Circ-0080229结合蛋白的筛选及其在胶质瘤调控中的意义

目的鉴定EGFR基因来源的环状RNA circ-0080229在胶质瘤中所结合的蛋白,并分析其在胶质瘤调控中所发挥的作用。方法通过PCR技术验证circ-0080229在胶质瘤中高表达,再应用RNA结合蛋白纯化实验及蛋白质谱技术,分析circ-0080229所结合的蛋白质。利用TCGA数据库进行circ-0080229结合蛋白的差异表达分析及生存分析,筛选出最有价值的circ-0080229结合蛋白ANXA2,并进行细胞功能实验的验证。结果共有33个蛋白可与circ-0080229结合,其中以ANXA2和SIL1为代表的蛋白与胶质瘤病理分级和预后相关。在胶质瘤U251细胞系中,下调ANXA2的表达可显著抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力。结论环状RNA circ-0080229可特异性结合ANXA2等RNA结合蛋白,同时circ-0080229结合蛋白ANXA2可促进胶质瘤的增殖能力、迁移能力与侵袭能力。     

RNA干扰ANXA5表达对人胆管癌细胞QBC939的增殖和侵袭的影响

目的:探讨膜联蛋白A5(ANXA5)对人胆管癌细胞QBC939增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:构建3个沉默QBC939细胞ANXA5的shRNA质粒(ANXA5-sh1/2/3)和1个阴性对照质粒,慢病毒包装质粒后感染QBC939细胞,流式细胞仪检测感染效率。病毒感染QBC939细胞后,Western blotting检测细胞的ANXA5蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率变化;划痕实验和Transwell实验评估QBC939细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:干扰组(KD)细胞中的ANXA5蛋白水平显著低于空白组(BC)和阴性对照组(NC)细胞中的ANXA5蛋白水平。与NC组和BC组细胞相比,KD组细胞中G0/1细胞的百分比和凋亡率增高,而细胞增殖活性降低。KD组细胞中的细胞迁移和侵袭能力也低于NC和BC组细胞。结论:RNA干扰QBC939细胞的ANXA5表达后,明显抑制其增殖、侵袭和诱导凋亡的作用。     

反义AKT2 RNA逆转C6胶质瘤的细胞恶性表型

目的研究反义AKT2RNA逆转C6鼠脑胶质瘤细胞恶性表型。方法将逆转录病毒LXSN为载体的反义AKT2构建体脂质体复合物直接转染人脑胶质瘤细胞系TJ905和鼠脑胶质瘤细胞系C6,LXSN载体转染组为空载对照。随机筛选阳性克隆并应用蛋白印记和原位杂交鉴定转染。MTT法和TUNEL法评价细胞的增殖活性和凋亡,Transwell法分析侵袭能力,划痕实验研究细胞迁移能力,流式细胞法分析细胞周期,并进行GFAP的表达分析。结果转染ASAKT2cDNA后C6细胞AKT2表达显著抑制。与C6对照组和LXSN空载组比较,转染反义AKT2后C6细胞存活率均明显下降(P<0.01),凋亡指数增加(0.33vs13.67,P<0.01),侵袭能力和细胞迁移能力抑制,诱导细胞出现G0/G1细胞周期阻滞,上调GFAP的表达。结论反义AKT2RNA基因治疗通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭与迁移并使G0/G1细胞周期阻滞逆转其恶性表型,AKT2可作为基因治疗胶质瘤的重要优选靶的。     

环状RNA circKDM4B调控肝癌细胞增殖及侵袭迁移的实验研究

目的 探索环状RNA circKDM4B对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭迁移的影响,明确其在肝癌进展中所发挥的调控作用。方法 采用核糖核酸酶R（RNase R）消化实验和荧光原位杂交实验（FISH）验证circKDM4B的环状结构稳定性及其在细胞中的定位;利用小干扰RNA（siRNA）敲减肝癌细胞circKDM4B的表达,并通过qRT-PCR实验验证敲减效率;采用细胞计数方法（CCK-8）实验、EdU增殖实验检测circKDM4B对肝癌细胞增殖的影响,流式细胞技术检测其对肝癌细胞凋亡的影响;同时应用划痕实验、Transwell实验检测circKDM4B对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果 相较于线性KDM4B mRNA,circKDM4B对RNase R耐受性更加稳定,FISH结果显示circKDM4B主要定位于肝癌细胞质中;在转染了circKDM4B siRNA后,circKDM4B在肝癌细胞表达下调,而亲本基因KDM4B不受影响。CCK-8和EdU增殖实验结果显示,敲减circKDM4B可抑制肝癌细胞的增殖;流式细胞实验显示敲减circKDM4B可明显促进肝癌细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验表明敲减circKDM4B后肝癌细胞的侵袭和迁移能力明显减弱。结论 circKDM4B稳定表达于肝癌细胞质中,并具有促进肝癌细胞增殖、侵袭迁移、抑制肝癌细胞凋亡的能力,这提示circKDM4B有望成为新的肝癌治疗靶点。     

CXCR2对胃癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 :探究CXC类趋化因子受体2(C-X-C motif chemokine receptor, CXCR2)对胃癌细胞侵袭、迁移及凋亡等生物学特性的影响。方法:取人胃癌MGC80-3细胞和SGC-7901细胞。转染建立CXCR2过表达细胞,质粒瞬时转染和RNA干扰建立敲减细胞。蛋白质印迹实验研究蛋白质相关细胞表型变化。通过transwell侵袭及迁移实验、增殖实验(cell counting kit-8, CCK8)、流式细胞实验AnnexinⅤ-PI双染法以及实时定量PCR等进行细胞功能、增殖、凋亡以及CXCR2 mRNA表达的检测。结果:胃癌细胞过表达CXCR2后其侵袭、迁移能力显著增强(P0.05),凋亡率显著降低(P0.01)。CXCR2下调后抑制胃癌细胞的侵袭、迁移能力(P0.05),凋亡率显著升高(P=0.02)。CXCR2过表达的胃癌细胞中Akt的磷酸化水平显著上调。Akt磷酸化水平与凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平相一致。结论:CXCR2上调后增强胃癌细胞的侵袭、迁移及抗凋亡能力。胃癌细胞中CXCR2的抗凋亡能力与CXCR2/Akt/Bcl-2通路相关。     

环状RNA FBLIM1在肝细胞癌中生物学功能的初步研究

目的:探讨环状RNA FBLIM1(circ FBLIM1)对肝细胞癌(HCC)增殖与侵袭能力的影响。方法:将HCC细胞系Hep G2、7402、97H分别转染circ FBLIM1干扰序列(si-circ FBLIM1)和阴性对照序列后,用q RT-PCR验证转染效果,然后分别用CCK-8实验和Transwell实验检测细胞的增殖情况与侵袭能力;将10只裸鼠皮下接种Hep G2细胞后随机均分为两组,分别以40μL si-circ FBLIM1或阴性对照序列进行原位注射,1次/4 d,每4天记录移植瘤体积,28 d后完整剥离肿瘤称重。结果:q RT-PCR结果显示,3种HCC细胞系转染si-circ FBLIM1后,circ FBLIM1的表达均明显降低(均P0.05)。CCK-8实验与Transwell实验结果显示,3种HCC细胞系转染si-circ FBLIM1后的增殖能力与侵袭能力均明显减弱(均P0.05)。裸鼠移植瘤实验结果显示,注射si-circ FBLIM1的移植瘤生长速度明显减慢,肿瘤体积与质量均明显降低(均P0.05)。结论:circ FBLIM1具有促进HCC细胞增殖与侵袭的作用,可能是HCC恶性生物学特征的重要调节因子,抑制circ FBLIM1的表达可能是HCC有效的治疗策略。     

环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤细胞中功能及作用机制研究

目的探索环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤中功能及作用机制。方法荧光定量PCR验证环状RNA-circ-VCAN在正常胶质细胞以及胶质瘤细胞中的表达情况;核质分离实验验证circ-VCAN在细胞核质分布情况;RNase R消化线性RNA实验验证circ-VCAN对RNase R消化的抵抗能力;构建敲低环状RNA-circ-VCAN的U373和T98G瞬时转染细胞株;CCK8实验检测敲低环状RNA-circ-VCAN后细胞的增殖能力;Western blot检测NF-κB通路蛋白P-P65表达水平。结果与正常胶质细胞(HA1800)相比,环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤细胞(尤其是在U373和T98G)中高表达,差异均有统计学意义(P0.05);细胞核质分离实验证明circ-VCAN主要存在细胞质中;circ-VCAN能抵抗RNase R的消化;CCK8实验证明敲低circ-VCAN能抑制U373和T98G的细胞增殖(P0.05);Westernblot检测敲低circ-VCAN后的U373和T98G细胞显示NF-κB通路蛋白P-P65表达水平减少。结论在胶质瘤细胞中敲低circ-VCAN能减慢胶质瘤细胞的生长,提示circ-VCAN可能成为一个新的治疗靶点。     

环状RNA SLC41A2在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状RNA SLC41A2(circSLC41A2/hsa_circ₀006260)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义, 探讨其对人NSCLC增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法使用高通量环状RNA(circRNA)测序鉴定NSCLC组织中差异表达的circRNA, 并通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)进行验证, LSD-t检验分析其表达差异。收集临床数据, 采用χ2检验分析circSLC41A2表达与各种临床病理特征的相关性。绘制受试者工作特征曲线(ROC)评价其诊断价值, 绘制Kaplan-Meier(K-M)生存曲线评价其预后评价价值。RT-qPCR检测人NSCLC细胞系(H1299、A549、HCC827、H1650、H359)和人正常肺上皮细胞系BASE-2B中circSLC41A2的表达, 采用单因素方差分析其表达差异。沉默circSLC41A2后, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测增殖和集落形成, 流式细胞术检测细胞凋亡, 细胞划痕实验和Transwell实验评估迁移和侵袭能力,...     

circ＿0001982靶向miR-578对乳腺癌细胞自噬、增殖及细胞周期影响的机制研究

目的：探讨环状RNA0001982(circ＿0001982)对乳腺癌细胞自噬、增殖和细胞周期的影响及分子机制。方法：RT-qPCR检测乳腺癌患者癌组织和癌旁组织circ＿0001982和miR-578表达水平。将乳腺癌细胞MCF-7分为NC组、si-NC组、si-circ＿0001982组、pc DNA-circ＿0001982组、miR-578组和pc DNA-circ＿0001982+miR-578组。RT-qPCR检测circ＿0001982和miR-578表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）和流式细胞术检测细胞增殖和周期;Western blot法检测Cyclin D1、p21、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证circ＿0001982和miR-578的关系。结果：乳腺癌组织和MCF-7细胞中circ＿0001982表达水平升高,miR-578表达水平降低（P<0.05）。敲低MCF-7细胞circ＿0001982可降低细胞活性和G2/M期细胞比例,减少Cyclin D1、LC3-Ⅰ蛋白表达,升高G0/G1期细胞比例,促进p21、LC3-Ⅱ蛋白表...     

SPAG9调控前列腺癌迁移侵袭能力的研究

目的探讨SPAG9对前列腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其分子机制。方法应用RNA干扰技术下调SPAG9在前列腺癌细胞中的表达,采用Western blot方法评估SPAG9基因干扰效果。采用Transwell实验比较SPAG9干扰前后前列腺癌细胞DU145、PC3的迁移与侵袭能力的改变。用CCK8细胞增殖实验分析SPAG9基因沉默对前列腺癌细胞DU145、PC3增殖能力的影响。用Western blot实验研究SPAG9基因沉默对前列腺癌细胞中MMP-2及TIMP-2蛋白表达的影响。结果特异性SPAG9基因的干扰RNA(siRNA)能够有效沉默DU145、PC3前列腺癌细胞株中SPAG9蛋白的表达。SPAG9敲低后的前列腺癌细胞株迁移与侵袭能力显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。siSPAG9组DU145和PC3细胞中MMP-2的蛋白表达水平比siCtrl组显著降低,两组比较差异有统计学意义(P0.05),而TIMP-2的表达量显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。SPAG9基因沉默后并不影响DU145及PC3细胞的增殖,组间差异无统计学意义(P0.05)。结论SPAG9基因通过激活MMP-2信号通路增强前列腺癌细胞的迁移与侵袭能力。     

微小RNA-487a-3p通过抑制磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路调控脑胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探究微小RNA(miRNA, miR)-487a-3p对脑胶质瘤细胞(U-87 MG)的增殖、迁移和侵袭能力的调控作用及信号通路机制。方法利用GEO2R分析工具对基因表达数据库(GEO)的数据集(GSE165937)进行比较分析获得差异表达miRNA。通过定量聚合酶链式反应(qPCR)在HA1800和U-87 MG细胞系中检测miR-487a-3p的表达水平。通过在U-87 MG细胞中转染miR-487a-3p模拟物(miR-mimic)上调其表达并应用qPCR进行验证。分别通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和总蛋白激酶B(t-Akt)的表达水平, 通过计算比值评价各组细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的激活水平。两组间比较采用t检验进行统计学分析。结果共有62个差异表达miRNA(Log2│差异倍数│>2, P<0.05), 其中上调9个, 下调53个, miR-487a...     

Pin1相互作用的长非编码RNA lncPIL-1调控乳腺癌恶性表型的研究

目的 探究与Pin1蛋白结合的长非编码RNA lncPIL-1对乳腺癌细胞增殖、迁移和干性表型的影响。方法 采用RNA免疫沉淀联合深度测序（RIP-seq）得到与Pin1特异性结合的长非编码RNA,并通过RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）和紫外交联免疫沉淀（CLIP）进行验证筛选;利用小干扰RNA（siRNA）敲降乳腺癌细胞lncPIL-1的表达,利用慢病毒感染得到lncPIL-1过表达乳腺癌细胞株,并通过qRT-PCR实验检测敲降及过表达效率;采用平板克隆方法检测lncPIL-1对乳腺癌细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验检测lncPIL-1对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响;采用ALDEFLUOR法检测lncPIL-1对乳腺癌细胞干性表型的影响。结果 RIP-seq及验证实验显示,lncPIL-1在Pin1免疫沉淀复合物中富集。乳腺癌患者高表达lncPIL-1与总生存率低密切相关。平板克隆实验显示lncPIL-1不影响乳腺癌细胞生长。Transwell实验中过表达lncPIL-1会加强乳腺癌细胞的迁移能力,而敲降lncPIL-1会降低乳腺癌细胞的迁移能力;ALDEFLUOR检测结果显示敲降lncPIL-1明显抑制乳腺癌细胞干性表型。结论 lncPIL-1与Pin1特异性结合并与乳腺癌患者预后不良高度相关,具有促进乳腺癌细胞运动迁移及干性表型的能力,提示lncPIL-1有望成为新的乳腺癌治疗靶点。     

RNA激活技术上调p21WAF1/CIP1基因表达对胆囊癌细胞增殖、侵袭与迁移能力的影响

目的利用RNA激活技术上调人胆囊癌细胞(GBC-SD)中p21基因的表达,观察其对GBS-SD细胞体外增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法将与p21基因启动子DNA序列互补的双链RNA分子(dsRNA)转染入人胆囊癌细胞中,采用RT-PCR法和Western blot分别检测p21基因mRNA及蛋白的表达情况;MTT法检测细胞增殖活性;Transwell小室法检测RNAa后细胞侵袭、迁移能力的变化。结果 dsRNA转染GBC-SD细胞72h后能显著上调p21基因mRNA和蛋白的表达,与空白组和对照组比较,转染dsp21后,GBC-SD细胞的增殖活性明显受到抑制,细胞侵袭及迁移能力明显下降。结论 RNAa技术能有效上调p21基因的表达并抑制细胞的增殖活性,降低其侵袭及迁移能力,为胆囊癌疾病的基因治疗提供依据。     

热CO2气腹对人结肠癌细胞侵袭迁移能力及基质金属蛋白酶-2表达的抑制作用

目的 研究热CO2气腹对COLO 205细胞株侵袭迁移能力及转移相关蛋白-基质金属蛋白酶-2表达的影响.方法 COLO 205细胞分别经热CO2气腹43℃作用3～4 h,体外迁移和侵袭实验评价其对细胞侵袭迁移能力的影响;并利用同位素标记的相对和绝对定量技术标记,液相色谱分离蛋白质,质谱仪找出处理前后表达差异蛋白,同时利用蛋白质印迹和RT-PCR进行验证.结果 热气腹不仅对COLO 205细胞侵袭和迁移具有抑制作用,并呈作用时间依赖性;而且对COLO 205细胞株MMP-2的表达有抑制作用,与作用时间相关.结论 热CO2气腹能抑制COLO 205的侵袭和迁移,其机制可能与热CO2气腹抑制了细胞内的MMP-2的表达有关.     

RNAi沉默pyk2基因对鼠脑胶质瘤细胞增殖、侵袭能力的影响

目的 探讨pyk2小干扰RNA表达载体对小鼠脑胶质瘤G422细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 用以pGenesil-1质粒为载体,以pyk2为靶基因,构建短发夹状小干扰RNA表达载体.用pyk2短发夹状小干扰RNA表达载体转染体外培养的人脑胶质瘤G422细胞,反转录聚合酶链反应和Western blot法检测pyk2基因和蛋白表达的改变,噻唑蓝(MTT)比色法检测转染后细胞的增殖情况,Transwell小室法测定转染细胞体外侵袭能力.结果 构建了pGenesil-1-pyk2重组质粒,并成功转染G422细胞.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)显示pyk2 siRNA转染G422细胞后显著降低pyk2mRNA的表达,以48 h为著,下降近70%;Western blot证实转染后pyk2蛋白的表达下降近65%;G422细胞的活力降低为(67.1±5.2)%;Transwell小室测定转染细胞体外侵袭能力明显下降.结论 pGenesil-1-pyk2 siRNA重组质粒明显下调pyk2在胶质瘤细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞增殖,抑制其侵袭能力.     

卵泡抑素对头颈鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制探讨

目的 探讨卵泡抑素（FST）对头颈鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法 采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白质印迹法检测头颈鳞癌细胞系HSC-3、Fadu、Tu686以及人正常人口腔上皮细胞HOK中FST的表达水平。利用siRNA和shRNA构建敲低FST的细胞株，通过CCK8、细胞克隆形成、Transwell侵袭迁移和裸鼠皮下成瘤实验，研究敲低FST对肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响；将敲低FST的细胞株和对照组的总RNA送检转录组测序，对差异表达的基因进行信号通路富集分析，利用qRT-PCR对TGFβ信号通路进行初步验证，通过Western blot和流式细胞技术检测肿瘤细胞凋亡情况。结果 FST在Tu686、Fadu和HSC-3细胞中mRNA及蛋白表达水平均高于HOK细胞。肿瘤细胞敲低FST后穿过Transwell小室的数目显著减少、形成的克隆数目显著减少、肿瘤细胞增殖速度变慢、裸鼠皮下成瘤体积变小。RNA测序结果显示，与对照组相比，敲低FST的肿瘤细胞差异表达的基因在TGFβ信号通路中有明显富集，敲低FST后肿瘤细胞凋亡比例增加，凋亡相关蛋白Casepa...     

胃癌细胞中长链非编码RNA CCAT2的表达及其作用

目的:探讨长链非编码RNA(lnc RNA)CCAT2在胃癌细胞中的表达及其作用。方法:用q RT-PCR检测胃癌细胞系AGS、Hs746T和BSG823及正常胃黏膜上皮细胞GES-1中CCAT2的表达,将胃癌AGS细胞分别转染CCAT2si RNA(si-CCAT2组)与阴性对照si RNA(阴性对照组)后,以无转染的AGS细胞为空白对照,CCK-8法检测细胞的增殖情况,并分别用流式细胞术分、细胞划痕和Trans well实验、Western blot检测si-CCAT2组与阴性对照组的凋亡情况、迁移和侵袭能力以及凋亡相关蛋白的表达。结果:各胃癌细胞系中CCAT2相对表达量均明显高于正常胃黏膜上皮细胞GES-1(均P0.05);转染后72、96h,si-CCAT2组的增殖能力明显低于空白对照组与阴性对照组(均P0.05),而阴性对照组与空白对照组各时间点增殖能力均无明显差异(均P0.05);与阴性对照组比较,si-CCAT2组细胞凋亡率明显升高、划痕愈合率明显降低、侵袭细胞数明显减少(均P0.05);P53、caspase-8、Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下调(均P0.05)。结论:CCAT2在胃癌细胞中高表升高,敲低其表达可抑制胃癌细胞的增殖及迁移与侵袭能力,机制可能与其调控凋亡相关蛋白的表达有关。     

在结肠癌细胞中P53突变调控 KLF5功能及表达变化的实验研究

目的 探讨在结肠癌细胞株中P53基因突变对KLF5基因功能及表达变化的影响。方法 通过对常见结肠癌细胞株的筛选,选取P53野生型及KLF5基因蛋白表达相对较低的细胞株作为研究对象,应用质粒构建过表达载体转染目的 细胞,运用PCR及Westernblot技术进行验证,再用细胞迁移、侵袭、增殖实验观察结肠癌细胞株中P53突变与否对KLF5基因功能及表达的影响。结果 通过应用Westernblot技术对常见的7株结肠癌细胞株中KLF5基因蛋白表达以及应用Sanger测序对细胞株中P53突变情况的筛选,选取结肠癌细胞株RKO作为研究对象,在成功构建P53R175H过表达载体及KLF5干扰和过表达载体,并转染到RKO细胞株中,并行Western-blot验证后,运用细胞迁移、侵袭及增殖实验,发现在没有P53R175H突变的RKO结肠癌细胞株中,KLF5的过表达能抑制细胞的迁移、侵袭及增殖的能力,而敲除KLF5的表达后,可以发现细胞的迁移、侵袭及增殖能力明显增加;而在P53R175H突变后的结肠癌细胞株RKO中,KLF5的过表达则会导致RKO的迁移、侵袭及增殖能力明显增强,而敲除KLF5的表达后迁移、侵袭及增殖能力下降。同时也发现RKO细胞中P53的突变会导致KLF5的表达水平的下降。结论 在高表达P53突变的结肠癌细胞株RKO中,KLF5的蛋白表达水平下降,而且其基因功能则从抑癌向促癌方向转换。     

小干扰RNA介导的蛋白激酶Cε基因沉默对肾透明细胞癌769P细胞增殖及迁移侵袭的影响

目的 观察下调蛋白激酶Cε(PKCε)基因对肾透明细胞癌细胞株769P细胞的生长、侵袭及迁移能力的影响.方法 用脂质体将PKCε小干扰RNA (siRNA)转染至769P细胞中,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分析PKCε基因及蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)及单细胞克隆试验测定细胞的生长;划痕及侵袭试验检测细胞的侵袭和迁移能力.结果 通过siRNA下调769P细胞中PKCε的表达后,细胞的增殖能力下降明显(P＜0.05);同时,细胞的侵袭和迁移能力较正常细胞降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PKCε可影响人肾透明细胞癌细胞株769P细胞的生长及细胞侵袭、迁移能力.     

过表达FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制研究

［摘要］ 目的 探讨FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT?PCR）的方法检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和人骨肉瘤细胞U2OS、MNNG/HOS中FOXO1的mRNA表达水平。利用pcDNA3.1?FOXO1重组质粒建立FOXO1过表达的细胞模型,空载质粒（pcDNA3.1?vector）作为对照,qRT?PCR和蛋白质印迹法（Western blot）验证转染效率。确定成功过表达FOXO1基因后利用Cell Counting Kit?8（CCK?8）实验检测骨肉瘤细胞的增殖能力（吸光度值）,Transwell实验体外检测骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力,并采用qRT?PCR和western blot的方法检测基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达变化。结果 人骨肉瘤细胞MNNG/HOS、U2OS中FOXO1的mRNA的表达水平显著低于人成骨细胞hFOB 1.19（P<0.05）,且骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1的表达水平较低。重组质粒pcDNA3.1?FOXO1转染后,骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1表达水平显著升高。与对照组（pcDNA3.1?vector）比较,U2OS?FOXO1过表达组的细胞的增殖能力降低（P<0.05）,侵袭迁移和迁移能力降低,MMP9较对照组表达水平明显降低（P<0.05）。结论 骨肉瘤细胞中FOXO1表达水平明显低于正常成骨细胞。过表达FOXO1可能通过下调MMP9抑制骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力。