基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路研究三叶香茶菜含药血清对枯否细胞活化的影响

目的 研究三叶香茶菜含药血清(isodon ternifolius-containing serum，ITS)通过Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的大鼠原代肝枯否细胞(Kupffer cell，KC)活化的影响。方法 分离培养大鼠原代KC，将LPS诱导的大鼠原代KC分为空白对照组、模型对照组、空白血清组、阳性对照组(秋水仙碱含药血清组)、ITS组、TLR4阻断剂组、TLR4阻断剂+ITS组。MTT法检测不同浓度ITS对KC增殖活性的影响；ELISA法检测KC细胞上清液白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量；荧光定量聚合应(PCR)、Western blotting和免疫荧光检测KC中TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路中TLR4、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、半胱肽氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白表达情况。结果 与模型对照组相比，各药物组KC上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α和IL-6含量，以及细胞中TLR4、IκBα、Caspase-1、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、p-IκBα、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白的表达均下调或降低(P<0.05或P<0.01)；与TLR4阻断剂组比较，TLR4阻断剂+ITS组上述多数指标的改善更加明显。结论 三叶香茶菜可能通过下调TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路抑制KC活化，减少炎性因子的表达和释放，从而减轻肝脏炎症损伤。     

利伐沙班对下肢动脉硬化闭塞症大鼠血管内皮功能及p38MAPK/NF-κB通路的影响

摘 要 目的：探究利伐沙班对下肢动脉硬化闭塞症（ASO）大鼠血管内皮功能及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）/核因子κB（NF-κB）通路的影响。方法: 将大鼠分为假手术组、模型组、利伐沙班低剂量组、利伐沙班中剂量组、利伐沙班高剂量组,给药2周后检测各组大鼠血清中一氧化氮（NO）和内皮素（ET-1）含量;检测血清中内皮细胞的数量;检测动脉血管中p38MAPK、p p38MAPK、NF-κB表达情况。结果:与模型组相比,利伐沙班组静脉血中内皮细胞数量减少;利伐沙班组血清中NO显著高于模型组,ET-1显著低于模型组（P<0.05）;利伐沙班组动脉中p p38MAPK的表达量显著低于模型组,NF-κB的表达量显著高于模型组（P<0.05）,呈剂量依赖性。结论:利伐沙班能够改善ASO大鼠血管内皮功能,推测是通过调控p38MAPK / NF-κB通路实现的。     

雷公藤次碱通过调控TLR4/MyD88/TRAF6信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应

目的 探讨雷公藤次碱抗炎活性及其作用机制。方法 用细胞计数盒-8 (CCK-8)法考察雷公藤次碱对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW 264.7 增殖活性的影响,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测雷公藤次碱对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞分泌细胞因子一氧化氮（NO）、白细胞介素-1β（IL-1β）、 肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的影响,用免疫印迹法考察雷公藤次碱对白介素受体相关激酶（IRAK）、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6（TRAF6）、核因子κB抑制因子α（IκBα）、核因子κB（NF-κB p65）、分裂原激活的蛋白激酶p38（p38）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）在LPS刺激的RAW264.7细胞中的表达及其磷酸化的影响。结果 雷公藤次碱在25、50、100 μmol/L浓度下对RAW264.7细胞无显著毒性,并可显著抑制细胞因子NO、IL-1β、TNF-α和IL-6含量。免疫印迹法检测结果显示雷公藤次碱可显著抑制IRAK及TRAF6的表达;显著抑制ERK、P38和JNK的磷酸化;抑制IκBα的降解,降低NF-κB p65的核转运水平。结论 雷公藤次碱具有体外抗炎活性,其作用机制可能介导TLR4/MyD88/TRAF6信号通路。     

仙茅苷对脂多糖诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移及表型转化的影响

目的 观察仙茅苷（curculigoside,Cur）对脂多糖（LPS）诱导血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）发生细胞增殖、迁移以及促进其表型转化的影响,并对其机制进行初步探讨。方法 体外分离培养大鼠血管平滑肌细胞,将血管平滑肌细胞 随机分为对照组、脂多糖组、脂多糖+不同浓度仙茅苷组及仙茅苷组。采用噻唑蓝(MTT)比色法观察并计算各组细胞增殖率;采用细胞划痕实验观察并计算细胞迁移率。应用 Western blot法检测各组细胞内α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及核转录因子κB（NF-κB）信号通路相关蛋白表达情况。结果 与对照组相比,脂多糖组细胞增殖率、迁移率及细胞内核转录因子κB及基质金属蛋白酶9蛋白表达水平明显提高（P<0.001）,而α-平滑肌肌动蛋白表达明显降低（P<0.001）;与脂多糖组相比,脂多糖+仙茅苷组细胞增殖率、迁移率以及细胞内基质金属蛋白酶9、核转录因子κB蛋白表达水平明显下降（P<0.001）,α-平滑肌肌动蛋白表达水平明显上升（P<0.001）。结论 仙茅苷可明显抑制由脂多糖诱导的血管平滑肌细胞表型自收缩表型向合成表型转化,进而抑制血管平滑肌细胞的增殖与迁移能力。其作用机制可能与核转录因子κB信号通路相关。     

金合欢素对糖尿病肾病大鼠肾损伤及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨金合欢素对糖尿病肾病（DN）大鼠肾损伤及Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 通过高脂高糖饲料喂养及ip链脲佐菌素（STZ）建立DN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,金合欢素低、高剂量（40、80 mg ·kg^-1）组,金合欢素（80 mg ·kg^-1）＋脂多糖（LPS,0.1 mg ·kg^-1）组,缬沙坦（20 mg ·kg^-1）组,每组10只,并以正常喂养且不ip STZ的10只大鼠作为对照组。干预结束后,尾静脉取血,检测大鼠空腹血糖含量;收集大鼠24 h尿液,分析尿蛋白含量;腹部主动脉取血,ELISA法检测血清中血肌酐、血尿素氮水平及肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;分离双肾组织,透射电镜及HE染色检测肾组织损伤情况;Western blotting检测Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组肾组织严重受损,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）;与模型组比较,缬沙坦和金合欢素低、高剂量组肾组织损伤得到缓解,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著降低（P<0.05）;与金合欢素高剂量组相比,金合欢素＋LPS组肾组织损伤加剧,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）。结论 金合欢素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路改善DN大鼠肾损伤。     

獐牙菜苦苷的抗炎活性及其对NF-κB通路相关因子p65和IKK-α表达的影响

目的 观察獐牙菜苦苷（Swertiamarin）的抗炎活性以及对核转录因子-κB（NF-κB）通路的调控作用。方法 采用脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7构建体外炎症模型,CCK-8法观察獐牙菜苦苷对细胞活性的影响,ELISA法检测其对炎症相关因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）表达的影响,RT-PCR法测定其对NF-κB通路相关因子p65和IKK-α的mRNA表达的影响。结果 100 μg·mL^-1獐牙菜苦苷能降低细胞存活率,3.125~50 μg·mL^-1浓度对细胞存活率无影响;25~50 μg·mL^-1獐牙菜苦苷能降低炎症相关因子TNF-α及IL-6的释放;12.5~50 μg·mL^-1獐牙菜苦苷能抑制p65的mRNA表达,50 μg·mL^-1獐牙菜苦苷能抑制IKK-α的mRNA表达。结论 獐牙菜苦苷对LPS诱导的炎症模型中TNF-α、IL-6的生成具有抑制作用,其机制可能与抑制NF-κB通路相关因子p65、IKK-α的表达有关。     

糖尿病大鼠脾脏核因子κB和肿瘤坏死因子-α表达及其相关性

目的 观察糖尿病大鼠脾脏的病理改变,检测核因子-κBp65、肿瘤坏死因子-α表达的变化,并探讨两者关系.方法 采用右下腹腔内一次性注射链脲佐菌素60mg/kg诱导Wistar大鼠糖尿病模型26只,分别于成模后1、3、6个月观察脾组织的病理改变,采用免疫组化方法检测核因子-κBp65、肿瘤坏死因子-α表达变化.结果 随糖尿病病程延长,脾组织发生病理改变,核因子-κBp65、肿瘤坏死因子-α表达显著增强,两者呈正相关.结论 高糖环境下,核因子-κBp65、肿瘤坏死因子-α在大鼠脾组织显著表达,与糖尿病脾脏病理、功能改变相关.     

黄芪-川芎药对治疗脑卒中的网络药理学研究

目的 探讨黄芪-川芎药对治疗脑卒中的药理机制。方法 通过多个数据库并结合文献调研检索黄芪、川芎的有效化学成分和相关靶点;采用Cytoscape软件绘制成分靶点可视化网络,并进行拓扑分析;以CTD在线分析平台挖掘脑卒中的相关靶点,借助STRING数据库构建化合物靶点蛋白互作网络、脑卒中靶点蛋白互作网络,应用Cytoscape软件进行网络合并获取核心网络,并对核心靶点基因进行KEGG通路富集分析。结果 共筛选出黄芪、川芎中49个有效化合物,靶点蛋白272个,核心靶点蛋白39个,KEGG富集通路10条。作用通路涉及肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、白介素17（IL-17）信号通路、松弛素信号通路、核因子（NF）-κB信号通路、低氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路、C型凝集素受体信号通路、Toll样信号通路、核苷酸结合寡聚化结构域（NOD）样信号通路、血管内皮生长因子（VEGF）信号通路、p53信号通路。结论 黄芪-川芎药对中槲皮素、山柰酚等化合物可能通过肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、白介素17（IL-17）信号通路等多条通路发挥治疗脑卒中的作用。     

红花提取物对大鼠心脏缺血再灌注的保护作用及机制研究

目的 研究红花提取物（safflower extract,SE）对心脏缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury,IRI）的保护作用及作用机制。方法 50只大鼠随机分为假手术组,IRI组,SE 1,2,4 g·kg^-1（以生药量计）组,每组10只。SE组于缺血前30 min,分别腹腔注射对应剂量的SE,假手术组及IRI组分别腹腔给予生理盐水1 mL。IRI组和SE组血管夹夹闭左冠状动脉前降支,30 min后松开血管夹,术后测定各组大鼠左心室内压最大上升（下降）速率（±dp/dtmax）、左心室舒张压（LVDP）、左心室舒张末期压（LVEDP）、心率（HR）。恢复心脏灌注20 min后,收集各组大鼠心脏和血清,检测各组大鼠心脏结构及心肌梗死面积,检测肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸酶（LDH）活性、蛋白激酶B抗体（Akt）、磷酸化蛋白激酶B抗体（p-Akt）、磷脂酰肌醇3-激酶抗体（PI3K）、雷帕霉素靶蛋白抗体（m-TOR）、核因子κB（NF-κB）、白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平。结果 与假手术组相比,IRI组HR、LVDP、±dp/dtmax、LVEDP下降,CK-MB、LDH、Akt、p-Akt、PI3K、m-TOR、NF-κB、IL-6、TNF-α表达水平明显升高,心脏病理结构改变明显。与IRI组相比,SE组HR、LVDP、±dp/dtmax、LVEDP升高,CK-MB、LDH、NF-κB、IL-6、TNF-α表达水平明显降低,Akt、p-Akt、PI3K、m-TOR表达水平明显增加,心脏病理结构改变显著减少。结论 SE对于心脏IRI的保护作用呈现剂量相关性,其作用机制与激活PI3K/m-TOR信号通路,抑制炎症因子释放相关。     

石荠苧总黄酮对博来霉素致大鼠肺纤维化的治疗作用及其机制

目的 观察石荠苧总黄酮（MSF）对博来霉素致大鼠肺纤维化的干预作用,并初步探讨其机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,阳性对照组,MSF低、中、高剂量组,气道注射博来霉素（5 mg·kg^-1）制备大鼠肺纤维化模型。造模14 d后,阳性对照组给予2 mg·kg^-1醋酸泼尼松,MSF低、中、高剂量组分别给予40,80,160 mg·kg^-1,正常组和模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续28 d,于造模42 d后检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、白细胞介素-4（IL-4）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1（TGF-β1）和透明质酸（HA）含量,Masson染色观察纤维化发展情况,免疫组化检测α-肌动蛋白（α-SMA）表达,蛋白印迹检测核因子-κB（NF-κB）、TGF-β1、TNF-α、Smad2/3和pSmad2/3表达情况。结果 与模型组相比,MSF干预后大鼠血清SOD、GSH活性显著增加;IL-4、TNF-α、TGF-β1和HA含量显著降低（P<0.01）;α-SMA表达明显下调,纤维化程度减轻;NF-κB、TNF-α、TGF-β1、Smad2/3和pSmad2/3表达显著降低（P<0.01）。结论 MSF对肺纤维化具有一定的治疗作用,其机制可能与抑制NF-κB和TGF-β1通路信号转导有关。