26株鸟-胞内分枝杆菌复合群菌株药物敏感性分析

目的 了解鸟-胞内分枝杆菌复合群对抗分枝杆菌相关药物的敏感性.方法 对分枝杆菌菌种鉴定为鸟-胞内分枝杆菌复合群的菌株应用绝对浓度法进行药物敏感性测定,测定药物及其浓度(μg/ml)分别为:异烟肼(1、10)、利福平(50、250)、链霉素(10、100)、乙胺丁醇(5、50)、阿米卡星(10、100)、力克肺疾(1、10)、卷曲霉素(100、1000)、环丙沙星(1、10)、莫西沙星(1、10)、左氧氟沙星(1、10)和克拉霉素(10、100).结果 26株鸟-胞内分枝杆菌复合群的菌株依异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、阿米沙星、力克肺疾、卷曲霉素、环丙沙星、莫西沙星、左氧氟沙星、克拉霉素排序对各种药物低浓度的敏感率分别为:0、0、34.86%、65.38%、69.23%、3.85%、26.92%、7.69%、7.69%、7.69%、96.15%;对各种药物高浓度的敏感率分别为:23.08%、92.31%、76.92%、88.46%、96.15%、11.54%、88.46%、34.62%、84.62%、38.46%、96.15%.未发现对低浓度敏感对高浓度耐药的药物依赖型菌株.结论 在测定药物中,鸟-胞内分枝杆菌复合群对乙胺丁醇、阿米卡星和克拉霉素三种药物的高、低浓度和利福平、链霉素、卷曲霉素及莫西沙星四种药物的高浓度均具有较高的敏感性.联合应用这些药物治疗鸟-胞内分枝杆菌复合群感染可望取得较好的临床效果.     

广东地区脓肿分枝杆菌复合群对克拉霉素的耐药机制研究

目的 探讨脓肿分枝杆菌复合群(MABC)对克拉霉素的耐药机制,为MABC肺病诊治提供依据.方法 对广州市胸科医院冻存的191株龟-脓肿分枝杆菌复合群进行hsp65、rpoB、ITS多靶位基因菌种鉴定,确定为MABC的菌株进行克拉霉素最低抑菌浓度(MIC)药敏,延长培养时间至14 d,记录3、7、10、14 d的MIC值...     

应用PCR技术快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种

目的 建立快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种的方法.方法 将7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物(Mtbc1-7)进行聚合酶链反应(PCR)扩增,通过对扩增产物的不同系带型进行分析,对已知标准株和96株临床分离株进行菌种鉴定.结果 用3株结核分枝杆菌复合群(MTBC)标准株,9株非分枝杆菌标准株以及27株非结核分枝杆菌的分枝杆菌(MOTT)对7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物进行特异性鉴定,结果证明引物Mtbc1能鉴定出分枝杆菌和非分枝杆菌;引物Mtbc2能鉴定出MOTT和MTBC;引物Mtbc3能鉴定出田鼠分枝杆菌;引物Mtbc4能从MTBC中识别出牛分枝杆菌和卡介苗;引物Mtbc5能鉴定出非洲分枝杆菌Ⅱ型和结核分枝杆菌;引物Mtbc6和引物Mtbc4结合能鉴定出卡介苗;引物Mtbc7和引物Mtbc5联合能鉴定出canettii分枝杆菌.96株临床分离株经7对引物扩增,扩增结果显示MOTT 20株,牛分枝杆菌1株,卡介苗1株,canettii分枝杆菌3株,田鼠分枝杆菌3株,非洲分枝杆菌Ⅰ型3株,caprae分枝杆菌1株,结核分枝杆菌或非洲分枝杆菌Ⅱ型64株.结论 应用PCR技术鉴定结核分枝杆菌复合群菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值.     

鸟-胞内分枝杆菌肺病与耐多药肺结核的多层螺旋CT特征比较

目的：探讨鸟-胞内分枝杆菌（MAC）肺病与耐多药性肺结核（MDR-TB）的多层螺旋CT（MSCT）的表现异同。方法：回顾性分析经菌种鉴定的MAC肺病41例（MAC肺病组）和同时期经1:1病例匹配的MDR-TB 41例（MDR-TB组）的MSCT表现,比较2组间差异。结果：MAC肺病组薄壁空洞检出率为69.2%,高于MDR-TB组的30.6%,MAC肺病组空洞平均壁厚为2.5（1.8,3.3）mm,低于MDR-TB组的3.9（2.7,5.0）mm（均P ＜0.001）;MAC肺病组空洞外壁分叶或毛刺征象、空洞周围卫星灶、引流支气管征检出率分别为53.8%、49.2%、27.7%,低于MDR-TB组的79.6%、93.9%、67.3%（均P ＜0.05）;MAC肺病组支气管扩张检出率、支气管扩张累及范围≥3肺叶、右肺中叶、左肺舌叶及左肺下叶支气管扩张检出率、柱状支气管扩张、支气管扩张伴小叶中心结节检出率分别为73.2%、43.9%、63.4%、48.8%、22.0%、53.3%、56.1%,高于MDR-TB组的46.3%、9.8%、12.2%、2.4%、4.9%、21.1%、24.4%（均P ＜0.05）;MAC肺病组囊状支气管扩张占比13.3%,低于MDR-TB组的47.4%（P ＜0.05）;MAC肺病组＞1 cm结节/球形肿块检出率为22.0%,低于MDR-TB组的68.3%（P ＜0.001）。结论：MAC肺病与MDR-TB的MSCT表现比较有一定的特异性,空洞类型、支气管扩张分型及分布优势部位、结节的大小有鉴别意义,有助于临床诊断。     

PCR检测结核分枝杆菌复合群IS_(986)DNA重复序列

用ＰＣＲ检测ＭＴＢＣ特异的ＩＳ９８６ＤＮＡ重复序列。ＩＳ９８６ＤＮＡ重复序列全长１３５８ｂｐ，特异地存在于ＭＴＢＣ细菌染色体ＤＮＡ中，并且多次重复出现。作者参照文献，在此序列内合成一对引物，扩增出１８８ｂｐ的ＭＴＢＣ特异的ＤＮＡ片段。实验证明具有高度的特异性和敏感性。与其它的分枝杆菌和人血细胞ＤＮＡ无交叉反应。最小检出极限为１０ｆｇＤＮＡ或１０个菌体／ｍｌ。对ＰＣＲ反应体系中有关实验条件如引物浓度、ＴａｑＤＮＡ聚合酶用量、循环程序等进行了优化选择。在临床标本细菌ＤＮＡ抽提中首次采用了简便的ＴＥ－Ｔｒｉｔｏｎ煮沸法，节省了成本，使整个检测时间缩短至６～８ｈ，适合于临床实验室对结核病病原学的检测     

MDR-TB诊断试剂盒鉴定广东结核分枝杆菌复合群及RIF和INH药敏效果分析

目的评价耐多药结核病(MDR-TB)快速诊断试剂盒对广东地区结核分枝杆菌复合群的鉴定效果及利福平(RIF)和异烟肼(INH)的药敏检测效果。方法选取151份痰标本和150份细菌培养物,采用MDR-TB快速诊断试剂盒对其进行菌群鉴定及RIF和INH药敏检测,结果分别与常规法进行比较。结果与常规生化菌种鉴定结果相比,两者鉴定结果一致率为96.7%(291/301);与常规比例法药敏试验结果相比,诊断试剂盒检测单耐RIF的灵敏度为94.1%(64/68),检测单耐INH的灵敏度为87.7%(57/65),检测RIF和INH皆耐药株的灵敏度为79.3%(46/58),检测RIF和INH皆敏感株的特异性为100%。结论该试剂盒能简单快速地鉴定结核分枝杆菌复合群,检测RIF和INF的敏感性高、特异性好,在广东地区应用前景较好。     

利用荧光定量RT-PCR和PCR方法检测结核分枝杆菌复合群

目的 建立一种新的检测结核分枝杆菌复合群的荧光定量试验方法 （R/P分析）,探讨R/P分析检测临床标本中结核分枝杆菌复合群的应用价值.方法 根据结核分枝杆菌复合群基因保守序列设计引物和探针构建质粒标准品.运用R/P分析检测54例确诊结核病人临床样本,检测的结果 同时与培养法、荧光定量PCR法进行比较.结果 不同临床标本用R/P分析诊断结核病,其敏感性高于荧光定量PCR法和培养法,阳性检出率分别为96.3%、83.3%和55.6%.结论 R/P方法 是一种快速、特异的直接检测方法,它可以区分结核分枝杆菌复合群的死菌与活菌,因此可以更好的指导医生进行治疗,更准确地做出公共卫生决策.     

结核分枝杆菌higBA基因对细菌应激反应及胞内感染免疫机制的研究

  目的  探究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）higBA基因对细菌应激反应及胞内感染免疫的作用。  方法  从Mtb H37Rv基因组上扩增获得目的基因,与载体连接后电转化入耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis, Ms）构建重组菌,对空载菌 Ms_vec和重组菌 Ms_higBA进行应激实验和Raw264.7小鼠巨噬细胞感染实验,检测细菌菌落形成单位（CFU）和细胞因子白介素（interleukin, IL）-1β、IL-6、IL-10、IL-12p40,干扰素（interferon, IFN）-γ,肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF）-α和诱导型一氧化氮合酶（inductible nitric oxide synthase, iNOS ）的转录水平变化。  结果  成功构建Ms_higBA重组菌。应激实验结果表明higBA确能提高细菌在体外培养特定条件下的生存能力。胞内感染实验证明higBA能提高细菌在巨噬细胞内存活能力,影响细胞因子的转录水平。  结论  Mtb的higBA基因在细菌应激反应和胞内感染免疫中发挥了作用。     

环介导等温扩增法快速检测结核杆菌复合群内主要致病菌

目的 快速诊断和区分结核杆菌复合群内两种主要致病菌.方法 利用环介导等温扩增(LAMP)技术建立快速检测和区分结核杆菌复合群内主要致病菌的方法,利用该方法对相关的临床分离株样本进行特异性检测,并利用1∶ 10倍比稀释的已知菌株DNA模板分析其敏感性.反应结束后通过电泳或向反应管中加入DNA染料肉眼判定检测结果.结果 该方法可以成功检测到主要的结核致病菌:人型和牛型结核分枝杆菌,与包括卡介苗在内的其余相关菌株均未见非特异性交叉反应.检测的灵敏度可达100拷贝/微升,高于常规PCR方法.结论 该检测方法具有敏感、特异、低成本和快速的特点,可检测和区分人型和牛型结核分枝杆菌,并能排除卡介苗对诊断的干扰.     

结核分枝杆菌复合群及耐药基因突变检测试剂盒诊断结核分枝杆菌耐药效果研究

目的 评价结核分枝杆菌复合群及耐药基因突变检测试剂盒（GenoType MTBDRplus VER2.0,简称MTBDRplus 2.0）检测利福平和异烟肼耐药的灵敏度和特异度等效能指标,为提高结核分枝杆菌耐药性检测水平提供依据。方法 收集2022年1—12月云南省32个县（市、区）级结核病定点治疗医院分离培养的阳性菌株,经MTBDRplus 2.0检出结核分枝杆菌880株,进行最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）法药敏试验检测。结果 以MIC法为金标准,MTBDRplus 2.0检测异烟肼耐药的灵敏度为67.69%,特异度为98.40%,阳性预测值为77.19%,阴性预测值为97.45%,MTBDRplus 2.0和MIC法检测异烟肼耐药结果一致性中等,Kappa为0.701(P<0.001);检测利福平耐药的灵敏度为87.80%,特异度为99.40%,阳性预测值为87.80%,阴性预测值为99.40%,MTBDRplus 2.0和MIC法检测利福平耐药结果一致性较好,Kappa为0.872(P<0.001)。MTBDR...     

2009年589株结核分枝杆菌耐药性分析

目的了解深圳市第三人民医院门诊和住院结核病患者感染状况和结核分枝杆菌耐药情况。方法用MB／Bact240分枝杆菌培养仪和改良罗氏管对患者的多种标本进行分枝杆菌分离培养鉴定,对分离到的结核分枝杆菌采用绝对浓度法对4种一线抗结核药物,异烟肼（INH,H）、利福平（RFP,R）、乙胺丁醇（EMB,E）和链霉素（SM,S）,进行药物敏感性试验。结果1722例患者的标本结核分枝杆菌培养阳性589株,其中痰标本453株,非痰标本136株;结核菌培养阳性率为34．2％（589／1722）;对INH、RFP、EMB、SM的耐药率分别是15．1％（89／589）、14．3％（84／589）、4．8％（28/589）和17．1％（101/589）;总耐药率26．3％（155／589）,耐多药率10％（59／589）,其中4种药全耐者占2．7％（16／589）。结论本地区结核病疫情呈上升趋势。结核茵耐药情况仍然十分严重。     

Immunogenicity of Whole Mycobacterium intracellulare Proteins and Fingding on the Cross-Reactive Proteins between M. intracellulare and M. tuberculosis

Objectives To evaluate the immunogenicity of Mycobacterium intracellulare proteins and determine the cross-reactive proteins between M. intracellulare and M. tuberculosis. Methods Protein extracts from M. intracellulare were used to immunize BALB/c mice. The antigens were evaluated using cellular and humoral immunoassays. The common genes between M. intracellular and M. tuberculosis were identified using genome-wide comparative analysis, and cross-reactive proteins were screened using immunoproteome microarrays. Results Immunization with M. intracellulare proteins induced significantly higher levels of the cytokines interferon-γ (IFN-γ), interleukin-2 (IL-2), interleukin-12 (IL-12), interleukin-6 (IL-6) and immunoglobulins IgG, IgG1, IgM, and IgG2a in mouse serum. Bone marrow-derived macrophages isolated from mice immunized with M. intracellulare antigens displayed significantly lower bacillary loads than those isolated from mice immunized with adjuvants. Whole-genome sequence analysis revealed 396 common genes between M. intracellulare and M. tuberculosis. Microchip hybridization with M. tuberculosis proteins revealed the presence of 478 proteins in the serum of mice immunized with M. intracellulare protein extracts. Sixty common antigens were found using both microchip and genomic comparative analyses. Conclusion This is the advanced study to investigate the immunogenicity of M. intracellulare proteins and the cross-reactive proteins between M. intracellulare and M. tuberculosis. The results revealed the presence of a number of cross-reactive proteins between M. intracellulare and M. tuberculosis. Therefore, this study provides a new way of identifying immunogenic proteins for use in tuberculosis vaccines against both M. intracellulare and M. tuberculosis in future.     

噬菌体裂解法在肺结核分枝杆菌耐药性检测中的应用

目的探讨噬菌体裂解法在基层结核病防治机构实验中的应用价值。方法应用噬菌体裂解法检测临床108例痰标本中结核分枝杆菌对利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）的耐药性,并与比例法比较。结果以比例法检测结果为标准,噬菌体裂解法检测利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）耐药性的敏感性、特异性及准确性分别为100.0%、96.0%和96.3%,87.5%、95.7%和94.4%,76.2%、100.0%和95.4%,75.0%、96.0%和94.4%。噬菌体裂解法检测利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）药敏结果与比例浓度法检测药敏结果符合率分别为96.3%、94.4%、95.4%、94.4%。结论噬菌体裂解法检测痰标本中结核分枝杆菌对利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）的耐药性具有较高的敏感性、特异性和准确性,与比例法比较,具有较高的符合率,且简便快速。     

不同年龄复治肺结核患者结核分支杆菌耐药性的研究

目的分析不同年龄组复治肺结核患者结核分支杆菌的耐药情况,探讨当前结核病耐药性发展趋势。方法将691例痰结核分支杆菌培养阳性的复治肺结核患者分为青年组149例、中年组255例和老年组215例,采用绝对浓度法进行INH、SM、EMB和RFP等4种抗结核药物耐药性测定。结果青年组、中年组和老年组获得性耐药率分别为73．8％、58．4％和45、1％,中年组高于老年组（P〈0．01）,青年组高于老年组（P〈0．001）;获得性耐多药率青年组、中年组和老年组分别为44.1％、31．4％和19．5％,青年组高于中年组（P〈0．01）和老年组（P〈0．001）,中年组高于老年组（P〈0．005）;对RFP的获得性耐药率青年组和中年组均高于老年组（P〈0．001）。结论不同年龄组获得性耐药率差异较大,建议应重视不同年龄组复治肺结核患者耐药率的监测,为修订结核病控制规划提供依据。     

2016～2017年嘉兴一院结核分枝杆菌耐药情况及其耐药机制研究

目的 了解嘉兴一院2016～2017年结核分枝杆菌耐药状况,并利用比较蛋白质组学研究其可能存在的耐药机制,为耐药结核病的防控策略提供科学依据。 方法 对2016年1月～2017年6月嘉兴一院746株结核分枝杆菌进行培养及药敏试验分析,采用双向电泳技术比较临床不同耐药菌株与敏感菌株的全菌蛋白表达图谱,利用基质辅助激光解吸及电离飞行时间质谱仪进行质谱分析,通过蛋白质数据库对差异表达蛋白质相应的基因进行序列分析。 结果 746株结核分枝杆菌中总耐药率为18.50%（138/746）,单耐药率为9.92%（74/746）,耐多药率为4.42%（33/746）,多耐药率为 4.16%（31/746）。 4种药物的耐药率由高到底依次为异烟肼（INH,11.53%,86/746）、链霉素（Sm,10.86%,81/746）、利福平（RFP,5.36%,40/746）、乙胺丁醇（EMB,4.29%,32/746）。 初治耐药率及复治耐药率分别为 17.22%（115/668）、29.49%（23/78）,复治耐药率高于初治（χ2=6.976,p＜0.01）;从蛋白质组学功能分析结核分枝杆菌可能存在的耐药机制,发现了21个耐药结核杆菌的差异表达蛋白,其中5个蛋白的检出率在耐药菌株中相对较高,质谱分析获得明确的肽质量指纹图谱,分别为Rv0444c、Rv1446c、Rv3146、Rv3002c、Rv2159c。 结论 嘉兴一院近2年结核分枝杆菌耐药率保持在较低水平,且发现Rv0444c、Rv1446c、Rv3146、Rv3002c、Rv2159c与其耐药机制密切相关。     

结核分枝杆菌耐利福平机制及其研究进展

结核病是严重危害公众健康的全球性公共卫生问题,耐药结核病尤其是耐多药结核病的传播使结核病疫情更加严峻.利福平是重要的一线抗结核药之一,并且作为耐多药结核病的替代标志物.因此了解结核分枝杆菌耐利福平机制对预防及控制耐药结核病有着重要意义.本文就结核分枝杆菌耐利福平机制及其研究进展进行综述.     

住院肺结核患者耐药性分析

目的：分析了解2003年～2006年结核分枝杆菌的耐药性。方法：对2003年～2006年培养阳性的180例住院肺结核患者的耐药情况按初治、复治分组进行回顾性分析。结果：复治组耐药率明显高于初治组,耐单药率以INH较高,耐多药率以HSR占首位。结论：结果显示结核病的耐药情况相当严重,对结核病的临床治疗和管理应给予足够的重视。     

713株结核分枝杆菌耐药性分析

目的分析2005年以来我中心肺科就诊的肺结核病人结核分枝杆菌耐药趋势,为结核病的防治提供依据。方法应用改良罗氏培养基间接药敏实验绝对浓度法检测结核菌的耐药性情况。结果1754株结核分枝杆菌耐药713株,总耐药率为41．0％;耐多药（MDR）111株,耐多药率为6．3％。耐单药顺位从高到低依次为SM（26．1％）。RFP（25．3％）,INH（14．1％）,EMB（10．3％）。各年龄组耐药及耐多药均为青年组〉中年组〉老年组。结论结核分枝菌抗药性呈增强趋势,应加强监测,指导防控工作和临床合理用药。     

74例结核分枝杆菌耐药情况分析

目的了解遵义地区结核分枝杆菌耐药情况,并探讨其耐药特点,为耐药结核病的监测提供参考。方法采用比例法对我院门诊及住院的肺结核患者痰标本中分离到的74株结核分枝杆菌进行异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇4种一线抗结核药物的敏感性试验。结果 74例肺结核患者结核分枝杆菌对一线抗结核药的总耐药率为54.1%,耐多药率为12.2%。结论本地区结核分枝杆菌耐药情况严重,应进一步加强耐药结核的监测。     

深圳地区结核临床分离菌基因突变与耐药的关系

目的研究深圳地区结核分枝杆菌临床分离株的基因突变与利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药之间的关系。方法采用反向斑点杂交技术（RDBHA）对182株结核分枝杆菌临床分离株的rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因突变位点进行检测,并采用L-J比例法检测这些分离株对RFP、INH、SM、EMB的耐药性。结果 182株临床分离株中,总的基因突变率为34.62%（63/182）,其中rpoB基因突变率最高,达24.17%（44/182）。多重耐药结核菌（MDR-TB）占17.03%（31/182）。以L-J比例法作为金标准,采用RDBHA技术检测分别与RFP、INH、SM、EMB耐药相关的rpoB、katG/inhA、rpsL、embB基因突变,其灵敏度分别为88.89%、67.50%、81.82%和64.29%,特异度分别为97.08%、94.37%、97.99%和92.86%。结论深圳地区结核分离株ropB基因突变最普遍,S531L位点是其突变率最高的位点。深圳地区结核分枝杆菌对4个一线抗痨药物耐药现象均较严重,反向斑点杂交技术（RDBHA）可快速检测结核分枝杆菌耐药基因突变,能给临床提供快速用药指导。