反义c-fos核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的:利用反义核酸技术和显微外科技术,探讨反义c-fos核酸对自体移植静脉内膜增生的影响.方法:选择20只新西兰家免,等分为实验组和对照组,均行自体颈外静脉、颈总动脉移植手术,实验组移植静脉周围和血管吻合口周围应用反义c-fos核酸凝胶涂布;对照组仅行凝胶涂布.术后2周取出移植血管,分别行病理学、免疫组织化学检测移植血管内膜厚度,内膜平滑肌细胞数及PCNA阳性表达情况.结果:实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄度及VSMC数均较对照组减少,PCNA阳性表达情况亦较对照组明显减少.结论:反义c-fos核酸可有效的抑制移植静脉内膜的增生,是一种比较有发展前途的防治移植静脉内膜增生的基因疗法.     

联合转染P21基因和c-Fos反义核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的 探讨联合转染P^21基因和c—Fos反义核酸对自体移植静脉内膜增殖的影响。方法 选择20只新西兰家兔，随机等分为实验组和对照组，均行自体颈外静脉、颈总动脉移植手术，仅实验组移植静脉段行腺病毒介导的P^21基因溶液浸泡、吻合口周围行c—Fos反义核酸凝胶涂布；术后2周取出移植血管，分别行病理学、免疫组织化学检查。结果 实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄度、内膜平滑肌细胞数以及增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达细胞数均较对照组明显减少。结论 联合转染P^21基因反义c—Fos核酸可有效地抑制移植静脉内膜的增生，是一种比较有发展前途的防治移植静脉再狭窄的基因疗法。     

缺氧诱导基因-1α和gax基因共转染对移植静脉内膜重塑态的效应与分子机制

目的 探讨缺氧诱导基因(HIF-1α)和同源盒基因(gax)过表达对移植静脉内膜过度增生的影响及其机制.方法 自体静脉移植术大鼠28只均分为基因转染组和非基因转染组.于核酸、蛋白、细胞超微结构及细胞形态层次分析移植静脉中HIF-1α和gax基因表达与血管平滑肌细胞(VSMC)表型、中膜厚度等指标.结果 基因转染组与非基因转染组比较:HIF-1α和gax的mRNA及其蛋白表达增强(P＜0.05);增殖型VSMC和增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞减少(P＜0.05);TUNEL阳性细胞增多(P＜0.05);内皮修复较显著,较多肌-内皮连接结构形成;内膜过度增生程度有所减弱.结论 HIF-1α和gax基因联合转染对移植静脉内膜过度增生具有一定的抑制作用.     

转染survivin反义寡脱氧核苷酸对移植血管内膜增生的影响

目的研究survivin基因的反义寡脱氧核苷酸（ASODN）对移植血管内膜增生的影响。方法Wistar大鼠60只，建立自体静脉移植模型，术后随机分为5组：对照组，survivin ASODN 50μg组，200μg组，正义对照组，lipoectin＋pluronic组。分别施加不同的处理因素，在移植后1，2周取材。用组织形态学方法比较内膜增生程度；用半定量RT-PCR检测survivin基因的mRNA表达；Western blot检测survivin基因的蛋白产物表达；免疫组化方法检测survivin及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，TUNEL法检测血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡。结果静脉移植1～2周内膜增生明显，局部转染50μg survivin ASODN后明显抑制内膜增生（P〈0．05），200μg组受抑制程度较50μg组更为显著（P〈0．05）。静脉移植后，对照组survivin的mRNA及蛋白产物表达显著增加，而survivin ASODN组却显著减少（P〈0．05），VSMC中PCNA表达也同时减少，而TUNEL阳性细胞明显增加。结论survivin ASODNs可显著抑制移植静脉的内膜增生；其作用可能是通过抑制survivin的基因及蛋白产物表达，促进VSMC凋亡而实现的。     

反义雷帕霉素靶蛋白基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响

目的:观察以纳米粒子为载体的反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载mTOR基因,制备纳米级粒子混合物。检测其包埋率、体外释放情况及粒子大小。建立自体静脉移植模型,随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组移植静脉转染以纳米粒子为载体的反义mTOR基因,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。分别于术后3d、7d、14d、28d取材,常规HE、Verhoeff染色,RT-PCR、Westernblot检测mTOR基因的mRNA及蛋白的变化,TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P<0.05);转基因组内膜增生厚度7d、14d、28d较其他组明显减少(P<0.01);转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:纳米粒子可以作为转基因载体,反义mTOR基因的表达能够有效抑制自体移植静脉内膜的增生,促进VSMC的凋亡。     

联合转染tPA基因和PCNA反义寡核苷酸抑制兔自体移植动脉再狭窄研究

目的研究血管局部联合转染组织型纤溶酶原激活物（tPA）基因和增殖细胞核抗原反义寡核苷酸（PCNA—ASODN）对自体移植动脉血管再狭窄的防治作用。方法120只新西兰雄性白兔，按数字表法随机均分为4组（对照组、PCNA—ASODN组、tPA组、tPA＋PCNA—ASODN组）。将同一只兔的左、右髂外动脉（各1、0cm长）对换移植，移植血管及吻合口缝线分别用pBudCE4．1／tPA和PCNA-ASODN液浸泡。于术后3、7、14、28及56d取移植血管制片，显微镜下观察内膜增生情况，计算机图像分析测量其内膜面积和移植血管狭窄率，扫描电镜观察移植血管壁血栓形成情况，并分别用RT—PCR和免疫组织化学染色法检测tPA基因的mRNA表达率与PCNA阳性细胞百分率。结果术后3、7、14和28d时，tPA组与tPA＋PCNA-ASODN组的tPA基因mRNA表达率明显高于另2组（P〈0．01），PCNA—ASODN组、tPA组和tPA＋PCNA—ASODN组PCNA阳性细胞百分率均明显低于对照组（P〈0．05，P〈0、01）。tPA＋PCNA—ASODN组和PCNA—ASODN组、tPA组各时相血管壁内膜增生比对照组明显减轻，内膜面积和管腔狭窄程度显著低于对照组（P〈0、05．P〈0．01），且tPA＋PCNA—ASODN组又明显低于另2组（P〈0．05）。扫描电镜观察显示，tPA组和tPA＋PCNA-ASODN组血管壁只见少量血小板附着，未见血栓形成，而对照组血管壁可见大量血小板附着，且有血栓形成。结论血管局部联合转染tPA基因和PCNA—ASODN能有效抑制VSMC增殖和血栓形成，阻止内膜增生，防止移植血管狭窄。     

纳米粒子介导反义mTOR基因转染抑制移植静脉内膜增生

目的:观察以纳米粒子为载体的外源性反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载mTOR基因，制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型72只，随机分成转基因组(转染以纳米粒子为载体的反义mTOR基因)，空载体组(单纯转染纳米粒子包载的空载体)和对照组(不予特殊处理)。分别于术后3，7，14，28d取材。检测mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达，以及血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。 结果:转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P<0.05)；转基因组内膜增生厚度于7，14，28d较其他组明显减少(P<0.01)；转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:纳米粒子可以作为转基因载体。反义mTOR基因的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进VSMC凋亡。     

转染血小板源生长因子和增殖细胞核抗原反义寡核苷酸抑制移植血管狭窄的实验研究

目的　探讨联合应用血小板源生长因子(PDGF)和增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡核苷酸(AODN)防止移植血管狭窄的作用。方法　将同一只兔的左、右髂外动脉(各1 0cm)对换移植,移植血管用PDGF- AODN和PCNA -AODN转染;移植血管病理切片后测量其内膜厚度、内膜面积和移植血管狭窄率,并分别用原位杂交组织化学和免疫组织化学染色计数PDGF和PCNA阳性细胞数。结果　PDGF- AODN加PCNA- AODN组的移植血管内膜厚度、内膜面积、管腔狭窄程度和PDGF阳性细胞及PCNA阳性细胞数均显著低于对照组(P<0 .01),而且亦明显低于单独转染PDGF- AODN组或PCNA -AODN组(P<0. 05 ),PDGF AODN组和PCNA AODN组间差异无显著意义(P>0. 05 )。结论　联合应用PDGF AODN和PCNA- AODN能有效抑制血管平滑肌细胞增殖,阻止内膜增生,防止移植血管狭窄。     

纳米粒子包载反义雷帕霉素靶蛋白基因转染对移植静脉内膜增生的影响

目的观察纳米粒子包载的反义雷帕霉素靶蛋白（mTOR）基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA）和聚乙烯醇（PVA）包载mTOR基因。建立自体静脉移植模型，随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组移植静脉转染纳米粒子包载的反义mTOR基因，空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体，对照组不予特殊处理。分别于移植3、7、14、28d取材，常规苏木素．伊红（HE）、Verhoeff染色，检测mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达的变化，TUNEL法观察血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的动态变化。结果转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达明显减少（P〈0．01）；转基因组内膜增生程度在术后7、14、28d较其他组明显减少（P〈0．01）；转基因组凋亡细胞明显增多（P〈0．01）。结论纳米粒子可以作为基因载体，反义mTOR基因的表达能够抑制移植静脉内膜的增生，促进VSMC凋亡。     

反义寡核苷酸抑制Survivin基因表达对移植静脉内膜增生的影响

目的研究反义寡脱氧核苷酸（ASODN）抑制Survivin基因表达对移植静脉内膜增生的抑制作用。方法Wistar大鼠60只，建立自体静脉移植模型，术后随机分为：对照组、Survivin ASODN 50、200μg组、正义对照组、Lipofectin＋pluronic等五个组，施加不同的处理因素，在移植后1、2周取材。组织形态学方法比较内膜增生程度，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin基因的mRNA表达，Westem blot检测Survivin基因的蛋白产物表达，免疫组织化学方法检测Survivin及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，脱氧核苷酸转移酶末端标记法（TUNEL）检测血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的变化。结果移植后1、2周内膜增生明显，局部转染50μg Survivin ASODN组内膜增生明显受抑制（P〈0．05），200μg组受抑制程度更为明显（P〈0．05）；与对照组相比，Survivln ASODN组Survivin的mRNA及蛋白产物表达显著减少（P〈0．05），PCNA阳性表达同时减少，而TUNEL阳性细胞却明显增加。结论Survivin ASODN可显著抑制移植静脉的内膜增生，其作用可能是通过抑制Survivin基因及其蛋白产物表达，从而抑制VSMC增殖、促进其凋亡而实现的。     

缺氧诱导因子-1α与同源盒基因共转染在移植静脉重塑态的表达

目的 探讨缺氧诱导因子(HIF-1α)和同源盒基因(gax)共转染在移植静脉组织中的表达状态.方法 Wistar大鼠16只随机分为实验组和对照组,每组8只,均行自体静脉移植术,实验组移植静脉行缺氧诱导因子(HIF-1α)和同源盒基因(gax)共转染,对照组则未行基因转染,于术后14 d取出移植的静脉,分别采用逆转录-聚...     

人arresten基因转染对自体移植静脉内膜增生的影响

目的:探讨体内转染arresten基因对自体移植静脉内膜增生的影响。方法:建立大鼠自体静脉移植模型。血管吻合术前，用脂质体介导重组质粒pSecTag2-AT（Ⅰ组），空载体pSecTag2转染（Ⅱ组）移植血管，等体积脂质体溶液处理移植血管(空白对照组，Ⅲ组）。各组动物均于4周后切取移植血管，RT-PCR检测移植血管中arresten mRNA的表达；常规HE，Verhoeff弹力纤维染色；计算机图象分析检测移植静脉血管内膜及中膜面积、厚度；免疫组化检测移植血管内膜α-SMA及PCNA的表达；Western blot检测TGF-β1蛋白的表达。结果:Ⅰ组转染的移植静脉中有目的基因mRNA的表达, 而Ⅱ、Ⅲ组无Ⅰ组内膜、中膜面积小均于Ⅱ组和Ⅲ组，差异有显著性（P<0.05）。而内膜面积/中膜面积3组间无统计学差异（P>0.05）；Ⅰ组内膜厚度小于Ⅱ组和Ⅲ组，组间比较有统计学差异（P<0.01）；α-SMA染色表明增生内膜中的细胞是血管平滑肌细胞；PCNA阳性细胞数及表达指数Ⅰ组均低于Ⅱ组和Ⅲ组（P<0.05）；Ⅰ组TGF-β1蛋白的表达明显低于Ⅱ组和Ⅲ组。结论:移植血管转染arresten基因，可有效抑制自体移植静脉内膜的增生，在防治血管移植术后再狭窄方面显示出良好的临床应用前景。     

De-endothelialization and re-endothelialization in autogenous vein grafts--fundamental and clinical study

Preparation for preserving endothelial cells (ECs) of autogenous vein grafts (AVGs) and the process of de-endothelialization (de-E) and re-endothelialization (re-E) were studied. Jugular veins (n = 31) from mongrel dogs were immersed in saline solution (SS), heparinized blood (HB), and other three kinds of solution. Then jugular veins (n = 26) immersed in SS for 3 hours, were used for AVGs to the abdominal aorta. Intimal changes were observed by scanning electron microscopy. ECs showed irreversible changes about 60 minutes after immersion in SS and about 150 minutes in HB. Eleven (92%) of 12 graft specimens within 1 day after implantation showed wide areas of de-E, while ECs on the venous valve were satisfactorily preserved in 6 (55%) of 11 valves. Re-E was observed predominantly around the valve from 3 days after implantation, and completed within 3 weeks. Clinically, specimens in 35 AVGs were collected before anastomosis. Severe EC damage was observed in 23 (66%) of them. Long-term observation revealed graft stenosis in 2 due to intimal hyperplasia (IH) in grafts with severely damaged EC. These results suggest that venous valves are an important source of re-E, and that the preservation of ECs in graft preparation is an important factor to prevent IH.     

手术缝线携载反义基因预防血管吻合口内膜增生的实验研究

目的：探讨预防血管吻合口内膜增生的新方法。了解手术缝线携载反义基因对吻合口内膜增生的影响。方法：用分别浸泡过反义，正义及错配c-myc基因溶液的保护薇乔缝线行兔颈外静脉间置于同侧颈总动脉的血管吻合。实验动物24只随机分为对照组，反义组，正义组和错配组，每组6只，4周后血管造影观察吻合口通畅情况，同时取材制片显微镜下观察其内膜增生情况，计算机图像分析测量其内膜，中膜厚度及两者比值；内膜，中膜面积及两者比值。结果：所有吻合口通畅，未见闭塞，扩张或动脉瘤，反义组的内膜厚度，内膜／中膜厚度比值及内膜面积，内膜／中膜面积比值较其他组均低（P＜0．05），其他3组间比较差异均无显著意义（P＞0．05）；各组间的中膜厚度及中膜面积间差异无显著意义（P＞0．05），结论：用浸泡过反义 c-myc溶液的保护薇乔缝线进行血管吻合，能有效地抑制血管吻合口内膜增生。     

RNA干扰沉默蛋白激酶B基因表达对移植静脉内膜增生的影响

摘要：目的:观察纳米粒子包载的靶向蛋白激酶B(PKB)基因的shRNA表达载体局部转染对大鼠移植静脉内膜增生的影响。方法:应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载PKB的RNA干扰基因载体，制备纳米级粒子混合物。建立自体颈静脉-颈总动脉移植模型共72只，随机分成转基因组、空载体组和对照组。分别于术后3，7，14，28 d取材；常规HE及Verhoeff 染色,用Northern blot和Western blot检测PKB基因的mRNA及蛋白的变化，HE和Verhoeff 染色观察内膜厚度，TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中PKB基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P＜0.05)；术后7，14，28 d转基因组静脉内膜增生厚度较其他组明显减少(P＜0.01)；转基因组细胞凋亡率较其他组明显增高(P＜0.05)。结论:纳米粒子可以作为转基因载体；沉默PKB基因表达能有效地抑制自体移植静脉内膜的增生，促进VSMC的凋亡。     

32 P局部照射对移植静脉内膜平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究β射线局部照射对自体移植静脉内膜平滑肌细胞（VSMC）增生与凋亡的影响及可能机制。方法 建立80只大鼠自体静脉移植模型,随机分成^32P局部照射组、对照组,每组按3、7、14、28d随机分成4个亚组、每亚组10只。取材固定,弹力纤维染色,增殖细胞核抗原、p53、bcl-2、bax免疫组化测定,TUNEL法检测静脉平滑肌细胞的凋亡,计算机图象分析仪测量移植血管内膜厚度,计算细胞增殖及凋亡百分化。结果 术后2组移植静脉段的内膜平均厚度：7、14、28d,照射组明显 于对照组（t＝15．694,P＜0．05）;7、14d照射组VSMC增殖较对照组受到明显抑制（t＝60．157,P＜0．01）。凋亡指数14d照射组高于对照组（t＝56．176,P＜0．01）。p53的表达,2组间差异无显著性意义（t＝0．473,P＞0．05）,bax与bcl－2的表达,14d照射组高于对照组（t＝9．783,P＜0．05）。结论 ^32P局部照射可以抑制自体移植静脉的内膜增生及VSMC的增殖,促进VSMC的凋亡,可能是通过bax、bcl－2基因的表达实现的。     

p27kip1基因表达对大鼠移植静脉内膜平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的观察以聚乳酸聚乙醇酸（PLGA）纳米粒子为载体的人p27^kip1基因局部转染自体移植静脉后，对大鼠静脉内膜平滑肌细胞增殖及凋亡的影响。方法Wistar大鼠120只建立自体静脉移植模型，随机分成3组。转基因组：移植静脉转染以PLGA纳米粒子为载体的p27^kip1基因；空白对照组：转染不含有p27^kip1基因的单纯PLGA纳米粒子；单纯静脉移植组：使用生理盐水。分别于术后3、7、14、28d取材，常规HE、Verhoeff弹力纤维染色，Western blot检测p27^kip1蛋白的表达，免疫组化（SABC）法检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达、TUNEL法观察内膜平滑肌细胞凋亡的动态变化。结果转基因组内膜中p27^kip1蛋白表达水平高于其他组；内膜平均厚度7、14、28d低于其他2组（P〈0．01）；转基因组内膜PCNA的表达7、14d明显受到抑制（P〈0．01），平滑肌细胞的凋亡细胞百分比于7、14d较对照组明显增加（P〈0．01），单纯静脉移植组与空白对照组之间各项监测指标差异无统计学意义。结论p27^kip1基因的过表达能够有效抑制自体静脉移植后的内膜增生（IH），促进平滑肌细胞的凋亡。