人视网膜母细胞瘤的细胞凋亡

目的 观察凋亡是否为视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞死亡的主要方式。方法 应用光镜（１６例）、电镜（４例）及ＴＵＮＥＬ标记（１２例）对ＲＢ进行观察研究。结果 光镜下凋亡细胞大多位于退化区。电镜下可见不同凋亡阶段的ＲＢ细胞,占瘤细胞死亡的４２％。ＴＵＮＥＬ标记阳性细胞大多位于肿瘤退化区。凋亡指数（ＡＩ）在未分化型和放疗后的ＲＢ中明显增高（Ｐ〈０．０５）,与视神经受累与否及临床分期无关（Ｐ〉０．０５）。结论 凋亡可能是导致ＲＢ细胞死亡的主要形式,诱导调亡可作为促使ＲＢ退化的一种手段。     

水蛭提取液对恒河猴视网膜血管内皮细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察渗滤法水蛭提取液对恒河猴视网膜血管内皮细胞RF/6A细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用MTT法观察不同浓度水蛭提取液(0g.L-1、8g.L-1、16g.L-1、32g.L-1、64g.L-1、128g.L-1)对RF/6A细胞增殖的影响,筛选最佳抑制浓度,应用流式细胞仪观察水蛭提取液对凝血酶诱导的RF/6A细胞周期的影响。结果8g.L-1、16g.L-1浓度组水蛭提取液对血管内皮细胞RF/6A有促进生长作用,与空白对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);32g.L-1、64g.L-1、128g.L-1浓度组水蛭提取液对血管内皮细胞RF/6A均有明显抑制作用,与空白对照组相比差异也均有统计学意义(均为P<0.05);24hIC50为97g.L-1;64g.L-1为水蛭提取液的最佳抑制浓度,用于后期实验。流式细胞仪检测发现:水蛭提取液组G1期细胞比例(91.95±1.69)%高于其他各组,合药组(83.60±1.88)%高于凝血酶组(77.78±3.22)%,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。凝血酶组S期细胞比例(21.75±2.94)%高于其他各组,水蛭提取液组(7.55±2.45)%...     

人眼视网膜母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的 观察人视网膜母细胞（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ,ＲＢ）标本中细胞凋亡,探讨细胞凋亡在ＲＢ发生发展及消退中的作用。方法 用ＴＵＮＥＬ方法光镜和电镜观察人ＲＢ摘除眼球标本中是否存在细胞凋亡。结果 １５例人ＲＢ分化型和未分化型标本中有９例发现少量凋亡细胞,自发退化型ＲＢ中未发现凋亡细胞。每例中均见成片出现的坏死细胞。结论 视网膜母细胞瘤细胞死亡通过坏死与凋亡２种途径。细胞凋亡是ＲＢ自发退化的机制     

细胞因子诱导人视网膜母细胞瘤细胞凋亡

该研究旨在探讨IFN-λ和TNF-α在人视网膜母细胞瘤(Rb)细胞中的抗增生特性。     

视网膜母细胞瘤瘤细胞对角膜上皮和实南细胞侵袭的研究

目的研究视网膜母细胞瘤瘤细胞对角膜上皮和实质细胞的侵袭能力。方法将视网膜母细胞瘤细胞株ＳＯ－Ｒｂ５０瘤细胞与角膜上皮和实质细胞共同培养，用形态学方法观察其粘附能力，以电镜组织化学方法观察这些细胞表面蛋白聚糖的变化。结果ＳＯ－Ｒｂ５０瘤细胞能粘以角膜的纤维细胞上，呈贴壁生长敏殖，但与角膜上皮不粘附。电镜组织化学方法显示角膜上皮细胞和ＳＯ－Ｒｂ５０瘤细胞表面均有抗透明质酸酶和软骨素裂解酶消化的蛋白聚糖     

白藜芦醇对人视网膜母细胞瘤细胞侵袭能力的影响及机制研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞侵袭能力的影响,探讨Res抑制视网膜母细胞瘤细胞侵袭力的相关机制。方法分别用6.25μmol·L-1、12.50μmol·L-1、25.00μmol·L-1、50.00μmol·L-1、100.00μmol·L-1Res处理视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞,对照组加等量5g·L-1二甲基亚砜,孵育48h后,细胞划痕实验测定细胞迁移抑制率;分别用上述浓度的Res处理视网膜母细胞瘤细胞16h,Transwell小室侵袭实验测定细胞侵袭抑制率;50.00μmol·L-1Res处理细胞48h,采用RT-PCR和Western blotting方法分别测定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)mRNA和蛋白表达。结果 6.25μmol·L-1、12.50μmol·L-1、25.00μmol·L-1、50.00μmol·L-1、100.00μmol·L-1Res可明显抑制视网膜母细胞瘤细胞的迁移和侵袭;与对照组比较,50.00μmol·L-1Res处理细胞48h后,Res处理组MMP-2和MMP-9mRNA[对照组和Res处理组分别为(1.16±0.31、0.98±0.26和0.49±0.09、0.59±0.08)]及蛋白[对照组和Res处理组分别为(0.97±0.24、0.78±0.18和0.46±0.07、0.29±0.06)]的表达和活性均显著下降,TIMP-1和TIMP-2mRNA[对照组和Res处理组分别为(0.35±0.06、0.37±0.07和0.79±0.11、0.93±0.25)]及蛋白表达[对照组和Res处理组分别为(0.36±0.07、0.32±0.06和0.89±0.15、0.78±0.13)]均显著上升(均为P<0.05)。结论 Res通过下调MMP-2和MMP-9及上调TIMP-1和TIMP-2的表达来发挥抑制视网膜母细胞瘤细胞侵袭的作用。     

视网膜母细胞瘤基因对视网膜母细胞瘤移植瘤细胞周期的影响

目的 观察外源性视网膜母细胞瘤基因(Rb基因)对视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)移植瘤细胞周期的影响。 方法 在建立裸鼠眼玻璃体腔RB移植瘤模型及构建Rb基因的逆转录病毒表达载体PBabe-Rb的基础上,用脂质体Dosper介导法将Rb基因导入裸鼠RB移植瘤,流式细胞仪检测RB移植瘤细胞周期变化。 结果 Rb基因在RB移植瘤内的表达使RB移植瘤G₁期细胞数明显增加,DNA指数及S期百分比值有所降低。 结论 外源性Rb基因可部分抑制RB移植瘤细胞周期的进程。（中华眼底病杂志,2000,16：1-70）     

视网膜母细胞瘤分子生物学研究进展

视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,RB)是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤，一直被认为是研究肿瘤遗传学和肿瘤发病机理的理想模式，RB基因是人类第一个被分离的抑癌基因，随着研究的进展，通过对RB发病机理分子生物学深入的理解，将有可能为有效防治疾病提供新的思路。我们着重对RB基因突变的分析，最新的分子生物学检测技术及RB发病机理研究作一综述。     

溪黄草乙素对人视网膜母细胞瘤细胞生长的影响

目的 研究溪黄草乙素对人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)细胞生长的影响.方法 MTT法测定不同浓度(5μmol·L-1、10 μmol·L-1、20 μmol·L-1、40μmol·L-1和80 μmol·L-1)和不同时间(分别作用24 h和48 h)溪黄草乙素对人Rb细胞株增殖的影响;碘化丙啶染色,流式细胞术观察溪黄草乙素对Rb细胞周期及细胞凋亡的影响.结果 溪黄草乙素各个剂量组对Rb细胞的增殖均有显著抑制作用,OD值随溪黄草乙素浓度升高而下降,抑制率随浓度增加而增加.溪黄草乙素对Rb细胞株的IC50为130 μmol·L-1,且随着溪黄草乙素剂量增加对Rb细胞株抑制作用增强.不同剂量组(对照组、5 μmol·L-1组、10 μmol·L-1组、20 μmol·L-1组、40μmol·L-1组、80 μmol·L-1组)溪黄草乙素作用Rb细胞24 h后,细胞凋亡率分别为:(1.07±0.03)%、(5.13±0.82)%、(8.67±1.20)%、(14.39±2.07)%、(26.45±3.01)%、(34.18±1.25)%;作用Rb细胞48 h后,细胞凋亡率分别为:(2.36±0.27)%、(6.49±1.15)%、(11.90±1.54)%、(19.21±2.66)%、(37.10±3.62)%、(47.55±3.19)%.表明溪黄草乙素作用Rb细胞24 h和48 h后Rb细胞的凋亡率在各个剂量组均显著升高,也呈现一定的剂量-效应关系,提示溪黄草乙素对Rb细胞凋亡率的影响随着剂量增加而升高.结论 溪黄草乙素可阻滞细胞进入C2/M期,进而诱导Rb细胞株凋亡.     

一氧化氮在8-Br-cAMP对视网膜母细胞瘤细胞株影响中的作用

目的研究８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人视网膜母细胞瘤ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞作用后产生一氧化氮（ＮＯ）的效应,以探讨ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞分化和凋亡的机制。方法应用原位杂交和 ＲＮＡ斑点印迹技术检测 ＮＯＳ ｍＲＮＡ及 Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ;应用硝酸还原酶法检测ＮＯ的含量;应用蛋白斑点印迹技术检测一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）的酶活性;应用免疫细胞化学及蛋白质斑点印迹技术检测 ＮＳＥ的免疫反应性（ＩＲ）。结果 ＮＯＳ ｍＲＮＡ,ＮＯＳ酶活性,ＮＯ含量和 ＮＳＥ－ＩＲ均为实验组（ＥＧ）强于对照组（ＣＧ）（Ｐ＜０．０１）,而Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ为ＥＧ弱于ＣＧ（Ｐ＜０．０５）,并在ＥＧ标本上可见ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞呈现神经样的突起。结论 ８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可使 ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞生成 ＮＯ增加,促进 ＮＯＳ的酶活性和 ＮＯＳ ｍＲＮＡ的表达,提高ＮＳＥ－ＩＲ,并降低 Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的表达。结果表明,８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ具有促使 ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞向神经细胞分化并诱导该细胞凋亡的效应,提示ＮＯ可能参与此效应。     

蓝萼香茶菜乙素对Rb细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨蓝萼香茶菜乙素对体外培养的人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)细胞的增殖及细胞周期的影响。方法 MTT法测定不同浓度(2.5μmol.L-1、5.0μmol.L-1、10.0μmol.L-1、20.0μmol.L-1和40.0μmol.L-1)的蓝萼香茶菜乙素作用24h及48h后对人Rb细胞株的影响;碘化丙啶染色、流式细胞术观察蓝萼香茶菜乙素对Rb细胞周期及细胞凋亡的影响。结果蓝萼香茶菜乙素不同剂量组对Rb细胞均有显著细胞毒作用。蓝萼香茶菜乙素处理24h和48h后对Rb细胞株的IC50分别为79.15μmol.L-1和10.88μmol.L-1,剂量-效应关系较为明显;对照组和不同药物浓度组(2.5μmol.L-1组、5.0μmol.L-1组、10.0μmol.L-1组、20.0μmol.L-1组、40.0μmol.L-1组)作用Rb细胞24h后,细胞凋亡率分别为:(2.01±0.03)%、(6.21±0.91)%、(10.21±2.06)%、(16.83±2.61)%、(25.17±2.11)%和(35.29±1.04)%;作用48h后,对应细胞凋亡率分别为:(2.41±0.73)%、(7.94±3.01)%、(12.08±2.43)%、(20.11±2.37)%、(35.18±3.48)%和(51.20±2.93)%。这一结果也显示:随着药物浓度增加,Rb细胞凋亡率也随之升高。结论蓝萼香茶菜乙素通过诱导Rb细胞株凋亡发挥抑制人Rb增殖的作用。     

Anti-proliferation and apoptosis-inducing effects of sodium aescinate on retinoblastoma Y79 cells

AIM: To measure the central choroidal thickness (ChT) in children and adolescents with anxiety disorders. METHODS: Totally 41 anxiety patients (8-16y) and 35 healthy controls (age-matched) were evaluated. Complete ophthalmic examination was performed. Inclusion criteria were best corrected visual acuity ≥20/20, normal intraocular pressure (IOP; 10-21 mm Hg), and no systemic or ocular diseases according to history. The diagnosis of psychiatric disorders was determined using Schedule for Affective Disorders and Schizophrenia for School Aged Children Present-Lifetime Version (KSADS-PL). The central ChT was measured using the enhanced depth imaging optical coherence tomography (EDI-OCT). RESULTS: The mean age was 12.18±3.24y in the patient group and 12.86±3.15y in the control group. Age and gender distribution of the two groups was similar. Central ChT mean value was 353.26±31.9 μm in anxiety patients while 318.75±60.9 μm in the control group. Mean central ChT was statistically significantly higher in the children and adolescents with anxiety disorders than healthy controls (P<0.01). CONCLUSION: There is a significant relationship between anxiety disorders and increased central ChT. In the larger sample, longitudinal studies will contribute to the use of choroidal differences as a clinical marker for monitoring anxiety disorders.     

水蛭提取液体外对人视网膜色素上皮细胞PAR-1表达的影响

目的:研究水蛭提取液对人视网膜色素上皮(retinal pigment epichelial,RPE)细胞PAR-1表达的影响。方法:水蛭提取液体外单独或与凝血酶共同作用于人RPE细胞后,用免疫荧光法测定PAR-1的荧光表达。结果:PAR-1的免疫荧光光密度值比较:(1)凝血酶组与正常对照组比较,PAR-1的IOD值下降(1608±675,4036±1134,P<0.01)。(2)单加水蛭提取液组与正常对照组比较,PAR-1的IOD值升高(9998±2374,4036±1134,P<0.01)。(3)凝血酶和水蛭提取液同时加药组与凝血酶组比较,PAR-1的IOD值显著升高(19664±5436,1608±675,P<0.01)。表明水蛭提取液能竞争性抑制凝血酶对PAR-1的活化作用。结论:水蛭提取液能抑制凝血酶诱导的人RPE细胞膜上的PAR-1的活化,阻断PAR-1介导的细胞信号传导。     

8—Br—cAMP对人视网膜母细胞瘤HXO—Rb44细胞癌基因的表达效应

目的 研究８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对培养的人视网膜母细胞瘤ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞癌基因表达的效应及其与该细胞生长的关系。方法 ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ,Ｎ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ及ｐ２１ｒａｓ ｍＲＮＡ均以原位杂交ＲＮＡ斑点印迹技术检测,对繁殖细胞核抗原,ｖ－Ｆｏｓ,Ｎ－Ｍｙｃ和Ｐ＾２１ｒａｓ蛋白表达的免疫反应性则采用免疫组化及收白质斑点印迹技术检测。     

Advances in the research of plant-derived natural products against retinoblastoma

Retinoblastoma (RB) is a highly aggressive ocular tumor, and due to socioeconomic and medical constraints, many children receive treatment only in the metaphase and advanced clinical stages, resulting in high rates of blindness and disability. Although several approaches exist in the treatment of RB, some children with the disease do not have satisfactory results because of various factors. Plant-derived natural products have shown definite therapeutic effects in the treatment of various tumors and are also widely used in the study of RB. We review plant-derived natural products used in the study of anti-RB to provide ideas for the clinical application of these drugs and the development of new therapeutic drugs.     

miR-373在视网膜母细胞瘤Y79细胞中的表达及其抑制侵袭及迁移能力的实验研究

目的　观察miR-373在视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,RB）细胞中的表达及其对RB Y79细胞侵袭及迁移能力的影响和相关机制。方法　采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-373在RB细胞系RB Y79、SO-RB50和人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181中的表达水平,并应用脂质体转染法将miR-373 抑制物（miR-373抑制物组）和阴性对照（NC组）分别转染至Y79细胞,Transwell实验检测Y79细胞侵袭和迁移能力的变化,Western blot检测Y79细胞中上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关标志物E-Cadherin、Vimentin和N-Cadherin蛋白的表达变化。结果　qRT-PCR 结果显示,RB细胞系Y79、SO-RB50中miR-373的相对表达量分别为6.21±0.34、5.40±0.38,明显高于人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181中miR-373的相对表达量（1.02±0.04）（均为P＜0.05）。Transwell实验显示,miR-373抑制物组迁移细胞数（74±13）个,明显低于NC组（180±17）个（P＜0.05）,miR-373抑制物组侵袭细胞数（51±9）个明显低于NC组（113±14）个（P＜0.05）。Western blot结果显示,miR-373抑制物组E-Cadherin蛋白的表达（0.40±0.08）明显高于NC组（0.20±0.06）（P＜0.05）,Vimentin蛋白的表达（0.17±0.06）也明显低于NC组（0.51±0.10）（P＜0.05）,N-Cadherin蛋白的表达（0.12±0.06）也明显低于NC组（0.33±0.08）（P＜0.05）。结论　miR-373在RB细胞中表达异常增高,降低miR-373的表达能够通过调控EMT抑制RB Y79细胞的侵袭和迁移能力,为RB的靶向治疗提供了新的潜在靶点。