miRNA-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖与侵袭

目的:研究miRNA-34a(miR-34a)对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的生物调控作用。方法:采用定量PCR检测人乳腺上皮细胞MCF-10A,乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a的表达水平。通过miR-34a mimics分别上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达水平,MTT和Transwell检测肿瘤细胞增殖能力、侵袭力等生物学行为的变化。结果:乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a处于低表达水平。通过miR-34a mimics上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达后,细胞的增殖能力被miR-34a抑制（P＜0.05）,miR-34a对细胞侵袭有显著抑制作用（P＜0.05）。结论:miR－34a在乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453及Hs578T中低表达,miR-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的细胞增殖和侵袭能力。     

CiRS-7/P13K/AKT轴对乳腺癌细胞生物学行为的影响及紫草素干预机制研究

摘 要：［目的］ 探讨小脑变性相关蛋白1反义转录物(cerebellar degeneration-related protein 1 antisense,CDR1as,又名 ciRS-7)调控磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol-3 kinase,P13K）/蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）通路对乳腺癌细胞生物学行为影响及紫草素干预机制。［方法］ 选取河南黄河科技学院附属医院收治的41例乳腺癌患者癌组织及癌旁正常乳腺组织,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测ciRS-7、P13K及AKT 信使RNA（messenger RNA,mRNA）表达情况。选取乳腺癌细胞株MCF-7及正常乳腺细胞MCF-10A进行体外实验。采用RT-PCR法检测MCF-7和MCF-10A细胞ciRS-7、P13K及AKT mRNA表达水平。向MCF-7细胞株转染 ciRS-7抑制剂（转染组） 和ciRS-7 inhibitor 阴性对照（阴性对照组）48 h后,采用Western blot法检测细胞P13K、磷酸化P13K（phosphorylation- phosphatidylinositol-3 kinase,p-P13K）、AKT、磷酸化AKT（phosphorylation- protein kinase B,p-AKT）蛋白表达量,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室体外侵袭和迁徙实验检测细胞的体外迁移及侵袭能力。采用不同浓度（0、4、8、16 μmol/L）紫草素对MCF-7细胞进行干预,48 h后检测细胞增殖抑制率及凋亡率,RT-PCR法检测ciRS-7、P13K及AKT mRNA表达,Western blot法检测细胞P13K、p-P13K、AKT、p-AKT蛋白表达量。［结果］ 相较于癌旁组织和MCF-10A细胞,乳腺癌组织和MCF-7细胞ciRS-7、P13K及AKT mRNA水平更高（P＜0.05）。MCF-7细胞转染后,相较于阴性对照组,转染组P13K、p-P13K、AKT和p-AKT蛋白相对表达量有所降低,且细胞迁徙及侵袭能力均降低;转染48 h后,转染组和阴性对照组增殖抑制率分别为36.71%±4.22%、0.09%±0.05%,两组凋亡率分别为27.84%±3.57%、5.44%±1.28%,差异具有统计学意义（P＜0.05）。随着紫草素干预浓度的增加,48 h细胞增殖抑制率及凋亡率也有所上升,ciRS-7、P13K及AKT mRNA水平以及P13K、p-P13K、AKT、p-AKT蛋白相对表达量有所降低（P＜0.05）。 ［结论］ ciRS-7可通过P13K/AKT通路对乳腺癌细胞生物学行为产生影响,紫草素抑制乳腺癌细胞的增殖,并促进其凋亡,其机制可能与ciRS-7/P13K/AKT通路有关。     

miR-214通过PTEN调控AKT信号通路抑制鼻咽癌细胞凋亡CSCD

目的探讨miR-214通过PTEN调控下游AKT信号通路激活对鼻咽癌细胞凋亡的影响。方法miR-214抑制剂转染鼻咽癌5-8F和6-10B细胞。MTT法评估细胞增殖情况。Annexin-V/PI染色法检测两种鼻咽癌细胞凋亡情况。Western blot和real-time PCR检测miR-214抑制剂对PTEN基因转录和蛋白表达以及对AKT信号通路和凋亡相关蛋白表达水平的影响。检测shRNA沉默PTEN基因转录和蛋白表达后,miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞凋亡影响。结果miR-214抑制剂可抑制鼻咽癌细胞生长,诱导5-8F和6-10B细胞凋亡。miR-214通过靶向3'-UTR区域调控PTEN基因转录和蛋白表达。抑制miR-214可促进PTEN的表达,抑制AKT信号通路激活,进而调控下游细胞周期和凋亡相关蛋白表达。沉默PTEN基因转录和蛋白表达可逆转miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞AKT信号通路活性和凋亡的影响。结论miR-214可通过直接靶向PTEN基因转录促进AKT信号通路激活抑制鼻咽癌细胞凋亡。     

circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。［方法］ 通过集落形成实验、流式细胞术、CCK-8法评估circ_0001361和miR-486-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞克隆、凋亡以及细胞活力的影响。双荧光素酶检测circ_0001361与miR-486-3p的相互作用。［结果］ 干扰circ_0001361表达显著性促进细胞凋亡（7.16%±0.65% vs 25.27%±2.32%,P<0.001）、上调miR-486-3p表达（0.96±0.06 vs 3.08±0.29,P<0.001）、降低细胞光密度值（0.82±0.07 vs 0.44±0.04,P<0.001）和克隆形成数（84.47±7.23 vs 39.69±3.76,P<0.001）。过表达circ_0001361显著性下调miR-486-3p表达（1.00±0.00 vs 0.45±0.05,P<0.001）、促进细胞凋亡（7.36%±0.66% vs 20.44%±2.17%,P<0.001）、降低细胞细胞光密度值（0.86±0.06 vs 0.51±0.05,P<0.001）和克隆形成数（89.62±7.35 vs 45.81±4.48,P<0.001）。circ_0001361与miR-486-3p直接结合。下调miR-486-3p表达显著性减弱干扰circ_0001361对MDA-MB-231细胞克隆形成数、凋亡率和细胞光密度值的影响（P<0.001）。［结论］ 干扰circ_0001361通过促进miR-486-3p表达来诱导乳腺癌细胞凋亡,并抑制其增殖。     

MiR-202靶向调节EGFR介导的PI3K/AKT信号通路在紫杉醇治疗卵巢癌中的机制研究

摘 要：［目的］ 探讨miR-202靶向调节EGFR介导的PI3K/AKT信号通路在紫杉醇治疗卵巢癌中的作用机制。［方法］ 以人卵巢癌细胞株A2780细胞作为研究对象,分别转染miR-NC、miR-202 mimics及shEGFR。采用MTT和Transwell实验检测各组细胞增殖、迁移及侵袭能力。采用qRT-PCR检测细胞中miR-202和EGFR mRNA表达量。采用Western blot检测EGFR、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白水平。［结果］ qRT-PCR结果显示,与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,miR-202在卵巢癌细胞A2780/WT 及A2780/PTX中明显低表达（P<0.05）;EGFR mRNA水平显著性上调（P<0.05）。转染miR-202 mimics后,卵巢癌细胞中miR-202相对表达量显著性高于miR-NC组和shEGFR组（P<0.05）;而miR-202 mimics组和shEGFR组EGFR mRNA含量显著性低于miR-NC组（P<0.05）。过表达miR-202及转染shEGFR后,miR-202 mimics组和shEGFR组细胞增殖能力较miR-NC组均显著性降低（P<0.05）;迁移细胞和侵袭数目也随之减少（P<0.05）;且对紫杉醇的半数抑制浓度IC50降低（P<0.05）。免疫印迹测定结果显示,miR-202 mimics组和shEGFR组中EGFR蛋白、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT磷酸化水平较miR-NC组明显下调（P<0.05）。［结论］ miR-202能靶向调节EGFR表达,并且影响卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭过程,其作用机制是通过抑制EGFR下游PI3K/AKT信号通路从而发挥抑癌作用,为临床治疗提供了新方向。     

靶向抑制miR-19a提高人宫颈癌HeLa细胞对顺铂敏感性的机制研究

目的:研究miR-19a反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对人宫颈癌HeLa细胞对顺铂耐药性的影响,并进一步探讨其机制。方法:利用Lipofectamine 2000将 miR-19a-ASO瞬时转染HeLa细胞,实时定量PCR法检测miR-19a表达水平。MTT法检测顺铂对HeLa细胞存活率的影响。Western blot检测PTEN、AKT和p-AKT（Ser473）蛋白表达的变化。结果:miR-19a-ASO明显抑制HeLa细胞miR-19a的表达。MTT结果表明靶向抑制miR-19a能明显促进HeLa细胞对顺铂的敏感性。Western blot结果提示,与对照组比较,干扰miR-19a的HeLa细胞,PTEN表达水平升高,p-AKT（Ser473）表达水平降低。结论:沉默miR-19a可能通过抑制AKT通路提高宫颈癌细胞对顺铂的敏感性,从而为宫颈癌的治疗提供新靶点。     

miR-30a对卵巢癌细胞PTEN/PI3K/AKT/mTOR自噬通路及顺铂耐药性的影响

目的:探究miR-30a对人卵巢癌SKOV3细胞自噬及顺铂耐药性的影响,并初步研究其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞和人卵巢癌细胞（耐药）细胞（SKOV3/DDP）;将SKOV3/DDP细胞随机分为对照组、miR-30a 阴性对照（NC）组和miR-30a模拟（mimics）组,SKOV3细胞作为正常组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞miR-30a表达情况;CCK-8法检测各组细胞顺铂耐药性;Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹分析法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3 I/II（LC3I/II）、p62、磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶（p-PI3K）、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B（p-AKT）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）表达情况;双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-30a与PTEN的靶向关系。结果:与对照组和miR-30a NC组相比,miR-30a mimics组SKOV3/DDP细胞miR-30a表达水平、凋亡率、p62、p-PI3K、p-AKT及p-mTOR水平显著升高（P＜0.05）,IC50值、LC3II、PTEN蛋白表达水平及LC3II/LC3I比值显著降低（P＜0.05）;与正常组相比,对照组SKOV3/DDP细胞上述各指标变化趋势完全相反;mirbase数据库预测显示,miR-30a与PTEN mRNA 3' UTR区有结合位点,与PTEN-3' UTR-WT+miR-30a NC组比较,PTEN-3' UTR-WT+miR-30a inhibitor组荧光素酶活性降低（P＜0.05）。结论:miR-30a可能通过靶向抑制PTEN表达,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路调控人卵巢癌细胞自噬,降低卵巢癌细胞的顺铂耐药性。     

大荨麻提取物对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制

目的：探讨大荨麻提取物对乳腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法：用不同质量浓度的大荨麻提取物（0、1、2、4、8、16、32、64 mg/ml）处理乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231 24 h,MTT法检测细胞增殖活力,选择中位抑制浓度附近的浓度（5和10 mg/ml）作为给药浓度分别处理MCF-7和MDA-MB-231细胞24 h后,平板克隆形成实验和流式细胞术分别检测大荨麻提取物对乳腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,WB法检测对细胞周期和凋亡相关蛋白以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达的影响。在MCF-7细胞用5 mg/ml大荨麻提取物处理的同时转染过表达AKT质粒（大荨麻+AKT组）,转染空载质粒为对照组（大荨麻+vec组）,WB法检测过表达效率,比较过表达AKT对细胞增殖、周期和凋亡的影响。结果：各大荨麻提取物处理组 MCF-7 和 MDA-MB-231细胞增殖活力均显著低于对照组（P<0.05或P<0.01）;与对照组比较,5或10 mg/ml大荨麻处理组乳腺癌细胞的克隆形成数显著减少,G0/G1期细胞占比和凋亡率显著增加（P<0.05或P<0.01）,P21、BAX蛋白表达显著升高而Cyclin D1、CDK4、Bcl2蛋白以及p-PI3K、p-AKT蛋白表达显著降低（P<0.05或P<0.01）。大荨麻+AKT 组 p-AKT 和 AKT 蛋白表达显著高于大荨麻+vec 组,克隆数、S 期和 G2/M 期细胞占比均高于大荨麻+vec 组（P<0.05 或 P<0.01）,G0/G1期细胞占比和凋亡率低于大荨麻+vec组（P<0.05或P<0.01）。结论：大荨麻提取物可以抑制乳腺癌细胞增殖、促进凋亡且阻滞细胞在G0/G1期,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路相关。     

miR-204对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨miR-204在人乳腺癌组织及MCF-7细胞中的表达水平及其对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 提取癌症和肿瘤基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库中浸润性乳腺癌的miR-204相关数据进行汇总,转染miR-204过表达病毒,筛选稳定转染细胞株并通过RT-qPCR检测转染率,MTT法检测过表达miR-204后乳腺癌MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 结果 miR-204在浸润性乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织明显下调（P＜0.001）,且与淋巴结转移和远处转移相关（P＜0.05）。过表达miR-204能够抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力（P＜0.05）;miR-204上调后,细胞凋亡率达到（34.7±1.9）%,细胞凋亡能力明显增强（P＜0.001）。结论 miR-204可抑制乳腺癌细胞增殖并介导细胞凋亡。     

miR-129-5p通过HMGB1 调控乳腺癌MCF-7 细胞对紫杉醇的敏感性

目的：探讨miR-129-5p 通过调控高迁移率族蛋白B1 基因（high mobility group box 1,HMGB1）影响乳腺癌MCF-7 细胞对紫杉醇（paclitaxel,PTX）的敏感性。方法：采用脂质体转染技术将miR-129-5p mimics、HMGB1 小干扰RNA（si-HMGB1）分别转染入MCF-7 细胞,用PTX刺激培养细胞后,用实时荧光定量PCR检测转染后MCF-7 细胞miR-129-5p 和HMGB1 mRNA的表达,Western blotting 检测转染后MCF-7 细胞HMGB1 蛋白的表达,CCK-8 增殖实验检测转染后PTX对MCF-7 细胞增殖的影响,流式细胞术检测转染后对PTX诱导MCF-7 细胞凋亡的影响。结果：转染miR-129-5p mimics 后,MCF-7 细胞中miR-129-5p 的表达水平明显高于阴性对照组细胞（P<0.01）;过表达miR-129-5p 后可明显增强PTX抑制MCF-7 细胞的增殖和诱导细胞凋亡的能力（均P<0.05）,并显著抑制HMGB1 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）。转染si-HMGB1 后,显著降低MCF-7 细胞HMGB1 mRNA 和蛋白的表达（均P<0.05）;干扰HMGB1 表达进一步促进PTX抑制MCF-7 细胞的增殖并诱导细胞凋亡（均P<0.05）。结论：miR-129-5p 通过下调HMGB1 的表达增强乳腺癌MCF-7 细胞对PTX的敏感性。