。     

Klf4抑制Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞增殖的研究

目的探讨Klf4基因对大鼠软骨细胞增殖影响及相关机制。方法从出生24 h SD幼鼠的股骨头提取软骨细胞,细胞免疫荧光鉴定Col2a1和Sox9基因的表达。转染慢病毒载体PCDH-GFP-Klf4和辅助质粒PSPAX2及PMD2.0G至293ft细胞中产生慢病毒,48 h后收集病毒上清,用其感染大鼠软骨细胞作为Klf4组,用PCDH-GFP慢病毒感染细胞作为对照组。采用CCK8法检测2组细胞生长增殖变化;采用Western blot方法,分别检测2组细胞中Klf4基因表达、增殖相关基因PCNA和CyclinD1蛋白表达、Wnt/β-catenin信号通路上下游基因表达情况。结果原代培养软骨细胞均强表达Col2a1和Sox9基因。慢病毒PCDH-GFP-Klf4和PCDH-GFP成功感染软骨细胞,Klf4基因在软骨细胞过表达。Klf4组软骨细胞生长明显受到抑制,PCNA和CyclinD1蛋白表达和Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达均明显下调。结论过表达Klf4基因可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路相关分子的表达而抑制软骨细胞增殖。     

基于Wnt/β-catenin通路研究三物白散对胃癌AGS细胞凋亡的影响

目的 研究三物白散对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响并基于Wnt/β-catenin通路探讨其机制。方法 SPF级雄性SD大鼠28只,随机分为对照组及三物白散高、中、低剂量组,每组7只。三物白散高、中、低剂量组分别按0.125、0.0625、0.03125g·kg^-1·d^-1剂量灌胃,对照组以等剂量生理盐水灌胃。每日灌胃1次,连续7d。末次给药后45min经腹主动脉取含药血清。CCK-8法检测三物白散含药血清对胃癌AGS细胞活性的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测细胞Wnt1、β-catenin、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞Wnt1、β-catenin、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 与对照组相比,5%、10%、15%、20%高浓度组含药血清可呈浓度—时间依赖性抑制AGS细胞活性。细胞凋亡检测结果显示高浓度组AGS细胞凋亡率显著高于对照组(P<0....     

Wnt/β-catenin信号通路在治疗骨质疏松中的研究进展

 目的 对Wnt/β-catenin信号通路促进骨形成和调节骨吸收的研究成果以及Wnt信号拮抗物对骨量的影响作用进行综述,并探讨Wnt信号分子作为靶点治疗骨质疏松的应用前景。方法 通过对近年来国外相关文献进行归纳并进行分析和评述。结果 Wnt/β-catenin信号通路在维持骨稳态中具有重要调节作用,Wnt信号水平的高低决定其对骨形成促进或抑制。结论 经典的Wnt信号小分子抑制剂和中和抗体在用于治疗骨质疏松药物的研制和开发中具有广泛应用前景。     

白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠Wnt/β-catenin和TGF-β1-Smad2/3信号通路的影响

目的探究白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠Wnt/β-catenin和TGF-β1-Smad2/3信号通路的影响。方法利用链脲佐菌素一次性注射制作糖尿病肾病模型,40只SD大鼠随机分成白藜芦醇组(5 mg/kg)、氯沙坦组(30 mg/kg)、白藜芦醇联合氯沙坦组(5 mg/kg藜芦醇联合30 mg/kg氯沙坦)和模型组,每组小鼠10只,1次/d,均持续作用8周。检测尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、24 h尿蛋白及空腹血糖水平,计算肾脏指数,实时荧光定量PCR、Western blot法及免疫组化法检测Wnt4、β-catenin及TGF-β1、Smad2/3表达。结果与模型组比较,白藜芦醇组、氯沙坦组、白藜芦醇联合氯沙坦组的BUN、Scr、24 h尿蛋白和空腹血糖水平显著降低(P0.05),肾脏指数降低(P0.05),Wnt4、β-catenin、TGF-β1、Smad2/3 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.05);与白藜芦醇联合氯沙坦组比较,白藜芦醇组以上指标差异无统计学意义(P0.05),而氯沙坦组以上指标明显增加(P0.05)。结论白藜芦醇能够降低Wnt/β-catenin和TGFβ1-Smad2/3信号通路的表达水平,改善DN肾脏病理进程,减少肾脏受到的损害。     

买朱尼对骨性关节炎大鼠关节软骨中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用研究

目的观察维药买朱尼对骨性关节炎模型大鼠关节软骨中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用,探讨买朱尼对软骨细胞的保护作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和买朱尼组,每组10只。模型组和买朱尼组采用改良Hulth造模法建立膝骨关节炎模型,建模第2周开始买朱尼组灌胃买朱尼10.31 mg/(kg·d),模型组和假手术组灌胃等量生理盐水,均连续4周。末次灌胃后24 h取3组大鼠膝关节软骨标本进行大体评分和组织学评分,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测Wnt/β-catenin通路中β-catenin、GSK-3β和Wnt-3a的表达水平。结果模型组大鼠膝关节软骨标本大体评分、软骨组织学Mankin评分及软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、Wnt-3a蛋白及mRNA表达水平均明显高于假手术组(P均0.05),而买朱尼组均明显低于模型组(P均0.05)。结论维药买朱尼可以减轻大鼠膝关节软骨退变的程度,其可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路来发挥保护关节软骨细胞的作用。     

冬凌草甲素抑制人宫颈癌HeLa细胞生存，迁移，侵袭的活性研究＊

目的 观察冬凌草甲素对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。方法 体外培养HeLa细胞，以细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）检测不同浓度（0、10、20、40、80、160 μmol·L^-1）的冬凌草甲素对HeLa细胞处理不同时间（12 h、24 h和36 h）的细胞活力的影响。以0（对照组）、10、20、40 μmol·L^-1冬凌草甲素处理HeLa细胞24 h，TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI双染法分别检测HeLa细胞凋亡，细胞粘附实验检测HeLa细胞粘附力，划痕修复实验检测HeLa细胞侵袭能力，Transwell小室体外侵袭实验检测HeLa细胞侵袭能力，Western blot分析检测Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子原癌基因（C-myc）、细胞周期素D1（Cyclin D1）蛋白的表达。结果 冬凌草甲素以浓度-时间依赖效应的方式抑制HeLa细胞细胞活力（P < 0.05）。与对照组比较，10、20、40 μmol·L^-1冬凌草甲素组显著升高HeLa细胞凋亡率和凋亡指数（P < 0.05）；与对照组比较，10、20、40 μmol·L^-1冬凌草甲素组显著降低HeLa细胞黏附率、迁移率和侵袭率（P < 0.05）；与对照组比较，10、20、40 μmol·L^-1冬凌草甲素组显著降低HeLa细胞β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白表达（P < 0.05）。结论 冬凌草甲素具有抑制HeLa细胞增殖的作用，亦可诱导凋亡及抑制迁移和侵袭能力，并抑制Wnt/β-catenin信号通路。     

Wnt/β-catenin信号通路在骨质疏松症中的作用研究进展

本文就Wnt/β-catenin信号通路在骨质疏松症中的作用研究进展综述如下,以期对于骨质疏松症的临床防治、深入科研有所裨益。