右美托咪定激活Akt通路对缺氧复氧肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 观察右美托咪定对缺氧复氧诱导肾小管上皮细胞凋亡的作用,并探讨其作用机制。方法 将人肾小管上皮细胞分五组干预：对照组(C组),常氧环境中培养28 h;缺氧复氧组(HR组),低氧环境中培养24 h后常氧环境中培养4 h;右美托咪定处理组(D组),复制缺氧复氧模型前以右美托咪定处理2 h;Akt阻断剂Uprosertib处理组(U组),复制缺氧复氧模型前以Akt阻断剂Uprosertib处理1 h;右美托咪定复合Akt阻断剂Uprosertib处理组(DU组),复制缺氧复氧模型前先以Akt阻断剂Uprosertib处理1 h,再以右美托咪定处理2 h。采用Ellsa法检测细胞上清中TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、p-Akt蛋白含量。结果 与C组比较,HR组、D组、U组和DU组TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度、细胞凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白含量明显升高(P<0.05),细胞存活率、Bcl-2、p-Akt蛋白含量明显降低(P<0.05)。与HR组比较,D组和DU组TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度、细胞凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白含量明显降低(P<0.05),细胞存活率、Bcl-2、p-Akt蛋白含量明显升高(P<0.05);U组TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度、细胞凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白含量明显升高(P<0.05),细胞存活率、Bcl-2、p-Akt蛋白含量明显降低(P<0.05)。与D组比较,U组和DU组TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度、细胞凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白含量明显升高(P<0.05),细胞存活率、Bcl-2、p-Akt蛋白含量明显降低(P<0.05)。与U组比较,DU组TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度、细胞凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白含量明显降低(P<0.05),细胞存活率、Bcl-2、p-Akt蛋白含量明显升高(P<0.05)。结论 右美托咪定可通过激活Akt信号通路,抑制缺氧复氧造成的肾小管上皮细胞凋亡,发挥保护作用。     

铁死亡抑制剂Ferrostatin-1在心肺转流大鼠认知功能中的作用

目的 探讨铁死亡抑制剂Ferrostatin-1在心肺转流（CPB）大鼠认知功能中的作用。

方法 选择SPF级健康雄性SD大鼠24只,12周龄,体重350～400 g。采用随机数字表法将大鼠分为三组：假手术组（S组）、CPB组（C组）和CPB＋Ferrostatin-1组（F组）,每组8只。S组行股动静脉及颈内静脉穿刺置管,不进行CPB;C组穿刺置管后行CPB 60 min;F组术前腹腔注射Ferrostatin-1 5 mg/kg,60 min后穿刺置管并行CPB 60 min。于术后第3天行水迷宫实验,记录潜伏期和穿越平台次数。处死大鼠,采用ELISA法检测海马组织活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）浓度,亚铁嗪比色法检测海马组织Fe²⁺浓度,Western blot法检测海马组织τau蛋白、β-淀粉样蛋白（Aβ）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）蛋白含量,HE染色观察海马组织锥体细胞病理变化,透射电镜观察海马组织锥体细胞线粒体结构。

结果 与S组比较,C组和F组潜伏期明显延长（P＜0.05）,穿越原平台次数明显减少（P＜0.05）,海马组织ROS、MDA、Fe²⁺浓度、τau蛋白和Aβ蛋白含量明显升高（P＜0.05）,GSH浓度和GPX4蛋白含量明显降低（P＜0.05）,海马组织锥体细胞核固缩,线粒体损伤加重。与C组比较,F组潜伏期明显缩短（P＜0.05）,穿越原平台次数明显增多（P＜0.05）,海马组织ROS、MDA、Fe²⁺浓度、τau蛋白和Aβ蛋白含量明显降低（P＜0.05）,GSH浓度和GPX4蛋白含量明显升高（P＜0.05）,海马组织锥体细胞病理结构和线粒体损伤减轻。

结论 CPB诱导大鼠海马组织神经元发生铁死亡,诱发大鼠术后认知功能障碍,Ferrostatin-1通过抑制铁死亡降低大鼠海马组织ROS、MDA、Fe²⁺浓度和τau、Aβ蛋白含量,改善CPB大鼠的术后认知功能。     

PI3K/Akt信号通路在富氢水减轻心肺转流致大鼠心肌损伤中的作用

目的 评价磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路在富氢水（HRS）减轻心肺转流（CPB）致大鼠心肌损伤中的作用。
方法 清洁级成年雄性SD大鼠40只,10～12周龄,体重350～400 g。采用随机数字表法分为四组：假手术组（S组）、CPB组（C组）、HRS处理组（H组）和PI3K抑制剂组（P组）,每组10只。S组仅进行血管穿刺置管,置管后通过尾静脉注射生理盐水6 ml/kg,机械通气90 min,其余各组建立无血预充心脏不停跳CPB模型,CPB 60 min。CPB前60 min,P组通过腹腔内注射PI3K抑制剂6 ml/kg（LY294002,5 μg/ml）。CPB前30 min,C组通过尾静脉注射生理盐水6 ml/kg,H组和P组通过尾静脉注射HRS 6 ml/kg。四组均于CPB停机2 h后取相应标本进行检测。采用Masson染色法观察心肌组织形态学变化;测定大鼠心肌含水量;采用ELISA法测定血浆心肌损伤标记物 [心肌肌钙蛋白I（cTnI）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）]和炎性因子[白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]以及心肌组织氧化应激指标[丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）、氧化物歧化酶（SOD）]浓度;采用Western blot法检测心肌组织凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关x蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）]及PI3K信号通路相关蛋白 [PI3K、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、血红素加氧酶-1（HO-1）]含量。
结果 S组心肌组织结构基本正常,C组心肌纤维化且明显损伤,H组心肌纤维损伤得到改善。与H组比较较,P组大鼠心肌损伤程度较为严重。与S组比较,C组、H组和P组心肌含水量、血浆cTnI、LDH、CK-MB和IL-1β、IL-6、TNF-α浓度、心肌组织MDA、MPO浓度、Bax、caspase-3蛋白含量明显升高（P<0.05）,SOD浓度、Bcl-2和PI3K、p-Akt、HO-1蛋白含量明显降低（P<0.05）。与C组比较,H组心肌含水量、血浆cTnI、LDH、CK-MB和IL-1β、IL-6、TNF-α浓度、心肌组织MDA、MPO浓度、心肌组织Bax、caspase-3蛋白含量明显降低（P<0.05）,心肌组织SOD浓度、Bcl-2和PI3K、p-Akt、HO-1蛋白含量明显升高（P<0.05）。与H组比较,P组心肌含水量、血浆cTnI、LDH、CK-MB和IL-1β、IL-6、TNF-α浓度、心肌组织MDA、MPO浓度、心肌组织Bax、caspase-3蛋白含量明显升高（P<0.05）,心肌组织SOD浓度、心肌组织Bcl-2和PI3K、p-Akt、HO-1蛋白含量明显降低（P<0.05）。C组和P组上述指标差异无统计学意义。
结论 HRS减轻CPB致大鼠心肌损伤的机制与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

氢吗啡酮预处理对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的影响

目的观察氢吗啡酮预处理对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的影响,并探讨其作用机制。方法SPF级SD大鼠48只,随机分为假手术组(C组)、缺血-再灌注组(IR组)、氢吗啡酮组(H组)和吗啡组(M组),每组12只。采用前房加压灌注的方法制备视网膜缺血-再灌注损伤模型。于缺血前15 min,H组颈内静脉注射氢吗啡酮0.1mg/kg,M组注射吗啡1mg/kg,C组和IR组注射等容量生理盐水。再灌注24 h后,取大鼠视网膜组织,采用HE染色法观察病理学变化,测定视网膜内层厚度及全层厚度;采用TUNEL法计算细胞凋亡指数(AI);采用免疫组化法检测Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白含量;采用ELISA法检测TNF-α、IL-6浓度;采用硫代巴比妥酸及黄嘌呤氧化酶法分别检测MDA浓度和SOD活性。结果与C组比较,IR组视网膜出现病理学损伤,AI明显升高(P<0.05);Bax、caspase-3蛋白含量明显升高,Bcl-2蛋白含量和Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.05);TNF-α、IL-6和MDA浓度明显升高(P<0.05),SOD活性明显减弱(P<0.05)。与IR组比较,H组和M组视网膜组织病理学损伤明显减轻,AI明显降低(P<0.05);Bax、caspase-3蛋白含量明显降低,Bcl-2蛋白含量明显升高,Bcl-2/Bax比值明显升高(P<0.05);TNF-α、IL-6和MDA浓度明显降低,SOD活性明显增强(P<0.05)。结论氢吗啡酮可减轻大鼠视网膜缺血-再灌注损伤,其机制可能与改善视网膜细胞凋亡、炎症反应及氧化应激相关。     

不同剂量右美托咪定对创伤性脑损伤大鼠神经炎症反应及神经营养因子的影响

目的 探讨不同剂量右美托咪定对创伤性脑损伤（TBI）大鼠神经炎症反应及神经营养因子的影响。
方法 健康清洁级成年雄性SD大鼠75只,10～12周龄,体重220～250 g。采用随机数字表法将大鼠随机分为五组：假手术组（S组）、TBI组（T组）、右美托咪定25 μg/kg组（D25组）、右美托咪定50 μg/kg组（D50组）和右美托咪定100 μg/kg组（D100组）,每组15只。S组仅行头皮切开钻孔手术,T组采用Feeney自由落体法建立TBI模型,D25组、D50组、D100组分别于TBI模型建立后立即腹腔注射右美托咪定25、50、100 μg/kg。采用改良神经功能缺损评分（mNSS）评估建模后12、24、48、72 h的神经功能,干/湿比重法检测脑组织含水量,Western blot法检测脑组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β （IL-1β）及白细胞介素-6(IL-6)蛋白含量,免疫组织化学染色法观察脑组织皮层区脑源性生长因子（BDNF）、神经生长因子（NGF）表达情况。
结果 与S组比较,T组不同时点mNSS明显升高（P<0.05）,脑组织含水量明显增多（P<0.05）,脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白含量明显升高（P<0.05）,脑组织皮层区BDNF、NGF表达及阳性细胞数明显增多（P<0.05）。与T组比较,D25组、D50组、D100组mNSS明显降低（P<0.05）,脑组织含水量明显减少（P<0.05）,脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白含量明显降低（P<0.05）,脑组织皮层区BDNF、NGF表达及阳性细胞数明显增多（P<0.05）。与D25组比较,D50组不同时点mNSS明显降低（P<0.05）,脑组织含水量明显减少（P<0.05）,脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白含量明显降低（P<0.05）,脑组织皮层区BDNF、NGF表达及阳性细胞数明显增多（P<0.05）。D25组、D100组各指标差异无统计学意义。
结论 相对于右美托咪定25和100 μg/kg,右美托咪定50 μg/kg腹腔注射可明显改善脑水肿,减轻神经炎症反应,增加TBI后皮层神经营养因子表达水平,缓解神经功能障碍。     

糖原合成酶激酶3β在糖尿病减弱七氟醚后处理心肌保护中的作用

目的 通过糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的过表达,探讨其在糖尿病减弱七氟醚后处理心肌保护中的作用。
方法 2月龄健康清洁级雄性SD大鼠60只,体重200～300 g,采用随机对照法分为五组: 假手术组(Sham组)、正常大鼠IR组(NI组)、正常大鼠IR+七氟醚后处理组(NS组)、糖尿病大鼠缺血-再灌注(IR)+七氟醚后处理组(DS组)、正常大鼠GSK-3β过表达+IR+七氟醚后处理组(GS组),每组12只。采用腹腔单次注射链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg的
方法 制备糖尿病大鼠模型。采用左开胸心脏左前降支冠状动脉结扎30 min后再灌注120 min的
方法 制备IR模型。采用在IR模型构建前2周经尾静脉注射包装有GSK-3β突变型基因的腺相关病毒(AAV9型)
方法 处理构建GSK-3β过表达。观察大鼠IR模型制备过程中是否有心肌缺血的ECG表现(ST段抬高,出现宽大Q波及心律失常等),120 min后经腹主动脉取血,检测肌钙蛋白I(cTnI)浓度;处死大鼠取心脏,计算心肌梗死体积;光镜下观察心肌病理学损伤;采用Western blot法测定心肌GSK-3β和caspase-3含量。
结果 与Sham组比较,NI组、NS组、DS组、GS组cTnI浓度明显升高,梗死体积明显增大,病理损伤加重,GSK-3β和caspase-3含量明显升高(P<0.05);与NI组比较,NS组cTnI浓度明显降低,梗死体积明显减小,病理损伤减轻,GSK-3β和caspase-3含量明显降低(P<0.05);与NS组比较,DS组、GS组cTnI浓度明显升高,梗死体积明显增大,病理损伤加重,GSK-3β和caspase-3含量明显升高(P<0.05);DS组和GS组cTnI浓度、心肌梗死体积、GSK-3β和caspase-3含量差异无统计学意义。
结论 GSK-3β过表达可加重大鼠心肌IR损伤,七氟醚后处理对糖尿病大鼠心肌IR时的保护作用减弱可能是通过GSK途径导致的。     

右美托咪定对脓毒症小鼠急性肾损伤的影响

目的 探讨右美托咪定对脓毒症小鼠急性肾损伤的影响及与肾脏细胞焦亡的关系。
方法 健康清洁级ICR小鼠32只,雌雄各半,8~12周龄,体重20~25 g。采用随机数字表法将小鼠分为四组：对照组（C组）、脂多糖（LPS）组（L组）、LPS+右美托咪定组（LD组）和LPS+右美托咪定+阿替美唑组（LT组）,每组8只。L组、LD组和LT组腹腔注射LPS 400 μg/kg,8 h后腹腔注射LPS 10 mg/kg建立脓毒症急性肾损伤模型。L组于建模即刻、建模后0.5、2、2.5、4、4.5 h腹腔注射生理盐水0.5 ml;LD组于建模即刻、建模后2、4 h腹腔注射生理盐水0.5 ml,于建模后0.5、2.5、4.5 h分别腹腔注射右美托咪定40 μg/kg;LT组于建模即刻、建模后2、4 h腹腔注射阿替美唑750 μg/kg,于建模后0.5、2.5、4.5 h分别腹腔注射右美托咪定40 μg/kg;C组在各时点腹腔注射等量生理盐水。所有小鼠于建模后24 h麻醉处死。采用全自动生化分析仪检测血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）浓度,化学发光法测量肾皮质细胞三磷酸腺苷(ATP)和血清ATP浓度,ELISA法检测肾组织IL-1β和IL-18浓度,qRT-PCR法检测肾组织caspase-11、泛连接蛋白1（pannexin-1）、P2X7 mRNA表达量,Western blot法检测肾组织caspase-11、pannexin-1、P2X7蛋白含量,HE染色法观察肾组织病理结构,TUNEL染色记录肾小管上皮细胞凋亡细胞数并计算细胞凋亡率。
结果 与C组比较,L组、LD组和LT组血清BUN、Scr、ATP浓度均明显升高（P<0.05）,肾皮质细胞ATP浓度明显降低（P<0.05）,肾组织IL-1β和IL-18浓度、肾组织caspase-11、pannexin-1、P2X7 mRNA表达量及蛋白含量均明显升高（P<0.05）,肾小管上皮细胞凋亡率明显升高（P<0.05）。与L组比较,LD组血清Scr、BUN、ATP浓度均明显降低（P<0.05）,肾皮质细胞ATP浓度明显升高（P<0.05）,肾组织IL-1β浓度、肾组织caspase-11、pannexin-1 mRNA表达量均明显降低（P<0.05）,肾小管上皮细胞凋亡率明显降低（P<0.05）;LD组和LT组肾组织IL-18浓度、肾组织caspase-11、pannexin-1蛋白含量、肾组织P2X7 mRNA表达量及蛋白含量均明显降低（P<0.05）。与LD组比较,LT组血清BUN、Scr、ATP浓度均明显升高（P<0.05）,肾皮质细胞ATP浓度明显降低（P<0.05）,肾组织IL-1β和IL-18浓度、肾组织caspase-11、pannexin-1、P2X7 mRNA表达量及蛋白含量均明显升高（P<0.05）,肾小管上皮细胞凋亡率明显升高（P<0.05）。
结论 右美托咪定减轻了LPS导致的脓毒症小鼠肾脏病理学损伤,降低肾组织IL-1β和IL-18浓度,降低肾小管上皮细胞凋亡率,可能通过非经典途径减轻了肾脏细胞焦亡。     

睡眠剥夺对小鼠大肠组织炎症反应和氧化应激的影响

目的 探讨睡眠剥夺对小鼠大肠组织炎症反应和氧化应激的影响。
方法 选择SPF级雄性C57小鼠32只,8～12周龄,体重18～22 g。采用随机数字表法分为四组：空白对照组（C组）、切口组（I组）、睡眠剥夺组（A组）和睡眠剥夺+切口组（AI组）,每组8只。C组正常饲养,I组建立切口模型,A组使用睡眠剥夺箱睡眠剥夺48 h,AI组使用睡眠剥夺箱睡眠剥夺48 h后建立切口模型。取小鼠大肠组织,采用Western blot法检测白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2（NOX2）和超氧化物歧化酶2（SOD2）蛋白含量,超氧化物阴离子荧光探针法检测活性氧（ROS）荧光强度,免疫荧光染色法检测NOX2荧光强度。
结果 与C组比较,I组、A组和AI组大肠组织IL-1β、TNF-α和NOX2蛋白含量明显升高（P<0.05）,SOD2蛋白含量明显降低（P<0.05）,ROS和NOX2荧光强度明显增强（P<0.05）。与I组比较,A组和AI组大肠组织IL-1β、TNF-α和NOX2蛋白含量明显升高（P<0.05）,AI组大肠组织SOD2蛋白含量明显降低（P<0.05）,ROS和NOX2荧光强度明显增强（P<0.05）。与A组比较,AI组大肠组织IL-1β、TNF-α和NOX2蛋白含量明显升高（P<0.05）,SOD2蛋白含量明显降低（P<0.05）,ROS和NOX2荧光强度明显增强（P<0.05）。
结论 睡眠剥夺会引起小鼠大肠组织炎症反应和氧化应激,睡眠剥夺下行切口手术会进一步加重炎症反应与氧化应激。     

海马程序性坏死在心肺转流诱发大鼠认知功能障碍中的作用

目的 探讨海马程序性坏死在心肺转流（CPB）诱发大鼠认知功能障碍中的作用。
方法 选取健康雄性SD大鼠45只，6月龄，体重400～450 g，采用随机数字表法将大鼠分为三组：对照组（C组）、CPB组和CPB+程序性坏死抑制剂Nec-1组（N组），每组15只。建立CPB模型前，N组腹腔注射Nec-1 6.25 mg/kg，C组和CPB组腹腔注射等容量生理盐水。CPB组和N组建立无血预充心脏不停跳CPB模型60 min。于CPB结束后2 d采用旷场试验评估自主运动能力。于CPB结束后3 d采用Morris水迷宫实验评估认知功能。水迷宫实验结束后处死大鼠，分离海马组织，采用流式细胞术检测海马神经元程序性坏死数量，采用Western blot法检测p-RIP1、p-RIP3和p-MLKL蛋白含量，通过透射电镜观察海马神经元的超微结构。
结果 三组旷场试验运动速度、路程及中心停留时间差异无统计学意义。与C组比较，CPB组和N组逃避潜伏期明显延长，穿越原平台次数明显减少，原平台象限停留时间明显缩短，海马神经元程序性坏死率明显升高，p-RIP1、p-RIP3和p-MLKL蛋白含量明显升高（P<0.05），海马神经元细胞器肿胀，溶酶体破裂，部分细胞核发生染色质溶解。与CPB组比较，N组逃避潜伏期明显缩短，穿越原平台次数明显增多，原平台象限停留时间明显延长（P<0.05），海马神经元程序性坏死率明显降低（P<0.05），p-RIP1、p-RIP3和p-MLKL蛋白含量明显降低（P<0.05），海马神经元细胞器肿胀程度、溶酶体破裂程度及细胞核染色质溶解程度明显减轻。
结论 心肺转流可能通过增加海马程序性坏死程度诱发大鼠认知功能障碍。     

膜联蛋白A1拟肽Ac2-26对心肺转流大鼠肺损伤的影响

目的 通过观察Ac2-26对心肺转流(CPB)大鼠肺功能、肺组织结构及丝裂原活化蛋白激酶p38/细胞核因子-κB（p38MAPK/NF-κB）表达影响。
方法 选择成年健康SD雄性大鼠18只,体重350～450 g。随机分成三组：假手术组（S组）、缺血-再灌注组（IR组）和膜联蛋白A1（AnxA1）拟肽Ac2-26组（AC组）,每组6只。S组做穿刺及开胸处理,不建立CPB;IR组建立CPB,10 min后开胸夹闭左肺门;AC组建立CPB,在CPB前10 min给予Ac2-26 1 mg/kg,10 min后开胸夹闭左肺门。分别在CPB前、开放左肺门时、停CPB 90 min时,记录大鼠HR、MAP,并取动脉血行血气分析,计算氧合指数（OI）、呼吸指数（RI）。停CPB 90 min时用ELISA法检测左肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-10（IL-10）、支气管液肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-6（IL-6）和总蛋白含量,采用Western-blot法检测肺组织丝裂原活化蛋白激酶p38（p38MAPK）、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38（p-p38MAPK）、核因子-κBp65（NF-κBp65）、磷酸化核因子-κBp65（p-NF-κBp65）和AnxA1含量,取左肺组织行光镜检查和病理损伤评分。
结果 与S组比较,开放左肺门时、停CPB 90 min时IR组和AC组HR明显减慢,MAP、OI明显降低,RI明显升高（P<0.05）,停CPB 90 min时IR组和AC组TNF-α、IL-10、IL-6、总蛋白、p-p38MAPK、p-NF-κBp65、AnxA1含量明显升高（P<0.05）,病理损伤评分明显升高（P<0.05）。与IR组比较,停CPB 90 min时AC组HR明显增快,OI明显升高,RI明显降低（P<0.05）,TNF-α、IL-6、总蛋白、p-p38MAPK、p-NF-κBp65、AnxA1含量明显降低（P<0.05）,IL-10明显升高（P<0.05）,病理损伤评分明显降低（P<0.05）。
结论 膜联蛋白A1拟肽Ac2-26可抑制大鼠CPB后肺组织丝裂原活化蛋白激酶p38的活化,抑制核因子-κB的分泌,降低TNF-α和IL-6的含量,增加IL-10含量,减轻其肺损伤程度,减少炎性渗出,改善肺功能。     

丹酚酸A复合右美托咪定对脑缺血-再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨丹酚酸A复合右美托咪定对脑缺血-再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡及Sirt1-p53通路的影响。方法选择SD大鼠90只,体重160~230 g,随机分为五组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)、丹酚酸A干预组(A组)、右美托咪定干预组(D组)、丹酚酸A复合右美托咪定干预组(AD组),每组18只。采用线栓法建立大脑中动脉缺血-再灌注损伤模型。脑缺血-再灌注24 h后,检测大鼠血流动力学情况,Morris水迷宫实验观察第1、2、3、4、5天逃避潜伏期、穿越平台次数,评估神经功能缺损评分。采用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫化巴比妥酸法测定MDA含量,免疫组织化学法检测海马组织Bcl-2和Bax蛋白含量,Western blot法检测海马组织Sirt1和乙酰化p53蛋白含量。结果与S组比较,IR组、A组、D组和AD组第1、2、3、4、5天逃避潜伏期明显延长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.05),HR明显减慢(P<0.05),MAP、CO明显降低(P<0.05),神经功能缺损评分明显升高(P<0.05),海马组织凋亡细胞百分比、MDA含量、Bax和乙酰化p53蛋白含量明显升高(P<0.05),海马组织SOD活力、Bcl-2和Sirt1蛋白含量明显降低(P<0.05)。与IR组比较,A组、D组和AD组第1、2、3、4、5天逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),穿越平台次数明显增多(P<0.05),HR明显增快(P<0.05),MAP、CO明显升高(P<0.05),神经功能缺损评分明显降低(P<0.05),海马组织凋亡细胞百分比、MDA含量、Bax和乙酰化p53蛋白含量明显降低(P<0.05),海马组织SOD活力、Bcl-2和Sirt1蛋白含量明显升高(P<0.05)。与A组、D组比较,AD组第1、2、3、4、5天逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),穿越平台次数明显增多(P<0.05),HR明显增快(P<0.05),MAP、CO明显升高(P<0.05),神经功能缺损评分明显降低(P<0.05),海马组织细胞凋亡百分比、MDA含量、Bax和乙酰化p53蛋白含量明显降低(P<0.05),海马组织SOD活力、Bcl-2和Sirt1蛋白含量明显升高(P<0.05)。结论丹酚酸A复合右美托咪定可显著降低脑缺血-再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡,其作用可能与Sirt1-p53通路有关。     

丙泊酚降低高糖环境下H9C2心肌细胞缺氧后的损伤

目的探讨小窝蛋白3(Cav-3)在丙泊酚降低高糖环境下H9C2心肌细胞缺氧后损伤中的作用。方法培养大鼠原代H9C2心肌细胞,构建细胞缺氧-复氧模型。将心肌细胞分为六组:正常培养组(NC组)、高糖培养组(HG组)、高糖缺氧-复氧组(HR组)、丙泊酚处理组(P组)、Cav-3抑制剂组(PI组)和DMSO溶剂组(D组)。比较六组心肌细胞损伤程度、氧化应激反应、线粒体功能、Cav-3蛋白含量、蛋白激酶B(AKT)及信号传导及转录激活因子3(STAT3)活化情况。结果与HR组比较,P组细胞活力、总SOD(T-SOD)活性、线粒体活力、ATP含量、Cav-3蛋白含量、AKT及STAT3活化明显增加,LDH、CK-MB活性、cTnI含量、Bcl-2相关X蛋白(Bax)与B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)比值(Bax/Bcl-2)明显下降,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase 3)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-9(caspase-9)蛋白含量、MDA浓度、JC-1染色的荧光绿红比明显降低,DCF-DA荧光阳性细胞数、MPTP开放明显减少(P0.05);与P组比较,PI组和D100组细胞活力、T-SOD活性、线粒体活力、ATP含量、Cav-3蛋白含量明显降低,AKT及STAT3活化明显减少(P0.05),LDH、CK-MB活性、cTnI含量、Bax/Bcl-2值、caspase-3及caspase-9蛋白含量、MDA浓度、JC-1染色的荧光绿红比明显升高,DCF-DA荧光阳性细胞数、MPTP开放明显增加(P0.05)。结论丙泊酚通过上调Cav-3减少高糖环境下H9C2心肌细胞的缺氧后线粒体的损伤及细胞的死亡。     

黄连素在脊髓损伤中对线粒体的保护作用及机制

目的探讨黄连素对脊髓损伤(SCI)后线粒体氧化损伤的作用和可能机制。方法将36只C57小鼠随机分为假手术组、SCI组(伤后立即腹腔注射10 mg/kg生理盐水)和黄连素组(SCI后立即腹腔注射10 mg/kg黄连素),每组12只。使用PSI-IH脊髓打击器建立小鼠SCI模型,于损伤后24 h处死小鼠,取脊髓组织。使用全自动酶标仪检测各组小鼠脊髓组织线粒体内丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)的变化;用蛋白质印迹法检测脊髓组织caspase-3、cleaved caspase-3的表达及细胞质内和线粒体内细胞色素C(Cyt C)的表达;用免疫荧光双标染色法检测脊髓组织中神经细胞凋亡情况。结果与假手术组相比,SCI组小鼠脊髓组织线粒体内MDA水平升高,GSH、SOD水平降低;细胞质内Cyt C和脊髓组织中caspase-3、cleaved caspase-3表达水平增高,线粒体内Cyt C表达水平降低;脊髓组织中神经元凋亡比例增高;差异均有统计学意义(P 0.05)。与SCI组相比,黄连素组小鼠脊髓组织线粒体内MDA水平降低,SOD和GSH水平增高;细胞质内Cyt C和脊髓组织中caspase-3、cleaved caspase-3表达水平降低,线粒体内Cyt C表达水平增高;脊髓组织中神经细胞凋亡比例减少;差异均有统计学意义(P 0.05)。结论黄连素可减轻SCI小鼠脊髓组织中神经细胞凋亡,这可能与其抑制线粒体氧化损伤、减少Cyt C释放、降低凋亡蛋白表达有关。     

右美托咪定对大鼠离体肺缺血-再灌注损伤时RIP K3/MLKL介导程序性坏死的影响

目的评价右美托咪定对大鼠离体肺缺血-再灌注损伤(LIRI)时受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)/混合系列蛋白酶样结构域(MLKL)介导的肺组织细胞程序性坏死的影响。方法成年雄性SD大鼠72只,采用随机数字表法随机分成三组(n=24):缺血-再灌注损伤组(IR组)、右美托咪定组(DEX组)和对照组(C组)。IR组采用IL-2型离体肺灌流系统建立大鼠离体LIRI模型; DEX组在复灌开始时于灌流液中加入右美托咪定10 nmol/L;C组只通气和灌流。测定大鼠肺组织湿/干重比(W/D),光镜下观察肺组织病理学并测定肺泡损伤率(IAR)。测定灌流液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。Western blot法分别检测肺组织中RIPK3和MLKL蛋白含量。结果与C组比较,IR组和DEX组肺组织W/D、IAR和灌流液中MDA含量均明显升高(P0.05),而灌流液中SOD活性均明显降低(P0.05)。与IR组比较,DEX组肺组织W/D、IAR和灌流液中MDA含量均明显降低(P0.05),而灌流液中SOD活性明显升高(P0.05)。光镜显示IR组肺组织形态学结构发生明显损伤,而DEX组则明显减轻。与C组比较,IR组和DEX组肺组织RIPK3和MLKL蛋白含量均明显升高(P0.05);与IR组比较,DEX组肺组织RIPK3和MLKL蛋白含量均明显降低(P0.05)。结论右美托咪定可通过抑制RIPK3/MLKL介导的肺组织细胞程序性坏死来减轻大鼠离体肺缺血-再灌注损伤。     

齐墩果酸预先给药对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨齐墩果酸预先给药对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠128只,体重230～250 g,随机分为4组(n=32):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、羧甲基纤维素钠组(CMC组)和齐墩果酸预处理组(OA组).OA组胃内灌注齐墩果酸混悬液100 mg/kg,CMC组以相同容积的0.5%羧甲基纤维素钠溶液、S组与IR组以相同容积的饮用水替代,每天1次,连续7 d,第8天时IR组、CMC组和OA组采用阻断门静脉及肝动脉分支60 min后再灌注的方法制备肝脏缺血再灌注模型,S组仅分离胆管及门静脉、肝动脉分支.于再灌注即刻、3、6和12 h时取下腔静脉血样,测定血清ALT活性;取左肝中叶组织,测定SOD活性、MDA和谷胱甘肽(GSH)含量和磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)、p-Akt、Bcl-2、Bax、p-Bad和Bad的表达水平,观察肝组织病理学结果.结果 与S组比较,IR组、CMC组和OA组再灌注期间血清ALT活性和肝组织MDA含量升高,肝组织SOD活性和GSH含量降低,p-PI3K、p-Akt、Bax、Bad、p-Bad表达上调,Bcl-2表达下调(P＜0.05);与IR组比较,OA组再灌注期间血清ALT活性和肝组织MDA含量降低,肝组织SOD活性和GSH含量升高,p-PIK、p-Akt、Bcl-2和p-Bad表达上调,Bad和Bax表达下调(P＜0.05),CMC组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与CMC组比较,OA组再灌注期间血清ALT活性和肝组织MDA含量降低,肝组织SOD活性和GSH含量升高,p-PI3K、p-Akt、Bcl-2和p-Bad表达上调,Bad和Bax表达下调(P＜0.05).OA组肝组织病理学损伤较IR组减轻.结论 齐墩果酸预先给药可减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路,抑制细胞凋亡有关.     

Contrast induces kidney epithelial cell apoptosis through NRLP3 inflammasome pathway

Objective To investigate the effect of pyrin domain 3 (NLRP3) inflammasome in the process of contrast induced human kidney cell apoptosis. Methods Human kidney 2 (HK-2) cells were cultured in DMEM-F12 medium with 5% FBS. Cells were divided into control group, Contrast group (O group), NLRP3-siRNA+Iohexol group (si-NLRP3+O group), ASC-siRNA+Iohexol group (si-ASC+O group), and mannitol group (M group). Different concentrations of hypotonic contrast agent were added to HK-2 cell culture plates for 24, 48 and 72 h. Flow cytometry was used to detect apoptosis. NLRP3 and ASC mRNA expressions were detected by RT-PCR. The expressions of NLRP3, ASC, caspase-8/cleaved caspase-8, Bcl-2/Bax, caspase-1/cleaved caspase-1, and caspase-3/cleaved caspase-3 protein were detected by Western blot. The levels of interleukin (IL) 1β and IL-18 in supernatant were detected by ELISA. Results Compared with the control group, the rate of apoptotic cells, as well as the expressions of NLRP3, ASC and cleaved caspase-1 proteins were increased in HK-2 cells of contrast group. The expressions of NLRP3 and ASC mRNA in the contrast group also increased, so did IL-1β and IL-18 levels (all P＜0.05), suggesting that NLRP3 inflammasome in HK-2 cells was activated by contrast. Compared with the control group, the expressions of cleaved caspase-8, Bax and cleaved caspase-3 protein were increased, and the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 was decreased (all P＜0.05). Compared with the contrast group, the rate of apoptotic cells in the si-NLRP3+contrast group and si-ASC+contrast group was significantly decreased; the expression of cleaved caspase-1 was decreased; the expressions of Bax and cleaved caspase-3 were decreased, and Bcl-2 level was increased. The expressions of IL-1β and IL-18 in the supernatant of cells were decreased (all P＜0.05). Conclusion Contrast agent can activate the NLRP3 pathway in HK-2 cells and induce apoptosis, which could be reduced by blocking the NLRP3 pathway.     

Rutin attenuates gentamicin-induced renal damage by reducing oxidative stress,inflammation, apoptosis,and autophagy in rats

Abstract

Gentamicin is commonly used against gram-negative microorganisms. Its therapeutic use is mainly limited by nephrotoxicity. This study was aimed at evaluating the effect of rutin on oxidative stress, inflammation, apoptosis, and autophagy in gentamicin-induced nephrotoxicity in rats. The rats were treated with saline intraperitoneally (group I), 150?mg/kg of rutin orally (group II), 80?mg/kg of gentamicin intraperitoneally for 8?d (group III), or 150?mg/kg of rutin plus 80?mg/kg of gentamicin (group IV). The serum urea, creatinine, kidney malondialdehyde (MDA), and reduced glutathione (GSH) levels and superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and glutathione peroxidase (GPx) activity and protein concentration were measured, and renal histopathology analysis and immunohistochemical staining were performed. Rutin pretreatment attenuated nephrotoxicity induced by gentamicin by reducing the urea, creatinine, and MDA levels and increasing the SOD, CAT, and GPx activity, and the GSH levels. The rutin also inhibited inducible nitric oxide synthase (iNOS), cleaved caspase-3 and light chain 3B (LC3B), as evidenced by immunohistochemical staining. The present study demonstrates that rutin exhibits antioxidant, anti-inflammatory, anti-apoptotic, and anti-autophagic effects and that it attenuates gentamicin-induced nephrotoxicity in rats.     

铁死亡在肝缺血—再灌注损伤大鼠肠损伤中的作用

目的 探究铁死亡在肝缺血-再灌注损伤(HIR)大鼠肠损伤中的作用。方法 选择健康清洁级雄性SD大鼠40只,周龄8～10周,体重220～260 g。采用随机数字表法将大鼠分成四组：假手术组(S组)、铁死亡抑制剂Ferrostatin-1+假手术组(SF组)、HIR模型组(IR组)和铁死亡抑制剂Ferrostatin-1+HIR模型组(IF组),每组10只。S组腹腔注射等容量0.02%DMSO,30 min后行假手术,仅进行开腹、分离第一肝门和关腹处理。SF组腹腔注射Ferrostatin-1(溶于0.02%DMSO)5 mg/kg, 30 min后行假手术。IR组腹腔注射等容量0.02%DMSO,30 min后制备HIR模型。IF组腹腔注射Ferrostatin-1(溶于0.02%DMSO)5 mg/kg, 30 min后制备HIR模型。于再灌注后8 h处死大鼠,取小肠组织,采用ELISA法检测肠组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和铁(Fe²⁺)浓度;采用速率法检测血清中ALT和AST活性;采用Western blot法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁...     

肝缺血再灌注致大鼠脑损伤时诱导型一氧化氮合酶表达的变化

目的 评价肝缺血再灌注致大鼠脑损伤时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化.方法 健康雄性Wistar大鼠32只,体重240～280 g,随机分为假手术组(S组,n=8)和肝缺血再灌注组(IR组,n=24).S组仅开腹分离肝动脉、门静脉和胆管,游离脾静脉,40 min后切脾,关腹;IR组通过夹闭肝动脉、门静脉和胆管建立大鼠脾静脉-股静脉转流下全肝缺血再灌注模型,全肝缺血40 min后再灌注,同时切脾.S组断头处死大鼠,IR组分别于再灌注3、6、24 h时断头处死8只大鼠,取脑组织,采用硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测硝化酪氨酸(NT)表达,RT-PCR法检测iNOS mRNA表达.结果 与S组比较,IR组再灌注6、24 h时脑组织NO及MDA的含量升高,NT及iNOS mRNA的表达上调,再灌注6 h时SOD活性降低(P<0.05或0.01);与再灌注3 h时比较,再灌注6、24 h时IR组脑组织NO及MDA的含量升高,SOD活性降低(P<0.05).结论 肝缺血再灌注时大鼠脑组织iNOS表达上调,产生大量NO,生成OONO-,导致脑损伤.