miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测人卵巢上皮细胞HOSEpi C以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区(3’-UTR)的野生型(WT)和突变型(mut)荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义(P <0. 05),选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-26b-3p靶向CREB1调控神经胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨miR-26b-3p靶向调控环磷酸腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)表达水平影响胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法 运用RT-qPCR和Western blotting检测不同级别胶质瘤中miR-26b-3p和CREB1的表达情况;生物信息学方法分析miR-26b-3p与CREB1结合的靶向序列。采用双荧光素酶报告基因检测miR-26b-3p对CREB1的靶向调控机制;将胶质瘤U251细胞分为对照组、miR-26b-3p mimic组及miR-26b-3p inhibitor组,采用Western blotting检测CREB1的表达变化,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的影响,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力的影响,采用Transwell检测各组细胞侵袭能力的影响,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡的影响。结果 miR-26b-3p的表达随着胶质瘤级别的增加而降低（P<0.05）,而CREB1的表达则逐渐增加,差异有统计学意义（P<0.05）;双荧光素酶报告基因结果显示miR-26b-3p可显著影响CREB1 3′UTR表达载体的荧光素酶活性,CR...     

长链非编码RNA DLX6-AS1通过靶基因miR-103a-3p调控宫颈癌SiHa细胞的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA DLX6-AS1通过靶基因miR-103a-3p调控宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制.方法 培养正常宫颈细胞Ectl/E6E7和宫颈癌细胞株HeLa、SiHa、C33a、Caski.将SiHa 随机分为对照(NC)组、si-con 组、si-DLX6-ASl 组、P...     

LncRNA CASC7通过调控miR-19b-3p/SMG1轴抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)癌易感性候选基因7(CASC7)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肝癌组织、对应癌旁组织和肝癌细胞系Huh7、HepG2和MHCC97H及正常肝细胞系THLE-2中CASC7、微小RNA-19b-3p(miR-19b-...     

miR-30a-5p靶向URGCP调控胃癌细胞凋亡和糖酵解的机制研究

目的:探究miR-30a-5p通过靶向细胞增殖调控基因4(Up-regulated gene 4/Up-regulator of cell proliferation,URG4/URGCP)对胃癌(Gastric cancer,GC)细胞凋亡和糖酵解的影响,并阐明其潜在调控机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-30a-5p和URGCP在正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和GC细胞(AGS、HGC-27和SGC-7901)中的表达。选用HGC-27细胞作为后续实验研究对象并随机分为六组,除Control组外,其他组细胞分别转染miR-NC、miR-30a-5p mimic、pcDNANC、pcDNA-URGCP和pcDNA-URGCP+miR-30a-5p mimic。CCK-8实验用于检测各组细胞增殖活力,流式细胞术用于检测各组细胞凋亡水平。三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate,ATP)和乳酸检测试剂盒检测各组细胞乳酸生成和ATP水平。此外,双荧光酶素报告实验用于验证miR-30a-5p和URGCP之间的靶向关系。结果:相比较正常胃黏膜上皮细胞...     

circ_0000285通过miR-637/STAT3轴调控宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨circ 0000285对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在分子机制.方法:收集宫颈癌患者的肿瘤组织和癌旁正常组织,qRT-PCR法检测组织中circ_0000285的表达.体外培养宫颈癌细胞OVCAR-3,采用瞬时转染干扰细胞中circ_0000285、miR-637和信号传导与转录激活因子3(STA...     

miR-193a-3p在子宫内膜癌中的表达及临床病理的关系

目的 探究miR-193a-3p在子宫内膜癌组织中相对表达及其对子宫内膜癌细胞株的生物学行为的影响。方法子宫内膜癌、正常子宫内膜组织样本均取自徐州医科大学附属医院2020年7月～2021年4月行手术切除的患者。实时荧光定量PCR(qPCR)检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织样本中miR-193a-3p的表达,分析miR-193a-3p的相对表达量与临床病理之间的关系。此研究选用Ishikawa细胞株作为研究,分为正常组(未作任何处理组)、对照组(转染miR-193a-3p-NC组)和过表达组(转染miR-193a-3p-mimics组),qPCR检测各组细胞miR-193a-3p的表达水平,CCK-8、Transwell小室检测各组处理前后Ishikawa细胞增值、迁移和侵袭差异性。结果 正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织中miR-193a-3p相对表达量分别为1.00,0.50±0.11,子宫内膜癌组织中miR-193a-3p相对表达水平较正常子宫内膜组织明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌组织miR-193a-3p的表达水平与患者临床分期以及是否发生淋巴结转...     

miR-141-3p靶向UNC5C促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 本文旨在探究miR-141-3p对结直肠癌细胞的生物学功能及其影响结直肠癌发展的分子机制。方法 用生信分析法分析结肠癌组织中的差异表达基因;qRT-PCR检测细胞中miR-141-3p和UNC5CmRNA的表达;WB检测各细胞中UNC5C的蛋白表达;通过MTT实验、细胞划痕实验、Transwell实验分别检测各细胞增殖、迁移和侵袭情况。双荧光素酶实验检测miR-141-3p对UNC5C的靶向作用。结果 结肠癌细胞中miR-141-3p高表达;下调miR-141-3p抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭;UNC5C在结肠癌细胞中低表达, miR-141-3p靶向抑制UNC5C的表达;miR-141-3p通过靶向UNC5C促进结肠癌细胞的增殖, 迁移和侵袭。结论 miR-141-3p靶向抑制UNC5C的表达, 为结肠癌患者的治疗提供了新思路。     

miR-27b-3p调控SMAD1对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭作用的影响

目的 寻找并验证miR-27b-3p和SMAD1的关系,探讨miR-27b-3p对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移作用的影响,为骨肉瘤靶向治疗提供理论依据。 方法 采用生物信息学方法预测候选靶基因;应用双荧光素酶报告实验确定miR-27b-3p和SMAD1靶向关系;采用qRT-PCR法选择SAOS-2骨肉瘤细胞系。采用miR-27b-3p转染SAOS-2细胞后,分为miR-27b-3p inhibitor组、空白对照组和阴性对照组。采用MTT、Transwell迁移和侵袭实验检测miR-27b-3p对SAOS-2细胞的影响;采用Western blotting法检测沉默miR-27b-3p后SMAD1的表达量。 结果 生物信息学检测显示,miR-27b-3p与SMAD1-UTR存在结合位点;双荧光素酶报告实验显示,miR-27b-3p inhibitor组SMAD1的表达量高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),SMAD1是miR-27b-3p的靶基因。SAOS-2细胞MTT、Transwell迁移实验和侵袭实验结果均显示,miR-27b-3p inhibitor组与空白对照组和阴性对照组细胞数相比降低,差异有统计学意义(P<0.05),miR-27b-3p inhibitor组细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低。miR-27b-3p inhibitor组与阴性对照组SMAD1蛋白表达量相比明显降低(P<0.05)。 结论 miR-27b-3p可以通过调控SMAD1的表达促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭作用。miR-27b-3p可能在骨肉瘤细胞中起着促癌基因作用。     

miR-140-3p靶向ANK2基因对子宫肌瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨微小RNA-140-3p (miR-140-3p)对子宫肌瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法选取于2016年2月至2018年9月在西安市中医医院行手术治疗的59例子宫肌瘤患者为研究对象,同时期41例因子宫肌瘤切除全子宫的正常子宫肌组织作为对照,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测组织中miR-140-3p和锚蛋白B (ANK2) mRNA表达水平。子宫肌瘤细胞分为miR-140-3p组(转染miR-140-3p模拟物mimics)、miR-NC组(转染mimics阴性对照序列)、si-ANK2组(转染ANK2小干扰RNA)、si-NC组(转染乱序无意义阴性序列)、miR-140-3p+pcDNA-ANK2组(共转染miR-140-3p mimcs与ANK2过表达载体)和miR-140-3p+pcDNA组(共转染miR-140-3p mimcs与空载体)。RT-qPCR和蛋白印迹(Western blot)分别检测miR-140-3p或ANK2蛋白水平验证转染效果,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测各组细胞增殖情况,Transwell检测各组细胞的迁移和侵袭能力,W...     

miR-216a-3p miR-128-3p通过调控RGS17抑制口腔鳞状细胞癌细胞表型恶化的机制研究

目的:观察miR-216a-3p、miR-128-3p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞表型表达的影响,并探究其潜在的作用机制。方法:运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测癌组织、癌旁组织、人正常口腔角质形成细胞(hNOK)、OSCC癌细胞(SCC-9、SCC-25、HN4)中miR-216a-3p、miR-128-3p、G蛋白信号调节器17(RGS17)的表达;脂质体法将mimic-NC组(转染mimic)、mimic-miR-216a-3p组(转染miR-216a-3p mimic)、mimic-miR-128-3p组(转染miR-128-3p mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-RGS17组(转染si-RGS17)、mimic-miR-216a-3p+pcDNA组(共转染miR-216a-3p mimic和pcDNA)、mimic-miR-216a-3p+pcDNA-RGS17组(共转染miR-216a-3p mimic和pcDNA-RGS17)、mimic-miR-128-3p+pcDNA组(共转染miR-128-3p mimic和pcDNA)...     

circFOXK2靶向miR-409-3p调控肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨circFOXK2对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 收集45例肺癌患者的癌组织和癌旁组织,采用qRT-PCR法检测组织中circFOXK2和miR-409-3p表达。体外培养肺癌细胞A549和H1299,双荧光素酶报告基因实验验证circFOXK2和miR-409-3p的调控关系。转染circFOXK2小干扰RNA、miR-409-3p模拟物、或共转染circFOXK2小干扰RNA与miR-409-3p抑制剂至A549和H1299细胞。细胞增殖、迁移和侵袭用CCK-8法、克隆形成实验和Transwell分析。蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 肺癌组织中circFOXK2水平明显上升(P<0.05),而miR-409-3p水平明显下降(P<0.05)。circFOXK2在A549和H1299细胞中靶向结合并负调控miR-409-3p。敲减circFOXK2或过表达miR-409-3p后,肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(均P<0.05),N-cadherin水平降低(P<0.05),而E-...     

miR-199a-3p靶向CD151对甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响

目的 探究miR-199a-3p过表达靶向CD151对甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响。方法 通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-199a-3p和CD151的靶向关系。构建CD151 pcDNA载体过表达CD151,将miR-199a-3p mimic与pcDNA-CD151单独或联合转染至B-CPAP细胞,将细胞随机分为4组：Control组、miR-199a-3p mimic组、pcDNA-CD151组和miR-199a-3p mimic+pcDNA-CD151组。BrdU染色检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;流式分选检测细胞周期分布;Transwell检测细胞侵袭能力;Western blot检测MMP-2、Ki-67、Cyclin D1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果 CD151与miR-199a-3p存在靶向作用关系。与Control组比较,miR-199a-3p mimic组BrdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,G₂/M、G₁期比例降低,S期比例...     

miR-126-3p过表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及作用机制

目的 探究miR-126-3p过表达对宫颈癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法 研究样本为来自北京生物技术有限公司的宫颈癌HeLa细胞,培养后随机分为对照组(n=9)及miR-126-3p过表达组(n=9),对照组细胞正常培养,miR-126-3p过表达组采用miR-126-3p模拟物转染。使用细胞增殖实验检测两组样本细胞活力,使用流式细胞术检测两组细胞周期,使用划痕实验、Wright染色法检测两组细胞迁移量和细胞迁移率,使用蛋白印迹检测两组Bax、Casepase-3、Bcl-2、p85β、p-PDK1、p-AKT蛋白表达,使用DAPI染色观察两组细胞凋亡小体表达。结果 miR-126-3p过表达组miR-126-3p相对表达量比对照组高(3.14±0.28 vs 1.04±0.11,P=0.000),模型构建成功。miR-126-3p过表达组HeLa细胞存活率显著低于对照组(P<0.05)。DAPI染色结果显示,miR-126-3p过表达组细胞显示出凋亡小体,对照组未显示出明显的细胞凋亡。miR-126-3p过表达组G0/G1期细胞占比显著高于对照组,S期细胞占比显著低于...     

lncRNA LINC00339靶向miR-520a-3p对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00339靶向调控miR-520a-3p对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响.方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测卵巢癌细胞系(SKOV3、A2780、OVCAR3、HO-8910)和正常卵巢上皮细胞系(HOSEpiC)中LINC00339和miR-520a-3p...     

miR-10a-5p靶向ITSN1对宫颈癌细胞增殖和顺铂化疗敏感性的影响

目的 探讨miR-10a-5p对宫颈癌细胞增殖及对化疗药物顺铂敏感性的影响及机制.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测23对宫颈癌及配对癌旁组织miR-10a-5p的相对表达水平.利用空载体病毒(阴性对照组)或miR-10a-5p过表达慢病毒(miR-10a-5p过表达组)感染人宫颈癌细胞株Caski,同时设...     

miR-628-3p对胃癌细胞HGC-27增殖和迁移能力的影响

目的 初步探究miR-628-3p对胃癌细胞系HGC-27增殖和迁移能力的影响.方法 qRT-PCR检测人正常胃黏膜细胞GES-1及HGC-27细胞miR-628-3p的表达水平.转染miR-628-3p模拟物后MTT法检测HGC-27细胞增殖,Transwell小室实验检测HGC-27细胞迁移能力,Western b...     

miR-148a-3p抑制NRAS表达调控乳腺癌细胞增殖与凋亡的机制

目的 探讨miR-148a-3p在乳腺癌中的作用及可能的机制.方法 根据人乳腺癌细胞株-7(MCF-7)细胞是否转染及是否存在miR-148a-3p的模拟物分为3个组:未转染组、miR-148a-3p对照组和miR-148a-3p转染组.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测转染后miR-148a-3p在各组的信使RNA(mRNA)水平,运用四唑盐比色法(MTT)比较MCF-7细胞在3组的增殖情况,应用RT-qPCR检测各组神经母细胞瘤病毒性ras致癌因子的同原体(NRAS)的基因水平,应用Western blot检测各组RAS病毒致癌基因同源物NRAS的蛋白水平,应用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-3p与NRAS之间的作用.结果 过表达miR-148a-3p显著抑制乳腺癌细胞株MCF-7的增殖(P＜0.05),促进其凋亡(P＜0.05),降低NRAS基因和蛋白的表达(P＜0.05),双荧光素酶报告基因实验证明NRAS是miR-148a-3p的直接作用靶点.结论 miR-148a-3p可能通过靶向NRAS抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,促进细胞凋亡.